Application of Fetal DNA in Maternal Plasma in Noninvasive Prenatal Diagnosis

To explore the application of fetal DNA in maternal plasma for noninvasive prenatal diagnosis, the DNA template was extracted by hydroxybenzene-chloroform from 44 maternal (7-41 weeks) plasma. The Fetus-derived Y sequence DYZ-1 gene (149bp) was chosen to be amplified by PCR. The fragment was identified in all the plasma of male bearing pregnant women with the diagnostic accordance rate being 100.00 %. Two of the 22 female bearing pregnant women had false positive results. Among the 44 pregnant women, the diagnostic accordance rate was 88. 89 % at early pregnant stage, 100.00% at medium pregnant stage, and 96.55 % at late stage respectively.The final accuracy of 95.45% was obtained in all cases. It was concluded that by means of hydroxybenzene-chloroform extraction the authors of this article promoted the concentration and purity of the DNA template, and diagnosed more accurately. The results showed that free fetal DNA in the maternal plasma could be regarded as the gene resource for noninvasive prenatal diagnosis.     

Rh阴性孕妇外周血基因鉴定胎儿RhD血型的方法

目的建立可靠有效的检测孕妇外周血中胎儿游离DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。结论采用PCR技术对5例RhD阴性孕妇外周血血浆DNA进行分析,然后对出生后婴儿脐带血进行Rh血清学表型分析,回顾性评价无创性预测胎儿RhD基因分析的准确性。结果 5例RhD阴性血浆标本扩增出180bp与156bp两条特异性片段,产后新生儿脐血血清学检测结果为RhD阳性,与PCR检测结果完全吻合。结论孕妇外周血浆中胎儿游离DNA的测定能实现对胎儿RhD基因型的预测判定。孕妇外周血检测胎儿DNA可应用于非创伤性产前诊断。     

应用实时荧光定量PCR检测母血浆胎儿DNA进行RhD基因型产前诊断

目的建立实时荧光定量PCR(real time PCR)技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD基因型的方法。方法通过微量DNA抽提技术提取母血浆中胎儿游离DNA,利用Real time PCR检测22例妊娠15～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA,进行男性性别决定基因(SRY)和RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,基因型结果与血清学RhD定型结果对比,评价该技术方法的准确性。结果孕妇血浆中存在游离胎儿DNA。19例RhD真阴性孕妇血浆中,14例均检测到胎儿游离DNA的RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,判断为RhD阳性,基因定型结果与血清学表型相符。3例未检测到胎儿游离DNA的RhD基因特异性扩增,结果与胎儿血清学表型相符。因此检测胎儿游离DNA的RhD基因型准确率达到89.5%。另外2例只检测到RhD基因外显子10扩增,通过新生儿脐血血清学吸收放散试验确定为RhDel型。3例RhDel型孕妇血浆中检测到RhD基因扩增,不适于胎儿RhD基因型的分型。结论实时荧光定量PCR方法检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD基因型...     

孕妇外周血游离DNA深度测序在胎儿染色体非整倍体无创检测中的应用研究

目的:评估孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序在检测胎儿染色体非整倍体异常中的优势?方法:通过高通量测序技术检测1 000例妊娠13周以上孕妇的外周血中胎儿游离DNA,判断胎儿非整倍体异常,通过传统染色体核型分析及胎儿出生后的临床随访对检测结果进行验证?结果:1 000例标本中1例检测失败,其余999例中共检出18例异常,其中12例21三体,2例18三体,1例13三体,1例X单体,1例X三体,1例XXY?12例21三体阳性病例中,有1例为双胎妊娠,核型分析显示一胎正常,一胎为21三体;1例X三体经核型分析诊断为正常女性,其余检测结果均与染色体核型分析结果相符,对于21三体?18三体?13三体和性染色体非整倍体异常的总阳性检测率94.44%?所有检测结果为阴性者,均进行产后随访新生儿面容?体格发育等情况,未发现有21三体?18三体?13三体等常见染色体非整倍体异常征象,无假阴性病例?结论:孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序对于检测胎儿21三体?18三体和13三体准确度高,对性染色体非整倍体的检测,本技术检测指标有待进一步提高?     

用母体外周血中胎儿游离DNA检测胎儿SRY基因的研究

目的探索从孕妇外周血浆中检测胎儿躲y基因的高灵敏性及高准确性方法。方法应用PcR、实时荧光定量PcR、PEP—PcR技术,检测33例妊娠8～14周的正常孕妇血浆中游离胎儿DNA的脓y基因。组织标本躲y基因检测结果作为性别判定的标准。结果33例孕妇血浆标本检测职y基因,普通PcR检出的灵敏性为58．82％,特异性100％。PEP—PCR的灵敏性为88．24％,特异性100％。荧光定量PCR的灵敏性为88．24％,特异性100％。结论PEP—PCR技术和荧光定量PcR技术均可以提高胎儿游离DNA检测的灵敏度及准确性．可用于进一步染色体疾病的无创性产前筛查研究。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产前诊断中的应用

孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现,为无创性产前诊断开辟了一条新途径。检测孕妇血浆中特异的胎儿DNA序列已被用于胎儿性连锁疾病鉴定、RhD血型检查和多种单基因遗传病的产前诊断;游离DNA水平的变化还可被用作某些妊娠相关疾病如先兆子、早产和胎儿染色体疾病的临床诊断新指标。本文对母体外周血中胎儿游离DNA的生化特征及其临床应用研究,进行了总结和分析。     

孕妇外周血血浆胎儿DNA的检测

目的：建立可靠有效的检测孕妇血浆胎儿DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。方法：采用引物引伸预扩增（PEP）法及巢式PCR技术对65例孕妇外周血血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果：单用巢式PCR技术和联合应用PEP,PCR技术对怀男胎的孕妇血中SRY基因检出率分别为65．2％（30／46）和89．1％（41／46）,两组差异有极显著性,对怀女胎孕妇血中SRY基因的未检出率为78．9％（15／19）和94．7％（18／19）,两组差异无显著性。结论：应用PEP法可对胎儿DNA进行全基因组扩增使DNA模板量增加,并使继后的PCR技术检测SRY基因的敏感性明显提高,PEP法是解决母血中胎儿细胞数量太少的途径之一,孕妇血浆中胎儿DNA可成为非创伤性产前诊断的胎儿物质来源。     

荧光定量PCR法从母体血浆检测胎儿RhCcE血型

目的 建立荧光定量PCR(FQ-PCR)法从母体血浆中检测胎儿RhCcE血型,用于胎儿和新生儿溶血病的产前诊断.方法 采集孕期8～20周的妇女血浆,采用QIAamp DNA Mini方法从母体外周血中提取游离胎儿DNA,用FQ-PCR法检测胎儿DNA的RhCcE基因型,预测胎儿血型.与胎儿脐带血标本检测的结果进行比较,...     

应用甲基化识别定量检测胎儿DNA

目的建立一种应用表观遗传学方法定量检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的方法。方法 48例正常孕妇为观察组,10例非孕健康妇女为对照组,抽取外周血10 mL,应用甲基化标志物T-box3基因,经DNA分离、甲基化敏感限制性内切酶消除样本中母源性(非甲基化)DNA。未分解的胎儿DNA在合成寡核苷酸的存在下行竞争性聚合酶链反应扩增,再用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱定量检测分析胎儿DNA。结果观察组血浆游离胎儿DNA平均为(148.0±63.5)×103拷贝数.L-1,胎儿DNA占标本中总游离DNA的比例为12%;对照组血浆甲基化DNA平均为(6.0±4.5)×103拷贝数.L-1;2组血标本中甲基化DNA拷贝数差异有统计学意义(P<0.05)。本检测方法的敏感性和特异性分别为99%和100%。结论应用甲基化识别可以对母血中分离出的胎儿DNA进行检测并定量分析,有助于扩大无创伤性产前诊断的临床应用范围。     

母体血浆游离DNA分子浓度和片段完整性分析

目的 应用荧光定量PCR技术研究母体血浆游离DNA分子的浓度和片段的完整性的分子生物学特性.方法 提取本院2011年8月42例门诊16 ～20周妊娠女性和40例进行体检的非妊娠女性的血浆游离DNA,靶基因为lep-tin基因和SRY基因,用荧光定量PCR技术分别对其不同片段进行特异性扩增.leptin基因的扩增片段长度为80、202bp,SRY基因为83、206 bp,观察其片段完整性和DNA浓度的变化.结果 妊娠组和对照组leptin基因80 bp片段长度的DNA浓度平均值分别为681、439拷贝/ml(P＜0.01);在片段长度为202bp的DNA浓度平均值分别为157、91拷贝/ml,中位数为134、85拷贝/ml,表明均有显著性差异(P＜0.01).妊娠组胎儿SRY基因83 bp和206 bp的DNA浓度的平均值为94(38 ～369)拷贝/ml、80(71～88)拷贝/ml,与妊娠组leptin基因比较,有显著性差异.结论 妊娠女性血浆DNA分子浓度明显高于非妊娠正常女性和胎儿游离DNA分子浓度.     

应用巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿SRY基因

目的:利用孕妇血浆中胎儿DNA进行无创产前诊断.方法:对包括10例X连锁隐性遗传病携带者的60例14～22孕周孕妇的血浆DNA进行巢式PCR,扩增胎儿来源的Y染色体特异性SRY基因.结果:38例妊娠男胎的孕妇中32例出现SRY基因扩增带,灵敏度为84.2%.22例妊娠女胎的孕妇中4例出现SRY扩增带,特异性为81.8%,总符合率为83.3%(50/60).10例X连锁隐性遗传病携带者中7例妊娠男胎的孕妇中6例检出SRY基因,3例妊娠女胎的孕妇均未检出SRY基因.结论:采用巢式PCR技术检测母体血浆中的胎儿DNA进行产前性别鉴定具有较高的灵敏度和特异性,在遗传病的产前诊断中具有很大的应用前景.     

Gene analysis of free fetal DNA in maternal plasma

In recent years,many researches have beenstudying in the gene analysis of fetal cells frommaternal blood,but few reports were available aboutthe freefetal DNA from maternalblood. Justlikefetalcells in maternal blood,the fetal DNA isin very smallquantity that entails highly sensitive and specificmethods in order to perform gene analysis of fetalDNA. In this study,PEP and probe microplatehybridization were employed to detecttracefetal DNAin maternal blood,and the sensitivity was comparedby…     

１０例孕妇血浆中胎儿游离ＤＮＡ-ＳＴＲ位点检测分析

目的:探索短串连重复序列(STR)多位点检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性.方法:改进QIAamp离心柱型DNA提取方法提取10例孕中期孕妇血浆中总游离DNA,进行D3S1358、D13S317、CSFlPO、D12S391、D6S477、VWA 6个STR位点扩增,并以孕妇与胎儿羊水细胞基因组DNA为对照,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析胎儿游离DNA提取效果及检测效率.结果:10例孕中期孕妇血浆样本共检测位点60个,检出有结果位点44个,除去母体与胎儿DNA基因型完全一致的14个位点,剩余的30个位点中,18个位点成功检出胎儿DNA基因型,检出率30%.检出率最高的位点是D13S317和D12S391.结论:STR多位点的扩增可以检测得出胎儿特异性DNA序列,有望应用于无创伤性产前遗传性疾病的诊断和法医学亲子鉴定中.     

Detection of Fetal Nucleated Erythrocytes and Fetal DNA from Peripheral Blood of Pregnant Women

Prenatal diagnosis of inherited disorders by non-invasive techniques has aroused great interestthroughout the world.Nowadays,the most impor-tantapproachesare based on the detection offetalnu-cleated erythrocytes(FNRBCs) in maternalperipher-al blood and the analysis of fetal DNA from maternalplasma.However,due to the rarity of FNRBCs,theabsence of ideal separation methods and the difficultyin accurate identification of fetal cells or DNA frommaternal,it is impossible for these techniques …     

Non-invasive prenatal diagnosis of trisomy 21 by dosage ratio of fetal chromosome-specific epigenetic markers in maternal plasma

This study examined the methylation difference in AIRE and RASSF1A between maternal and placental DNA,and the implication of this difference in the identification of free fetal DNA in maternal plasma a...     

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

 【目的】 建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法&#65377;【方法】 从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA&#65377;【结果】 我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致&#65377;【结论】 我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性,胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断&#65377;     

从母血浆提取胎儿DNA行产前诊断的研究

目的：从孕妇血浆中提取胎儿DNA， 寻找一种非创伤性产前诊断的新方法。方法：采用煮沸法从血浆中提取DNA，结合巢式聚合酶链反应技术对40例10－40孕周的孕妇血浆中的胎儿DNA进行特异性扩增，扩增的基因为Y染色体的重复序列（DYZ1）基因，扩增片段大小为102bp。结果：30例孕育男性胎儿孕妇中有26例血浆中出现DYZ1基因扩增带。10例孕育女性胎儿孕妇血浆中，仅1例出现假阳性结果。结论：采用巢式聚合酶链技术在不同的孕期检测母体血浆中的胎儿DNA均有较高的灵敏度和特异性，作为一种非创伤性产前诊断的方法应用于临床具有可行性。     

巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿ZFY基因的研究

目的：建立一种无创伤性产前基因诊断的方法。方法：自行建立巢式PCR方法对46例10～40孕周的初孕妇血浆中游离胎儿Y染色体ZFY基因进行扩增，扩增片段分别为354bp和307bp，46例均采用母体血浆直接作为模板进行巢式PCR。结果：39例妊娠男性胎儿孕妇血浆中有32例出现ZFY基因条带，检出率为82．1％(32／39)，其中24例2次扩增均为阳性，8例第2次扩增才出现阳性条带，巢式PCR可明显提高检测敏感性(从61．5％提高到82．1％)。7例妊娠女性胎儿孕妇血浆2次均未出现阳性扩增带，无假阳性结果。本研究的性别总符合率为84．8％(39／46)。结论：巢式聚合酶链反应检测母体血浆中游离胎儿DNA的敏感性和特异性较高，有希望成为无创伤性产前基因诊断方法应用于临床。     

Use of polymerase chain reaction on maternal peripheral blood for determination of fetal sex

Ｕｓｅｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｏｎｍａｔｅｒｎａｌｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｅｔａｌｓｅｘ￥ＺｈａｎｇＱｉ（张其）；ＬｉｎＸｉａｎｇｈｕａ（林祥华）；ＭａｏＹｕｍｉｎ（毛裕民）；Ｌｉ...     

应用引物延伸预扩增反应技术检测孕妇血浆中的胎儿DNA

目的：建立一种检测孕妇血浆中胎儿DNA的新方法。方法;对65例5－41孕周的孕妇血浆中胎儿DNA采用引物延伸预扩增（PEP）后行特异性位点聚合酶链反应（PCR）扩增,并用探针微孔板杂交法检测PCR产物。扩增的基因为Y染色体短臂SRY基因,扩增片段的大小分别为351bp和254bp。结果：46例妊娠男性胎儿的孕妇中41例血浆中出现SRY基因扩增带,检出率89．13％;19例妊娠女性胎儿的孕妇中3例（15．79％）为假阳性。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为100％、90．91％、75％,总符合率86．15％。结论：利用PEP法能解决孕妇外周血中胎儿细胞数量太少达不到常规扩增条件所要求的最低模板量的问题,同时配合探针微孔板杂交法能使诊断结果更准确。