重组腺病毒Ad-HGF基因治疗小鼠慢性阻塞性肺疾病的实验研究

目的探讨携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒Ad-HGF基因对小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型的治疗作用。方法猪胰弹性蛋白酶(PPE)气管内滴注(4 u/只)复制小鼠COPD模型30只,随机分为模型对照组、Ad-HGF治疗组和Ad-Lac Z治疗组,每组10只。造模后3 d Ad-HGF治疗组气管内滴注Ad-HGF(3×1010particle/mouse);Ad-LacZ治疗组及模型对照组气管内分别滴注同剂量的Ad-Lac Z及同体积0.9%氯化钠溶液。每组5只实验动物分别于处理后7 d和14 d处死,光学显微镜下观察肺组织病理形态,测量肺泡平均截线长度(mean linear intercept,Lm);TUNEL法检测细胞凋亡;Ki-67免疫组织化学染色评价内皮细胞再生,并检测血浆HGF浓度。结果处理后7 d及14 d Ad-HGF治疗组血浆HGF浓度均明显高于Ad-LacZ治疗组及模型对照组,肺泡平均截线长度明显小于Ad-LacZ治疗组及模型对照组。TUNEL染色表明Ad-HGF治疗组与Ad-LacZ治疗组相比TUNEL阳性细胞明显减少。免疫组织化学染色显示Ad-HGF治疗组较Ad-LacZ治疗组Ki-67细胞明显增多。结论腺病毒介导的HGF基因可能有部分治疗小鼠COPD的作用。     

hHGF调控肝纤维化信号转导途径研究

目的应用寡聚核苷酸基因表达谱芯片研究人肝细胞生长因子(hHGF)转染肝癌细胞系后基因表达谱的差异,分析hHGF抗肝纤维化的信号转导途径。方法应用包含20000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片ImaGene3.0检测hHGF转染的肝癌细胞系基因表达谱差异,并选择其中参与肝纤维化过程的存在表达上调基因[信号转导和转录激活因子1(STAT1)和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)]用RT-PCR方法进行验证分析。结果基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中包括转录因子、细胞周期素、细胞因子相关蛋白、糖脂类物质代谢相关酶及细胞信号转导相关因子等,RT-PCR验证参与肝纤维化过程中的几种存在表达差异的基因,其中STAT1和MAPK1表达明显上调,与基因芯片分析结果一致。结论hHGF转染肝癌细胞系存在基因表达差异,可能影响细胞周期的调控、物质代谢相关过程及细胞信号转导系统,hHGF可能通过激活JAK/STAT通路和MAPK通路发挥其抗肝纤维化作用。     

肺纤方颗粒对盐酸平阳霉素致肺间质纤维化大鼠血清转化生长因子β1和血小板衍生生长因子的影响

目的：观察肺纤方颗粒抗大鼠肺间质纤维化的作用，及其对大鼠血清转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF—β1）和血小板衍生生长因子（platelet—derived growth factor，PDGF）的影响。方法：72只雄性Wistar大鼠经气管插管灌注盐酸平阳霉素1mg／kg复制大鼠肺间质纤维化模型，随机分入模型组、泼尼松组和肺纤方组，每组24只；15只雄性Wistar大鼠经气管插管灌注等体积生理盐水作为假手术组。造模后24h开始常规灌胃给药．泼尼松组给予醋酸泼尼松5mg／kg．肺纤方组给予肺纤方颗粒1．25g／kg，模型组和假手术组给予等体积生理盐水．1次／d。分别于第14、28、45天取材，假手术组每批5只，其余各组每批8只。检测其肺组织病理改变及血清中TGF-β1和PDGF的水平。结果：与模型组和泼尼松组比较，在第45天时病理检测显示肺纤方组肺间质纤维化的程度较轻；血清TGF—β1和PDGF检测结果显示，模型组大鼠两种因子水平升高。第45天时升高最明显，并高于假手术组（P〈0．05）。肺纤方组与泼尼松组的TGF-β1变化与模型组相似（P〉0．05），两组间TGF—β1变化比较差异无统计学意义（P〉0.05）。肺纤方组PDGF水平在第14天时与其余各组比较显著升高（P〈0．01）。然后持续下降，至第45天与假手术组接近（P=0．792）；而模型组和泼尼松组PDGF水平皆随时间延长逐渐上升，第45天时均显著高于假手术组（P〈0．01）。结论：肺纤方有一定的减轻盐酸平阳霉素致大鼠肺间质纤维化的作用，其作用机制可能与对血清PDGF水平的调节作用有关。     

门静脉栓塞及结扎联合肝细胞生长因子对肝纤维化大鼠肝再生的研究

目的 探讨门静脉栓塞及结扎联合肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）对肝纤维化大鼠肝再生的作用。方法 制备大鼠肝纤维化模型,将100只肝纤维化大鼠随机分为5组,术前对照组、门静脉栓塞组(A1组)、门静脉结扎组(A2组)、门静脉栓塞+肝细胞生长因子组(B1组)和门静脉结扎+肝细胞生长因子组(B2组）,每组20只。除术前对照组外以上各组栓塞或结扎大鼠门静脉右支。每组于术前及术后1、3、7及14 d分批处死大鼠,每次5只,检测各组时间点大鼠外周血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的含量;称取各叶肝脏及全肝重量,计算术后不同时间点非栓塞及非结扎肝叶占整个肝脏的百分比;免疫组化检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）与Ki- 67的表达。结果 术后各组ALT、AST呈一过性升高改变,表现为术后第1天达到高峰,B1与B2组术后第1、3、7天ALT及AST峰值分别较A1与A2组低(P <0.05)。各组大鼠非栓塞及非结扎侧肝重/全肝重百分比均随时间增加而增加,术后第7、14天B1组非栓塞叶肝重/全肝重较A1组高,B2组非结扎叶肝重/全肝重较A2组高(P<0.05)。免疫组织化学改变：A1与A2组、B1与B2组术后非栓塞及非结扎侧肝叶PCNA与Ki-67的表达较术前明显增加并于第3天达高峰(P<0.05),然后缓慢下降,第14天A1与A2组恢复至术前水平(P>0.05),而B1与B2组较术前仍明显升高(P<0.05)。结论 肝纤维化大鼠选择性门静脉栓塞、门静脉结扎后对侧肝脏均有再生能力;外源性HGF能明显提高肝再生能力。     

肝细胞生长因子在大鼠肾小管间质纤维化中的表达及意义

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在肾小管间质纤维化过程中的表达及意义。方法雄性3月龄SD大鼠60只,随机分为对照组和模型组各30只,以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,对照组以等体积的2%淀粉溶液灌胃,分别于实验第7周、12周、17周时随机处死10只大鼠,进行血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN),24 h尿蛋白定量和尿NAG酶检测,光镜下观察肾组织的病理变化及免疫组织化学法检测肾脏HGF、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)的表达情况。结果与对照组比较,模型组各时相点大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高(P<0.01);7周时模型组即有肾小管间质损害,随着病程进展,肾小管间质损害逐渐加重;肾脏HGF表达7周、12周时增加,17周时降低;与TGF-β1、α-SMA表达呈负相关(r=-0.999,P<0.01;r=-0.980,P<0.01)。结论肾小管间质纤维化过程中,肾脏HGF的表达早期上升是一种有益的防御反应。HGF抑制TGF-β1、α-SMA的表达,发挥其抗纤维化作用。     

卡托普利对博莱霉素致小鼠肺纤维化的防治作用及其机制探讨

目的 研究血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利对博莱霉素致小鼠肺纤维化的防治作用.方法 7～10周龄雄性ICR小鼠45只分3组,分别为模型组、卡托普利组与正常对照组.模型组与卡托普利组经尾静脉注射博莱霉素10mg/(kg·d)14 d建立稳定的肺问质纤维化模型,卡托普利治疗组于注射博莱霉素前24 h予卡托普利(12.5 mg/kg·d)灌胃,并与正常ICR小鼠进行对照.第28天收获肺组织,左肺行HE和Masson染色,右肺组织应用Real-time PCR检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TGFβ1及结缔组织生长因子CTGF mRNA表达,行Western-blot检测CTGF蛋白表达.结果 卡托普利治疗组与模型组比较,小鼠肺泡炎、纤维化程度有所改善,但无统计学意义.卡托普利能显著下调模型组肺组织中升高的Collagen Ⅰ、TGFβ1的mRNA水平及CTGF的mRNA与蛋白水平.但Collagen Ⅲ的mRNA水平并无明显改变.结论 卡托普利有减轻BLM诱导的肺泡炎及肺纤维化程度的趋势,提示卡托普利有一定的抗肺间质纤雏化作用;抑制TGF-β1及CTGF在肺组织中的表达,可能是其作用机制之一.     

结缔组织生长因子与大鼠移植肺纤维化的关系

检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在大鼠移植肺内的表达,并探讨其与移植肺纤维化的关系.方法:检测结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠移植肺内的表达,并探讨其与移植肺纤维化的关系.方法:取20只Wister大鼠作为供体,20只SD大鼠作为受体,进行原位左肺移植.急性排斥反应组(AR)大鼠于术后1周处死,慢性排斥反应组(CR)大鼠于术后6周处死,均取其移植肺作标本,取正常Wister大鼠肺标本作对照组(NH),每组10只.测取并计算肺组织的湿/干重比值(W/T);采用HE及Van Gieson染色观察肺组织病理形态,并进行纤维化的半定量评分;采用免疫组织化学方法检测CTGF在肺组织中的表达.结果:肺的W/T比值逐步减小(AR vs.NH:3.48±0.47 vs.4.67±0.51,P＜0.05;CR vs.AR:2.85±0.52 vs.3.48±0.47,P＜0.05);移植肺组织显示:大量炎性细胞浸润、肺间质纤维化、肺泡结构破坏、阻塞性肺炎、肺实变,CR组较AR组更明显;纤维化评分,AR组明显高于NH组(0.98±0.47 vs.0.00±0.00),CR组(2.35±0.52)明显高于AR组,(均P＜0.01).CTGF在移植肺组织中有明显表达,且CR组较AR组更高(P＜0.01),而正常肺无表达.结论:CTGF表达与移植肺纤维化密切相关,且参与了移植肺纤维化的病理过程.     

甘氨酸对肝纤维化及肝硬化大鼠肝组织肝细胞生长因子表达的影响

目的 探讨甘氨酸对肝纤维化及肝硬化大鼠肝组织肝细胞生长因子(HGF)表达的影响. 方法 将40只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(C组),肝纤维化(HF)模型组,肝硬化(HC)模型组,肝纤维化甘氨酸干预组(HF G)及肝硬化甘氨酸干预组(HC G).观察外周血浆内毒素(endotoxin),丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫组化染色分析肝组织肝细胞生长因子(HGF)的表达情况. 结果 血浆endotoxin、ALT及血清TNF-α水平在HF及HC组明显高于C组(P<0.01),而在HF G及HC G组分别低于HF及HC组(P<0.05).HGF在HF及HC组的表达均显著高于C组(P<0.01,P<0.05),在HC组的表达低于HF组(P<0.05),而在HF G及HC G组分别高于HF及HC组(P<0.05). 结论 甘氨酸可减轻肝纤维化及肝硬化大鼠的肝损伤,这可能部分是通过上调肝组织HGF的表达实现的.     

肝细胞生长因子抗肾纤维化的机制

肾纤维化包括肾小球硬化和肾小管间质纤维化,是所有慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的共同通路。肝细胞生长因子可以通过减少细胞外基质的沉积、抑制肾小管上皮细胞转分化、促进细胞再生、减少凋亡等多种机制来改善肾纤维化的进程。本文就肝细胞生长因子抗肾纤维化的分子机制进行综述。     

Improvement of cardiac function by hepatocyte growth factor via intracoronary transfection in the swine myocardial infarction model

Objective： To study the amelioration effect of AdenovirusS-mediated human hepatocyte growth factor （AdsHGF） on postinfarction heart failure in the swine myocardial infarction model. Methods： Twelve SuZhong young swine were randomly divided into 2 groups with 6 swine in each group： Ad5-HGF-treated group and null-Ad5 group. Four weeks after ligation at left anterior descending coronary artery in swine hearts, Ad5-HGF was transferred to the swine myocardium. Simultaneously, Gated myocardial perfusion imaging was performed to evaluate cardiac perfusion and heart function. After three weeks, Gated myocardial perfusion imaging was performed again, then the hearts were harvested and sectioned to examine the expression of HGF through ELISA. Results： High expression of human HGF was observed in the myocardium of Ad5-HGF-treated group. From 4 weeks to 7 weeks after operation, Left ventricular ejection fraction was increased in Ad5-HGF-treated group. The improvement in LVEF was greater in Ad5-HGF-treated group than that in null-Ad5 group at 7 weeks after operation. Cardiac perfusion was significantly improved in the Ad5-HGF-treated group. Conclusion： High expression of human HGF was observed in the myocardium through intracoronary transfection, which suggests that HGF can ameliorate heart function in swine with postinfarction heart failure.     

脑神经胶质瘤病人脑脊液TSGF及HGF对新生血管生成相关因子的影响

目的:探讨恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)及肝细胞生长因子(HGF)对脑神经胶质瘤进展的影响及与新生血管生成相关因子的关系.方法:选择87例胶质细胞瘤病人,WHO胶质细胞瘤分级(Ⅰ级29例,Ⅱ级26例,Ⅲ级21例,Ⅳ级11例,检测各级病人脑脊液TSGF及HGF、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮生长因子(EGF)及促血管生成素1(Ang-1).结果:Ⅱ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人TSGF及HGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01).Ⅱ级病人VEGF较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅲ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及Ang-1均较Ⅰ级明显升高(P<0.01),Ⅳ级病人VEGF均较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级明显升高(P<0.01),bFGF及Ang-1均较Ⅰ级、Ⅱ级明显升高(P<0.01).TSGF与VEGF、bFGF及Ang-1均呈正相关关系(P<0.05～P<0.01),HGF与VEGF亦呈正相关关系(P<0.01).结论:脑脊液内TSGF及HGF水平升高是导致神经胶质瘤分级进展的重要因素,其过程与新生血管生成相关因子水平升高密切相关.     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对移植颗粒脂肪成活的影响

目的探讨表皮生长因子(EGF)和肝细胞生长因子(HGF)对移植颗粒脂肪的血运重建及脂肪成活的影响,为提高移植颗粒脂肪的成活率提供理论和实验依据。方法在颗粒脂肪移植的动物模型中,分别应用EGF、HGF、EGF+HGF。微刻度试管测量各组脂肪的存活体积,HE染色后观察移植体组织细胞形态学改变,免疫组化法检测各组移植组织的微血管密度值。结果同一时间段,各实验组组织中微血管密度值明显高于对照组。术后14d起,各实验组组织中脂肪存活体积明显高于对照组。结论 EGF和HGF均能促进移植颗粒脂肪的血管生成,并显著提高移植颗粒脂肪的成活率。HGF和EGF具有协同作用。     

人肝细胞生长因子在CHO细胞中的表达

以ｐＲＣ／ＣＭＶ作为真核细胞表达性载体，用限制性内切酶ＢａｍＨＩ／ＸｂａⅠ将ＨＧＦｃＤＮＡ全序列定向重组到ｐＲＣ／ＣＭＶ的多克隆位点上。筛选得到的重组质粒以磷酸钙ＤＮＡ共沉淀的方法转染ＣＨＯ细胞，经８００ｍｇ／Ｌ的Ｇ４１８筛选，获得阳性细胞克隆。用ＨＣＣ－７９０２细胞及原代培养的成年大鼠肝细胞对转染阳性细胞培养基收集上清进行活性测定。３Ｈ－ＴｄＲ掺入等分析证明，它能有效地抑制体外培养的人肝癌细胞的生长，并可明显刺激鼠肝细胞ＤＮＡ的合成。结果表明，重组人ＨＧＦ基因在ＣＨＯ细胞中成功地获得表达，为基因工程大量制备和纯化ＨＧＦ奠定了基础     

肝细胞生长因子在纤维肉瘤细胞血行转移中的作用

目的：评价肝细胞生长因子（HGF）在纤维肉瘤细胞血行转移中的作用。方法：利用体 外肿瘤细胞血管内游走及血管外游走模型，定量地评价纤维肉瘤细胞(HT1080)的血行转移情 况。结果：HT1080能穿过基底膜和血管内皮细胞游走至血管内，并可通过内皮细胞间缝隙游 走至血管外基质；HT1080经HGF预处理后，血管内和血管外游走数量均明显高于对照组(P<0.01)。结论：HGF能够增强纤维肉瘤细胞的运动侵袭能力、加速血行转移。     

肝细胞生长因子在2型糖尿病大鼠肾脏病变中的作用

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在糖尿病肾脏病变发生发展中的作用。方法雄性Wistar大鼠70只,随机分为实验组和对照组,实验组40只,喂以高热量饲料2个月后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg;对照组30只,喂以普通饲料2个月后,腹腔注射等体积的枸橼酸缓冲液。两组分别于注射前、注射后1个月、2个月、3个月和6个月各处死6只,取血测定血清HGF、胰岛素水平等,光镜及电镜观察肾脏形态学改变。结果成模后1个月后肾小球体积开始增大,2个月更明显,3个月及6个月体积显著下降;成模后2个月出现明显蛋白尿,肾小球基底膜3个月时就已显著增厚,6个月时更为严重;血HGF 1个月后即明显增高,至2个月时达最高值,以后逐渐降低,但始终高于对照组(P<0.01)。结论HGF在糖尿病肾脏病变的发生发展中可能对肾脏具有保护作用。     

重组人肝细胞生长因子基因的克隆

用RT PCR技术从人胎盘组织内成功地扩增全长肝细胞生长因子 (HGF)cDNA基因 (2 184bp) ,并将其克隆至pGEM T载体 ,经限制性核酸内切酶NdeⅠ ,Bg1Ⅱ ,HindⅢ ,BamHⅠ和XhoⅠ的酶谱分析和DNA测序分析证实。再将其亚克隆至逆病毒载体pLNL XHC ,可进一步用于基因表达和基因治疗的研究     

肝细胞生长因子对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧、缺糖诱导的星形胶质细胞（As）损伤及凋亡的影响。方法：以缺氧、缺糖来诱导原代培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤。用不同终浓度（20～100ng/mL）的HGF处理星形胶质细胞,以乳酸脱氢酶（LDH）漏出率作为细胞损伤指标,四甲基偶氮唑盐（MTT）还原试验检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡细胞,透射电镜观察细胞超微结构。结果：缺氧缺糖引起LDH漏出率增高,细胞活力下降,细胞凋亡率增高。HGF处理后,LDH漏出率降低,细胞活力增高,同时细胞凋亡率降低（P＜0.05）,最大效应剂量为60ng/mL。结论： HGF对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用,能减少星形胶质细胞凋亡,并呈一定的剂量依赖关系。     

四环素诱导性人肝细胞生长因子真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建四环素诱导性人肝细胞生长因子（HGF）真核表达载体。方法 运用基因重组技术,将人HGF cDNA全长序列,定向克隆于四环素诱导性真核表达载体pBI-L多克隆位点MluⅠ和SalⅠ之间,限制性内切酶酶切和测序鉴定。结果 重组pBI-L-HGF真核表达载体经限制性内切酶酶切,与理论值相符;测序结果与GenBank比对,序列正确。结论 本实验成功构建人HGF四环素诱导性真核表达载体pBI-L-HGF,为今后临床开展HGF基因治疗提供了一种安全可调控的基因治疗策略。     

肝细胞生长因子对肺癌95D细胞系增殖和侵袭的影响

目的探讨人类重组肝细胞生长因子（rhHGF）对人肺癌95D细胞系侵袭、增殖的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养95D细胞,分别用10,30,50μg/L不同浓度rhHGF作用95D细胞48h,以MTT法检测rhHGF对95D细胞增殖的影响;以过河实验、Transwell方法及RT-PCR方法检测rhHGF对95D细胞的运动侵袭能力和对MMP-9基因表达的影响。结果rhHGF可明显增加95D细胞的增殖和生长,且随浓度提高作用增强,呈剂量效应关系。过河实验、Transwell方法显示rhHGF能增强95D细胞的体外侵袭和运动能力,随浓度提高,过河时间缩短,细胞侵袭力增加（P〈0.05）;RT-PCR测定显示rhHGF作用48h后,95D细胞中MMP-9基因表达上升。结论rhHGF可促进人肺癌95D细胞的生长和增加其体外侵袭能力,其机制与直接增加95D细胞迁移运动,及MMP-9表达增加有关。