等长收缩运动对动脉粥样硬化兔血管内皮生长因子与一氧化氮的影响

目的探讨等长收缩运动（IE）对动脉粥样硬化兔血管内皮生长因子（VEGF）和一氧化氮（NO）的影响。 方法选取成年雄性新西兰白兔24只,制作IE训练模型后,按照随机数字表法分为对照组、高脂组和训练组进行2个阶段（6周+4周）的实验,每组8只。对照组采用普通饮食,其余两组采用高脂饲料喂养。训练组兔在第2阶段增加每次2min、每日3次、每周5d的IE训练。分别于实验前、实验第6周及第10周时对兔进行外周血VEGF、VEGF mRNA与NO检测,并于实验第10周时对兔主动脉血管壁进行动脉粥样硬化斑块检测。 结果实验前,各组VEGF、VEGF mRNA、NO含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。10周后,高脂组兔外周血VEGF含量高于训练组和对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。训练组和对照组各时间点兔外周血VEGF含量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。高脂组兔实验10周后外周血VEGF含量高于实验前（P<0.05）。实验10周后,训练组和高脂组兔外周血VEGF mRNA含量均高于对照组（P<0.05）。3组兔实验10周后外周血VEGF mRNA含量均高于实验前和实验6周后（P<0.05）。实验6周后,训练组NO含量高于对照组（P<0.05）。实验10周后,高脂组NO含量高于对照组（P<0.05）。对照组、高脂组、训练组兔外周血NO含量在第6周和第10周时均高于实验前（P<0.05）。实验结束时,训练组兔有少量动脉粥样硬化斑块形成,高脂组兔动脉粥样硬化斑块最多,对照组兔无动脉粥样硬化斑块形成。 结论高脂饮食可以促进动脉粥样硬化形成,使VEGF、VEGF mRNA和NO含量显著增加,IE训练可有效减缓动脉粥样硬化进程,其具体机制尚待进一步研究。     

烟酸对高脂血症兔主动脉斑块面积和MCP-1的影响

[目的]观察烟酸对动脉粥样硬化斑块形成及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的影响.[方法]将新西兰兔给予高胆固醇饮食8周后随机分为高脂组、烟酸组和对照组.第14周末处死动物进行主动脉病理学检测,酶联免疫吸附法测定MCP-1浓度和半定量逆转录聚合酶链反应测定MCP-1 mRNA的表达.[结果]高胆固醇饮食14周后,兔主动脉内膜较对照组显著增厚,并明显可见斑块形成.烟酸干预6周后胆固醇水平显著低于高脂组(P＜0.05);主动脉内膜厚度小于高脂组,斑块面积也显著小于高脂组(P＜0.01).正常饮食兔的MCP-1水平很低[(61.4±10.2)pg/mL],高胆固醇饮食后显著升高[(227.1±23.0) pg/mL],烟酸干预6周后则显著降低[(164.5±21.7) pg/mL,P＜0.01];血清MCP-1水平与动脉粥样硬化斑块的面积呈正相关(r=0.71,P＜0.01).[结论]烟酸延缓动脉粥样硬化斑块的形成作用可能与其降脂及降低MCP-1水平有关.     

运动干预对实验性高同型半胱氨酸血症大鼠过氧化及血管内皮功能的影响

目的:探讨运动干预对实验性高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)大鼠过氧化及血管内皮功能的影响。方法:将48只大鼠随机分为6组,每组各8只。对照组(n=8只)给予普通饲料喂养;高蛋氨酸组(n=40只)在此基础上加3%的蛋氨酸,再根据运动强度分为模型组、叶酸组、HHcy运动组(低强度组、中强度组、高强度组),8只/组,持续16周。检测各组大鼠血清同型半胱氨酸(Hcy)、血浆丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素1(ET-1)水平。结果:干预后8周,HHcy运动组血清Hcy水平明显下降,且显著低于模型组(16.09±4.85 vs.24.24±3.11μmol/L)(P0.05);干预后16周,HHcy运动组血清Hcy水平与对照组无显著性差异(7.81±0.64 vs.6.63±1.27μmol/L)(P0.05),各组血清Hcy水平依次为叶酸组(6.63±1.27μmol/L)低强度组(7.62±0.73μmol/L)中强度组(6.91±0.37μmol/L)高强度组(6.19±0.34μmol/L)(P0.05);干预后16周,HHcy运动组MDA均显著下降,SOD活力和GSH-PX含量明显升高(P0.05),中、高强度运动组各过氧化指标与对照组无显著性差异(P0.05);与对照组比较,干预后16周模型组、叶酸组和低强度组ET-1明显升高(61.64±12.29、58.86±10.32、59.11±9.09 vs 49.48±11.09pg/ml),NOS(8.52±2.09、18.13±4.65、17.08±4.20 vs 33.98±6.67U/ml)、NO(1.19±0.24、1.30±0.41、1.30±0.41 vs 2.29±0.28μg/L)明显下降(P0.05),而中强度组、高强度组中ET-1、NOS与对照组比较,差异无显著性意义(P0.05);HHcy运动组、叶酸组NO均明显高于模型组(P0.05)。结论:高蛋氨酸饮食可诱发大鼠HHcy,而中、高强度运动干预有助于降低HHcy大鼠血清Hcy水平,改善氧化应激状态,减轻内皮功能损伤。     

血管内皮生长因子165与动脉粥样硬化兔血清C反应蛋白水平的相关性

目的:观察内皮细胞生长因子165对兔血清C反应蛋白的影响,探讨其对动脉粥样硬化形成与发展的影响。方法:实验于2002-04/2004-06在郧阳医学院实验动物中心和生命科学研究所完成。15只日本大耳白兔随机分为3组:对照组给普通饲料喂养,高脂组及血管内皮生长因子组给高胆固醇饲料喂养,喂养21d后对照组及高脂组肌注白蛋白(2μg/kg),血管内皮细胞生长因子组肌注内皮细胞生成因子165(2μg/kg),继续以前方式饲养3周(喂养42d)处死动物,测定各组血清C反应蛋白和血脂水平,用计量组织学的方法(CD34的阳性面积)测定动脉粥样斑块内新生血管的密度。结果:实验兔3组15只均进入结果分析。①血清C反应蛋白浓度:喂养21d及42d时,高脂组和血管内皮细胞生长因子组分别高于对照组[21d:(1.57±0.3),(1.48±0.2),(0.38±0.1)mg/L,P<0.05;42d:(1.49±0.2),(2.81±0.9),(0.37±0.1)mg/L,P<0.05],血管内皮细胞生长因子组42d高于21d(P<0.01)。②喂养42d时新生血管的密度:CD34阳性细胞数血管内皮细胞生长因子组高于高脂组,且两组均高于对照组[(61.15±7.55),(12.35±2.02),0个/mm2,P<0.05]。③血清C反应蛋白浓度与CD34的阳性细胞数之间关系:呈正相关(r=0.944)。④斑块面积,斑块周径及斑块的最大厚度:血管内皮细胞生长因子组高于高脂组,且两组均高于对照组[斑块面积:(24.12±3.58),(1.81±0.61)%,0;斑块周径:(25.71±1.97),(6.05±1.62)%,0;斑块的最大厚度:(0.16±0.007),(0.06±0.002),0mm,P<0.05]。⑤电镜观察新生血管:新生血管与动脉粥样斑块相邻,新生管腔内可见淋巴细胞。结论:内皮细胞生成因子165促进斑块内血管生成的过程中,其促进C反应蛋白合成可能是其促进动脉粥样斑块形成与发展的作用之一。     

EGCG对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的抑制效应及机制初探

本研究探讨绿茶茶多酚成分之一表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的影响及其机制。体外培养多发性骨髓瘤细胞KM3,观察不同浓度EGCG作用后的培养上清对血管内皮细胞株HUVEC迁移和形成血管能力的影响。ELISA法检测KM3细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平;RT-PCR方法检测KM3细胞VEGF mRNA表达水平。结果表明:EGCG以浓度依赖方式抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用,5,25,50和100μmol/L的EGCG迁移细胞数目分别为414±27,299±70,202±42及116±13个,且EGCG的浓度与内皮细胞的迁移数目呈负相关(r=-0.952,p<0.05)。同时,内皮细胞形成小管的面积随EGCG浓度的升高而减少,25及50μmol/L时的面积分别是88343.9±3231.1和60897.5±914.1μm2,均明显低于对照组(p<0.01),小管面积与EGCG浓度呈负相关(r=-0.888,p<0.05)。5、25、50、100μmol/L的EGCG作用于KM3细胞48小时后培养上清中VEGF的含量分别为1399.0±47.4pg/ml,660.1±5.7pg/ml,108.5±5.8pg/ml和26.2±18.6pg/ml,与对照组比较,25、50、100μmol/L组均有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示EGCG抑制KM3细胞VEGF的mRNA水平表达,且呈浓度依赖性。结论:EGCG能显著抑制多发性骨髓瘤细胞KM3的促血管新生作用;下调VEGF转录水平的表达,减少VEGF的分泌可能是其药理作用机制之一。     

原发性肝癌血管内皮生长因子及一氧化氮的检测及意义

目的 探讨原发性肝癌患者治疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)及一氧化氮(NO)的变化及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA),分光光度法对35例原发性肝癌患者,30例健康人的血清进行检测.结果 肝癌患者治疗前血清VEGF 362.39±72.42 pg/ml,血清NO 94.23±21.24 μmol/L,高于健康对照组(P＜0.01);肝癌稳定组治疗前后血清VEGF分别为324.51±44.24和128.93±40.86 pg/ml,血清NO分别为82.42±4.80和75.76±10.01 μmol/L,VEGF在治疗前后有统计学意义(P＜0.01),NO在治疗前后差异无统计学意义(P＞0.05);肝癌恶化组治疗前后血清VEGF分别为384.77±77.20和428.77±87.29 pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.01),血清NO分别为101.21±24.08和119.32±20.53μmol/L差异有统计学意义(P＜0.01).结论 血清VEGF及NO的检测可以为临床原发性肝癌的治疗及预后判定提供依据.     

硫化氢对急性肺损伤大鼠白细胞介素的调节

目的 研究气体信号分子硫化氢(H2S)在油酸诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及其在ALI中对炎症反应的调节.方法 采用鼠尾静脉缓慢注射油酸(OA,0.01 ml/kg)复制大鼠急性肺损伤模型,将SD大鼠49只随机分为三组:对照组、OA组及OA+硫氢化钠(NaHS)组.OA组和OA+NaHS组分为2 h、4 h、6 h三个观察点.对照组鼠尾静脉注射生理盐水(0.01 ml/kg),观察6 h.测定动脉血氧分压(PaO2)、肺湿干重比(W/D)、肺泡灌洗液中性粒细胞百分比(PMN%),光镜下半定量肺损伤评分(IQA),用敏感硫电极法检测血浆、肺组织匀浆H2S含量,用双抗体夹心ELISA法测定血浆、肺组织匀浆IL-6、IL-8和IL-10的含量.多组样本的均数的比较采用单因素差分析.结果 油酸鼠尾静脉注射可引起肺组织明显的形态学改变;与对照组比,OA组可见PaO2下降,W/D、PMN%、IQA增加(P＜0.01),在2 h、4 h、6 h时,血浆中H2S[对照:(36.58±6.80)μmol/L,2 h:(21.30±2.75)μmol/L,4 h:(20.63±1.26)μmol/L,6 h:(20.00±1.60)μmol/L,P＜0.01]以及肺匀浆中H2S[对照:(27.61±2.20)μmol/L,2 h:(20.67±1.37)μmol/L,4 h:(20.79±1.10)μmol/L,6 h:(18.92±0.75)μmol/L,P=0.000]均明显降低,血浆中IL-6[对照:(73.95±14.68)pg/ml,2 h:(186.70±23.85)pg/ml,4 h:(238.50±26.46)pg/ml,6 h:(215.95±25.86)pg/ml,P＜0.01]、肺匀浆中IL-6[对照:(60.58±12.91)pg/ml,2 h:(160.32±24.57)pg/ml,4 h:(195.27±46.28)pg/ml,6 h:(185.66±17.42)pg/ml,P＜0.01]均显著增加,血浆IL-8[对照:(80.69±20.42)pg/ml,2 h:(184.11±19.51)pg/ml,4 h:(286.20±53.34)pg/ml,6 h:(241.30±45.85)pg/ml,P＜0.01]、肺匀浆中IL-8[对照:(69.14±15.96)pg/ml,2 h:(174.10±20.36)pg/ml,4 h:(249.02±31.17)pg/ml,6 h:(237.74±34.18)pg/ml,P＜0.01]均显著增加,血浆IL-10[对照:(39.78±8.97)pg/ml,2 h:(111.18±11.46)pg/ml,4 h:(115.60±13.91)pg/ml,6 h: (102.41±9.93)pg/ml,P＜0.01]、肺匀浆中IL-10[对照:(71.86±14.19)pg/ml,2 h:(126.96±18.72)pg/ml,4 h:(151.88±27.61)pg/ml,6 h:(137.28±14.22)pg/ml,P＜0.01]含量均显著增加.而预先给予NaHS能减轻油酸引起的肺损伤,显著提高血浆和肺匀浆中H2S含量[4 h,血浆:(26.67±3.44)μmol/L vs(20.63±1.26)μmol/L,P=0.042;肺匀浆:(23.20±1.48)μmol/L vs(20.79±1.10)μmol/L,P=0.011;6 h,血浆:(26.98±4.93)μmol/L vs(20.00±1.60)μmol/L,P=0.022;肺匀浆:(21.43±1.79)μmol/L vs(18.92±0.75)μmol/L,P=0.016),同时血浆IL-6(185.37±21.98 pg/ml vs 238.50±26.46 pg/ml,4 h,P＜0.01;(124.22±21.84)pg/ml vs(215.95±25.86)pg/ml,6 h,P＜0.01 ]、IL-8[(199.40±34.56)pg/ml vs(286.20±53.34)pg/ml,4h,P＜0.01;(146.58±20.23)pg/ml vs(241.30±45.85)pg/ml,6 h,P＜0.01]含量明显降低,而IL-10含量增高[(154.48±18.08)pg/ml vs(115.60±13.91)pg/ml,4 h,P=0.000;(138.06±20.01)pg/ml vs(102.41±9.93)pg/ml,6 h,P=0.1300].结论 油酸诱导的大鼠ALI内源性H2S生成减少.外源性H2S通过抑制炎症因子IL-6和IL-8的表达,增加抗炎因子IL-10的表达,进而改变炎症/抗炎因子之间的比例,对油酸诱导的大鼠急性肺损伤起保护作用.     

脑小血管病患者外周血Hcy，VILIP-1和UA水平与病情严重程度及认知障碍的相关性研究

目的　探究外周血同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）、视椎蛋白样蛋白1（visinin-like protein 1,VILIP- 1）、尿酸（uric acid,UA）与脑小血管病（cerebral small vessel disease,CSVD）患者病情程度及认知障碍相关性。方法　选取2017 年6 月～ 2019 年6 月沧州市人民医院医专院区70 例CSVD 患者作为观察组,同期选取30 例健康体检者作为对照组。统计两组及观察组不同神经功能、脑动脉搏动指数（PI）、有无认知障碍、外周血Hcy,VILIP-1 和UA 水平,通过Spearman 和多元线性回归模型分析外周血各指标与病情程度、认知障碍的关系。结果　①观察组外周血VILIP-1（671.05±201.32 pg/ml）,Hcy（20.83±6.25 μmol/L）,UA（352.21±78.66 μmol/L）高于对照组（475.12±142.54pg/ml,10.05±3.02 μmol/L 和241.25±40.86 μmol/L）, 差异均有统计学意义（t=4.831,8.989,7.698,均P ＜ 0.05）。②观察组PI 重度者外周血UA（449.79±134.94μmol/L）,Hcy（30.43±5.89μmol/L）和VILIP-1（876.94±263.08pg/ml）水平高于PI 轻中度者（273.46±82.04μmol/L,360.18±108.05μmol/L;15.33±4.60μmol/L,20.58±6.27μmol/L;502.51±150.75pg/ml,689.84±206.95pg/ml）, 差异均有统计学意义（F=13.545~35.749,均P ＜ 0.05）。观察组NIHSS评分外周血UA（443.70±133.11μmol/L）,Hcy（28.33±5.46μmol/L）,VILIP-1（941.35±282.41pg/ml）水平高于NIHSS 评分轻中度者（280.25±84.08μmol/L,372.59±111.78μmol/L;16.05±4.82μmol/L,21.42±5.91μmol/L;498.88±149.65pg/ml,692.27±207.61pg/ml）,差异均有统计学意义（F=12.544~23.020,均P ＜ 0.05）。③观察组认知障碍者UA（389.96±116.99μmol/L）,Hcy（25.66±7.71μmol/L）,VILIP-1（811.52±243.56pg/ml）水平高于无认知障碍者（301.88±90.56μmol/L,14.39±4.32μmol/L,483.76±145.13pg/ml）,差异均有统计学意义（F=3.424~7.710,均P＜ 0.05）。④外周血Hcy,VILIP-1,UA与PI 呈正相关（r=0.836,0.883,0.728）,与NIHSS 评分呈正相关（r=0.665,0.762,0.666）,与认知障碍呈负相关（r=-0.591,0.635,0.599）;在控制年龄、性别等其他因素后,外周血Hcy（标准化偏回归系数:0.277,1.122,-0.250）,VILIP-1（标准化偏回归系数:0.638,0.304,-0.319）,UA（标准化偏回归系数:0.251,0.656,-0.398）与PI 和NIHSS 评分、认知障碍显著相关（均P ＜ 0.05）。结论　CSVD 患者外周血Hcy,VILIP-1 和UA 水平呈高表达,与病情程度、认知障碍密切相关。联合检测其水平变化有助于指导临床治疗。     

心肌内注射载体腺病毒血管内皮生长因子165治疗心肌缺血的安全性

目的:血管内皮生长因子在动脉粥样硬化斑块中的高表达可能会促进斑块的发生与发展。因此,就产生了在动脉粥样硬化进程中局部应用血管内皮生长因子基因治疗心肌缺血是否会产生促进动脉粥样硬化斑块发展的安全性问题。方法:实验于2006-05/2007-03在长海医院胸心外科实验室完成。①实验材料:SPF级雄性新西兰大白兔28只,体质量2.0～2.5kg;表达hVEGF165的腺病毒及表达LacZ的腺病毒AdLacZ由解放军第二军医大学长海医院胸心外科自行构建。②实验分组:将动物随机分为实验组和对照组,每组14只。③实验过程:将28只雄性新西兰大白兔应用球囊损伤 高脂饮食喂养建立动脉粥样硬化模型后平均分成两组:Ad-hVEGF165治疗组和AdLacZ对照组;结扎兔左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型,载体腺病毒直接心肌内注射治疗。④实验评估:4周、8周后进行兔斑块形态学、病理及心功能检测。结果:①治疗组和对照组兔均形成明显的动脉粥样硬化斑块,苏丹Ⅳ染色为猩红色,两组在斑块面积、斑块周径及斑块最大厚度相比差异无明显统计学意义。②治疗组与对照组心功能在术后4周时相比较术前都有下降,对照组较治疗组下降更明显(P<0.05)。③治疗组心肌毛细血管密度比对照组增加,缺血心肌及动脉粥样斑块中均发现人血管内皮生长因子表达。结论:在应用治疗剂量Ad-hVEGF165治疗心肌缺血时不会促进动脉粥样硬化的发展。     

动脉粥样硬化与肾素血管紧张素系统及纤溶系统的关系

目的　探讨动脉粥样硬化斑块与肾素血管紧张素系统 (RAS)和纤溶系统之间的关系。方法　根据超声检查和冠状动脉造影将 78例受试者分为正常组 (A组 )和动脉粥样硬化组 (B组 )。检测血浆血管紧张素Ⅱ、醛固酮、纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂。结果　A组和B组AngII分别为 (3 2 .68± 13 .85 ) pg/ml和 (3 6.96± 3 0 .2 )pg/ml,Ald分别为(0 .2 1± 0 .0 6) pg/ml和 (0 .2 4± 0 .0 4) pg/ml ,PAI 1分别为 (0 .5 1± 0 .17)AU/ml和 (0 .5 9± 0 .14 )AU/ml ,两组测值均存在显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;t PA分别为 (0 .3 3± 0 .12 )IU /ml和 (0 .3 5± 0 .15 )IU /ml(P >0 .0 5 )。结论　动脉粥样硬化斑块形成患者血液中的RAS和纤溶系统分泌异常。     

异基因间充质干细胞输注促进动脉粥样硬化发展

本研究探索间充质干细胞（MSC）输注对动脉粥样硬化的作用。通过体外培养兔骨髓穿刺液获得间充质干细胞。30只新西兰白兔随机分为3组：正常饮食组6只（对照）,给予普通饲料饲养;高脂饮食组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射生理盐水;MSC注射组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射5×10^7MSC。分别于实验前,实验第5周,第9周和第13周测体重和空腹血脂水平。实验第13周时处死所有动物,检测动脉粥样硬化斑块和主动脉外膜滋养血管。结果表明,MSC注射组与高脂饮食组相比,主动脉窦斑块面积显著增大（斑块面积占血管面积的百分比分别为（23．35±3．51）％和（11．39±3．08）％,P〈0．05）,整体主动脉斑块形成明显增多（斑块面积占主动脉面积的百分比分别为（76．64±12．70）％和（57．61±9．00）％,P〈0．05）。MSC注射组兔主动脉外膜滋养血管增生明显,毛细血管密度增加。结论：异基因MSC输注促进高脂血症兔动脉粥样硬化斑块进展。采用MSC或包含MSC的细胞进行细胞治疗时应采取策略,减少MSC促进斑块形成的作用。     

阿托伐他汀对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中血清一氧化氮、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的机制。方法:24只载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为3组(n=8),分别给予普通饮食(空白对照组)、高脂饮食(高脂饮食组)、高脂饮食+阿托伐他汀(高脂他汀组),建立动脉粥样硬化模型,人工饲养8周后检测各组小鼠血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及行小鼠主动脉弓HE染色。结果:(1)HE染色结果显示:空白对照组主动脉内膜未见明显增厚,泡沫细胞含量极少;高脂饮食组小鼠主动脉弓可见明显动脉粥样硬化斑块,内膜明显增厚,其内可见大量泡沫细胞及增生的纤维组织,胞体大,胞浆呈空泡状,纤维帽薄;高脂他汀组主动脉亦可见明显动脉粥样硬化斑块,内膜稍增厚,泡沫细胞含量极少,可见较厚纤维帽。(2)普通饮食组、高脂饮食组、高脂他汀组血清NO分别为(56.104±16.104)、(29.881±12.009)、(53.713±16.430)μmol/L,TNF-α分别为(3.138±0.435)、(5.163±0.523)、(3.938±0.452)pg/mL(P<0.05)。结论:已知NO及TNF-α与动脉粥样硬化相关,阿托伐他汀能够调节小鼠血清NO、TNF-α的表达,提示阿托伐他汀能够通过调整炎性介质的表达发挥其抗动脉粥样硬化的作用。     

骨髓间充质干细胞对慢性肾衰竭大鼠的修复作用

目的探讨经尾静脉移植骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对腺嘌呤所致慢性肾衰竭(CRF)大鼠的修复作用。方法经密度梯度离心法结合贴壁筛选法于体外分离培养并纯化BM-MSCs。36只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、CRF组、BM-MSCs移植组,每组12只。采用腺嘌呤200 mg·kg-1·d-1灌胃法制作大鼠CRF模型。造模成功24 h,正常对照组和CRF组经尾静脉注射1 ml磷酸盐缓冲液(PBS),BM-MSCs移植组经尾静脉注射1×106个BM-MSCs。8周后采血检测各组大鼠的肾功能,收集肾组织称重,计算大鼠的肾脏系数,并用JG12免疫组化检测肾小球毛细血管密度,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血管内皮生长因子(VEGF)的含量,并比较三组间各指标的差异。结果移植BM-MSCs 8周后,BM-MSCs移植组的肾脏系数较CRF组明显降低(0.99±0.10 vs.1.32±0.20,P=0.019)。BM-MSCs移植组尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)均较CRF组降低[BUN:(11.23±1.45)mmol/L vs.(14.25±1.23)mmol/L,P=0.033;SCr:(122.45±15.37)μmol/L vs.(183.33±41.66)μmol/L,P=0.028]。CRF组肾小球中JG12表达较正常对照组显著降低(33.85±2.28 vs.66.93±3.98,P<0.001),移植BM-MSCs后肾小球中JG12表达有所增加(50.84±1.29vs.33.85±2.28,P<0.001),血清VEGF的含量升高[(86.55±5.18)pg/ml vs.(55.74±2.74)pg/ml,P<0.001]。结论腺嘌呤所致CRF大鼠移植BM-MSCs后,肾小球毛细血管密度增加,肾功能改善;其作用可能与其旁分泌促血管生成因子VEGF有关。     

阿司匹林对兔动脉粥样硬化及其炎性过程的影响

目的探讨阿司匹林对兔动脉粥样硬化斑块的抑制作用及其对动脉粥样硬化的发展中炎性过程的影响。方法18只雄性新西兰兔随机分为对照组(喂食普通兔料)、高脂模型组(喂食高脂饲料)、阿司匹林组(喂食高脂饲料并给与阿司匹林干预),饲养12周后处死动物,取主动脉进行病理学检查,采用免疫组化方法观察各组斑块区环氧合酶-2(COX-2)、巨噬细胞和平滑肌细胞表达情况。结果病理学大体观察,对照组、高脂模型组和阿司匹林组斑块/内膜面积比分别为0%、(59．6±13．7)%和(49．3±7．8)%,组间比较有显著性差异(P＜0．01);光镜下动脉粥样硬化斑块多参数分析显示,斑块最大厚度、管腔狭窄度和斑块所占周径比值3个指标各组间两两比较均有显著性差异(P＜0．01)。免疫组化检测结果显示:阿司匹林组斑块区COX-2表达、巨噬细胞含量明显低于高脂模型组,平滑肌细胞增殖和迁移也低于高脂模型组。结论阿司匹林能明显减轻高脂饮食所致的新西兰兔动脉粥样硬化大小及程度并起到稳定斑块的作用。抑制斑块内COX-2的表达以及后继的炎症过程可能是其抗AS的机制之一。     

血浆内皮素与总胆红素含量检测在门脉高压大出血中的意义

【目的】探讨血浆内皮素(ET)和总胆红素(TBIL)含量在门脉高压症大出血时的动态变化及其临床意义。【方法】将61例肝硬化门脉高压症病人分为三组:对照组,出血组,死亡组。分别检测出三个组出血发生后不同时间血浆ET和血清TBIL含量变化情况。【结果】对照组ET含量(57.62±17.15)pg/ml,TBIL含量为(12.42±6.53)μmol/L,出血组ET(100.32±24.28)pg/ml,TBIL(37.20±28.87)μmol/l,出血组出血后d1、d2血浆ET浓度较对照组显著增高(P<0.01),随后于4～7d逐步下降。死亡组ET(124.86±20.7)pg/ml,呈显著增高,TBIL为(30.96±11.46)μmol/L。出血组、死亡组出血d1TBIL水平基本接近(P>0.05),d2TBIL显著升高(P<0.01)。【结论】过高的ET、TBIL水平可能提示肝功能损害和病人预后不良。动态检测ET、TBIL对于了解患者的病情,提高诊疗水平有重要的临床意义。     

有氧运动干预高脂血症C57BL/6J小鼠血浆内皮素的变化

目的:观察有氧运动对高脂血症C57BL/6J小鼠(动脉粥样硬化易感型)血脂及血浆内皮素1水平的影响,方法:实验于2004-05/08在中国医科大学动物实验中心完成。①选用C57BL/6J纯系小鼠60只,8周龄,体质量18～20g。按随机数字表法分为3组:正常对照组、高脂膳食组、高脂膳食 运动组,每组20只。正常对照组:喂常备标准饲料,其他两组除喂常备标准饲料外,每日以脂肪乳(质量分数0.012的胆固醇、质量分数0.15的脂肪和质量分数的0.015的胆酸)按10mL/kg剂量灌胃高脂膳食。高脂膳食 运动组:进行无负重游泳,从灌胃之日起每周进行5d游泳训练。每次运动时间从最初的10min/d,每天递增10min,直至60min/d,并维持此量,共训练8周。②用放射免疫法检测血浆内皮素水平。用HITACH7071A自动分析仪测定血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平。③采用不同样本t检验进行组间比较。结果:C57BL/6J小鼠60只均进入结果分析。①血脂水平比较:训练8周后高脂膳食组的血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平分别为(4.71±0.30),(2.48±0.29),(2.55±0.07)mmol/L,高于正常对照组[(4.20±0.08),(1.27±0.03),(2.33±0.06)mmol/L,P<0.05],而高密度脂蛋白胆固醇水平明显低于正常对照组(P<0.05),分别为(1.28±0.09),(1.69±0.29)mmol/L。高脂膳食 运动组血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平分别为(4.34±0.10),(1.20±0.19),(2.42±0.04)mmol/L,低于高脂膳食组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇水平为(1.56±0.10)mmol/L,高于高脂膳食组(P<0.05)。②血浆内皮素水平比较:训练8周后,高脂膳食组血浆内皮素1水平为(72.50±6.48)ng/L,高于正常对照组[(59.78±6.74)ng/L,P<0.05],高脂膳食 运动组内皮素1水平为(62.00±2.00)ng/L,低于高脂膳食组(P<0.05)。结论:有氧运动能够降低高脂血症C57BL/6J小鼠血脂水平和血浆内皮素1水平。     

选择性iNOS抑制剂1400W对缺氧培养人肝癌SMMC-7721细胞株iNOS和VEGF表达的影响

目的探讨选择性诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）抑制剂1400W对缺氧条件培养的人肝癌SMMC-7721细胞株iNOS和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法实验组分别加入选择性iNOS抑制剂1400W 50（50μmol/L组）、100（100μmol/L组）、200（200μmol/L组）μmol/L的培养液培养;对照组不加选择性iNOS抑制剂1400W培养液培养,缺氧条件下培养24 h后,采用硝酸还原酶法检测细胞培养上清液NO含量;RT-PCR检测iNOSmRNA和VEGFmRNA水平。结果50μmol/L组、100μmol/L组、200μmol/L组NO含量分别为（28.77±2.1）、（21.63±3.0）、（17.23±2.4）μmol/L,均明显低于对照组[（43.68±4.3）μmol/L]（P均〈0.01）;50μmol/L组、100μmol/L组、200μmol/L iNOSmRNA水平分别为0.212±0.009、0.169±0.012、0.136±0.006,均明显低于对照组0.246±0.009（P〈0.05或P〈0.01）;50μmol/L组、100μmol/L组、200μmol/L VEGFmRNA水平分别为0.429±0.038、0.309±0.022、0.249±0.014,均明显低于对照组0.598±0.040（P〈0.05或P〈0.01）。结论选择性iNOS抑制剂1400W可抑制缺氧条件下培养的人肝癌SMMC-7721细胞株iNOS和VEGF表达。提示选择性iNOS抑制剂1400W对肝癌新生血管的形成具有预防和潜在的治疗价值。     

动脉粥样硬化与辛伐他汀的抗氧化应激作用

目的:他汀类药物抑制动脉粥样硬化的机制尚未完全阐明。观察他汀对动脉粥样硬化氧化应激作用的影响,探讨其抗动脉粥样硬化机制,以期为他汀类药物在动脉粥样硬化患者临床干预中的应用提供病因学依据。方法:本实验于2004-09/2005-01在中国医科大学动物部实验室完成。选择21只健康白兔,平均分为3组,观察造模后各组兔超氧化物歧化酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶活力、丙二醛含量及血清脂质浓度的变化,并计算各组兔主动脉动脉粥样硬化斑块面积比。结果:模型组血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的浓度显著高于对照组(P<0.01),辛伐他汀组总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇高于对照组,但显著低于模型组(P<0.01);模型组超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力分别为(2.23±0.34)NU/μL和(96.54±15.82)mmol/(L·min),均显著低于对照组(3.54±0.57)NU/μL,(118.53±17.29)mmol/(L·min)(P<0.01,P<0.05),而辛伐他汀组超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力(2.95±0.37)NU/μL,(120.06±20.55)mmol/(L·min)则高于模型组(P<0.01,P<0.05);模型组丙二醛含量(10.15±1.63)μmol/L明显高于对照组(6.10±1.03)μmol/L(P<0.01),而辛伐他汀组丙二醛含量(7.52±1.22)μmol/L显著低于模型组(P<0.01)。模型组动脉粥样硬化斑块面积     

大豆苷元对原代培养大鼠成骨细胞功能的影响

目的:了解大豆苷元对原代培养大鼠成骨细胞增殖、分化、钙含量及矿化功能的影响。方法:实验于2004-08/2005-06在北京同仁医院检验科完成。选取出生24h以内的SD大鼠30只,断颈处死,无菌取头盖骨,获取成骨细胞进行培养。分为对照组、大豆苷元10μmol/L组、大豆苷元5μmol/L组和大豆苷元1μmol/L组。应用四甲基偶氮唑盐法、对硝基苯磷酸盐法、原子吸收分光光度法及茜素红染色方法观察大豆苷元对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、基质钙含量及矿化结节形成的影响。结果:①各浓度组与对照组相比均可增加吸光度值,刺激成骨细胞的增殖,其中大豆苷元10μmol/L组与对照组相比,差异有显著性意义(大豆苷元10μmol/L组为0.82130±0.10130,大豆苷元5μmol/L组为0.66370±0.04749,大豆苷元1μmol/L组为0.67750±0.05392,对照组为0.66250±0.07382,P<0.005)。②各浓度组大豆苷元作用于成骨细胞48h,均可使碱性磷酸酶活性增加,差异有显著性意义(大豆苷元10μmol/L组为1.10917±0.34190,大豆苷元5μmol/L组为0.97433±0.33267,大豆苷元1μmol/L组为0.84033±0.20408,对照组为0.55050±0.15489,P<0.005或0.02);各浓度组大豆苷元作用于成骨细胞72h,均可使碱性磷酸酶活性增加,差异有显著性意义(大豆苷元10μmol/L组为1.04667±0.12217,大豆苷元5μmol/L组为0.95000±0.07330,大豆苷元1μmol/L组为1.07700±0.14704,对照组为0.81867±0.07829,P<0.005或0.02)。③各浓度组大豆苷元处理细胞18d,可增加细胞基质钙含量,其中大豆苷元5μmol/L组与对照组相比,差异有显著性意义犤大豆苷元10μmol/L组(0.69975±0.13809)mg/L,大豆苷元5μmol/L组(1.01225±0.13277)mg/L,大豆苷元1μmol/L组(0.70375±0.07146)mg/L,对照组(0.60000±0.10494)mg/L,P<0.005犦。④大豆苷元1μmol/L和5μmol/L组处理细胞18d,形成矿化结节数高于对照组犤大豆苷元5μmol/L组(182.7±30.1)个,大豆苷元1μmol/L组(117.0±41.9)个,对照组(74.7±9.5)个,P<0.005犦。结论:大豆苷元具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性、细胞基质钙含量及矿化结节形成的数量的作用。     

N-乙酰半胱氨酸预防兔实验性动脉粥样硬化的作用途径

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸对兔实验性动脉粥样硬化预防作用的途径.方法：实验于2004-08/12在锦州医学院科学实验中心实验室完成.选择健康日本大耳白兔24只,给予普通颗粒饲料喂养1周后,随机分为4组,正常对照组、模型组、N-乙酰半胱氨酸50 mg/（kg&;#183;d）,150 mg/（kg&;#183;d）组各6只.①正常对照组：喂饲普通颗粒饲料.②模型组：用高脂饲料喂养,即在普通饲料中加入1 g胆固醇和8 g猪油.③N-乙酰半胱氨酸50mg/（kg&;#183;d）组：每只兔给予N-乙酰半胱氨酸50mg/（kg&;#183;d）,混合于与模型组同条件的高脂饲料中喂饲.④N-乙酰半胱氨酸150 mg/（kg&;#183;d）组：每兔给予N-乙酰半胱氨酸150 mg/（kg&;#183;d）,其余同③.造模及预防性用药共10周,实验共11周.实验结束后分别检测各组兔的血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、一氧化氮和内皮素,低密度脂蛋白胆固醇（mmol/L）=总胆固醇-高密度脂蛋白胆固醇-三酰甘油/2.2.实验结束后,麻醉处死动物,解剖后取主动脉行病理形态学观察并定量分析病变程度.结果：纳入24只白兔全部进入结果分析,无脱失.①各组兔的血清血脂水平及一氧化氮、内皮素含量比较：喂饲高脂饲料后,模型组、N-乙酰半胱氨酸50mg/（kg&;#183;d）,150mg/（kg&;#183;d）组兔的血清中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著高于正常对照组（P＜0.01）,高密度脂蛋白胆固醇显著低于正常对照组（P＜0.01）.但两用药组与模型组比较,差异无显著性意义（P＞0.05）.N-乙酰半胱氨酸150 mg/（kg&;#183;d）组兔的一氧化氮含量显著高于模型组和N-乙酰半胱氨酸50 mg/（kg&;#183;d）组P＜0.01）,而N-乙酰半胱氨酸150 mg/（kg&;#183;d）组兔的内皮素含量显著低于模型组和N-乙酰半胱氨酸50 mg/（kg&;#183;d）组（P＜0.01）.②各组兔主动脉的病理形态学观察结果比较：模型组主动脉内膜表面不光滑,动脉管壁弹性下降,染色后橘红色斑块明显向管腔凸出,N-乙酰半胱氨酸50 mg/（kg&;#183;d）组兔的主动脉管壁弹性较好,斑块凸出不明显.N-乙酰半胱氨酸150 mg/（kg&;#183;d）组主动脉内膜仅有少量脂质斑点形成,大部分内膜光滑,弹性好.结论：N-乙酰半胱氨酸可以有效抑制动脉粥样硬化的进一步发展,其可能作用途径为N-乙酰半胱氨酸能够降低血清内皮素水平,增加一氧化氮生成,从而减少血管内皮的氧化损伤,但此作用与血脂水平无关.