快速酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量

目的　建立快速测定冰冻红细胞中残留甘油含量的方法。方法　根据GPO PAP法测定甘油三脂的部分原理 ,将甘油用甘油激酶及三磷酸腺苷磷酸化 ,再以磷酸甘油氧化酶 ,氧化 3 磷酸甘油 ,生成H2 O2 ,并以 4 氨基比林与 4 氯酚显色 ,显色程度与甘油含量成正比。结果　含甘油 1 0 0mg/L与 1 4 0 0mg/L的定值样本批内cv值分别为 2 1 1 %、3 48% ,批间cv值分别为 3 78%、4 52 %。甘油含 (750～ 2 0 0 0 )mg/L样本的回收率为 97%～ 1 0 5 % ;甘油浓度在 (1 2 5～ 2 0 0 0 )mg/L有较好的线性关系 ,r =0 .9997,Y =0 .0 0 94- 0 .0 4 58。 结论　酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量 ,具有方法简单、快速、特异、灵敏之特点 ,结果客观、准确、稳定     

2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的效果比较

目的观察2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的结果,比较洗涤溶液组合中是否加入羟乙基淀粉20氯化钠溶液对洗涤结果的影响。方法取44份全血,应用ACP215血液处理仪制备成冰冻红细胞,分A组:9%NaCl溶液、羟乙基淀粉20氯化钠注射液、0.9%NaCl溶液;B组:9%NaCl溶液、0.9%NaCl溶液2种洗涤溶液进行解冻去甘油。对2组红细胞回收率、残留白细胞、残留血小板、甘油含量、游离血红蛋白含量、体外溶血等指标进行检测分析。结果 A组解冻红细胞的红细胞回收率(86.0±3.4)%、残留白细胞(0.57±0.18)%、残留血小板0、甘油含量(3.4±0.8)g/L、游离血红蛋白含量(0.55±0.14)g/L、体外溶血试验(12±5)%均符合国家标准,B组红细胞回收率(87.0±2.3)%、残留白细胞(0.51±0.24)%、残留血小板0、甘油含量(3.5±0.7)g/L、游离血红蛋白含量(0.47±0.10)g/L、体外溶血试验(10±4)%也符合国家标准,2组解冻红细胞制品也均符合AABB标准和欧洲标准中对于红细胞回收率的要求,2组结果差异无统计学意义,P>0.05。结论羟乙基淀粉20氯化钠注射液对使用ACP215血液处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞的洗涤效果无影响,但洗涤液中不加入羟乙基淀粉20氯化钠溶液,其制品质量符合国家标准、AABB标准和欧洲标准,更加经济、省时。     

深低温保存Rh阴性血液的质量控制

目的　确保深低温保存Rh阴性红细胞解冻后的质量。方法取ACD抗凝 ,4℃保存 6d内Rh阴性红细胞悬液或全血离心除去添加剂或血浆的浓缩红细胞 ,将红细胞经 (4 0 % )浓度甘油处理后 ,置 - 80℃冰冻保存。临床需要时 37℃水浴解冻复苏红细胞 ,依次用 9%NaCl羟乙基淀粉溶液 ,0 .9%NaCl羟乙基淀粉溶液 ,0 .9%NaCl各洗涤 1次。用生理盐水羟乙基淀粉溶液悬浮红细胞。结果 35袋冰冻解冻红细胞去甘油后红细胞回收率为(81 .1 7± 1 8.5 ) % ,游离血红蛋白为 (0 .6 3± 0 .1 6 ) g/L ,甘油残留量平均为 5 .3g/L ,体外溶血试验血红蛋白增加率为2 5 .1 9%。结论冰冻解冻去甘油红细胞各项指标均达到了国家规定的质量标准 ,临床输用效果良好     

冰冻红细胞制备过程中若干问题探讨

目的　为简化冰冻红细胞的制备程序 ,保证临床及时用血。方法　比较不同条件制备的成品冰冻红细胞的红细胞回收率、溶血率、上清游离血红蛋白及体外溶血试验。结果　红细胞冰冻前在 4℃贮存 1～ 6d与 7～1 2d、甘油化红细胞先冰冻待解冻后再去甘油与先去甘油再冰冻、洗涤时加不同量的 9%氯化钠溶液所制备的成品冰冻红细胞的红细胞回收率、溶血率、上清游离血红蛋白及体外溶血试验均无显著性差异 ,缓慢匀速加甘油与快速加甘油中间静置平衡使红细胞甘油化后甘油中血红蛋白含量有显著性差异 ,前者高于后者。结论　上述条件的改变可简化冰冻红细胞的制备程序且不影响冰冻红细胞的质量     

不同方法检测冷冻红细胞甘油残留量的比较

目的通过比较过碘酸钠法、甘油三酯检测试剂盒和甘油检测试剂盒对冰冻红细胞甘油残留量的检测结果,选择一种快速简单、灵敏、结果准确、稳定、易于开展的甘油残留量检测方法。方法采用3种方法分别检测0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L甘油溶液,进行线性实验和回收率实验;并采用3种方法检测甘油含量均为1.0g/L的不同浓度血红蛋白甘油溶液;并分别测定本站成分科制备的20份冷冻解冻去甘油红细胞的甘油残留量。结果线性实验的r值均大于0.99,Y=0.05＋1.076X、Y=0.126＋0.912X、Y=0.006＋0.104X,表明甘油含量在（0.5-2）g/L范围内有较好的线性关系,回收率均在90%-110%,回收率较高;游离血红蛋白小于1g/L时,3种方法甘油回收率均在90%-110%,无明显干扰。过碘酸钠法血红蛋白浓度超过1.5g/L,甘油三酯检测试剂盒血红蛋白浓度超过2g/L,回收率超过110%,有较明显的干扰;用3种方法检测20份本站制备的冰冻解冻去甘油红细胞的甘油含量,经统计学处理,P均〉0.05,其游离血红蛋白均小于1g/L,甘油残留量均小于2g/L。结论游离血红蛋白在小于1g/L,甘油残留量小于2g/L时,3种方法均可用于冷冻去甘油红细胞甘油残留量的检测。甘油三酯试剂盒简单、快速、结果稳定、价格低廉,对仪器设备无特殊要求,更适合于一般实验室开展此项实验。     

扩容降渗法快速洗涤冰冻甘油红细胞的研究

目的研究一种快速去除冰冻红细胞甘油的方法。方法用一种扩容液使处于高渗态的冰冻甘油红细胞,随着扩容液体积的增加,其周围的渗透压也平稳地、近似无梯度地下降至等渗态,然后借助于血浆单采机的部分功能,收集浓缩红细胞,达到去甘油、去高盐的目的,并将该法与常规手工法相比较。结果扩容法RBC回收率(85.6±2.1)%,游离血红蛋白(0.69±0.18)g/L,残留甘油含量(1.39±0.28)g/L,手工法的检测指标相应为(80.4±1.8)%,(0.57±0.14)g/L和(1.46±0.29)g/L。两种方法的RBC回收率有统计学差异(P<0.05)。扩容法处理1U冰冻RBC仅花0.5h,手工法则需要3-4h。结论扩容法不失为一种快速、高效的去甘油方法,值得推广。     

全自动酶偶联法测定腺苷脱氨酶

目的　建立全自动测定腺苷脱氨酶 (ADA)的酶偶联分光光度法。方法　用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究。用该法测定了 90例健康者的血清样本及 99例胸腹水的ADA活性。结果　该法最低检出限为1.7U/L ,线性范围可达 2 2 0U/L(r=0 .9989) ,批内CV为 2 9%～ 5 .4 % ,批间CV为 4 .7%～ 6 4 % ,回收率为 99.7%。胆红素 <136 .8μmol/L ,血红蛋白 <3.5g/L ,抗坏血酸 <2 84 μmol/L和三酰甘油 <9.0 3mmol/L的情况下 ,对测定结果无显著性影响。 结论　本法灵敏度高 ,线性、精密度好 ,结果准确 ,干扰少 ,且操作简便快速 ,适用于全自动生化分析仪分析。     

甘油激酶偶联法测定解冻红细胞的甘油含量

受血者Rh(D)血型常规检测后,冰冻红细胞需求量明显增多.甘油用于红细胞冷冻保存,可通过红细胞膜,使溶液的冰点降低,增加未冻水量,具有冷冻保护作用.同时甘油对红细胞又有溶血作用,故解冻红细胞必须除去甘油,使红细胞内甘油含量少于1%才能在输注后获得适当的存活率[1、2].因此,准确测定解冻红细胞悬液上清液的甘油含量非常必要.笔者参考文献[3],建立了测定甘油含量的甘油激酶-甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶酶偶联法,报道如下.     

酶法检测解冻红细胞残留甘油含量

红细胞冰冻保存需要添加一定的保护剂 ,目前最常见的保护剂为甘油 ,但临床应用前须经一定的程序洗涤 ,尽量去除添加的外源性甘油。解冻洗涤处理过的冰冻红细胞内残留甘油的含量对于保证其质量至关重要 ,国家规定的标准为≤ 1 0 g/L[1 ]。目前血站对于冰冻红细胞内残留甘油的检测大多采用高碘酸法 [2 ] ,但其操作繁琐。本实验室利用甘油三酯试剂盒 (酶法 )检测解冻红细胞残留甘油含量 ,取得较好的效果 ,现报告如下。材料与方法1　仪器与试剂　三氯醋酸由上海凌峰化学试剂厂提供 ;甘油三酯测定试剂盒由浙江宁波慈城生化试剂厂提供 (试剂内含…     

微量板酶法测定红细胞内肌酸

目的　建立一种红细胞内肌酸的测定方法。　方法　采用 CTase/SOX/POD三联酶氧化肌酸产生 H2 O2 ,通过偶联显色反应测定红细胞内肌酸。　结果　方法的线性范围为 0～ 2 0 0μmol/L;精密度 :批内 CV 0 .92 %～ 1 .5 1 % ,批间CV1 .2 8%～ 2 .1 2 % ;回收率 98.30 %～ 1 0 1 .69%。采用了 μmol/g Hb和 μmol/LRBC两种红细胞内肌酸测定的单位表示方法 ,消除了实验误差对结果产生的影响。 2 86例健康人红细胞肌酸参考值分别为男性 1 .93± 0 .36μmol/g Hb,684 .3± 1 2 7.5μmol/LRBC;女性 2 .1 7± 0 .4 1 μmol/g Hb,75 9.4± 1 37.9μmol/LRBC。　结论　本方法简便、可靠、线性范围广、特异性好 ,适合作为红细胞内肌酸的常规测定。