胃癌患者腹腔灌洗液CK19 mRNA、CEA mRNA的检测及其临床意义

目的观察采用巢式逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）检测胃癌患者腹腔冲洗液中细胞角蛋白19（CK19）mRNA和癌胚抗原（CEA）mRNA的临床价值。方法收集67例胃癌患者和8例胃良性病变患者腹腔冲洗液或腹水。常规行H-E染色细胞学检查，采用巢式RT-PCR方法检测腹腔冲洗液中CK19 mRNA和CEA mRNA的表达，并以胃癌细胞SGC7901为阳性对照。结果67例胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA的阳性表达率为58.2％（39/67）；CEA mRNA的阳性表达率为53.7％（36/67）；CK19 mRNA和CEA mRNA的联合检测阳性率为67.2％（45/67），皆高于细胞病理学检查的19.4％（13/67），而13例细胞病理学检查阳性患者的CK19 mRNA、CEA mRNA检测结果均为阳性。CK19 mRNA、CEA mRNA阳性率与肿瘤胃壁浆膜受侵、淋巴结转移和胃癌分期明显相关（P＜0.05）。结论采用巢式RT-PCR方法检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达敏感性高，对于早期诊断胃癌患者腹腔种植转移有一定临床价值。     

RT-PCR检测CK19 mRNA青年结直肠癌患者淋巴结微转移

目的利用RT-PCR检测CK19 mRNA技术,从分子水平探讨在青年结直肠癌患者区域淋巴结微转移的价值及临床意义。方法采用RT-PCR扩增,对角蛋白CK19检测。对30例结直肠癌患者的癌组织标本和108个淋巴结进行检测,检测良性结直肠疾病(结直肠息肉、憩室等)手术的20例患者的正常肠周淋巴结20枚作为对照组,同时行常规病理检查。结果 30例结直肠癌患者均有CK19 mRNA表达,108个淋巴结中有47个存在CK19 mRNA阳性表达,阳性率为43.5%;常规病理检查有25枚有癌转移,阳性率为23.2%;20例良性病变患者30枚淋巴结CK19mRNA表达为阴性。结论 RT-PCR扩增CK19 mRNA检测结直肠癌区域淋巴结微转移,是一种敏感而特异性的检测方法,对青年结直肠癌患者指导治疗,有较大的临床意义。     

肺癌转移监测—影像学与细胞角蛋白19—mRNA对照应用研究

目的：建立一种利用影像学和细胞角蛋白19－mRNA(CK19-mRNA)全面评估肺癌患者癌细胞转移状况的方法。并探讨其临床意义。方法：利用影像学手段检测肺癌患者临床肿瘤转移灶,同时采用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测肺癌区域性淋巴结和肺癌患者外周血CK19－mRNA表达,来评估肺癌患者亚临床转移（微转移）情况。结果（1）在临床癌转移灶检测方面,影像学具有较高的灵敏度,能够发现1cm以上的转移灶,（2）在亚临床转移检测方面：（1）将CK19 RT－PCR和传统的病理学检测方法进行对比9枚病理学检测阳性淋巴结CK19RT－PCR均为阳性,31枚病理学检测为阴性的淋巴结中有10枚CK19 RT－PCR阳性。（2）将CK19 RT－PCR和影像学进行对比,有5枚淋巴结经CT或MRI确诊为转移（标准为短径大于1cm),CK19 RT-PCR均为阳性;而经CT或MRI诊断为可疑或无临床意义的35枚淋巴结中,CK19 RT－PCR有14枚阳性。（3）30例肺癌患者外周血标本中有12例CK19 RT－PXR阳性（40％）,15例肺良性病变及5例正常人外周血中只有1例阳性。结论：（1）影像学检查是诊断肺癌临床转移可靠和主要的手段,具有很高的灵敏性。（2）在微转移检测方面,CK19 RT－PCR可作为一个标志物来检测肺癌微转移,并且有很高的灵敏度和特异度。（3）CK19RT－PCR结合影像学检查,有助于全面评估肺癌患者的转移状况;定期检测外周血CK19－mRNA,尚可作为疗效的观察指标。     

大肠癌淋巴结中CEA、CK20和MMP-7mRNA表达诊断肿瘤微转移的意义

目的探讨大肠癌淋巴结中癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白(CK20)和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)mRNA的表达及其与肿瘤微转移的关系。方法分别用RT-PCR技术检测CEA、CK20、MMP-7基因的mRNA在106例大肠癌患者628个淋巴结及18例良性肠道疾病患者45个淋巴结中的表达情况,并与常规病理学检查进行比较。结果大肠癌患者淋巴结中CEA、CK20、MMP-7mRNA表达阳性率分别为41.6%(261/628)、42.7%(268/628)和56.1%(352/628),病理学检查转移阳性率为22.3%(140/628);CEA、CK20、MMP-7mRNA的阳性检出率均明显高于病理学阳性检出率(均P<0.01)。而18例良性肠道疾病患者45个淋巴结三者表达均阴性。结论RT-PCR技术检测淋巴结CEA、CK20、MMP-7mRNA的表达可用于诊断大肠癌的微转移,其结果较常规病理学检查敏感,对临床分期、预后评估具有重要意义。     

肋骨骨髓CK18 mRNA基因表达与食管癌微转移的关系

目的：探讨巢式逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测CK18 mRNA对食管癌微转移的诊断意义。 方法：采用巢式RT-PCR方法检测50例无远处转移、10例有远处转移的食管癌患者及10例食管良性病变患者肋骨骨髓中细胞角蛋白CK18 mRNA基因的表达。 结果：食管良性病变患者的肋骨骨髓未检测出CK18 mRNA阳性表达;50例无远处转移、10例有远处转移的食管癌患者外周血中CK18 mRNA表达阳性率分别为42.0%（21/50）、100.0%（10/10）。食管癌Ⅳ期与Ⅱa、Ⅱb和Ⅲ期阳性率（分别为100.0％、40.0％、41.7％和45.8%）比较差异有显著性意义（P＜0.05）,而其他各期之间阳性率比较差异无显著性（P＞0.05）。不同病理分化程度之间阳性率（Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期分别为41.7％、41.7％和42.9％）比较差异无显著性（P＞0.05）。结论：食管癌患者临床早期已有癌细胞发生微转移。应用巢式RT-PCR检测肋骨骨髓中CK18 mRNA靶基因有助于食管癌微转移的早期诊断。     

食管鳞癌区域淋巴结微转移分子学检测的临床病理意义

目的：评价RT-PCR法检测食管鳞癌区域淋巴结微转移的临床病理意义。 方法：取23例食管鳞癌患者的区域淋巴结共104枚，将每枚淋巴结均分为两等份，分别进行病理学检查和上皮组织特异性标志物角蛋白CK19基因的表达分析。对两法测得的淋巴结转移结果与常见临床病理参数间的关系进行统计学分析。结果：23例病人中，病理检查发现其中10例 （43.5%）淋巴结存在癌转移，淋巴结是否转移与临床病理参数之间不存在相关性。CK19RT-PCR法不但证实了病理检查的结果，而且还另外发现5例病人存在淋巴结微转移，淋巴结转移与否与组织分化等级（P =0.035）和pTNM分期（P =0.024）间存在相关关系。结论：运用RT-PCR法检测区域淋巴结转移有助于揭示食管癌固有的转移规律。     

免疫组织化学和RT-PCR法检测胃癌淋巴结微转移的临床研究

目的：评价胃癌淋巴结微转移的临床意义。方法：对55例胃癌根治性手术切除的淋巴结转移资料进行回顾性分析，共切取淋巴结1225枚，每例平均切除13～49枚。采用免疫组织化学（IHC）法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法同步检测细胞角蛋白20（CK20）和癌胚抗原（CEA）的表达，对比分析胃癌淋巴结微转移与临床病理参数和预后的关系。结呆：IHC和RT-PCR法检测淋巴结的转移率从HE染色的74．5％分别上升为83．6％和90．9％；IHC和RT-PCR法检测微转移度分别为7．4％和17．3％；经IHC和RT-PCR法检测重新分期率分别为20．0％和40．0％；淋巴结微转移的发生与肿瘤大小、部位无关，与肿瘤Lauren分型和浸润深度密切相关；肿瘤Lauren分型为独立预后因素。结论：IHC和RT-PCR法是检测胃癌淋巴结微转移的有效手段，能够准确判断临床分期，为制定治疗方案提供依据；微转移与胃癌的预后无明显关系。     

CK19在口腔鳞状细胞癌转移淋巴结中的表达研究

目的：检测口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者淋巴结标本中细胞角蛋白19（CK19）的表达情况,寻找发现OSCC淋巴结转移及微转移的有效分子生物学手段。方法应用荧光定量RT- PCR检测8例OSCC患者的119枚淋巴结标本中CK19 mRNA表达水平,并与HE染色及免疫组化进行比较。结果 HE染色及免疫组化同时检测到CK19阳性淋巴结24枚,荧光定量RT- PCR检测到CK19阳性者48枚,HE染色及免疫组化结果CK19阴性而定量RT- PCR阳性的微转移淋巴结主要分布于颈Ⅱ区。淋巴结总体微转移率为20.17%。荧光定量 RT- PCR检测的CK19阳性淋巴结与 HE染色及免疫组化比较有统计学差异（χ2=22.04,P＜0.01）。结论对于OSCC淋巴结转移与微转移的检测,荧光定量RT- PCR对CK19 mRNA的检测较HE染色和免疫组化敏感,分子病理检测方法的应用可以有助于肿瘤的分期判断、预后评估及治疗方案的抉择。     

CK19及nm23-H1基因联合检测在胃癌淋巴结微转移中的研究

目的 研究胃癌淋巴结微转移情况以判断肿瘤预后，指导肿瘤的综合治疗。方法 采用RT-PCR方法对胃癌上皮及淋巴结进行CK19mRNA的检测及胃癌上皮细胞nm23-H1mRNA的检测。结果 6例正常淋巴结无CK19mRNA表达，20例胃癌组织均有CK19mRNA表达，其中有12例淋巴结存在CK19mRNA表达，占60%，而病理组织学检查只有4例存在淋巴结转移，占20%，另外该12例有淋巴结转移的胃癌组织中有9例nm23-H1mRNA低表达，结论 应用RT-PCR方法对胃淋巴结CK19mRNA及胃癌组织nm-H1mRNA进行联合检测，可提高胃癌淋巴结微转移的早期诊断率。     

早期胃癌组织中VEGF-C表达与淋巴结微转移关系的研究

目的 研究早期胃癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达水平及其与淋巴结微转移的关系.方法 采用免疫组化技术检测48例常规HE染色无淋巴结转移的早期胃癌患者胃癌组织中VEGF-C 的表达水平,采用淋巴结组织HE 染色和细胞角蛋白(CK)20 表达检测判断淋巴结微转移情况,分析VEGF-C 表达水平与淋巴结微转移的关系.结果 48 例患者中,7 例患者的14 枚淋巴结发现CK20 阳性细胞,阳性率14.6%(7/48),淋巴结微转移率3.6%(14/385);有淋巴结微转移组VEGF-C 阳性表达率85.7%(6/7),明显高于无淋巴结微转移组的31.7%(13/41),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 检测CK20 的表达了解淋巴结微转移较传统病理检查敏感,适用于微转移诊断;胃癌组织VEGF-C 高表达有较高的淋巴结微转移风险,这对判断预后和指导治疗有重要意义.     

胃窦癌肝十二指肠韧带淋巴结微转移与清扫

目的检测进展期胃窦癌肝十二指肠韧带淋巴结微转移状况,探讨进展期胃窦癌根治术肝十二指肠韧带淋巴结清扫的必要性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以细胞角蛋白20(CK20)mRNA为标志基因,对45例进展期胃窦癌患者的86枚肝十二指肠韧带淋巴结标本进行检测。结果45例进展期胃窦癌患者有23例出现肝十二指肠韧带淋巴结CK20阳性(51.11%),与常规病理检查相比,存在显著性差异(P<0.01);常规病理检查阴性的86枚淋巴结有46枚CK20阳性(53.49%),亦存在显著性差异(P<0.01)。肝十二指肠韧带淋巴结微转移与临床分期、浸润深度以及肿瘤分化程度显著相关。结论RT-PCR技术检测CK20 mRNA是诊断胃窦癌淋巴结微转移敏感而特异的方法,进展期胃窦癌根治术应包括肝十二指肠韧带淋巴结的清扫。     

细胞角蛋白19基因诊断淋巴结微转移癌灶的意义

目的研究淋巴结转移情况以判断肿瘤预后,指导综合治疗。方法应用细胞角蛋白19（cyto－keratin19,CK19）RT－PCR方法对上皮性肿瘤及淋巴结进行CK19mRNA检测。结果5例正常淋巴结无CK19mRNA表达;15例乳腺癌、10例胃癌、11例大肠癌均表达CK19mRNA;82个淋巴结中,组织学检查11个有肿瘤转移,其CK19RT－PCR也为阳性,其余71个无肿瘤浸润淋巴结,经CK19RT－PCR发现16个表达CK19mRNA。结论CK19RT－PCR方法提高了淋巴结转移的检出率,在上皮性肿瘤患者的其它部位（外周血、骨髓）微转移癌灶的检测中有推广应用价值。     

乳腺癌患者外周血hMAM、CK19、CEA、SBEM mRNA表达与淋巴结微转移的关系

目的探讨腋淋巴结阴性（ANN）乳腺癌患者外周血hMAM、CK19、CEA和SBEM mRNA的表达及与淋巴结微转移的关系。方法研究对象为62例ANN乳腺癌患者,免疫组化S-P法检测CK（AE1/AE3）在其淋巴结中的表达,以判定微转移;用荧光定量PCR技术检测外周血hMAM、CK19、CEA、SBEM mRNA的表达。结果 ANN组腋窝淋巴结微转移率为27.42%,有微转移的患者外周血hMAM、CK19、CEA和SBEM mRNA的阳性表达率分别为41.18%、29.41%、23.52%和35.29%,与对照组相比有显著差异。4种标记物联合检测比单项检测有更高的敏感度和准确性。结论外周血中的hMAM、CK19、CEA和SBEM mRNA联合检测可能为预测ANN乳腺癌患者淋巴道转移和微转移提供有用的观测指标。     

CEA mRNA检测诊断胃周围淋巴结癌细胞微转移

目的:评估癌胚抗原(CEA)mRNA在诊断胃癌细胞淋巴结微转移方面的应用价值。方法:以胃周围淋巴结为检测标本,用反转录套式聚合酶链反应技术(RT-NP-PCR)检测CEA mRNA,用常规病理学方法检查癌细胞。结果:胃癌组胃周围淋巴结38.8?A mRNA阳性,病理学检测17.9%癌细胞阳性;良性胃病组胃周围淋巴结均阴性。RT-NP-PCR检测CEA mRNA与病理学检查癌细胞的结果比较,有非常显著性差异(P<0.01)。结论:CEA mRNA指标诊断胃癌细胞淋巴结微转移的敏感性较高,具有较高的应用价值,可以在病理学诊断胃癌淋巴结转移时开展应用。     

SCCAg、CK19mRNA与早期宫颈癌前哨淋巴结微转移的相关性研究

目的 探讨鳞状细胞癌抗原（SCCAg）联合细胞角蛋白（CKs）19mRNA在预测IA2-IB2期宫颈癌前哨淋巴结微转移中的价值及相关性.方法 IA2-IB2期宫颈癌患者为研究组,CIN患者及健康妇女为对照组.用ELISA法检测宫颈癌患者术前及对照组血清中SCCAg含量,荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测宫颈癌患者前哨淋巴结CK19mRNA的表达,分析两项指标的临床价值及两者间的关系.结果 宫颈癌组血清SCCAg较CIN组及健康体检组明显增高;荧光定量PCR检测CK19mRNA检出前哨淋巴结微转移的阳性率（32.6%）比常规病理检查（12.8%）高;血清SCCAg与CK19mRNA表达呈正相关.结论 检测CK19mRNA能显著提高IA2-IB2期宫颈癌前哨淋微转移的检出率;联合检测IA2-IB2期宫颈癌患者血清SCCAg及前哨淋巴结CK19mRNA可能成为预测早期宫颈癌前哨淋巴结发生微转移的一种有价值的方法.     

巢式RT-PCR技术检测肺癌76例微量癌细胞转移分析

目的 :建立检测肺癌患者外周血及淋巴结微转移癌细胞的敏感的分子检测方法 ,并探讨其临床应用的意义。方法 :采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术特异引物扩增 CK19- m RNA,以检测肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19- m RNA的表达情况。分析CK19- m RNA扩增结果与患者临床指标的关系。结果 :76例肺癌患者外周血标本中 39例CK19- m RNA阳性 ,阳性率为 5 1 .3% ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率为 3.7% ,1 5例健康对照者均为阴性。全部患者 1 5 7枚淋巴结中 CK19- m RNA检测出阳性率为 38.9%( 61 / 1 5 7) ,常规病理方法检出阳性率为 1 4.6% ( 2 3/ 1 5 7) ,两种方法比较 ,有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,且 HE染色阴性的 1 34枚淋巴结中 ,经 RT- PCR法证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% ( 38/ 1 34) ,两组比较有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :巢式 RT- PCR是一种特异性和敏感性均较高的癌细胞微量转移检测方法 ;可能有助于肺癌细胞微转移的早期诊断。     

早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征研究

目的:研究早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征,探讨微小转移的诊断、治疗及其预后,阐明早期胃癌淋巴结转移发生、发展机理。方法:以11例有微小淋巴结转移者作为微小转移组,以46例有淋巴结转移者作为对照组。应用免疫组织化学染色检测ssDNA、bcl-2、p53、c-myc、E-cadherin、Ki-67和CD34。将各组的肿瘤灶亚分类为表层部、浸润部和淋巴结部,对各病例的各部位、各个指标进行统计学分析。结果:微小转移组中表层部的ssDNA阳性率高于对照组、浸润部和淋巴结部,bcl-2的阳性率高于浸润部和淋巴结部,c-myc阳性率高于对照组;其淋巴结部的E-cadherin阳性率和微血管面积比低于对照组;其表层部和淋巴结部的Ki-67阳性率低于对照组。微小转移组中淋巴结等于或小于4mm者占27.3%。结论:ssDNA、E-cadherin和Ki-67低表达的早期胃癌癌细胞恶性程度较高,黏附力较低,但增殖能力较弱,部分处于静止状态;而微血管增加是转移灶形成和发展的基础。