Effect of dendritic cell vaccine against a tongue squamous cell cancer cell line (Tca8113) in vivo and in vitro

Dendritic cells (DCs), as primary antigen-presenting cells with the capacity to activate naïve T lymphocytes, are considered to be promising adjuvants for immunity against cancer. In this study, the effect of T lymphocyte-mediated immunity induced by a DC vaccine against Tca8113 cells in vivo and in vitro was evaluated. DCs were from human peripheral blood monocytes cultured in the presence of granulocyte–macrophage colony stimulating factor, interleukin 4 and/or tumour necrosis factor α, and stimulated with Tca8113 cell lysate prepared by the freeze–thaw method. The autologous T cells activated by these DCs were used in an in vitro MTT assay to detect their tumouricidal activity and investigated for their anti-tumour effect in vivo by administration to nude mice with implanted tumours (Tca8113). An adequate number of DCs were successfully generated from the monocytes. The T cells activated by the DC-based vaccine killed Tca8113 cells in vitro (P < 0.01), postponed tumour doubling time of the implanted tumours in nude mice (P < 0.01) and inhibited the growth of the tumours (P < 0.05). These results show that DCs from monocytes induce a lymphocyte-mediated immune response against tongue squamous carcinoma, and could be used as a vehicle for tumour antigens.     

热放疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的：探讨热放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：实时定量逆转录PCR（RT—PCR）检测热放疗对Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞多药耐药基因1（MDR1）、多药耐药相关蛋白1基因（MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（GST-π）表达的影响和检测热放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA和Tca 8113细胞热放疗后耐药基因MDR1的表达在4h和24h无明显改变（P〉0．05）。MRP1基因的表达在4h和24h组均有明显下降（P〈0．05）,GST-π基因表达在4h组Tca 8113和Tca 8113／CBDEA的表达无明显改变（P〉0．05）,在24h组有明显下降（P〈0．05）．热放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显上升。结论：热放疗联合应用抑制了放疗造成的耐药基因表达上升,增加了细胞内的药物浓度,热放疗联用不会促使肿瘤细胞产生MDR。     

TRPM1在舌癌组织及Tca8113细胞中表达的研究

目的 观察瞬间受体势M亚基1(Transient Receptor Potential Melastatin-1,TRPM1)在舌癌组织及舌癌Tca8113细胞系中的表达情况。方法 选取25例舌癌组织作为实验组,15例正常舌组织作为对照组,应用免疫组化及Western-blot的方法检测TRPM1蛋白在舌癌组织及Tca8113细胞与正常舌组织中的表达;应用RT-PCR方法检测TRPM1 mRNA在舌癌细胞与正常舌组织中的表达。结果 免疫组化实验结果显示,23/25例舌癌组织中TRPM1呈强阳性表达,2/25例呈阴性表达;12/15例正常舌体组织中TRPM1呈阴性表达,3/15例呈弱阳性表达。TRPM1在舌癌与正常舌组织中的表达有显著性差异(P<0.05);Western-blot实验显示舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113细胞中TRPM1蛋白的表达水平高于其在正常舌组织的表达;RT-PCR实验结果也证实TRPM1 mRNA在Tca8113细胞中的表达高于正常舌组织。结论 TRPM1与舌癌的发生可能存在相关性。     

热疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的 探讨热疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞多药耐药蛋白表达和耐药性的影响.方法 应用免疫组化SP法检测热疔对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associate protein 1,MRP1)和谷胱甘肽硫-转移酶π(glutathione S-tranferaseπ,GST-π)表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响.结果 Tca 8113/CBDEA细胞在热疗后4 h和24hMDR1、MRP1、GST-π耐药蛋白表达量明显下降(P＜0.01),Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时亦有明显下降.热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升.结论 热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,,热疗可能是逆转其耐药提高化疗效果的一种有效手段.     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的：探讨舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞对放疗的敏感性及放疗对其耐药性的影响.方法：应用MTT法测定Tca 8113和Tca 8113/CBDEA细胞的放疗成活曲线,实时定量逆转录PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）检测放疗对多药耐药基因1（mdr1）、多药耐药相关蛋白1基因（mrp1 ）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（gst-π）表达的影响和对细胞内阿霉素浓度的影响.结果：Tca 8113/CBDEA对放疗的ID50是Tca 8113的1.24 倍（P＜0.01）.Tca 8113/CBDEA细胞在放疗后4 h mdr1,mrp1,gst-π耐药基因表达无明显上升,24 h耐药基因的表达明显升高（P＜0.01）,Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时均有明显上升（P＜0.01）.放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降.结论：耐药的舌鳞癌细胞表现放疗耐受性,放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药.对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点.     

姜黄素对舌鳞状细胞癌Tca8113侵袭和迁移影响的实验研究

目的 研究姜黄素对舌鳞状细胞癌明胶酶分泌的影响,探讨舌鳞癌侵袭和转移的机制.方法 收集不同浓度(0～100μmol/L)姜黄素作用Tca8ll3 24 h后的细胞上清液,采用明胶酶谱法(gelatin zymography)检测上清液中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9活性的变化;同时采用Transwell小室建立细胞体外侵袭迁移模型,检测不同浓度姜黄素对Tca8113细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 25 μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-9活性降低86.8%,50～100μmol/L姜黄素作用24 h后,则检测不到MMP-9的活性,抑制率接近100%;25μmol/L和50μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-2活性降低40%左右,在75 μmol/L和100μmol/L时,抑制率达90%.姜黄素可显著降低细胞的侵袭迁移能力,经分析,以上结果具有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄素可以通过抑制明胶酶的分泌抑制Tca8113细胞的侵袭和迁移.     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系CD133+亚群生物学特性的研究

目的研究CD133在人舌鳞癌Tca8113细胞系中的表达,观察纯化的CD133肿瘤细胞体外生长特性。方法采用有限稀释法观察单细胞体外增殖的能力;利用超低黏附板,观察舌鳞癌Tca8113细胞体外悬浮肿瘤细胞成球;流式细胞仪检测舌鳞癌Tca8113细胞系中的CD133表达;免疫磁珠分选技术纯化CD133肿瘤细胞,体外培养并观察其增殖及分化能力。结果单细胞体外增殖12 d后,仅有5.23%的细胞具有持续增殖的能力。体外观察发现,超低黏附96孔培养板中细胞悬浮生长,部分可以形成肿瘤球;Tca8113细胞系中有占肿瘤部分0.95％的CD133肿瘤细胞呈阳性表达,且分选出的CD133+肿瘤细胞的增殖能力均高于CD133-肿瘤细胞及未分选的肿瘤细胞;CD133在培养体系中的比例逐日下降,由培养第1天的92.45％下降至第12天的1.62％。结论Tca8113细胞系中肿瘤细胞具有异质性,且CD133+细胞占肿瘤细胞比例较低,在体外分化和增殖能力较强,CD133可能是肿瘤起始细胞的表型标志之一。     

乏氧对人舌鳞癌细胞系Tca8113体外黏附和侵袭能力的影响

目的:研究乏氧及人乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达对舌鳞癌Tca8113细胞系黏附和侵袭能力的影响.方法:将化学合成的siRNA_(HIF-1α)转染入Tca8113细胞后进行常氧或乏氧(1% O_2)培养.实验设以下对照组:空白对照组、脂质体组及非特异性siRNA(siRNA_(Irr))组.采用real time-PCR和Western blot法测定细胞中HIF-1α mRNA表达和蛋白含量,并分别检测HIF-1α基因干扰前后细胞对细胞外基质(ECM)的黏附与侵袭力.结果: 乏氧能够诱导Tca8113细胞的黏附与侵袭力增加.乏氧培养条件下,HIF-1α的表达上调主要发生在蛋白水平.siRNA_(HIF-1α)转染后常氧或乏氧培养24 h, HIF-1α mRNA表达显著下调,与各对照组相比有统计学意义(P<0.01),Tca8113细胞内HIF-1α蛋白含量亦显著降低.无论在常氧还是乏氧培养条件下,siRNA_(HIF-1α)转染的Tca8113细胞黏附力与各对照组相比均显著降低(P<0.05或P<0.01);侵袭力也显著降低(P<0.01).乏氧条件下siRNAHIF-1α转染的Tca8113细胞黏附力和侵袭力下降程度高于常氧培养[(36.4±2.7)% vs (26±2.35);(44.2±2.2)% vs (35±1.75), P<0.01)].结论: 化学合成的靶向HIF-1α的siRNA能够下调Tca8113细胞中HIF-1α基因的表达,降低细胞对ECM的黏附和侵袭力,可能成为抑制肿瘤转移的基因治疗的新途径或新靶点.     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

半导体量子点对舌鳞状细胞癌Tca8113系生物学行为影响的研究

目的：研究新型发光纳米材料半导体量子点（semiconductor quantumdots，QD）对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响。方法：用不同浓度最大发射波长为605nm的QD与Tca8113共培养，观察QD对Tca8113细胞生长的影响。用QD标记Tca8113细胞（Tca8113-QD），利用transwell小室法和冲刷实验，观察Tca8113-QD细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化。结果：Tca8113细胞与不同浓度QD共培养后，其细胞的生长曲线基本一致，差异无统计学意义。Tca8113-QD细胞和Tca8113细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力差异无统计学意义。结论：用QD标记Tca8113细胞后，不影响肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力，为半导体量子点在活体生理条件下用于肿瘤细胞和细胞内分子成像及示踪研究提供了科学依据。     

VEGF-C在人舌鳞癌细胞株TCa8113的表达及过表达细胞株的建立

目的 研究VEGF—C在人舌癌发生发展中的作用，检测VEGF—CmRNA和蛋白在人舌鳞癌细胞株TCa8113中的表达，建立高表达VEGF-C的细胞株TCa8113／VEGF—C。方法 运用RT—PCR和免疫组化法分别检测VEGF—CmRNA和蛋白在人舌癌细胞株中的表达，通过脂质体转基因的方法筛选建立过表达VEGF-C的细胞株。结果 TCa8113中检测到VEGF—C的表达，筛选建立的细胞株高表达VEGF—C。结论 TCa8113能转录VEGF—CmRNA，并在胞浆中翻译表达VEGF—C蛋白，但是表达较弱；筛选建立的高表达VEGF-C的TCa8113细胞株为今后的研究提供了材料。     

羟基喜树碱纳米微球抑制舌鳞癌Tca8113细胞的实验研究

目的探讨改良闭环羟基喜树碱（HCPT）药用剂型体外抑制口腔鳞癌细胞株的疗效。方法透析法制备载闭环羟基喜树碱/聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯（HCPT/PEG-PBLG）纳米微球,与HCPT羧酸钠盐分别作用于Tca8113细胞,对比观察细胞形态学改变,MTT检测细胞毒作用,流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测细胞周期变化及细胞凋亡。结果成功制备HCPT/PEG-PBLG纳米微球,包封率56.8%;载药率7.5%。Tca8113细胞经HCPT和HCPT/PEG-PBLG分别作用后,显微镜形态学观察见细胞凋亡、生长抑制。MTT检测显示HCPT呈现明显细胞毒作用;HCPT纳米微球剂型组48h时生长抑制率低于HCPT普通剂型组（P≤0.01）,至96h时则与HCPT普通剂型组差异已无统计学意义（P〉0.05）。流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测细胞周期发生变化：HCPT阻抑细胞于S期,同时诱导细胞凋亡;HCPT/PEG-PBLG组细胞周期与HCPT组改变类似,但S期阻抑增加速度平缓,慢于后者。结论HCPT对Tca8113细胞具有较强的抑瘤作用,阻抑细胞周期于S期并诱导细胞凋亡。HCPT纳米微球剂型具有药物缓释优点,体外实验作用平缓,终末抑瘤效果与HCPT羧酸钠盐剂型持平。     

TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义

目的 观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type 8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义.方法 应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达.结果 免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达.TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P＜0.05).免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达.Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织.结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节.     

环氧化酶-2抑制剂对舌癌细胞侵袭及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨环氧化酶-2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌细胞系Tca8113侵袭、黏附及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分泌的影响。方法Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,免疫组织化学方法检测细胞Cox-2蛋白表达,细胞外基质黏附实验检测细胞黏附力,Boyden侵袭小室测定细胞的侵袭力,酶联免疫吸附法检测培养液中MMP-2的水平。结果Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,Cox-2蛋白表达明显受到抑制,Boyden侵袭小室细胞穿膜数和细胞外基质黏附率明显降低,同时,培养液中MMP-2水平也明显降低。结论Cox-2抑制剂塞来昔布可抑制Tca8113细胞Cox-2蛋白表达,其抑制细胞侵袭力和黏附率作用可能与抑制MMP-2分泌有关。     

Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞生物学特性的影响

目的:研究脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,Fas)基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞生物学特性的影响,探讨分子机制.方法:脂质体法将含Fas基因的真核表达重组质粒pBK-Fas导入Tca8113细胞,流式细胞术(FCM)检测Fas蛋白表达,MTT法检测细胞化疗敏感性,TUNEL法检测细胞凋亡敏感性,H33342释放法检测外周血单核细胞(PBMC)的癌细胞杀伤活性.结果:Fas转染细胞蛋白表达强度由35.01±5.26提高到55.40±7.31,二者差异有显著性(P＜0.01).相同浓度条件下,5-Fu对Fas转染细胞杀伤率提高.Fas转染细胞对抗Fas单克隆抗体诱导的细胞凋亡敏感性增强,凋亡指数由16.88%±1.46%提高到27.12%±2.35%.与未转染细胞相比,两项指标差异均有显著性(P＜0.01).PBMC对转染细胞的杀伤活性为51.22%±4.61%,对未转染细胞为23.92%±2.38%,差异也有显著性(P＜0.01).结论:Fas基因转染提高化疗药物和机体免疫细胞对舌鳞癌细胞的杀伤活性.     

血管内皮生长因子C 对舌鳞癌癌周淋巴管的促增殖作用

目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)对舌鳞癌癌周淋巴管的促增殖作用.方法将VEGF-C高表达的舌鳞癌细胞株(A组)接种于发育至第6～8天的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM),设立空白质粒转染组(B组)和空白对照组(C组),5′-核苷酸酶(5′-Nase)染色观察瘤周淋巴管,淋巴管形态学测量统计分析淋巴管数密度(LVD)、截面面积以及周长的变化.结果 3组在CAM上均能成瘤,肿瘤组织对周围CAM的侵袭较弱,瘤体组织内未见淋巴管的生成;瘤周淋巴管形态学测量分析发现A组癌周淋巴管的LVD、截面面积和周长均高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.01);B、C组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 CAM是研究淋巴管的较理想的模型;VEGF-C能够诱导癌周淋巴管扩张,这可能是VEGF-C增加舌鳞癌颈淋巴转移的机制之一.     

Celecoxib enhances the inhibitory effect of cisplatin on Tca8113 cells in human tongue squamous cell carcinoma in vivo and in vitro

J Oral Pathol Med (2010) 39 : 579–584 Background: Overexpression of cyclooxygenase‐2 (COX‐2) is associated with carcinogenesis, invasiveness, and metastasis of malignant tumors. Inhibition of COX‐2 is one hot topic of research in prevention and treatment of malignant tumors. Because of the selective and specific inhibition on the activity of COX‐2, the roles of celecoxib in prevention and treatment of tumors have attracted broad attention in recent years. In this study, we investigated the inhibitory effect of celecoxib combined with cisplatin on the proliferation of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 in vivo and in vitro. Methods: Human tongue squamous cell carcinoma tumor cells Tca8113 and a mouse model with Tca8113 cells were used to study the growth inhibition of cisplatin enhanced by celecoxib. Drug treatment of Tca8113 in vitro and mice bearing xenografts in vivo were used. The level of COX‐2 expression was detected by Western blotting. Sensitivity of cells to drug treatment was analyzed by MTT assay. Results: Treatment of Tca8113 cells with cisplatin (CDDP) had less effect on the expression of COX‐2, whereas the COX‐2 expression was significantly down‐regulated after treatment with celecoxib alone or in combination with CDDP for 24 h. In addition, the combination of celecoxib with CDDP was also able to inhibit the Tca8113 line heterotransplanted in Balb/c nude mice. Conclusions: Those findings indicate that a low dose of celecoxib could augment CDDP‐induced growth inhibition of Tca8113 cells and its xenograft in Balb/c nude mice.