抗O／129的非O1群霍乱弧菌分子生物学特征研究

为了从遗传学基础上，探索抗Ｏ／１２９的非Ｏ１群霍乱弧菌的基因结构的特点，即对１９９２～１９９４年从肠道门诊急性腹泻患者粪便中分离到的２１株抗Ｏ／１２９的非Ｏ１群霍乱弧菌的分子生物学特性进行了研究，结果显示，染色体ＤＮＡ经核酸限制性内切酶ＰｓｔＩ消化后，用琼脂糖凝胶电泳分离ＤＮＡ，全部菌株表现为多样化特征的限制性酶谱，用Ｄｉｇ标记的基因探针做ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，无一株菌具有Ｏ１群霍乱弧菌流     

水源中分离出抗O／129的非O1群霍乱弧菌

水源中分离出抗Ｏ／１２９的非Ｏ１群霍乱弧菌金保中（浙江省军区卫生防疫检验所，杭州３１０００８）关键词弧菌属，霍乱弧菌，水源１９９５年５月下旬，我们在对驻杭部队自备水源进行监测时，分离到一株发酵乳糖、在伊红美蓝琼脂上呈紫黑色、具金属光泽菌落的细菌，经实...     

急性腹泻患者粪便中分离出抗O／129的非O1群霍乱弧菌

从临床急性腹泻患者的粪例标本中分离到非Ｏ１群霍乱弧菌１７５株，检出率为５．１３％，其中有１７株（９．７１％）具有抗１０μｇ和１５０μｇ二氨基二异丙基喋啶磷酸盐（Ｏ／１２９）的作用。试验表明：该１７株抗Ｏ／１２９的非Ｏ１群霍乱弧菌其Ｏ抗原分属于ＶＢＯ２、３、４、７、８和１０型，并与抗霍乱弧菌鞭毛单抗ＳＰＡ制剂凝集；对氟哌酸等７种临床常用药物１００％敏感，对ＴＭＰ－ＳＭＺ１００％耐药。．     

广东省非O1群霍乱弧菌对O/129磷酸盐出现抗性的研究

广东省１９８６～１９９４年从腹泻病人粪便和外环境标本检出的非Ｏ１群霍乱弧菌１１９株中，有１０．０８％和５．８８％分别对１０μｇ和１５０μｇ的Ｏ／１２９磷酸盐出现抗性，出现抗性最早的一株是１９８６年从海产品中检出的。对１０μｇ和１５０μｇ的Ｏ／１２９出现轻度敏感者分别占４．２０％和３．３６％，抗Ｏ／１２９的非Ｏ１群霍乱弧菌可能会增加。在抗１０μｇ和１５０μｇＯ／１２９的７株非Ｏ１群霍乱弧菌中，有５株同时抗磺胺甲基异恶唑（ＳＭＸ），但仍有２株对ＳＭＸ敏感。在分离鉴定时应加以注意，并需继续观察。     

非O1群霍乱弧菌感染调查

为了解本地区腹泻病人的弧菌感染情况,我们对９８０例腹泻病患者进行调查。材料和方法一、标本来源　１９９８年本院９８０例肠道门诊腹泻患者粪便,记录其性状和镜检结果。二、试剂　碱性蛋白胨水、庆大霉素琼脂、ＳＳ琼脂均由中国预防医学科学院流行病学微生物研究所提供。诊断血清由北京天坛生物工程技术公司提供,细菌鉴定２０ＮＥ板条由法国生物梅里埃公司提供。三、细菌的分离与鉴定　将粪便接种碱性蛋白胨水和ＳＳ培养基,３７℃过夜;碱性蛋白胨水转种庆大霉素琼脂平板,３７℃培养１８～２４ｈ后,分离弧菌和气单胞菌,用２０ＮＥ…     

浙江省丽水市首起非O1群霍乱弧菌食物中毒分子生物学溯源分析

目的 利用分子生物技术了解引起食物中毒的非O1群霍乱弧菌携带毒力基因情况及耐药性特征.方法 对检出的非O1群霍乱弧菌菌株进行耐药性分析,同时采用聚合酶链反应(PCR)方法进行霍乱弧菌肠毒素基因(Ctx)、小带联结毒素基因(Zot)、辅助霍乱肠毒素(Ace)基因的检测,并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并作同源性分析.结果 从8例患者和8份食品标本中分离到7株非O1群霍乱弧菌,未检出Ctx、Zot、Ace等毒素基因,检出溶血素,Dienes试验和脉冲场凝胶电泳图谱显示病人分离株和剩余食物检出株同源.经耐药性分析,菌株除对复方新诺明、氨苄西林100%耐药外,对其余抗生素均较敏感.结论 通过实验证实本次食物中毒是由聚餐者共同食用冷菜凤爪所致,流行病学追溯从患者共同食用冷菜和海产品中非O1群霍乱弧菌毒力基因、耐药性和脉冲场凝胶电泳分析为同源菌株.     

急性腹泻患者粪便中分离出抗O／129的非O1群霍乱弧菌

从临床急性腹泻患者的粪便标本中分离到非Ｏ１群霍乱弧菌１７５株，检出率为５．１３％，其中有１７株（９．７１％）具有抗１０μｇ和１５０μｇ二氨基二异丙基喋啶磷酸盐（Ｏ／１２９）的作用。试验表明：该１７株抗Ｏ／１２９的非Ｏ１群霍乱弧菌其Ｏ抗原分属于ＶＢＯ２、３、４、７、８和１０型；并与抗霍乱弧菌鞭毛单抗ＳＰＡ制剂凝集；对氟哌酸等７种临床常用药物１００％敏感，对ＴＭＰ－ＳＭＺ１００％耐药。     

胶乳凝集试验检测O1群霍乱弧菌

为建立一种快速，简便的Ｏ１群霍乱弧菌检测方法，用抗Ｏ１群霍乱弧菌多价单克隆抗体敏胶乳，建立起胶乳凝集试验（ＬＡＴ），检测粪便标本６ｈ培养３物中的霍乱弧菌，ＬＡＴ的检测的敏感性为５×１０＾５ＣＦＵ／ｍｌ，检测过程小于５ｍｉｎ，在９２例临床标本中，４４例培养阳性者ＬＡＴ法均阳性，４８例培养阴性者中，有１例假阳性，但用镜检法厅筛除。     

协同凝集试验检测O1群霍乱弧菌

目的建立一种快速简便的O1群霍乱弧菌检测方法。方法将抗O1群霍乱弧菌多价单克隆抗体包被到金黄色葡萄球菌CowanI株上制成SPA菌体试剂,建立起协同凝集试验(COA),检测粪便标本6h培养物中的霍乱弧菌。结果COA检测的敏感性为4×106CFU/ml,检测过程为5min。92份临床标本的测定结果与培养法相比较,COA的特异性、敏感性、诊断符合率分别是100%、95.5%、97.8%。结论COA简便、快速,可作为一种新的霍乱弧菌快速诊断方法。     

O139群霍乱弧菌ctxAB基因序列分析

目的 探讨O130群霍乱JX株的ctxAB基因序列，分析该株基因特点。方法 采用PCR扩增技术，检测含O130群霍乱标本，对ctxAB阳性者进行核苷酸序列测定，分析基因变异情况。结果 发现阳标本中，对其中一株进行了ctxAB基因序列测定，该序列与853（O139群）和N16961（Eltor)同源性为100％，与569B（古典型）同源性99．7％。结论 该研究证明本株与O1群（EVC）遗传关系最近，可能属于B型。     

O139霍乱弧菌生物学特性及药物敏感性分析

为了有效、准确地检测霍乱弧菌，在某地水样泻患者的粪便中分离４株Ｏ１３９霍乱弧菌，经对分离株的生物学特性、血清学及药物敏感性进行研究，并与Ｏ１群霍乱弧菌进行比较。结果表明，Ｏ１３９霍乱弧菌具有Ｏ１群同样的生化特性，但不与Ｏ１群霍乱弧菌抗血清凝集，仅与Ｏ１３９霍乱弧菌抗血清在玻片上呈强凝集，试管凝集滴度为１：６４０～１：２５６０，所有菌株都使鸡红细胞凝集，对羊红细胞溶血的作用可变。所有菌株对霍乱Ｏ１群特异的ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ＇ｓ噬菌体有抗性，对Ｏ／１２９多粘菌素Ｂ等药物耐药；而对红霉素、环丙氟哌酸等抗生素敏感。Ｏ１３９与Ｏ１群霍乱弧菌的不同特征，可作为鉴别的参考依据，但由于观察的菌株尚少，有待进一步研究。     

江苏省环境来源的O139群霍乱弧菌的核酸特征分析

目的 分析江苏省2003-2005年之间从环境样本中分离到的霍乱弧菌的核酸特征,及其差异的程度.方法 将11株目的菌株的表型特征(包括血清型,耐药谱,生化特征以及El Tor霍乱弧菌的噬菌体分型)和核酸特征(包括霍乱毒素基因ctx-A、zot、ace、tcp-A的分布情况和脉冲场凝胶电泳指纹图谱)结合起来进行比较和分析.结果 11株菌株中有10株O139群霍乱弧菌,1株El Tor小川;其中6株O139同时对5种以上抗生素耐受,2株O139对4种抗生素耐受,1株0139对2种抗生素耐受,另外1株O139(属于PFGE-C型)和1株小川分别只对一种抗生素耐受;11株霍乱弧菌的生化特征没有明显差异;8株O139同时携带4种毒力相关基因,1株0139只携带zot和ace,另外1株O139(05052)和1株小川未携带这4种基因;9株O139的脉冲场凝胶电泳指纹图谱聚为一类,另外1株O139和小川各自聚为一类.结论 10株O139中有1株(属于PFGE-C型)的耐药谱、毒力相关基因分布及PFGE指纹图谱与其他9株不同,而与分离地点相同的小川相似,提示自然环境中的O139群霍乱弧菌存在着差异.     

O139霍乱弧菌的分子流行病学特征

利用ｃｔｘＡ，Ｚｏｔ，Ａｃｅ，ＲＳ１，ｓｔ和ｉｇａ等基因探针检测５７８株霍乱弧菌，发现其中１株埃尔托型霍乱弧菌和６株Ｏ１３９霍乱弧菌不含ｃｔｘＡ，进一步分析证明这７个菌株中，除１株含ＲＳ１序列外，其他毒力基因检测均为阴性，这为菌苗候选株的筛选提供了依据。用１６ＳｒＲＮＡ基因探针检测不同地区分离的６２株Ｏ１３９菌株和Ｏ－１群埃尔托型菌株，将其分为９个１６ＳｒＲＮＡ基因型。结合ｃｔｘＡ探针检测结果，认为我国流行的Ｏ１３９霍乱弧菌有两种类型，与印度、孟加拉国分离的菌株不尽相同。本文首次报导，通过１６ＳｒＲＮＡ基因检测，可区分Ｏ－１群埃尔托型霍乱弧菌与Ｏ１３９霍乱弧菌，并建议将ｃｔｘＡ、１６ＳｒＲＮＡ两个基因作为确定Ｏ１３９霍乱弧菌分子流行病学特征的指标。     

O1和O139群霍乱弧菌超级整合子VchintIA基因的变异

目的 研究不同血清群(型)霍乱弧菌超级整合子整合酶基因(VchintIA)的变异及其与霍乱弧菌分类的关系。 方法 使用聚合酶链反应(PCR)和序列测定的方法对VchintIA基因进行扩增和序列分析。 结果 在实验菌株中,O1El Tor和O139群霍乱弧菌产毒株以及毒素共调菌毛(toxin co-regulated pilus, tcp)基因簇阳性的O1群非产毒株的VchintIA序列完全一致,tcp基因簇阴性的O1群非产毒株的VchintIA序列在核苷酸水平上与产毒株不同,但是在氨基酸水平上相同。O139非产毒株的VchintIA序列在核苷酸和氨基酸水平上均与产毒株的VchintIA不同。 结论 O1和O139霍乱弧菌超级整合子VchintIA存在核苷酸和氨基酸水平上的变异,O139非产毒株中VchintIA的变异与其整合子内部的结构可能相关。     

利用脉冲场凝胶电泳及核糖体分型技术对14株上海崇明地区O139群霍乱弧菌分型分析

目的 对14株上海市崇明地区2005年O139群霍乱弧菌菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)及核糖体分型分析。 方法 用PFGE、核糖体分型对霍乱弧菌进行分析。 结果 14株O139群霍乱弧菌产毒株经核糖体分型分析为同一型;而PFGE双酶切分型结果为其中10株为同一型,其余4株为高度同源性。 结论 上海市崇明地区2005年流行的O139群霍乱弧菌核酸指纹分型基本一致。     

临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征分析

目的 了解临床分离的非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征。方法 收集2014-2015年北京友谊医院4-10月肠道门诊分离到的非O1/O139群霍乱弧菌,采用微量肉汤稀释法检测霍乱弧菌对15种抗生素的耐药性;PCR检测霍乱弧菌的毒力相关基因。结果 35株非O1/O139群霍乱弧菌对复方新诺明的耐药率(40.0%)最高,其次是氯霉素(28.5%)和磺胺异恶唑(22.6%),对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢西丁、头孢吡肟及亚胺培南完全敏感。毒力基因检测显示所有菌株均携带hlyA和ompU,hapA(97.1%)、rtxA(91.4%)、Ⅵ型分泌系统T6SS(94.3%~97.1%)、Ⅲ型分泌系统T3SS(80.0%~85.7%)和nanH(62.9%)阳性率较高;主要的毒力基因型为hlyA-rtxA-hapA-ompU-nanH-vasA-vasK-vasH-vcsC-vcsV-vcsN-vspD(40.0%)。结论 临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因多样化,对抗菌药物耐药性较高,需加强腹泻病例中非O1/O139群霍乱弧菌的毒力及耐药监测。     

浙江省非O1、非O139群霍乱弧菌快速检测与毒力基因研究

目的 建立一种快速检测非O1、非O139群霍乱弧菌方法,并对浙江省部分地区海水产品中非O1、非O139 群霍乱弧菌及其携带毒力基因开展快速检测.方法 采用三糖斜面、氧化酶实验、粘丝实验、无盐胨水等简单生化进行初筛,对全部结果阳性的菌株用聚合酶链反应(PCR)方法检测霍乱弧菌外膜蛋白OmpW以及毒力基因ctxA、hl...