辣根过氧化物酶与溃变结合法新探

HRP方法和溃变方法是研究神经通路的有效方法.80年代以来,一些学者将二方法结合应用,在中枢的不同部位损毁和导入HRP,然后在同一区内观察神经元之间的突触联系.而在同一区域神经组织内分别导入HRP与电解损毁后,在另一中枢区域内观察神经元之间的突触联系的研究在国内、外尚属首次.本文作者经几年摸索,采用HRP逆行追踪与同区内延时电解损毁相结合的电镜方法,追踪皮质丘脑神经元之间的突融联系,取得了较为理想的效果.1 材料和方法1.1 健康猫 16只,体重1.5～3.0Kg,雌雄不拘,以1%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉,将猫固定在脑立体定位仪上,常规消毒开颅,暴露一侧脑皮质体感I区,直视下将CB-HRP(Sigma VI RZ3.0)2.0μl分10点注射于一侧体感I区皮质内.每点进针深度1.0～1.5mm,注射20分钟,留针20分钟,5小时后,用电极多     

大鼠中枢神经内细胞色素氧化酶与逆行辣根过氧化物酶联合反应

向大鼠单侧尾壳核注射HRP后,用氯化钴—细胞色素氧化酶组织化学反应方法,证明脑干内红核、三叉神经中脑核及耳蜗神经核等显高CO活性神经元;丘脑板内核、黑质、中缝背核及中脑被盖核等神经元呈现HRP标记;蓝斑核内可同时观察到高CO活性和HRP标记两种神经元。实验结果说明此法有可能直接用于研究脑内高CO活性神经元与其它神经元之间的联系。     

辣根过氧化物酶逆行追踪风池穴的神经径路

目的：研究风池穴的神经径路。方法：针灸组大鼠对风池穴行透刺法后,将HRP从一侧风池穴注入对侧风池穴;对照组不行针灸,直接将HRP从一侧风池穴注入对侧风池穴。于不同时间点,对脑、脊髓及神经节行连续冰冻切片。结果：针灸后第1天,HRP阳性神经元出现于双侧第1～4颈神经节及其对应的颈髓前角、面神经核内侧部和副面神经核。随着存活时间的延长,阳性神经元密度减少,颜色变淡。对照组上述部位的HRP阳性神经元的面密度等较针灸组小。结论：风池穴可能通过面神经的耳后支、第2～3颈神经前支分别与面神经核群及副面神经核、颈髓和延髓前角神经元相联系而发挥其功能。     

辣根过氧化物酶逆行标记鸡小脑向海马结构的直接投射

目的:观察鸡是否存在小脑向海马的直接投射.方法:将30%辣根过氧化物酶水溶液注射到鸡一侧端脑的海马结构,逆行追踪双侧端脑和小脑向海马结构的传入纤维联系.结果:在小脑,第Ⅰ～Ⅵ叶、Ⅹ叶和Ⅸ叶的前半叶皮质中的蒲氏细胞被标记.在端脑,双侧的外侧隔核、海马结构的旁海马内侧区(APHm)均有多量神经元被标记,初步表明禽类海马结构在端脑的传入联系类似于哺乳类.结论:鸡小脑蒲氏细胞存在向端脑海马结构的直接投射.     

利用辣根过氧化物酶作抗原显示抗体形成细胞的探讨

用辣根过氧化物酶作为抗原免疫家兔，取国窝淋巴结作涂片，经该酶处理后显色，可清晰地定位抗体形成细胞－淋巴母细胞、浆母细胞、浆细胞和特化的小淋巴细胞内的抗体成分。该方法简便、特异性强。     

运用辣根过氧化物酶和乙酰胆碱酯酶双标记法对家兔腰、骶、尾髓脊髓小脑束乙酰胆碱酯酶阳性神经元的研究

本研究采用10只家兔进行腰、骶、尾髓的脊髓小脑束乙酰胆碱酯酶阳性神经元定位研究。其中8只在小脑内注射HRP后,按Mesulam组化法追踪腰、骶、尾髓各节段的HRP-AChE双标及HRP单标神经元;作为对照,2只家兔同样节段的脊髓切片则单纯显示神经元的AChE活性。实验结果表明,家兔腰、骶、尾髓的各群脊髓小脑束神经元中,大多数细胞均为乙酰胆碱酯酶阳性神经元,但它们所含AChE的量可能有所不同。各群细胞中乙酰胆碱酯酶阳性神经元所占数量的多少可能与脊髓小脑束神经元的不同功能有关。     

单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记

<正> 单克隆抗体(下称单抗)由于仅有唯一特异抗原结合位点,其标记较多克隆抗体困难,尤其应用IgM单抗则更为困难。作者用戊二醛二步法,过碘酸钠氧化法。和戊二醛-过碘酸钠氧化法标记IgM单抗均未成功。而用改良过碘酸钠氧化法得到满意效果。     

纯视细胞移植术后RCS鼠视皮质内γ—氨基丁酸的分布

目的：通过成功地纯视细胞移植,观察RCS鼠视皮质内抑制性神经递质γ-氨基丁酸（GABA）的分布和变化。方法：取同龄Wistar/皇家外科学院（Royal College of Surgeon,RCS)鼠为供／受体,准分子激光切削法制备视细胞层,外路途径移入RCS鼠的视网膜下腔,术后2周取RCS鼠手术组眼、手术对照组眼、RCS对照组眼及其视皮质分别做冰冻切片、免疫组织化学染色染法色、普通光学显微镜下观察。结果：视细胞细胞术后2周,移植视细胞存活,外丛状层重建,与手术对照眼,RCS对照相相比,重视高膜受体RCS鼠对侧视皮质内GABA免疫反应神经元数量较多,而同侧视皮质内无GABA免疫反应神经元。结论：成功纯视网细胞移植可以重建RCS鼠的视传导通路,移植的纯视细胞使RCS鼠视皮质内GABA免疫反应的分布发生变化。     

辣根过氧化物酶新老技术在神经示踪实验中样片展示

<正>科学的发展是推动人类社会向前发展的主要动力,在众多缤纷复杂的学科中,神经科学无疑是一股中间力量。在过去上百年里,神经科学的发展处于滞后状态,直至近几十年,随着神经生物学的诞生,神经科学的发展迈出了可喜的     

大鼠胚胎神经上皮细胞脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的 观察大鼠胚胎神经上皮细胞植入帕金森病大鼠纹状体后的存活、分化情况及治疗作用。方法 孕11d大鼠剖腹取胚胎,剥离神经管,胰酶消化后获取神经管壁上的神经上皮细胞,在脑立体定位仪下植入帕金森病大鼠毁损侧纹状体内,于移植后不同时间诱发旋转实验,观察症状的改善,并灌注取脑,切片后做酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,检测胚胎神经上皮细胞的存活及分化状况。结果 胚胎神经上皮细胞脑内移植后,帕金森病鼠的旋转行为有明显改善。移植后2、4及8周时可检测到成片或散在的TH-免疫阳性细胞。结论 胚胎神经上皮细胞移植至帕金森病大鼠纹状体后,可分化为多巴胺能神经元并能改善旋转症状。     

培养胚胎神经干细胞移植入纹状体后的形态学观察

本研究的目的是 :将体外培养的小鼠胚胎大脑皮层和脊髓的神经干细胞经单细胞悬液微移植后观察其在大鼠纹状体的存活、迁移和分化的状况。实验在无血清条件下将这些细胞扩增、培养再经活细胞荧光染料 Di I标记后 ,采用微移植的方法 ,通过脑立体定位仪上用微玻璃针将干细胞分别植入成年大鼠双侧纹状体的对称部位。大鼠存活 8周后 ,经灌注固定、恒冷箱切片 ,在荧光显微镜下观察标记的移植细胞的迁移状况 ;用星形胶质细胞特异性抗体观察移植区 GFAP的表达 ,以显示移植细胞分化状况。结果表明 :来源于胚胎小鼠大脑皮层和脊髓的体外培养神经干细胞经微移植后 ,均可在成年大鼠脑内纹状体区域存活 ,移植的神经干细胞可向周围的脑实质内迁移 ,迁移细胞沿特定的纹状体结构分布。神经干细胞主要分化成星形胶质细胞。本实验结果提示 ,移植的神经干细胞可在脑实质内存活、迁移和分化。     

骨髓基质干细胞移植选择下调大鼠心肌梗死细胞外基质基因表达

目的心肌纤维化是心肌梗死后左室重构的主要组成部分，本实验主要观察骨髓基质干细胞移植对缺血性心肌左室重构细胞外基质的基因表达以及对心脏左室功能的影响。方法将骨髓基质干细胞经体外培养、5-氮杂胞苷（5-azacytidine）诱导、扩增及标记后，植入急性心肌梗死大鼠动物模型心肌中，于28d测定大鼠心脏功能后取出心脏并称量，对缺血性心肌的纤维化程度及注入的骨髓基质干细胞进行观察，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及原位杂交技术，检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）等细胞外基质基因表达情况，并观察了转化生长因子（TGF）-β1基因表达情况。结果在心肌中骨髓基质干细胞存活；梗死大鼠心脏功能明显改善；心肌梗死面积明显减小（10％）；Ⅰ胶原、Ⅲ型胶原、TIM-1以及TGF-β1基因表达水平与未注入骨髓基质干细胞对照组相比显著降低，且心肌细胞纤维化被有效抑制。结论骨髓基质干细胞移植可以抑制心肌纤维化，降低细胞外基质基因表达，改善心脏功能，有望成为心肌梗死治疗的一条新途径。     

大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的 建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC；通过体外长期传代培养后建立1株细胞系，应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。结果 HSC细胞系已传了78代，保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为36．5h；细胞的染色体众数42条，为正常大鼠体细胞的染色体表型；双层软琼脂培养未见细咆克隆形成；免疫细胞化学检测表明，细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、iNOS、ICAM-1、TGF-α；RT-PCR检测表明，该细胞系表达TGF-β、ICAM-1；聚硅酮膜培养法显示，HSC细胞系能在ET-1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准，是1株新建立的大鼠肝星状细胞系，命名为rHSC-99，可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。     

用APA微囊牛肾上腺嗜铬细胞移植治疗疼痛的研究

用胶原酶消化法分离牛肾上腺嗜铬细胞 ,用海藻酸钠 聚赖氨酸 海藻酸钠 (APA)法包埋牛肾上腺嗜铬细胞 ,将微囊牛肾上腺嗜铬细胞植入恶性肿瘤患者的蛛网膜下腔 ,移植后不使用免疫抑制剂。结果显示在 30例恶性肿瘤患者中 ,止痛的显效率为 6 7% (2 0例 ) ,有效率为 2 7% (8例 ) ,无效率为 6 % (2例 ) ,镇痛作用维持时间长达 15 0天。除个别患者发烧和腰痛外未发现其它明显副作用。     

体外培养的神经干细胞球的超微结构

目的 探讨体外培养的神经干细胞球的超微结构。方法 采用常规透射电镜结合硝酸镧示踪染色、钌红染色和单宁酸染色等技术，观察体外培养的大鼠脑神经干细胞球的超微结构。结果 神经球中细胞之间连接较为松散，不存在紧密连接结构，神经干细胞增殖活跃，并可见神经球中有部分干细胞分化为具有突起和轴突样结构的细胞，甚至出现髓鞘样结构。结论 揭示了体外培养的神经干细胞球的超微结构。     

大鼠胚胎神经上皮细胞侧脑室移植后存活及分化的实验研究

目的：观察大鼠胚胎神经上皮细胞同种脑移植后的存活及生长分化状况。方法：孕12d大鼠剖腹取胚胎，剥离神经管，胰酶消化后获取神经管壁上的神经上皮细胞，然后植入其父体侧脑室中，分别于移植后10d,14d,21d,28d灌注取脑，肜HF染色及神经元特异烯醇化酶（NSE），胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组织化学方法检测胚胎神经上皮细胞移植后的存活及分化状况。结果：神经上皮细胞侧脑室移植后多贴附于脑室壁形成细胞团块，有的随脑脊液循环至第三脑室生长，随时间延长移植物增大，HE染色见脑室内有成团的移植细胞，免疫组织化学染色显示移植细胞团内既有NSE－免疫阳性细胞，也有GFAP－免疫阳性细胞，移植物周围多为GFAP－免疫阳性细胞。结论：胚胎神经上皮细胞侧脑室移植后能够贴附脑室壁存活，并能分化为神经元和神经胶质细胞。     

三维培养的主动脉平滑肌细胞-胶原凝胶皮下移植的研究

目的 研究经三维培养后的主动脉平滑肌细胞(ASMC)-胶原凝胶移植后,是否仍能产生弹性纤维及宿主的接受状态。方法 将仿真皮替代物三维培养2周的ASMC-胶原凝胶植人大鼠皮下,分别于术后4、7、10、14和28d取材,用HE染色、Gomori醛复红染色、α肌动蛋白免疫组织化学染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,观察和检测ASMC-胶原凝胶。结果在移植后第1周有大量的弹性纤维产生,但于28d时完全消失。在移植后的28d内,ASMC-胶原凝胶块周围没有明显的白细胞浸润。结论利用ASMC-胶原凝胶作为一种有弹性的真皮替代物,尚需讲一步的研究。     

大鼠睾丸Sertoli细胞内微管分布的研究

本研究应用免疫荧光和透射电镜方法,对大鼠睾丸Setroli细胞内微管的分布进行了观察。结果表明,Serto|i细胞内微管主要分布于核上方胞质内,沿细胞长轴排列,并随Sertoli细胞主干及分支伸展于各生精细胞之间,直至上皮顶部。在生精上皮周期中,伴随上皮构筑的改变及Sertoli细胞的变形,微管分布呈现规律性变化。Ⅰ～Ⅴ期长形精子细胞周围微管密集,沿细胞长轴顺行。Ⅶ期时,富含微管Sertoli细胞突起包绕于精子细胞头部周围,并将其送入和悬吊子曲管腔内,部分微管伸展方向与精子细胞头部镰状外形一致。精子释放后(Ⅷ～Ⅸ期),Sertoli细胞突起及其微管回缩;在开始伸长变形的精子细胞周围微管再次聚集。本研究结果提示,Sertoli细胞内微管分布及其规律性变化与生精上皮构筑,Sertoli细胞外形变化及精子细胞的运动和释放密切相关。     

低氧预适应对移植大鼠肝细胞线粒体超微结构的影响

目的 观察低氧预适应(HP)对移植大鼠肝细胞线粒体超微结构的影响. 方法 采用改良的自体肝移植模型模拟肝移植过程,将72只SD大鼠随机分为正常对照(NC)、自体移植(AT)和低氧预适应(HP)3个组,每组24只.HP为术前用8%氮氧混合气体处理90min,分别于术后1、6、24h处死大鼠取肝脏标本,透射电镜观察肝细胞及线粒体的形态学改变,并用图像分析系统定量评判线粒体超微结构的改变程度. 结果 透射电镜下见AT组线粒体肿胀明显,膜模糊不清,部分膜破裂,线粒体嵴疏松溶解,有空泡形成;而HP组线粒体结构基本正常,仅有轻度肿胀,线粒体排列整齐,膜基本完整,线粒体嵴密集,未见空泡形成;定量分析线粒体的面积、周长及直径均和AT组有显著性差异(P<0.05),HP组线粒体损伤程度较AT组有明显改善. 结论 线粒体超微结构的改变是移植后肝细胞损伤的早期变化,HP可改善这一变化以减轻肝细胞损伤.