补肾生血法对慢性再生障碍性贫血患者信号转导MAPK通路的影响

目的:观察补肾生血法对慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,探索补髓生血颗粒对CAA患者骨髓基质细胞黏附信号转导MAPK通路的影响。方法:将CAA患者121例随机分为试验组60例、对照组61例进行临床试验研究,将患者治疗前后的骨髓基质细胞提取,分析黏附信号转导MAPK通路的相关酶类JNK、P38、ERK磷酸化的变化情况。结果:CAA患者骨髓基质细胞P-ERK1/2蛋白表达水平低于正常组(P<0.05),P-JNK与P-P38蛋白表达水平高于正常组(P<0.05);通过采用补肾生血法补髓生血颗粒治疗可以调整三种蛋白的异常表达,与治疗前比较(P均<0.05)。结论:CAA患者骨髓基质细胞造血粘附信号转导MAPK通路中酶类表达异常,这些可能是骨髓造血微环境粘附功能异常的原因之一,为CAA发病机制研究提供了分子生物学依据,本研究证明采用补肾生血法治疗CAA具有较好的疗效。     

补肾活髓颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓血清中bFGF的影响

目的:观察补肾活髓颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的临床疗效及其对骨髓血清中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法:将66例CAA患者随机分为试验组和对照组各33例。并设20例健康人为健康组。试验组用补肾活髓颗粒治疗,对照组用西药常规治疗。疗程6月,并在疗程结束后观察患者临床疗效及不良反应。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测治疗前后骨髓血清中bFGF的表达情况。结果:临床疗效总有效率试验组为66.67%,对照组为54.55%,2组比较,差异无显著性意义(P0.05)。证候疗效总有效率试验组为100%,对照组为90.91%,2组比较,差异有显著性意义(P0.05)。2组中医证候积分治疗前后组内比较,差异均有显著性意义(P0.05),2组治疗后组间比较,差异均有显著性意义(P0.05)。2组治疗后白细胞计数、血红蛋白及血小板计数均明显提升(P0.05),试验组改善优于对照组(P0.05)。2组治疗前后组内及治疗后2组组间骨髓增生情况比较,差异均无显著性意义(P0.05)。2组患者治疗前bFGF表达明显低于健康组(P0.05);治疗后2组bFGF表达均较治疗前升高(P0.05),且治疗组表达高于对照组(P0.05),但与健康人组比较仍有差距(P0.05)。试验组无1例出现不良反应,不良反应发生率为0;对照组有2例出现转氨酶升高,4例出现不同程度的痤疮、多毛等,不良反应发生率为18.18%,高于试验组(P0.05)。结论:补肾活髓颗粒治疗CAA疗效确切,且对bFGF表达水平有调节作用。     

补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血患者67例

目的:观察补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的临床疗效及骨髓单个核细胞(BMNC)中Ras同源基因家族成员(Rho)-鸟苷酸三磷酸酶(GTP)相关酶类如细胞分裂周期蛋白(CDC42),Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物(Rac)以及Rho家族成员A(Rho A)的蛋白表达。方法:将134例CAA患者按随机数字表法分为试验组67例和对照组67例,另设20名健康志愿者作为正常对照组。试验组采用补髓生血颗粒治疗,对照组采用再造生血片治疗,两组疗程均为6个月。观察治疗前后临床疗效、中医症状积分、中医证候疗效、外周血、骨髓增生程度变化,采用Western-blot方法检测CAA患者治疗前后BMNC中Rho-GTP相关酶类(CDC42,Rho A,Rac)的蛋白表达。结果:试验组临床疗效及中医证候疗效均优于对照组(均P0.05);经治疗后,两组中医症状平均积分及外周血均明显改善(P0.05),试验组中医症状平均积分及外周血白细胞计数(WBC)及血红蛋白含量(HGB)的改善优于对照组(均P0.05),两组血小板计数(PLT)改善程度无显著性差异;两组骨髓象改善比较无显著性差异;两组治疗前CDC42,Rho A,Rac的相对蛋白含量表达均低于正常对照组(均P0.05),治疗后两组CDC42,Rho A和试验组中Rac的相对蛋白含量表达明显升高(均P0.05),而对照组中Rac的表达较治疗前无明显变化,两组治疗后CDC42,Rho A,Rac仍低于正常对照组(均P0.05),且试验组CDC42及Rac的表达改善优于对照组。结论:补髓生血颗粒治疗CAA疗效显著,且一定程度上能改善CAA患者的骨髓造血功能。CAA患者BMNC中Rho A,CDC42及Rac的蛋白均表达异常,提示Rho GTP酶异常表达可能与CAA发病相关,补髓生血颗粒可能通过调节Rho-GTP相关酶类CDC42,Rho A,Rac的表达来改善造血干细胞与造血微环境调节进而改善其骨髓造血功能。     

补髓生血颗粒治疗慢性再障临床疗效及对骨髓细胞p-JNK mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察中药补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,并探讨对骨髓细胞p-JNK信号通路mRNA及蛋白表达的影响。方法:将符合纳入标准的60例CAA患者按照随机数表分为试验组、对照组各30例,正常组20例均为健康志愿者。试验组口服补髓生血颗粒,对照组口服再造生血片,两组连续治疗6个月。观察比较治疗前后两组临床疗效及中医证候疗效变化,检测两组CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞中p-JNK的mRNA表达(采用RT-PCR法检测)、p-JNK的蛋白表达(采用Western-blot法检测)。结果:治疗后,试验组临床总有效率高于对照组(P0.05);治疗前,两组p-JNK的mRNA及蛋白表达均高于正常组(均P0.05);治疗后,两组p-JNK的mRNA及蛋白表达水平均有降低,与疗前相比均有显著性差异(均P0.05),p-JNK mRNA表达试验组与对照组相比有显著性差异(P0.05),与正常组相比无显著性差异(P0.05),p-JNK蛋白表达试验组与对照组相比有显著性差异(P0.05),与正常组相比有显著性差异(P0.05)。结论:补髓生血颗粒治疗CAA可提高临床总有效率,改善患者临床症状与造血功能。CAA患者骨髓细胞中p-JNK的mRNA及蛋白表达水平异常升高,提示CAA发病机制可能与p-JNK表达异常相关,补髓生血颗粒可能通过下调p-JNK mRNA及蛋白表达水平,来抑制造血干细胞过凋亡效应,延长细胞生存时间,提高骨髓造血能力。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者Th17细胞的影响

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血中RBC、WBC、PLT数量及Th17细胞表达的影响。方法:将63例CAA患者随机分为试验组(33例)、对照组(30例),同时选取健康人10例作为正常对照组,其中试验组给予口服补髓生血颗粒,对照组给予口服再造生血片,观察周期为半年;采用血细胞分析仪检测RBC、WBC、PLT数量,采用流式细胞仪检测法分别对试验组、对照组CAA患者治疗前后外周血中Th17细胞表达水平进行对比,两组治疗后细胞表达水平分别与正常对照组进行对比。结果:试验组与对照组治疗前后比较,使外周血中血红蛋白数量、白细胞数量及血小板得到显著提升,显著降低了Th17细胞的表达水平(均为P0.01);治疗后试验组在升高白细胞总数及血小板数量与对照组相当(P0.05);治疗后试验组在升高血红蛋白数量上优于对照组(P0.05);治疗后试验组在降低Th17细胞的表达水平上优于对照组(P0.05)。结论:1补髓生血颗粒在升高外周血血红蛋白数量上优于再造生血片。2补髓生血颗粒在降低外周血Th17细胞的表达水平上优于再造生血片,Th17细胞可能参与了CAA的发病。     

补肾生血法对慢性再生障碍性贫血患者骨髓ERK信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨补肾生血法对CAA患者骨髓细胞外调节信号通路相关蛋白的表达变化及其意义。方法:将60例CAA患者按照中医辨证分为肾阴虚型33例,肾阳虚型27例,均予以补肾生血之中药补髓生血颗粒治疗,另取20例健康志愿者作为正常对照组。采用蛋白质印迹方法(Western-blot)观察CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞ERK1、ERK2的蛋白水平表达。结果:CAA患者治疗前骨髓单个核细胞ERK1、ERK2均低于正常对照组(P均0.05),经补肾中药治疗后,ERK1、ERK2表达均有所上升(P均0.05);治疗后肾阳虚型的ERK1、ERK2上升程度均较肾阴虚型明显(P均0.05)。结论:CAA患者骨髓单个核细胞ERK1、ERK2均表达异常,提示ERK信号通路异常与CAA发病相关,补肾中药可能通过调节ERK信号通路相关蛋白ERK1、ERK2的表达来改善CAA骨髓造血功能,且存在中医证型的疗效差异。     

补肾活髓颗粒联合西药治疗慢性再生障碍性贫血临床疗效的倾向指数研究

目的应用倾向指数法比较补肾活髓颗粒联合西药治疗与单纯西药治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效。方法选择慢性再生障碍性贫血患者236例,随机分为治疗组158例和对照组78例。对照组给予口服司坦唑醇片每次2~4 mg,每日3次;环孢菌素软胶囊每次75 mg,每日2次。治疗组在对照组治疗基础上给予补肾活髓颗粒,每日1剂,分两次口服。两组均治疗6个月。应用倾向指数匹配法对两组患者基线资料进行匹配,对匹配前后两组临床疗效和匹配后、治疗前后两组患者的血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)水平进行比较。结果两组各有76例成功匹配。匹配前两组临床疗效比较:对照组基本治愈16例,缓解14例,明显进步18例,总有效率61.54%;治疗组分别为50例、36例、34例及75.95%,两组比较差异无统计学意义(χ~2=6.71,P=0.08)。匹配后两组临床疗效比较:对照组基本治愈16例,缓解14例,明显进步17例,总有效率61.84%;治疗组分别为12例、18例、17例及61.84%,两组比较差异无统计学意义(χ~2=1.07,P=0.78)。匹配后两组患者治疗后HGB、WBC及PLT较治疗前均明显升高(P0.01),治疗组治疗后HGB和PLT均明显高于对照组(P0.05)。结论补肾活髓颗粒联合西药治疗慢性再生障碍性贫血在改善HGB及PLT方面优于单纯西药。     

补髓生血汤对慢性再生障碍性贫血患者骨髓基质细胞相关细胞因子的影响

目的:观察补髓生血汤对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的疗效,并探讨其骨髓基质细胞相关细胞因子的机制。方法:随机将2012年3月—2015年10月收治的112例CAA患者分为两组患者,各56例,对照组采用康力龙联合环孢素治疗,观察组基于对照组采用补髓生血汤治疗,观察两组患者疗效,比较治疗前后的临床证候评分,血红蛋白(Hb),白细胞计数(WBC),血小板计数(PLT),骨髓像,碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和b FGF受体(b FGFR)mRNA表达量。结果:观察组总有效率(87.50%)高于对照组(67.86%)(χ~2=6.231,P0.05);两组患者治疗后的临床证候评分均下降,且观察组低于对照组(P0.05);观察组治疗后WBC,PLT,Hb升高,且高于对照组(P0.05);治疗后,观察组骨髓增生程度改善,且优于对照组(P0.05),观察组的非造血细胞比率(41.68±7.85)%,明显低于对照组的(53.45±8.78)%(P0.05);两组患者治疗后b FGF,b FGFR表达升高,且观察组高于对照组(P0.05)。结论:补髓生血汤治疗CAA患者的效果较好,对血象、骨髓象,骨髓造血功能具有改善作用,可能与调节细胞因子b FGF和b FGFR mRNA表达有关。     

补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞HGF受体mRNA表达水平的影响

目的 通过观察慢性再生障碍性贫血(CAA)患者治疗前后骨髓单个核细胞HGF mRNA含量的变化,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的疗效作用机理.方法 60例CAA患者随机分为治疗组和对照组,治疗组给予补髓生血颗粒,对照组给予再障生血片,采用逆转录-聚合酶链法( RT - PCR)检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞HGF受体mRNA表达水平的变化.结果 两组基本治愈、缓解率分别为73.33％和57.14％,明显高于对照组57.14％,(P＜0.05).各组治疗前CAA患者骨髓单个核细胞HGF受体mRNA表达水平明显升高,高于正常对照组,经治疗后各组均有不同程度下降,并且以补髓生血颗粒组表达水平的下调程度优于再障生血片组(P＜0.05).结论 CAA患者骨髓单个核细胞HGF mRNA的表达存在异常,补髓生血颗粒剂可能通过调节骨髓造血细胞HGF受体mRNA的表达来改善CAA患者的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复.     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

补肾活血方药对CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF基因表达的影响

目的:探讨补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓造血细胞C-met SF基因表达的影响。方法:60例CAA病人随机分为治疗组和对照组,治疗组给予补肾活血中药汤剂,每日1剂,分2次口服;对照组给予再障生血片,5片,每日3次,口服,疗程为3个月,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞C-met SFmRNA基因含量的变化。结果:CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF mRNA表达水平高于正常对照组,治疗后C-met SF mRNA表达水平有不同程度下降,并且补肾活血方药对C-met SF表达水平的下调程度优于再障生血片组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓C-met SF的基因表达存在异常;补肾活血方药可能通过调节骨髓C-met SF基因的表达而改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

补肾调和肝脾法对慢性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞端粒酶活性的影响

[目的]观察补肾调和肝脾法治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,从外周血单个核细胞端粒酶活性的角度探讨其作用机制。[方法]将92例CAA患者,采用随机数字表法随机分为治疗组和对照组,每组46例,对照组给予西药常规治疗,治疗组在对照组常规西药治疗基础上,加补肾调和肝脾中药,每日1剂,每剂分2次服,疗程均为6个月。评价临床疗效,并分别于治疗前后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周血单个核细胞端粒酶表达水平。[结果]两组临床疗效比较有统计学意义(P0.05),治疗组优于对照组。治疗组和对照组在治疗前后外周血象白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)和TERT mRNA表达水平均具有统计学意义(P0.05),治疗组在改善外周血象HGB、PLT和降低TERT mRNA表达水平均优于对照组,差异具有统计学意义(P0.05),但治疗组在改善外周血象WBC方面与对照组相比差异不具有统计学意义(P0.05)。[结论]补肾调和肝脾法能够有效提高CAA患者的临床疗效,其作用机制可能与降低外周血单个核细胞端粒酶活性,参与造血干细胞的生成分化有关。     

补肾活髓通络颗粒对非重型再生障碍性贫血患者血清成骨生长肽表达的影响

目的：探讨补肾活髓通络颗粒对非重型再生障碍性贫血（NSAA）血清成骨成生长肽表达水平（OGP）的影响。方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）对36例NSAA患者（观察组）治疗前及经补肾活髓通络颗粒治疗后血清OGP表达水平进行检测,并与18例健康人（对照组）相比较。结果：治疗前观察组血清OGP明显低于对照组（P〈0．05）,治疗后明显高于治疗前,但仍低于对照组。结论：补肾活髓通络颗粒可以升高NSAA患者血清OGP表达水平;血清OGP表达水平增高可作为NSAA治疗有效的一项指标;血清OGP在NSAA中呈低表达,可通过影响造血微环境而影响造血干细胞的增殖和分化,参与NSAA的发生和发展。     

补肾解毒活血法与益气补血法对骨髓抑制小鼠造血功能影响的比较研究

目的:比较补肾解毒活血法与益气补血法对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠造血功能的影响及其作用机制的不同特点.方法:昆明种小鼠80只,随机分为4组,正常对照组、模型组、补肾解毒活血组(20.55 g·kg -1·d-1)和益气补血组(17.47 g·kg-1·d-1).采用CTX 100 mg·kg-1 ip,连续3d,制成骨髓抑制小鼠模型.各组于造模完成后次日开始ig连续10d.分别于造模前及造模后1,3,5,7,10,14 d动态检测外周血象;于末次给药次日后进行骨髓有核细胞计数(BMNC)及粒-单核系集落形成单位( CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、和红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落计数.结果:补肾解毒活血方和益气补血方均可明显升高模型小鼠的WBC,PLT,BMNC,可促进造血祖细胞(HPC)增殖,CFU-GM,CFU-E,BFU-E集落数均显著高于模型组(P＜0.01);补肾解毒活血方对血小板的恢复优于益气补血方.结论:补肾解毒活血方和益气补血方均可促进骨髓造血祖细胞集落生成,具有减轻和改善化疗后骨髓抑制的效果,而前者尤可减轻血小板减少、促进其恢复;其作用机制可能在骨髓细胞分化过程或造血微环境等途径上有不同.     

天升元口服液在免疫介导的再生障碍性 贫血模型小鼠上的效应观察

目的:观察候选新中药天升元口服液对免疫介导的再生障碍性贫血(immune-mediated aplastic anemia,IAA)模型小鼠的效应。方法:建立IAA小鼠模型,给予天升元口服液14 d后,检测外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比积(HCT)、血小板(PLT)、网织红细胞(RET)、股骨骨髓有核细胞(BMNC)和脾脏指数,并进行股骨和脾脏病理形态学观察。结果:模型对照组WBC,RBC,HGB,HCT,PLT,RET,BMNC和脾脏指数均较正常对照组显著下降(P<0.001);而天升元口服液(12.4,24.8 g.kg-1.d-1)能显著升高模型小鼠WBC(升幅分别达150%和133.3%),RBC(9.5%和37.1%),HGB(12.9%和44.5%),HCT(11.6%和28.4%),PLT(94.8%和252.3%),RET(115.4%和123.1%),BMNC(71.1%和95.6%)和脾脏指数(18.7%和33.7%),与模型组比较差异显著(P<0.05～0.001)。病理学检查显示天升元口服液明显增加骨髓造血细胞,降低脂肪细胞产生,减轻脾小体萎缩状态,促进脾小体髓外造血灶产生。结论:天升元口服液通过促进骨髓内外造血细胞增殖,改善造血功能,产生对IAA模型小鼠的治疗效应。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞c-kit mRNA及CD117影响的研究

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓单个核细胞c-kitm RNA及CD117表达的影响。方法:分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及流式细胞技术检测CAA病人治疗前后骨髓单个核细胞c-kitm RNA及CD117水平的变化。结果:CAA患者骨髓c-kitm RNA及其CD117表达水平高于正常对照组,治疗后二者表达水平均有不同程度下降,并且补髓生血颗粒对二者表达水平的下调程度优于再障生血片对照组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓c-kitm RNA及CD117的表达存在异常;补髓生血颗粒剂可能通过调节骨髓c-kitm RNA及CD117的表达来改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

参芪十一味颗粒治疗消化系统肿瘤化疗后脾肾亏虚证临床分析

目的观察参芪十一味颗粒治疗中晚期消化系统肿瘤患者化疗后出现的脾肾亏虚证的疗效。方法治疗组50例,并设对照组50例,观察治疗前后临床症状改善情况、血细胞(WBC、Hb、PLT)、免疫功能变化(IgA、IgG、IgM、ICT)及药物不良反应等。结果治疗组临床症状改善率为92%,对照组为38%(P<0.01);治疗组患者血细胞有所下降。但下降值和下降程度明显低于对照组(P<0.01);免疫功能变化治疗后两组比较有显著性差异(P<0.05～0.01)。结论该药配合化疗可明显改善临床症状,减轻骨髓抑制,其通过增强机体免疫功能从而达到扶正祛邪的目的。