沙利度胺对胶原诱导性关节炎大鼠TNF-α表达的影响

目的探讨沙利度胺对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法以CIA大鼠作为类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的动物模型,将健康雄性Wistar大鼠76只分为正常对照组、CIA组、沙利度胺治疗组,通过比较三组大鼠足爪厚度及血清TNF-α水平之间的关系,探讨TNF-α在RA发病过程中的作用以及沙利度胺对CIA大鼠的治疗效果。结果血清TNF-α与CIA大鼠关节炎的肿胀程度密切相关,TNF-α浓度越高,关节的肿胀越严重。沙利度胺能够降低CIA大鼠血清TNF-α的浓度,改善CIA大鼠的关节肿胀情况。结论沙利度胺可通过降低大鼠血清TNF-α浓度进而改善CIA大鼠关节症状,有望应用于类风湿关节炎的治疗。     

雷公藤内酯醇对胶原诱导的大鼠关节炎关节腔和外周血清中细胞因子的影响

目的:观察雷公藤内酯醇对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血清和关节腔中IL-6、IL-10、TNFα的影响,探讨雷公藤内酯醇治疗CIA的可能机制。方法:以胶原诱导的W istar大鼠关节炎为动物模型,将模型复制成功的20只大鼠随机分为模型组和雷公藤内酯醇组。雷公藤内酯醇按40μg/kg BW肌注给药,每3 d 1次,31 d处死动物,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清和膝关节腔液中TNFα、IL-6和IL-10含量。结果:与正常对照组大鼠相比,CIA模型大鼠关节腔液和血清中TNFα、IL-6含量升高IL-10含量降低(P<0.01),经过雷公藤内酯醇治疗后,关节腔液和血清中TNFα、IL-6含量降低,IL-10含量升高,模型组与治疗组相比,差异有显著性(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇可能通过调节细胞因子变化而达到治疗CIA,这也可能是雷公藤治疗类风湿关节炎的机制之一。     

脑缺血叠加寒冷诱导血瘀证表征模型的建立

目的由线栓法大脑中动脉闭塞致脑缺血叠加寒冷诱导建立血瘀证表征模型,通过与寒凝血瘀证表征模型和脑缺血诱导血瘀证表征模型比较,选择一种最合适的血瘀证表征模型。方法选择大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型、冰水冷冻大鼠模型、大脑中动脉闭塞叠冰水冷冻大鼠模型,进行脑缺血后1、3、5、7d不同时间点大鼠证候模型表征变化(舌、舌下脉络)及其对模型大鼠进行行为学、血液流变学检测。结果脑缺血后3dMCAO组、冰水组与冰水MCAO组大鼠的舌质色度值与正常组比较均存在统计学差异(P<0.05);脑缺血后5d冰水MCAO组大鼠的舌质色度值与正常组比较存在统计学差异(P<0.05);脑缺血后3d冰水MCAO组舌质色度值为各时间点最高值(舌质色度值60.12±5.15),但各组间舌质色度值比较统计学无差异(P>0.05)。各组血液流变学统计结果显示,MCAO组、冰水冷冻组、冰水MCAO组全血及还原黏度、血球压积、血浆黏度、聚集指数、变形指数均较正常组升高,部分时间点值升高与正常组比较有统计学差异(P<0.01,P<0.05),其中又以冰水MCAO组脑缺血后3d血液黏度、血球压积、血浆黏度、聚集指数均为各组最高值,变形指数为各组最低值。结论在3种模型中,大脑中动脉闭塞叠加寒冷模型可能为最合适的诱导血瘀证表征模型的动物模型。     

益肺通络方对血瘀大鼠血液流变学的影响

目的：观察益肺通络方对血瘀证模型大鼠血液流变学的影响。方法采用皮下注射肾上腺素加冷水冰浴制备血瘀证大鼠模型,观察益肺通络方对血瘀证模型大鼠血液流变学的影响。结果与模型组比较,益肺通络方可以显著降低血瘀证模型大鼠高、低切变率全血黏度（P〈0.05,P〈0.01）,降低血浆黏度（P〈0.05）,可降低全血高切相对指数、全血低切相对指数和卡松黏度（P〈0.05）。结论益肺通络方对血瘀证模型大鼠血液流变学具有改善作用。     

丹参影响CIA大鼠血清MMP-9水平与易栓关系

目的 观察丹参对Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎(CIA)大鼠血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,探讨丹参干预类风湿关节炎(RA)炎症与易栓状态的实验研究.方法 48只SD大鼠随机分为5个实验组,皮下注射Ⅱ型胶原诱导RA大鼠模型,应用Western Blot检测各组大鼠血清MMP-9表达.结果 所有实验组MMP-9水平均高于正常对照组(P<0.05).模型组的MMP-9水平高于丹参组、甲氨蝶呤(MTX)组和丹参 MTX组;丹参组MMP-9水平高于MTX组及丹参 MTX组;MTX组MMP-9水平高于丹参 MTX组(P<0.05).结论 丹参和MTX联合使用改善RA炎症与易栓状态比药物单用组更明显,治疗效果显著优于药物单用组.     

风寒湿对类风湿关节炎DNA甲基化和组蛋白修饰的影响

目的探讨类风湿关节炎(RA)风寒湿病证结合模型的造模方法及风寒湿因素对RA DNA甲基化和组蛋白修饰的影响。方法在胶原诱导性关节炎(CIA)和风寒湿因素刺激的基础上建立RA风寒湿病证结合模型,进行关节评分、测关节直径、检测外周血单个核细胞(PBMCs)DNA甲基化及组蛋白H3乙酰化水平。结果与正常组相比,风寒湿病证结合模型组关节炎指数评分≥5分的比例显著升高(P0.05);大鼠踝关节直径显著增加(P0.05)。与CIA模型组相比,风寒湿病证结合模型组PBMCs DNA甲基化水平显著下降(P0.05);PBMCs组蛋白H3乙酰化水平有所升高,但无统计学意义。结论风寒湿因素可能通过下调PBMCs DNA甲基化水平,从而影响关节炎严重程度。     

类风湿关节炎肾虚证大鼠模型的建立

目的：建立类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）肾虚证病证结合大鼠模型。方法：选用6周龄无特殊病原体级Sprague-Dawley大鼠110只,雌雄各半。分别采用去势法和羟基脲法制作肾虚动物模型,然后采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂混合物的方法诱导出关节炎。通过对大鼠一般状态观察,关节炎指数计算和关节肿胀度测量对比两种RA肾虚证病证结合动物模型的发病情况,并采用酶联免疫吸附测定法检测血浆抗Ⅱ型胶原抗体、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、IL-10、γ干扰素（interferon-γ,IFN-γ）和皮质酮（corticosterone,CORT）含量,放射免疫法检测肾上腺环腺苷酸（cyclic adenylic acid,cAMP）和环鸟苷酸（cyclic guanylic acid,cGMP）含量。结果：与胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）对照组大鼠相比,结合去势法、羟基脲法制作的肾虚CIA大鼠关节红肿程度和关节损伤程度明显加重,并且这两组大鼠出现倦怠、精神萎靡,弓背蜷缩,体毛枯疏,自主活动少,反应逐渐迟钝,喜扎堆,饮食减少,大便质稀,肛周污秽等与临床肾虚证相似的症状;肾虚CIA大鼠cAMP与cGMP比值明显降低,雄性大鼠CORT含量升高,雌性大鼠的CORT水平下降,抗Ⅱ型胶原抗体含量明显升高。采用去势法制作的肾虚CIA大鼠与CIA对照组大鼠相比,IL-6、IL-10及IFN-γ水平明显升高。结论：用去势法和羟基脲法制作的肾虚证RA动物模型,既有明显的肾虚症状,又有明显的RA特征,说明这两种肾虚型RA病证结合模型能够部分地反映肾虚证RA病人的发病特点,具有可行性。而去势法制作的肾虚CIA大鼠更适合RA肾虚证的实验研究。     

清热活血方抑制Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠滑膜组织血管新生的研究

目的 研究清热活血方的活血化瘀作用,探讨该方药抑制滑膜组织内血管新生的机制.方法 采用Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,治疗组用清热活血方大、小剂量干预,同正常组、模型组、阳性药物组比较,观察清热活血方对CIA大鼠关节肿胀度、关节病理切片、滑膜病理切片、微血管密度(MVD)、血清中致炎因子干扰素(INF)-γ及血管疾病相关指标组织型纤溶酶原激活因子(tPA)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响.结果 清热活血方能明显缓解CIA大鼠关节肿胀;关节病理切片显示清热活血方可以抑制关节内滑膜的增生,延缓关节软骨与骨的破坏.滑膜病理切片显示,清热活血方大、小剂量组滑膜组织内炎症细胞的浸润较模型组减少,且微血管密度较模型组降低;清热活血方大、小剂量组大鼠血清中INF-γ含量较模型组明显减少(P＜0.05).与模型组比较,清热活血方大剂量组可以减少tPA的生成(P＜0.05);与模型组比较,清热活血方小剂量组可以下调eNOS的表达(P＜0.05),大剂量组能显著下调eNOS的表达(P＜0.01),说明该方对于eNOS表达具有抑制作用,并且呈剂量相关性.结论 清热活血除了可以有效地控制关节的炎症,延缓关节内软骨与骨的破坏,减少关节内滑膜的增生外,还可以改善关节周围血瘀的情况,抑制促血管生成因子的表达,从而减少新生血管的数量,较好地控制活动期类风湿关节炎的病情.     

消结安胶囊对血瘀模型大鼠血液流变性的影响

目的通过动物实验观察消结安胶囊对血瘀模型大鼠血液流变性的影响。方法通过盐酸肾上腺素加冰水应激造成血瘀大鼠模型,观察消结安胶囊对血瘀模型大鼠血液流变学各项指标的影响。结果消结安胶囊大、中剂量均可显著地降低血瘀模型大鼠升高的血液流变学各项指标(P0.05或P0.01),且作用显著优于消结安胶囊小剂量组及桂枝茯苓胶囊组(P0.05或P0.01)。结论消结安胶囊可以显著改善血液流变状态。     

寒凝血瘀证表征模型的建立

目的建立寒凝血瘀证表征模型,为探讨血瘀证生物学基础提供实验模型。方法采用多次冰水冷冻刺激法诱导寒凝血瘀证大鼠模型,采用数码相机拍摄实验大鼠证候表征变化。结果模型大鼠舌质紫暗,舌下脉络增粗增长,与正常大鼠舌质鲜红润泽舌下脉络清晰有明显差异。模型大鼠耳廓润泽、微血管清晰但显暗红较正常大鼠耳廓、微血管略有变化。模型大鼠血液流变学全血黏度和还原黏度高切和低切各项指标与正常组比较均有升高(P<0.05);模型大鼠聚集指数、聚集面积显著高于正常大鼠(P<0.05);模型大鼠血小板最大聚集率显著高于正常大鼠,模型大鼠凝血酶时间和凝血酶原时间显著短于正常大鼠(P<0.05)。结论冰水冷冻20次后,血瘀证表征尤其舌质紫暗和舌下脉络增粗增长显现,符合寒凝血瘀证表征模型评价的基本条件。多次冰水冷冻刺激法造模,方法简单,模型稳定性好。     

部分缩窄大鼠腹主动脉致心室重构动物模型的病证结合研究

目的研究部分缩窄大鼠腹主动脉致心室重构模型的中医证候特点及心室重构特点。方法大鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,采用部分缩窄大鼠腹主动脉致心室重构。应用中国中西医结合学会关于虚证和血瘀证辨证标准,观察术后动物的每周一般状态以及心率、力竭性游泳时间、心电图、超声心动图的变化,进行中医证候评价。结果模型组大鼠一般情况表现为虚症和血瘀证,术后4周与假手术组比较,模型组大鼠ST段发生异常的抬高或降低的导联数明显增加(P<0.01),心率明显增快(P<0.05)、力竭性游泳时间明显缩短(P<0.01)、室间隔舒张末期厚度(IVSTd)明显增加(P<0.01),左室心肌质量指数(LVM I)明显增加(P<0.01);术后8周与假手术组比较,模型组大鼠ST段发生异常的抬高或降低的导联数增加、心率增快、力竭性游泳时间的缩短、IVSTd、LVPWTd和LVM I的增加仍同4周时的改变性质,但LVDd发生显著性增加(P<0.05),EF也发生明显减小(P<0.05)。结论部分缩窄腹主动脉致心室重构大鼠中医证候表现有心气虚证及血瘀证的特点,血瘀证贯穿于病变整个过程,心气虚证随着病变的发展而出现并加重。该模型大鼠心脏早期左心室呈现典型的向心性肥厚的病理改变;造模8周后该模型呈既有向心性肥厚又有离心性肥厚的混合型左室肥厚。     

粗毛纤孔菌对寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响及谱效关系分析

目的：观察粗毛纤孔菌子实体对寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响,探讨粗毛纤孔菌的活血化瘀作用。方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、血瘀模型组、阳性对照组和低、高剂量粗毛纤孔菌子实体（S1~S6）组,共15组,每组12只。各组大鼠连续灌给药7d（正常对照组和模型组大鼠给予蒸馏水）,除正常对照组外,其余各组大鼠均注射盐酸肾上腺素和浸入冰水中造成寒凝血瘀证模型。检测大鼠血液流变学指标,并进行谱效分析。结果：寄生于不同树种的粗毛纤孔菌的黄色子实体（S3~S6）均具有改善寒凝血瘀证模型大鼠血液流变学作用,与模型组比较,高剂量粗毛纤孔菌黄色子实体组大鼠血浆黏度和全血黏度均降低（P<0.05）。粗毛纤孔菌的黑色子实体（S1和S2）具有与黄色子实体相似的功效,但与模型组比较,粗毛纤孔菌黑色子实体组大鼠血液流变学指标无明显变化（P>0.05）。谱效分析,11个色谱峰对应的成分与大鼠血浆黏度变化密切相关,相关系数均>0.8;经鉴定,其中4个化合物为phellibaumin A、phelligridin C（反式）、phelligridin D和3'4'-dihydroxy-5-[（11-hydroxyphenyl）-6,7-vinyl]-3,5-dioxa-fluoren-5-one。结论：寄生于不同树种的粗毛纤孔菌的黄色子实体均可以降低大鼠血浆黏度和全血黏度,具有活血化瘀作用。     

RNA干扰沉默STAT3对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)干扰沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)对大鼠类风湿关节炎(RA)的治疗作用,评价其有效性,为RA的基因治疗提供实验依据。方法: 采用鸡Ⅱ型胶原诱导方法建立大鼠 RA(CIA)模型,实验分为正常组(非关节炎大鼠)、模型组(不给予治疗的关节炎大鼠)、阴性对照组(给予乱码RNA的关节炎大鼠)和治疗组(给予STAT3特异干扰siRNA的关节炎大鼠),实验中siRNA均由慢病毒颗粒包载。实验期间观察大鼠一般情况,每7 d检测大鼠关节病变程度并记录,实验第35天处死大鼠后观察其关节病理切片并进行评分;Western blotting法检测大鼠滑膜组织中STAT3蛋白表达水平;RT-PCR法检测大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA表达水平。结果: 与模型组和阴性对照组比较,治疗组大鼠临床及形态学表现均明显减轻。与正常组比较,模型组和阴性对照组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05或P<0.01),治疗组差异无统计学意义(P>0.05);模型组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论: 局部注射siRNA阻断STAT3的表达可明显改善RA大鼠关节的组织病理学表现,其机制可能与STAT3 mRNA和蛋白表达水平降低有关。     

HIF-1α、VEGF在CIA大鼠模型中的表达与意义

目的制备牛Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)模型,探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在类风湿关节炎发病中的作用。方法50只SD大鼠,随机分为对照组与模型组。建立CIA模型,动态观察各项关节炎活动指标,于造模第21、28、35、42天取踝关节行HE染色及HIF-1α、VEGF免疫组化染色,分析两者在CIA中的相关性及与关节炎活动指标、滑膜病理学评分之间的关系。结果CIA大鼠关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α、VEGF二者呈明显正相关,r为0.75(P<0.01),第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关,r分别为0.4、0.48、0.50(P<0.05),与炎症浸润评分无明显相关r为0.30(P<0.05)。结论HIF-1α可能通过调控一系列下游靶基因,如VEGF等,促进滑膜增生及血管生成,影响类风湿性关节炎(rheumatoi...     

通痹灵对胶原诱导性关节炎大鼠软骨破坏的对抗作用

目的 探讨中药通痹灵对类风湿关节炎软骨破坏的对抗作用。方法 采用大鼠胶原诱导性关节炎（CIA）模型，用关节软骨免疫组化染色方法，评价造模后通痹灵早期给药治疗对大鼠软骨病变中肿瘤坏死因子－α（TNF-α），转化生长因子－β（TGF－β）的表达的影响，并与模型组，甲氨碟呤（MTX）组，雷公藤组等进行半定量的平行对比研究。结果 正常组的软骨组织中TNF－α阳性软骨细胞数呈低表达，且染色浅，与模型组的高阳性表达深染色有显著性差异（P＜0．01），也明显优于MTX低剂量组（P＜0．01）。通痹灵高，低剂量组及雷公藤高剂量组较接近正常组的表现，优于MTX高，低剂量组（P＜0．05），与模型组比较差异有显著性（P＜0．01）。正常组软骨组织中TGF－β呈较活跃的表达，模型组与雷公藤高，低组则表达少而染色浅，与正常比较有显著性差异（P＜0．05）。通痹灵高，低剂量组是各病理组中最接近正常组表现的，与模型组比较有显著性差异（P＜0．01）。结论 通痹灵治疗和改善软骨病变的机制可能与其降低软骨细胞异常升高的致炎，致溶骨的细胞因子TNF－α的分流行性并升高保护性因子TGF－β的含量有关。     

昆仙胶囊对大鼠诱导性关节炎滑膜及血清γ IP-10的影响

目的:观察昆仙胶囊对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜及血清中γIP-10的调节作用,探讨昆仙胶囊补肾祛风湿法治疗类风湿关节炎的作用机理。方法:采用尾根部皮下多点注射Ⅱ型胶原蛋白建立CIA大鼠模型。将实验用Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、MTX组及昆仙胶囊低、中、高剂量组。测量各组大鼠后肢关节肿胀度,检测各组关节影像学改变及滑膜病理变化,ELISA法检测大鼠血清中γIP-10含量,RT-PCR法检测大鼠滑膜组织γIP-10 mRNA的表达水平。结果:MTX组和昆仙胶囊各剂量组大鼠关节炎症状减轻,滑膜细胞增生、炎性细胞浸润及血管翳形成等病损较模型组明显改善(P<0.05);与正常组相比,模型组血清γIP-10含量和滑膜组织γIP-10 mRNA表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,MTX组和昆仙胶囊中、高剂量组大鼠血清γIP-10含量下降(P<0.05),MTX组和昆仙胶囊各剂量组滑膜组织γIP-10 mRNA基因表达下降(P<0.05),尤以昆仙胶囊高剂量组下降明显(P<0.01)。结论:昆仙胶囊能显著缓解胶原诱导关节炎大鼠关节炎症状及滑膜细胞病损,明显下调大鼠血清和滑膜细胞中γIP-10的高表达,减轻慢性关节滑膜炎及血管炎病变。     

全反式视黄酸对CIA大鼠血清炎性细胞因子及软骨损伤相关蛋白表达的影响

目的 探讨全反式视黄酸（ATRA）对胶原诱导的类风湿关节炎模型大鼠（CIA大鼠）关节炎症反应、炎性相关细胞因子及软骨损伤相关蛋白表达的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组和造模组,造模组采用牛CⅡ型胶原和不完全弗氏佐剂诱导关节炎。造模成功后,将模型鼠随机分为CIA模型组和ATRA治疗组。ATRA治疗组给予不同剂量（0.50 mg/kg、1.00 mg/kg）的ATRA腹腔注射,3次/周,连续治疗6周。空白对照组给予等体积的生理盐水,CIA模型组给予等体积玉米油。观察CIA大鼠关节炎指数（AI）评分、血清炎性相关细胞因子的水平、膝和踝关节组织病理形态学改变及软骨损伤相关蛋白的表达。结果 ATRA干预6周后,不同剂量ATRA治疗组AI评分与CIA模型组相比,差异均无统计学意义（ P>0.05）;HE染色示,CIA模型组和ATRA 1.00 mg/kg剂量组膝、踝关节结构紊乱,ATRA 0.50 mg/kg剂量组膝关节结构有所改善。此外,与CIA模型组相比,ATRA可抑制促炎细胞因子干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、白介素-17A的分泌（ P<0.05）,促进白介素-4的分泌（ P<0.05）;下调解整链蛋白金属蛋白酶（ADAMTS）-4、基质金属蛋白酶（MMP）3、MMP1的表达（ P<0.05）。结论 ATRA可在一定程度上抑制促炎因子分泌,纠正Th1/Th2及Th17/Treg失衡,并抑制软骨损伤相关酶类的蛋白表达,对类风湿关节炎有潜在的有利影响。