金属蛋白酶MMP-9可调控型表达与人黑色素瘤细胞侵袭表型的相关性

目的：探讨金属蛋白酶MMP-9与肿瘤恶性表型的相关性以及其可调控型表达在肿瘤基因治疗中的应用。方法：利用基因重组技术构建正义MMP-9cDNA四环素可调控型表达载体，用脂质体法转染正义MMP-9至早期人黑色素瘤细胞株WM35（不表达MMP-9）。检测转染后细胞MMP-9表达水平的改变以及体外生长、侵袭能力的变化。结果：在外源性四环素存在时，转染基因不表达，细胞表型无明显变化。去除四环素，WM35细胞MMP-9的表达及活性增强，细胞生长速度加快、错着非依赖性生长能力增加、体外侵袭能力增强。结论：正义MMP-9基因的可调控型表达能促进人黑色素瘤细胞的生长和侵袭，进一步证明MMP-9在人黑色素瘤细胞侵袭过程中起重要作用。     

可调控型反义MMP-9表达与恶性肿瘤转移表型的相关性研究

目的探讨金属蛋白酶MMP-9与肿瘤转移的相关性。方法利用基因重组技术构建反义MMP-9cDNA四环素可调控表达载体,用脂质体法转染反义MMP-9至转移性人黑色素瘤细胞株WM451(高表达MMP-9)。检测转染后细胞MMP-9表达水平的改变以及裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果转染反义基因后,WM451细胞MMP-9的表达及活性明显下降,体外侵袭能力及裸鼠体内成瘤性及自发转移能力均受到一定程度抑制;运用四环素可以抑制四环素负调控逆转录病毒载体上的外源基因的表达。结论反义MMP-9基因下调MMP-9的表达,可使人黑色素细胞转移能力受到一定程度的抑制,说明MMP-9在人黑色素瘤细胞转移过程中起重要作用。同时,四环素负调控逆转录病毒载体可以调控外源基因的表达。     

MMP-9与人黑色素瘤细胞生长相关性的研究

目的 利用多种方法检测金属蛋白酶MMP—9基因与人黑色素瘤细胞生长的相关性。方法 利用细胞记数、MTT、^3H—thymidine掺入实验等方法检测分别转染正义和反义MMP—9CDNA后人黑色素瘤细胞生长速度的改变。结果 转染反义基因后WM45l细胞生长速度受到明显抑制(P＜0．05)；转染正义基因后WM35细胞生长速度受到明显促进(P＜0．05)。而运用四环素可以抑制四环素负调控逆转录病毒载体上的外源基因的表达，其结果与对照细胞相似。结论 反义MMP—9基因使人黑色素瘤细胞的生长能力受到一定程度的抑制，正义MMP—9基因使人黑色素细胞的生长能力受到一定程度的促进。说明MMP—9在人黑色素瘤细胞生长过程中起重要作用。同时，四环素负调控逆转录病毒载体可以调控外源基因的表达。     

肿瘤侵袭转移过程中基质金属蛋白酶作用机制系列研究

针对肿瘤侵袭转移过程中基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物的作用和调节机制进行了较深入的系列研究。在包括肺癌、前列腺癌和黑色素瘤的几组具有不同转移潜能的人肿瘤细胞系中，癌细胞产生MMP-2和MMP-9的能力与其侵袭转移能力密切相关。进一步通过反义基因转染技术证实，抑制MMP-9基因表达可以明显降低高转移癌细胞的体外侵袭及裸鼠体内自发转移能力。将金属蛋白酶组织抑制因子TIMP-1，TIMP-2和TIMP-3基因分别导入高转移癌细胞，可以观察到转染细胞的侵袭转移能力受到明显抑制。说明通过选择性抑制MMPs基因表达或增强TIMPs基因表达均可在一定程度上达到抑制肿瘤侵袭转移的目的。与此同时，我们应用定时控制表达技术分别将正义或反义MMP-9基因导入MMP-9不表达或高表达的黑色素瘤细胞，通过四环素控制的分子开关成功实现了MMP-9基因的定时控制表达，为提高临床基因治疗的效果提供了初步实验依据。     

金属蛋白酶MMP-9表达与人黑色素瘤细胞系转移表型的相关性

目的 :探讨金属蛋白酶MMP 9与肿瘤转移的相关性。方法 :利用基因重组技术构建反义MMP 9cDNA真核表达载体 ,用脂质体法转染MMP 9高表达的转移性人黑色素瘤细胞株WM 45 1,检测转染后细胞MMP 9表达水平的改变以及体外生长、侵袭、裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果 :转染细胞MMP 9的表达及活性明显下降 ,同时MMP 2的表达也受到一定抑制 ,细胞生长速度、体外侵袭能力及裸鼠体内成瘤性及自发转移能力均受到一定程度抑制。结论 :通过反义RNA技术下调MMP 9的表达 ,可使人黑色素细胞转移能力受到一定程度的抑制 ,说明MMP 9在人黑色素瘤细胞转移过程中起重要作用     

CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究

目的 探讨CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭及转移的影响及可能机制。方法 设计合成CXCR4特异性短发夹状RNA(shRNA)插入pSilencer载体,转染人高转移性黑色素瘤细胞株MV3、RT-PCR和Western blot法检测shRNA对靶基因CXCR4表达的影响。利用Transwell小室模型检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞体外增殖能力。通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射,将转染后的细胞接种至裸鼠皮下,构建黑色素瘤转移模型,观察肿瘤生长情况。结果 CXCR4-shRNA能有效下调CXCR4基因的表达,降低黑色素瘤细胞增殖、体外侵袭及转移能力。RT-PCR及细胞免疫荧光显示,转染CXCR4-shRNA的黑色素瘤瘤MV3细胞系MMP-2表达下调;免疫组化结果显示,实验组裸鼠黑色素瘤瘤体及转移灶组织MMP-2的表达低于对照组。结论 shRNA介导的CXCR4基因沉默在体外实验能够显著抑制黑色素瘤细胞的生长和增殖活性,减弱体外侵袭能力,且体外产生抑瘤效应,明显降低肝、脑器官转移能力和定向肺转移能力。其机制可能与SDF-1/CXCR4信号途径阻断,进而抑制MMP-2的表达有关。     

TMSG-1基因转染对肿瘤转移表型的影响

目的：研究肿瘤转移抑制基因TMSG-1对肿瘤转移表型的影响。方法：将含TMSG-1全长开放阅读框架的1.5kb cDNA克隆于pcDNA3，构建正义及反义TMSG-1 cDNA真核表达载体，以脂质体转染人肺巨细胞癌PG的高转移亚系BE1，挑选G418抗性克隆，RT-PCR检测正义或反义TMSG-1cDNA在转染细胞中的表达，进行转染细胞体外肿瘤生物学行为检测。结果：RT-PCR显示正义TMSG-1cDNA转染的BE1细胞（BE1-S）中TMSG-1表达明显高于BE1及空载体对照细胞，反义TMSG-1cDNA转染细胞（BE1-AS）中TMSG-1表达低于空载体对照细胞。与BE1及空载体对照细胞（BE1-V）相比，BE1-AS细胞体外生长较快，软琼脂克隆形成能力明显增强；而BE1-S细胞体外生长能力没有显著改变，但其穿越Matrigel的能力及软琼脂克隆形成能力明显减弱。流式细胞仪分析结果显示BE1-S的G0、G1期的细胞较BE1-V细胞比例增多，并且BE1-S出现了细胞凋亡峰。结论：实验结果表明反义TMSG-1基因转染可增强BE1细胞的体外生长、体外侵袭能力及克隆形成能力。而正义TMSG-1基因转染则使BE1细胞的侵袭能力及软琼脂克隆形成能力减弱，而对细胞体外生长能力无明显影响。结论支持TMSG-1是一个肿瘤转移抑制基因。     

金属蛋白酶MMP—9表达与人黑色素瘤细胞系转移表型的相关性

目的：探讨金属蛋白酶ＭＭＰ－９与肿瘤转移的相关性，方法：利用基因重组技术构建反义ＭＭＰ－９ｃＤＮＡ真核表达载体，用脂质体法转染ＭＭＰ－９高表达的转移性人黑色素瘤细胞株ＷＭ４５１，检测转染后细胞ＭＭＰ－９表达水平的改变以及体外生长、侵袭、裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果：转染细胞ＭＭＰ－９的表达及活性明显下降，同时ＭＭＰ－２的表达也受到一定抑制，细胞生长速度、体外侵袭能力及裸鼠体内成瘤性及自发     

nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响

目的：探讨nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响。方法：将含有全长nm23-H1 cDNA的真核表达载体通过脂腩体法转染人胆管癌细胞系。结果：转染成功的QBC939细胞，其nm23-Hl基因的mRNA、蛋白表达明显增加，转染nm23-H1基因的胆管癌细胞体外浸润能力下降，穿越matrigel的细胞数明显低于亲本QBC939细胞，代表浸润能力的IV型胶原酶（MMP-9）分泌量下降。结论：nm23-Hl基因可以抑制胆管癌细胞的体外浸润能力。     

不同转移潜能的人黑色素瘤细胞p53和MMPs基因突变的研究

目的探讨具有不同潜在转移能力的黑色素瘤细胞恶性表型的演进及其侵袭转移的机制。方法采用细胞培养,p53蛋白免疫组化,PCR－SSCP检测;酶活性分析,流式细胞术检测。结果人类黑色素瘤细胞中存在有p53基因的突变,瘤细胞表面671kDa层粘连蛋白受体（LN－R）的荧光阳性率和全部细胞的平均荧光强度大小顺序为：WM451＞WM983A＞WM1341B＞WM35。MMPs的产生情况：早期WM35不产生MMPs,WM1341B仅产生72kDa（MMP－2）,不产生92kDa（MMP－9）;进展期WM983A和远处转移瘤株WM451均产生72kDa和92Kda。其侵袭、转移的潜能与其产生或诱导产生的MMPs的能力和其表面67kDaLN－R的表达水平密切相关。结论p53基因突变;MMPs的产生和细胞表面67kDaLN－R的高表达是人黑色素瘤细胞侵袭转移能力获得的关键因素。     

RelA反义寡核甘酸对人细胞滋养细胞基质金属蛋白酶-2,-9表达的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)的亚单位RelA反义寡核甘酸对人细胞滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2,-9表达的影响。方法:离体培养人早孕期细胞滋养细胞(CTB),将反义和正义RelA寡核酸片断分别瞬时转染CTB,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Westernblot)法检测基质金属蛋白酶-2,-9的mR-NA和蛋白表达。结果:CTB转染RelA反义寡核甘酸后,MMP-9的mRNA和蛋白的水平均下降(P<0.05),而MMP-2mRNA和蛋白水平均无显著变化(P>0.05)。结论:RelA反义寡核甘酸可以调节细胞滋养细胞MMP-9的表达,提示RelA可能通过调节MMP-9的表达参与胚泡着床过程中滋养细胞对子宫内膜的侵袭。     

IL-8受体介导c-Jun和Ets-1异常调控MMP-9促进胃癌细胞侵袭

目的:探讨白介素-8(IL-8)受体促进胃癌侵袭所介导的分子机制?方法:胃癌细胞培养后分别转染空白质粒pcDNA3.1(+)?针对IL-8受体的反义表达质粒pcDNA3.1(+)/as-IL-8G和针对IL-8受体的正义表达质粒pcDNA3.1(+)/s-IL-8G,Western blot检测蛋白表达,细胞侵袭力用相对侵袭细胞数量表示?结果:低表达IL-8受体的胃癌细胞侵袭能力显著减弱,且细胞内c-Jun?Ets-1?MMP-9的蛋白水平显著下降;而高表达IL-8受体的胃癌细胞侵袭能力则显著增强,且细胞内c-Jun?Ets-1?MMP-9的蛋白水平显著上升?用硫代磷酸化修饰的反义寡聚脱氧核苷酸阻断该细胞内c-Jun或Ets-1的表达后,MMP-9的蛋白表达水平显著降低,并伴随细胞侵袭能力明显下降?结论:IL-8受体通过介导c-Jun和Ets-1异常调控MMP-9促进了胃癌细胞的侵袭过程?     

HBV对肝癌细胞系HepG2和HepG2.2.15中MMP-2及MMP-9的表达影响

目的研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9在肝细胞癌(HCC)细胞系HepG2和HepG2.2.15中的表达情况,探讨乙型肝炎病毒(HBV)对肝癌细胞系(HepG2,HepG2.2.15)中MMP-2、MMP-9表达的影响及其与癌细胞侵袭转移之间的关系。方法用明胶酶谱法检测HepG2细胞和稳定转染了HBV质粒的HepG2.2.15细胞中MMP-2和MMP-9的表达情况,观察两种细胞的某些生物学活性,用细胞生长曲线检测两者的生长速度。结果明胶酶谱法检测HepG2细胞中MMP-9的表达水平高于HepG2.2.15细胞(P<0.05),而两者MMP-2的表达差异不显著(P>0.05)。细胞生长曲线显示HepG2细胞的生长速度快于HepG2.2.15细胞。结论通过体外鉴定肝细胞癌细胞系HepG2细胞和HepG2.2.15细胞生长状态的差异,揭示了HBV的细胞内感染过程中HBV对肝细胞癌的生长具有一定的影响。HBV可影响明胶酶MMP-2和MMP-9的分泌及活性,进而对肿瘤的侵袭转移产生一定的影响。     

Nek2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响

目的研究RNA干扰Nek2表达对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响以及相关的分子机制。方法设计合成3条针对Nek2基因的siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用Real-time RT-PCR和Western blot技术筛选出抑制效率最高的Nek2-siRNA序列,用Transwell方法检测转染该序列的SKOV3细胞侵袭能力的改变,并用Western blot方法检测Nek2-siRNA转染后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达的变化。结果①RNA干扰序列2对SKOV3细胞中Nek2的抑制效果最明显;②与未转染组和阴性对照组相比,转染了Nek2-siRNA的SKOV3细胞侵袭能力明显下降(P<0.01);③Western blot检测表明,与未转染组和阴性对照组相比,Nek2-siRNA转染48 h后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9的表达明显下调,而TIMP-1的表达明显上调(P<0.01)。结论 Nek2-siRNA能有效得沉默SKOV3细胞中Nek2的表达,通过下调MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达,从而抑制SKOV3细胞的侵袭转移。     

MMP-9和PEDF在胃癌侵袭转移中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）和色素上皮源性因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）基因表达在胃癌侵袭转移中的作用，为防治胃癌转移提供理论依据。方法应用免疫组织化学法检测82例人体胃癌组织标本中胃癌细胞内MMP-9和PEDF的表达；统计学分析两种分子标记物与胃癌侵袭转移关系。结果胃癌组织中的MMP-9和PEDF表达率分别约为70％和43％，MMP-9高表达和PEDF低表达与浸润深度、淋巴管转移和远处转移呈正相关（P〈0、05）；MMP-9与PEDF表达呈负相关（P〈0、01）。结论MMP-9在胃癌侵袭转移中起促进作用，PEDF可抑制胃癌的进展，PEDF低表达可能通过上调MMP-9的表达从而促进胃癌的得袭转移．     

胃癌组织中E-cadherin和MMP-9的表达及其临床意义

目的 探讨E-cadherin和MMP-9在胃癌组织中的表达,分析二者的相关性、与临床病理特征的关系及它们在胃癌浸润转移过程中的作用.方法 用免疫组织化学染色方法分别检测E-cadherin和MMP-9在30例胃癌组织中及25例正常胃粘膜内的表达情况.结果 E-cadherin在胃癌组织中和正常胃粘膜中阳性表达率分别为33.33％（10/30）和100％ （25/25）.MMP-9在胃癌组织中和正常胃粘膜中阳性表达率分别为76.7％（23/30）和0.00％（0/25）,胃癌组织中E-cadherin和MMP-9表达呈负相关（P＜0.05）.结论 胃癌组织E-cadhefn的表达低而MMP-9的表达高,说明两者与胃癌的生物学行为密切相关,二者共同促进了胃癌的浸润与转移,因此,E-cadherin和MMP-9检测有助于胃癌恶性程度和侵袭能力的判断.