大鼠下丘脑内的一氧化氮合酶与雌激素受体双标神经元

目的:探讨一氧化氮合酶(NOS)和雌激素受体(ER)在下丘脑诸核团的分布及共存,为揭示雌激素与一氧化氮之间的内在联系提供形态学依据。方法:采用NADPH-d组织化学法并结合免疫组织化学技术,观察雌性大鼠下丘脑内NOS阳性神经元、ER阳性神经元以及NOS/ER双染神经元的形态及分布。结果:NOS阳性神经元主要分布在下丘脑室旁核、视上核、下丘脑外侧区和室周核;ER阳性神经元在下丘脑诸核团的表达不及NOS阳性神经元广泛;NOS与ER双染神经元主要分布在下丘脑的室旁核、视上核、下丘脑外侧区及室周核;其他区域可见散在分布的双染神经元。结论:NOS与ER双染神经元主要集中分布在视上核的背内侧和背外侧部及室旁核小细胞部腹内侧区,在下丘脑外侧区分布较广但比较分散,室周核呈散在分布。     

高原低氧对大鼠下丘脑生长抑素和γ-氨基丁酸含量的影响

目的：观察高原低氧大鼠下丘脑前生长抑素原（ＰＰＳ）ｍＲＮＡ和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）含量变化。方法：应用大鼠高原低氧模型及原位杂交技术和氨基酸测定法,检测下丘脑前ＰＰＳ－ｍＲＮＡ神经元数量和ＧＡＢＡ的含量。结果：高原低氧组大鼠下丘脑ＧＡＢＡ的含量明显增多,室周核、室旁核、弓状核ＰＰＳ－ｍＲＮＡ阳性神经元数目增加,而ＧＡＢＡ受体拮抗剂荷包牡丹碱使高原低氧大鼠下丘脑ＰＳ－ｍＲＮＡ阳性元数目增多更为显著     

间断性低压性缺氧对大鼠下丘脑NOS和生长抑素神经元的影响

本研究采用 NADPH-d组化与生长抑素免疫组化技术探讨了间断性低氧 (每天 6h) 1d、7d、15 d、2 1d和 3 0 d对大鼠下丘脑内一氧化氮合酶 (NOS)和生长抑素的影响。结果表明 :间断性低压性低氧可使下丘脑室旁核、视上核 NOS和室周核生长抑素阳性神经元数量明显增多 ,且低氧第 1d即达高峰 ,7和 15 d维持较高水平 ,2 1d开始下降 ,3 0 d则明显减少。NOS阻滞剂 L-NAME(3 0 mg/kg,ip)明显抑制低氧诱导下丘脑生长抑素阳性神经元数的增多。以上结果说明 ,下丘脑内源性的 NO与生长抑素参与了间断性低压性缺氧反应 ,并与慢性缺氧的适应反应有关 ;此外 ,NO作为下丘脑内源性的神经递质对下丘脑生长抑素的释放有促进作用     

大鼠下丘脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的分布

观察大鼠下丘脑各核团NOS阳性神经元的分布。采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH－d）法，结果显示，大量NOS阳性神经元见于下丘脑外侧区、视上核（SO）和室旁核（Pa）；出现较多NOS阳性神经元的部位是视前大细胞核，见到少量NOS阳性神经元的部位是室周核、视前内侧区、视前外侧区和下丘脑前区。结论：NOS阳性神经元分布于下丘脑的许多核团。     

内脏伤害性刺激后Fos在大鼠脑内NOS阳性神经元内的表达

目的：观察一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元在内脏伤害性信息传递通路上的分布。方法：给予大鼠内脏伤害性刺激后，采用Fos免疫组织化学(ABC法)和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色的方法，观察脑内NOS和Fos阳性神经元的分布。结果：脑内Fos／NOS双标阳性神经元主要分布在孤束核，中缝背核，丘脑室旁核，下丘脑室旁核、室周核、背内侧核，中脑导水管周围灰质腹外侧部、背外侧部，臂旁内侧核，内侧缰核，杏仁复合体内侧部等部位。结论：NO是内脏伤害性信息传递和调控通路上的神经递质之一。     

精氨酸加压素阳性神经元在大鼠下丘脑的定位

目的:观察大鼠精氨酸加压素(AVP)及其mRNA阳性神经元在下丘脑的分布和形态特征。方法:以尼氏染色作参照,运用免疫组化和原位杂交观察AVP及其mRNA在下丘脑的表达。结果:下丘脑AVP及其mRNA阳性的神经元由吻侧到尾侧依次出现于视上核,视上核和视交叉上核,视上核、视交叉上核和室旁核,视上核和室旁核及视上核、下丘脑前核和室旁核。AVP及其mRNA阳性神经元仅占据视上核背内侧;在第三脑室室管膜膜内或膜下可见AVP阳性神经元的胞体或突起;在不同核团内AVP阳性神经元的形态存在差异。结论:AVP及其mRNA阳性神经元在下丘脑不同核团内具有特异性分布;AVP阳性触液神经元可能是调节脑脊液和脑组织之间AVP含量的桥梁。     

一氧化氮合酶在大鼠杏仁基外侧核传入神经元内的分布

目的：研究一氧化氮合酶(NOS)在大鼠杏仁基外侧核(BLA)传入投射神经元中的分布。方法：采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH—d)组织化学双重染色相结合的方法。结果：双标神经元(NADPH-d／CTb)主要分布在孤束核、蓝斑、臂旁内侧核、中缝背核、中央灰质背侧部、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、下丘脑室周核、下丘脑腹内侧核以及杏仁内侧核等神经核团。结论：NOS在大鼠BLA传人投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与BLA的功能调节。     

外源性雌激素对去势后大鼠下丘脑视上核一氧化氮合酶阳性神经元分布的影响

目的观察外源性雌激素对去势后雌性大鼠下丘脑视上核(SON)一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元分布的影响。方法选用2～3月龄、健康未交配的雌性大鼠40只;动物分组如下:对照组大鼠20只,分为正常对照组(n=10)和实验对照组(卵巢切除术后,n=10)。实验组(即卵巢切除术后肌肉注射雌激素组)20只,造模成功后,分别于术后40d(即给药一个月)和术后70d(即给药两个月)陆续灌注取材。采用SABC法在光学显微镜下对下丘脑视上核内NOS阳性神经元进行形态学观察和细胞计数,采用图像分析系统测定NOS阳性神经元内免疫反应产物的平均灰度值。结果卵巢切除术后对照组大鼠下丘脑视上核NOS阳性神经元的密度明显增高,细胞比正常对照组有所增大(P0.05)。去势后补充雌激素1个月组的大鼠与正常对照组和卵巢切除组相比较,视上核内NOS阳性神经元的密度及形态均无明显改变(P0.05)。去势后补充雌激素两个月组与实验对照组相比较,无论NOS阳性神经元的密度还是阳性神经元胞体的大小均显著下降(P0.05),细胞着色变浅。结论外源性雌激素可能影响去势雌性大鼠下丘脑视上核NOS阳性神经元的分布和表达。     

雄性大鼠下丘脑雄激素受体蛋白及其mRNA表达的探讨

为了观察雄激素受体 ( AR)蛋白及其 m RNA在大鼠下丘脑的表达 ,本研究采用免疫组织化学和原位杂交方法观察了成年 ( 3月龄 )雄性大鼠下丘脑 AR阳性神经元的存在及其表达。结果显示 ,雄激素受体阳性神经元广泛分布于下丘脑诸核 ,尤其是弓状核、腹内侧核、背内侧核、室周核、室旁核 ,阳性神经元多为小细胞。同时在基因水平证实部分下丘脑神经元能合成 AR,提示雄激素可能作用于以上区域。     

不同生殖状态下雌性大鼠下丘脑视上核、室旁核内一氧化氮合酶活性的观察

为了进一步研究一氧化氮(NO)与生殖的关系,本文应用一氧化氮合酶(NOS)免疫组织化学ABC法和计算机图像分析,对正常、晚期(22天)妊娠和中期(7天)哺乳的大鼠下丘脑视上核、室旁核内NOS阳性神经元的细胞数、细胞平均切面面积及平均灰度值进行了观察。结果表明:晚期孕鼠的NOS阳性细胞数、细胞的平均切面面积和平均灰度值在室旁核分别为49.8±3.9、152.4±14.1μm2和153.4±8.9;在视上核分别为29.2±3.7、163.5±13.8μm2和140.5±7.2,前两项指标明显高于正常组(p<0.01),平均灰度值明显低于正常组(p<0.01)。中期哺乳鼠室旁核的NOS阳性细胞…     

体外反搏对心肌梗死犬一氧化氮系统的影响

目的:探讨体外反搏对心肌梗死犬一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和其基因表达的影响。方法:19只健康杂种犬随机分为对照组、缺血组和缺血+反搏组(反搏组)3组,采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型,用改良硝酸还原酶法测定心肌缺血前后血清NO含量、以及心肌组织的NO含量和NOS比活性,采用免疫组化方法检测缺血区心肌组织的NOS亚型即诱导型NOS(iNOS)和内皮型NOS(eNOS)的蛋白合成,用原位杂交方法检测构成型NOS(cNOS)信使核糖核酸(mRNA)的基因表达。结果:在冠状动脉结扎前和结扎后60min,3组犬血清NO含量均无明显差异(P＞0.05);结扎后120min和180min时,反搏组犬血清NO含量明显高于缺血组(P＜0.05)。正常组和反搏组犬心肌组织NO含量和NOS比活性均大于缺血组(P＜0.05)。免疫组化结果表明心肌缺血时iNOS蛋白合成增多,而eNOS蛋白合成减少;体外反搏对iNOS有抑制作用,对eNOS有促进作用。此外心肌缺血时cNOSmRNA的表达明显减少,反搏可促进cNOSmRNA的表达。结论:体外反搏促进NO的产生可能是其抗心肌缺血性损伤的重要机制之一。     

肢体缺血预适应的小肠保护作用及与一氧化氮/内皮素-1的关系

目的：观察一氧化氮/内皮素-1(NO/ET-1)失衡与肢体缺血再灌注(I/R)后小肠损伤的关系，以及缺血预适应(IPC)对NO/ET-1系统的调节作用。 方法： 雄性Wistar大鼠18只，随机分为对照（control）组，缺血再灌注（IR）组和缺血预适应（IPC+IR）组，每组6只，分别测定血浆和小肠组织二氨氧化酶(DAO)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、NO/ET-1比值的含量变化及小肠组织的髓过氧化物酶(MPO)、DNA双链百分率(ratio of DNA chain %)、总一氧化氮合酶（tNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）的水平；免疫组化法检测小肠组织的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达。 结果： IR组血浆和小肠组织NO、ET-1，血浆DAO及组织MPO均明显高于对照组，而 NO/ET-1的比值，组织DAO及DNA双链百分率明显少于对照组；小肠粘膜iNOS的表达及总NOS活性高于对照组，cNOS（主要为eNOS）的表达少于对照组。IPC+IR组血浆和小肠组织NO、ET-1，血浆DAO及组织MPO均明显少于IR组，而 NO/ET-1的比值，组织DAO及DNA双链百分率却明显高于IR组；小肠粘膜iNOS的表达及总NOS活性少于IR组，cNOS（主要为eNOS）的表达高于IR组。 结论： 肢体I/R后小肠损伤与NO/ET-1失衡有关，IPC对肢体IR继发的小肠粘膜损伤的拮抗作用可能通过对NO/ET-1系统的调节作用而介导，此时内皮源的NO产生增加，非内皮源的NO产生减少。     

抗血小板药物对缺血再灌注后一氧化氮合酶的影响

目的:评价急性心肌梗死（acute myocardial infarction, AMI）再灌注后一氧化氮合酶(NOS)的变化及抗血小板药物对其影响。 方法:中华小型猪24只，随机分成对照组、氯吡格雷与阿司匹林合用治疗组、替罗非斑治疗组和假手术组,每组8只。冠状动脉结扎3 h , 松解1 h制备AMI再灌注模型。采用硝酸还原酶法检测AMI前、后和再灌注后血一氧化氮 (NO) 的含量;采用催化L-Arg法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法观察正常、再流和无再流区心肌组织内NOS及其mRNA的表达。 结果:（1）替罗非斑组可提高血NO水平(P<0.05-0.01)，增加再流区心肌组织中cNOS活性及其mRNA表达，减少再流区心肌组织中iNOS活性及其mRNA表达(均P<0.05-0.01)。而氯吡格雷与阿司匹林合用不能提高血NO水平，增加再流区心肌组织中cNOS活性及其mRNA表达，仅能减少再流区心肌组织中iNOS活性及其mRNA表达。 结论:替罗非斑可能通过保护内皮细胞起到了减少无再流的作用，而氯吡格雷与阿司匹林合用并不能保护内皮功能，仅能减轻再灌注后的炎性反应。     

延迟预适应对兔心脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:观察延迟缺血预适应(IschemicPreconditioning,IPC)对兔在体心脏缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤的保护作用。方法:方法18只兔随机分为3组:假手术组(CON组,n=6),缺血再灌注组(I/R组,n=6),预适应组(IPC组,n=6)。采用免疫组化方法检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)在心肌及冠状动脉内皮中的表达情况。结果:IPC组的梗死面积明显小于I/R组。在心肌中,IPC组iNOS表达明显高于I/R组与CON组,而eNOS无显著性差异。在内皮中,IPC组eNOS表达明显高于I/R组,与CON组无显著性差异,而iNOS均无表达。结论:延迟缺血预适应能缩小兔缺血再灌注后心肌梗死面积。     

参麦注射液对大鼠急性心肌缺血及eNOS mRNA表达的影响

目的：探讨参麦注射液(SMI)预处理可能对 大鼠急性心肌缺血及心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达的影响。方法:大鼠随机分为对照组、模型组、处理组1和处理组2，应用异丙肾上腺素建立大鼠心肌 缺血模型,以心电图ST段抬高值作为心肌缺血指标，硝酸还原酶法测定血清和心肌的NO^-₂/NO^-₃，RT-PCR检测心肌eNOS mRNA表达。结果：模型组各时点的心 电图ST段均显著高于对照组，缺血20 min时达高峰，血清和心肌NO^-₂/NO^-₃含量及 心肌eNOS mRNA表达均低于对照组；两个处理组于缺血20、30、40 min时的心电图ST段抬高 幅度均显著低于模型组，血清和心肌NO^-₂/NO^-₃含量均显著高于模型组，心肌eNOS mRNA表达强于模型组；处理组1和处理组2比较，心电图ST段抬高幅度、血清和心肌的NO^-₂/NO^-₃含量及心肌eNOS mRNA表达差异均无显著。结论：参麦注 射液可能是通过促进心肌组织eNOS mRNA表达、增强eNOS活性而提高NO水平，达到抗心肌缺 血的作用。     

Inducible and endothelial nitric oxide synthase expression during development of transplant arteriosclerosis in rat aortic grafts.

In the vascular system, distinct isoforms of nitric oxide synthase (NOS) generate nitric oxide (NO), which acts as a biological messenger. Its role in the development of transplant arteriosclerosis (TA) is still unclear. To investigate whether NO is involved in TA, we studied the expression of NOS isoforms, inducible NOS (iNOS) and endothelial NOS (eNOS), by immunohistochemistry and in situ hybridization during the first two post-transplantation months and their relation with cold ischemia (1 to 24 hours) and reperfusion injury using an aortic transplantation model in the rat. We found an increased iNOS expression in the intima and adventitia and a decreased expression in the media, whereas eNOS expression was not significantly altered during the development of TA. Co-localization studies suggested that iNOS-positive cells were vascular smooth muscle cells, monocyte-derived macrophages, and endothelial cells. Prolonged ischemic storage time resulted in an increase in eNOS expression in the neointima. In situ hybridization showed iNOS mRNA expression by vascular cells in the neointima and media. NO produced by iNOS and eNOS may be involved, at least in part, in the pathogenesis of TA in aortic grafts. Additional studies are needed to confirm the modulatory mechanism of NO during the development of TA.     

局部肾素-血管紧张素系统在反搏治疗心肌缺血时的改变及其机制

目的:探讨局部肾素-血管紧张素系统(RAS)在心肌缺血与体外反搏(ECP)治疗时的改变及其改变机制。方法:利用冠状动脉结扎法造成急性心肌缺血犬模型,观察缺血与ECP治疗时缺血心肌和主动脉壁肾素活性、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平的改变,应用反转录-聚合酶链式反应观察血管紧张素原与肾素mRNA的表达。结果:反搏组缺血心肌肾素活性、AngⅡ水平和主动脉壁AngⅡ水平都明显低于缺血组。反搏组缺血心肌中血管紧张素原、肾素以及主动脉肾素mRNA也明显低于缺血组,其中,除缺血心肌肾素mRNA外,均降至正常水平。结论:ECP能通过抑制心血管肾素mRNA的表达来抑制肾素活性,还对血管紧张素原mRNA有抑制作用,造成心血管局部AngⅡ的降低,这可能是ECP保护缺血心肌的机制之一。     

慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠血浆NO和肺动脉NOS及其基因表达的变化

目的：探讨一氧化氮体系在慢性低O₂高CO₂肺动脉高压形成中的作用。方法：雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组和4周低O₂高CO₂肺动脉高压组。测定血浆NO含量,免疫组化法检测肺细小动脉cNOS和iNOS活性,原位杂交法检测其cNOS mRNA和iNOS mRNA的表达。结果：肺动脉高压组血浆NO含量、肺细小动脉cNOS活性和cNOS mRNA表达显著低于对照组（均P<0.01）,而iNOS活性和iNOS mRNA表达明显高于对照组（均P<0.01）。结论：低O₂高CO₂时肺动脉NOS活性和NOS mRNA表达的改变引起的NO变化参与了肺动脉高压的形成。     

参麦注射液对心肌缺血-再灌注大鼠一氧化氮合酶系统的影响

目的:探讨参麦注射液(SM)对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的防治作用及机制。方法:结扎冠状动脉前降支复制大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,描记标准肢体II导联,测定心肌组织中丙二醛含量及结构型、诱导型一氧化氮合酶(cNOS,iNOS)活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测其cNOSmRNA、iNOSmRNA表达。结果:SM组心律失常发生率明显低于其他各组;cNOS活性及其mRNA表达显著增高(P<0.01),iNOS活性及其mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:SM能减轻缺血-再灌注引发的损伤,其作用机制可能与增加cNOS活性,促进cNOSmRNA表达,抑制iNOS活性,降低iNOSmRNA表达有关。     

罗格列酮对改善糖尿病大鼠心肌微血管内皮细胞功能的影响

目的探讨罗格列酮对糖尿病大鼠心肌微血管内皮细胞功能的影响。方法腹腔注射小剂量链脲佐菌素结合高能量饲料制备2型糖尿病大鼠模型，随机分为未治疗组与治疗组：罗格列酮4mg／（kg·d）。16周后定量测定血管内皮损伤标志物：可溶性血管内皮细胞蛋白C受体（sEPCR）、可溶性血栓调节蛋白（sTM）、血管性血友病因子（VWF）和一氧化氮（NO）的血浆浓度。分光光度法及免疫组化法分别测定心肌组织内NO浓度、NO合酶（NOS）的活性及内皮型NO合酶（cNOS）在微血管内皮细胞的表达。结果罗格列酮治疗组血糖及血浆中sEPCR、sTM、vWF显著低于未治疗组，但高于非糖尿病对照组。与未治疗组比较，罗格列酮治疗组心肌组织中NO、结构型NOS（cNOS）含量增高，eNOS阳性反应产物量增多，而诱导型NOS（iNOS）含量降低。结论罗格列酮可以降低糖尿病大鼠血糖，减轻内皮细胞损伤与改善心肌微血管内皮细胞功能，有助于减少糖尿病时心肌微血管病的发生与发展。