胃癌COX-2 的表达与微血管密度及相关临床病理因素的关系

目的 :探讨胃癌COX - 2的表达与微血管密度及相关临床病理因素的关系。方法 :采用免疫组化S -P法检测 4 6例胃癌的COX - 2表达 ,采用CD34单克隆抗体进行微血管内皮细胞染色 ,计算微血管密度 (MVD)分析与相关临床病理因素的相关性。结果 :COX - 2在胃癌组织表达的阳性率为 71 6 %。COX - 2的高表达与胃癌淋巴结转移、浸润深度、分化程度和临床分期有关 ,与肿瘤大小、腹膜转移、血行转移无显著相关性。COX - 2表达阳性、淋巴转移阳性、浸润程度深者MVD值明显增高。结论 :COX - 2的表达对胃癌细胞的演进和血管形成可能起重要作用 ,是判断预后和指导治疗的有效指标。     

胃癌组织环氧合酶-2表达与幽门螺杆菌cagA+菌株感染的关系

目的探讨胃癌组织H pylori cagA感染对环氧合酶2(COX2)表达的影响。方法采用原位聚合酶链反应(PCR)及免疫组织化学技术检测60例慢性浅表性胃炎6、0例慢性萎缩性胃炎、64例肠上皮化生6、4例不典型增生、64例胃癌组织中cagA基因及COX2蛋白表达情况。结果COX2在胃癌、异型增生的阳性表达率升高,分别为70.3%、64.1%与肠上皮化生、萎缩性胃炎、浅表性胃炎相比有显著性差异(P<0.05)。在H pyloricagA阳性胃癌组、异型增生组COX2表达率明显高于H pyloricagA阴性组,两组之间有显著性差异(P<0.05);COX2阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小无关,与患者浸润深度、淋巴转移、H pyloricagA感染有关。结论H pylori可通过诱导COX2表达参与胃癌病变,COX2参与胃癌的发生发展,CagA是H pylori的重要致病因素,与COX2表达上调及胃癌的发生密切相关。     

生长抑素受体亚型2、5在胃癌细胞株中的表达及奥曲肽对胃癌细胞分泌VEGF的抑制作用

目的检测SGC－7901胃癌细胞株中生长抑素受体亚型2、5（SSTR－2、SSTR－5）的表达情况及其分泌血管内皮生长因子（VEGF）状况以及奥曲肽对SGC－7901胃癌细胞株分泌VEGF是否有抑制作用。方法采用免疫细胞化学及逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法,检测胃癌细胞株SGC－7901中SSTR－2、SSTR－5的表达;利用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测奥曲肽对胃癌细胞株SGC－7901分泌VEGF的抑制作用。结果SSTR－2、SSTR－5在胃癌细胞SGC－7901均呈阳性表达;SGC－7901胃癌细胞可以自分泌VEGF,呈时间依赖性;奥曲肽（10^-6mol／L－10^-5mol／L）可以抑制SGC－7901胃癌细胞合成分泌VEGF,具有时间一剂量依赖性。结论胃癌细胞株SGC－7901表达SSTR－2、SSTR－5;奥曲肽能够抑制人SGC－7901胃癌细胞中VEGF的分泌,可能是奥曲肽抗血管新生的作用机制之一。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

NORE1基因调控胃癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究Ras相关区域家族5(NORE1)基因过表达对胃癌细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用前瞻性研究将胃癌细胞分为NORE1过表达组和对照组,分别转染人的胃癌AGS细胞和SGC7901细胞,Westren blot检测细胞转染效率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力;Westren blot检测胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中NORE1表达量显著高于对照组(P0.05)。胃癌细胞AGS、SGC7901的迁移、侵袭能力减弱,与对照组具有显著差异(P0.05)。与对照组相比,NORE1过表达组胃癌细胞AGS、SGC7901中AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量显著下降(P0.05)。结论胃癌细胞中NORE1基因可以通过调节AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量影响其迁移和侵袭能力。     

E-钙粘附素和DNA含量与胃癌侵袭、转移的相关性研究

目的探讨E 钙粘附素 (E cadherin ,)在胃癌组织中的表达和癌细胞核DNA含量与胃癌侵袭、转移的相关性。方法应用免疫组织化学S P法对 83例胃癌组织、2 5例正常胃组织进行E cadherin表达的测定 ,同时以经典的Feulgen染色法及图象分析技术对癌细胞DNA含量进行测定 ,分析与胃癌侵袭转移之间的关系。结果正常胃粘膜E cadherin呈强阳性表达 ,胃癌组织中E cadherin表达率明显减低为 16 .9% (14 / 83)。E cadherin表达减低与胃癌细胞分化差、浸润深度、生长方式、淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 ) ;而与TNM分期及肿瘤大小未见明显相关性。DNA指数在胃癌组织和正常胃组织中分别为 1.4 7± 0 .2 3和 0 .97± 0 .15 ,胃癌组织的DNA指数明显高于正常胃组织 (P <0 .0 1) ,DNA指数与胃癌的分化程度、浸润深度、生长方式、淋巴结转移相关 (P <0 .0 1) ,而与TNM分期和肿瘤大小无明显相关性。胃癌中E cadherin表达与DNA含量呈负相关。结论E cadherin表达和DNA含量与胃癌侵袭转移密切相关 ,二者在癌组织中水平的变化是胃癌细胞重要的恶性生物学特征 ,对其检测有助于对胃癌患者的转移及预后作出判断。     

MicroRNA-1184在胃癌细胞中的表达及作用

摘要:目的探讨 MicroRNA-1184( miR-1184)在胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡等生物学行为中的作用。方法通过实时荧光定量 PCR检测胃癌组织及人胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-1184的表达水平;通过 CCK-8试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及细胞划痕试验检测胃癌细胞的增殖和迁移能力;通过流式细胞术检测胃癌细胞系的细胞周期及凋亡率的变化;通过Western blot 检测胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过双荧光素酶报告基因试验检测miR-1184与异柠檬酸脱氢酶3(NAD+)a( IDH3A)的靶向关系。结果与胃癌旁组织及人胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-1184在胃癌组织中呈低表达(t=2.54,P<0.05),且在胃癌细胞系BGC-823 和 MGC-803中呈低表达(t= 13.99,P<0.001;t= 14.85,P<0.01)。与对照组相比,转染miR-1184抑制剂可促进胃癌细胞的增殖(t=9.28, P<0.05)、迁移(t=9.24, P<0.001). EMT进程,G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡减少(t=6.57,P<0.01);转染 miR-1184模拟物可抑制胃癌细胞的增殖(t=7.34 ,P<0.001)、迁移(t=9.24,P<0.001)、EMT进程、G,/S期细胞周期转换以及细胞凋亡增加(t= 20.33 ,P<0.000 1) ;miR-1184可与IDH3A靶向结合,其抑制剂可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量增加(t=11.32 ,P<0.001),而其模拟物可使胃癌细胞中IDH3A蛋白的表达量减少(t=20.91,P<0.0001)。结论miR-1184 在胃癌组织和细胞系中呈低表达,可影响胃癌细胞增殖、迁移EMT进程、细胞周期G,/S期转换及细胞凋亡等生物学行为。     

人胃癌组织中PLK1基因的表达及其生物学特性分析

目的探讨胃癌患者丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶polo样激酶1基因(PLK1)的表达水平及其对胃癌细胞增殖和抗凋亡能力的作用机制。方法用荧光定量PCR及免疫组织化学染色法检测PLK1基因及蛋白质在胃癌组织中的表达水平;用pc DNA3.1-PLK1及其对应空质粒载体转染胃癌细胞系SGC7901及MKN45,用annexin V-PI共染法及Brd U法检测其对细胞增殖及凋亡的影响;用western blot检测联蛋白(β-catenin)及STAT3通路激活情况。结果与正常胃黏膜组织(0.06±0.01)相比,PLK1基因在人胃癌组织中的表达水平(0.19±0.05)增高,差异有统计学意义(t=19.08,P0.01);免疫组织化学染色法结果表明,PLK1蛋白在胃癌组织中的阳性率为90.0%(54/60),显著高于癌旁组织的51.7%(31/60),差异有统计学意义(χ2=21.34,P0.05);Brd U法结果表明,加入抑制剂BI2536可抑制SGC7901和MKN45细胞PLK1酶活性(P均0.05);annexin V-PI共染法结果表明,转染PLK1的SGC7901和MKN45的细胞凋亡率分别为21.1%和19.6%,与未转染SGC7901和MKN45的细胞凋亡率(分别为32.5%和29.8%)比较,显著降低(P均0.01);western blot结果表明,加入抑制剂BI2536可降低细胞中β-catenin和STAT3通路各蛋白质的表达水平(P均0.05)。结论 PLK1在胃癌组织中过量表达,并通过β-catenin及STAT3通路促进胃癌细胞的增殖。     

SNRPA对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及Snail1信号通路的影响

摘要：目的?检测小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达，分析SNRPA调控锌指转录因子1(Snail1)对人胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法?通过对GAPIA数据库进行检索以及western blot验证，以确定SNRPA在胃癌组织中的表达情况，并对患者临床病理参数进行统计学分析。进一步检测胃癌细胞系AGS、HGC27、SGC7901、BGC823和MGC803中SNRPA蛋白及mRNA的表达水平。在胃癌细胞系AGS和SGC7901中分别转染SNRPA siRNA和SNRPA过表达质粒，采用CCK8及EdU细胞增殖试验检测转染后细胞的增殖活性；Transwell细胞迁移和侵袭试验检测细胞迁移能力；western blot检测相应蛋白质的表达；敲减Snail1后进一步验证SNRPA调控Snail1介导胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。结果?SNRPA在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。此外，在AGS细胞系中SNRPA的表达水平最高，而在SGC7901细胞系中SNRPA的表达水平最低。在AGS细胞系中，敲减SNRPA后，其细胞增殖活性显著低于阴性对照组(P<0.05)，且细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。在SGC7901细胞系中，转染SNRPA过表达质粒后，其增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显增高(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。在AGS细胞系中，转染Snail1 siRNA后，其细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。而在SGC7901细胞系中，SNRPA过表达质粒和Snail1 siRNA共转染后，与对照组相比，其细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力差异均无统计学意义(P>0.05)。结论?SNRPA在胃癌组织中高表达；SNRPA通过上调Snail1表达促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9在胃癌细胞中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、IκB激酶抑制剂-β(inhibitor of IκB kinase-beta,IKK-β)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)在具有转移潜能和低分化的胃癌细胞系及永生化胃上皮细胞中的表达.为进一步研究OPN在胃癌侵袭转移中的可能作用机制及其临床应用提供实验基础.方法:免疫细胞化学SP法和Western blot检测OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9在具有转移潜能和低分化的胃癌细胞系MKN45、GC9811-C11、803、AGS、GC7901及永生化胃上皮细胞293中的表达.结果:(1)免疫细胞化学结果显示:胃癌细胞胞浆及胞周可见OPN和MMP-9弱阳性染色,尤以803明显.而在293细胞中,未见OPN和MMP-9阳性染色.IKK-β和NF-κB p65在胃癌细胞胞浆中均成阳性染色,胞核中还可见NF-κB p65弱阳性染色,而293细胞中IKK-β和NF-κB p65未见阳性染色.(2)Western blot结果显示:OPN、IKK-β和MMP-9在胃癌细胞MKN45、GC9811-C11、803、AGS、GC7901与293细胞中的表达有差异,细胞核中NF-κB p65的表达也有差异.结论:OPN、IKK-β、NF-κB p65和MMP-9与胃癌的侵袭转移密切相关,OPN参与胃癌侵袭转移的分子机制及其能否作为胃癌侵袭转移的生物学指标还需进一步的实验研究.     

A molecular biological study of anti-tumor mechanisms of an anti-cancer agent Oxaliplatin against established human gastric cancer cell lines.

We report that preoperative administration of Oxaliplatin, a new anti-cancer platinum agent, is an effective treatment for gastric cancer. The purpose of this in vitro study is to determine whether Oxaliplatin induces apoptosis in established human gastric cancer cell lines. Five established gastric cancer cell lines are used: MNK45, KATO-III, OKAJIMA, MNK28 and MNK74. Chemosensitivity to l-OHP is studied using a growth inhibition test. Induction of apoptosis in gastric cancer cells is analyzed by assessing DNA ladder formation, DNA fragmentation and actin cleavage. While all five gastric cancer cell lines are sensitive to Oxaliplatin, the poorly differentiated lines are the most sensitive. DNA ladder formation and/or DNA fragmentation are detected in all gastric cancer cell lines. However, actin cleavage is not detected in any of the cell lines. Oxaliplatin has an anti-cancer effect on human gastric cancer cell lines, particularly cell lines of poorly differentiated adenocarcinoma, indicating that Oxaliplatin would be an effective treatment for poorly differentiated gastric cancer. Oxaliplatin induces apoptosis in gastric cancer cell lines, but actin cleavage is not detected in cancer cells. This finding suggests that (1) the apoptotic caspase pathway leads mainly to DNA condensation and fragmentation, and (2) caspase-independent apoptotic pathways may be activated when gastric cancer cells are treated with Oxaliplatin.     

Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨抗凋亡蛋白Survivin在胃癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法检测54例胃癌及27例癌旁组织和10例正常胃粘膜组织Survivin蛋白表达,并结合临床指标、预后进行分析。结果癌旁组织与癌组织中Survivin表达阳性率分别为14.8%和38.7%,正常胃粘膜为0,组间阳性表达率差异有显著性(P<0.05)。Survivin表达与患者性别、年龄、淋巴结转移、临床分期均无关(P>0.05),而与肿瘤分化程度及生存预后有关,低分化组较高分化组Survivin表达明显增加(P<0.05),高表达组3年生存率明显低于低表达组(P<0.05)。结论胃癌中Survivin高表达,其表达与肿瘤恶性程度及预后相关,提示Survivin在胃癌发生、发展过程中有重要作用,并可作为判断胃癌预后的一个指标。     

血浆PGD2检测在胃癌诊断中的临床价值

目的 探讨血浆前列腺素D2(PGD2)水平在胃癌诊断中的临床价值.方法 收集胃癌初诊患者、胃良性病变患者及体检健康者的血浆标本,采用酶联免疫吸附试验检测血浆PGD2水平,并分析血浆PGD2水平在不同组间及不同人群间的差异.采用蛋白免疫印迹法分析胃癌组织、癌旁组织、胃良性病变组织中前列腺素D2合成酶(L-PTGDS)及前...     

人胃癌细胞系端粒酶逆转录酶基因启动子区域甲基化的检测

目的研究人胃癌细胞系端粒酶逆转录酶基因（hTERT）启动子区域是否存在甲基化,甲基化程度是否与肿瘤的恶性程度相关。方法运用甲基化特异性PCR（MSP）方法,以人乳腺癌细胞、人胚肺成纤维细胞作为阳性及阴性对照,检测中、低分化的胃腺癌细胞系hTERT基因启动子区域甲基化情况。结果端粒酶阳性的胃癌细胞、人乳腺癌细胞均存在甲基化,而端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞不存在甲基化,不同分化程度胃癌细胞的hTERT启动子区CpG位点甲基化情况不同。结论hTERT基因启动子区域的甲基化,与细胞的分化程度相关,可能参与了胃癌细胞的发生与发展。     

转录因子7类似物2在胃癌中的表达及其与铂类药物耐药性的关系

目的研究转录因子7类似物2(TCF7L2)基因在胃癌中的表达情况及其与胃癌化疗耐药的关系。方法采用qRT-PCR方法检测15例胃癌及其癌旁组织中TCF7L2的mRNA量,western blot实验检测胃癌细胞株SGC-7901、HSC44、44AS3、N87、MKN45、MGC803与永生化正常胃黏膜上皮细胞GES-1中TCF7L2蛋白表达量。通过基因稳定转染技术构建高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株和SGC-7901/CON(对照组)细胞株,用细胞计数法分别检测两者对顺铂和卡铂的耐药情况。结果 TCF7L2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,在胃癌细胞株中的表达水平也明显高于对照细胞GES-1。高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株对顺铂与卡铂的耐受性明显强于对照细胞株。结论 TCF7L2基因表达与胃癌的发生发展有正相关关系;TCF7L2高表达可能是胃癌对铂类药物化疗耐受的原因之一。     

表皮生长因子受体在早期胃癌中的表达

本文采用ＡＢＣ免疫组化方法，检测了３９例早期胃癌中表皮生长因子受体的分布。发现表皮生长因子受体在正常胃粘膜中几乎不存在，而在早期胃癌和癌旁不典型增生胃粘膜中的阳性百分比（５１．２８％和４８．７２％）没有显著性差异，在印戒细胞癌和低分化腺癌中，表皮生长因子受体的阳性百分比显著高于高分化腺癌和中分化腺癌。提示表皮生长因子受体的过度表达与早期胃癌的生物学行为有一定正相关。     

胃腺癌甲状旁腺激素相关蛋白的表达及临床意义

目的 探讨甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)在胃腺癌组织的表达以及与分化程度、分期和转移之间的关系.方法 应用免疫组织化学链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物技术( streptavidin biotin-peroxidase complex method,SABC),对60例胃腺癌手术标本(其中低分化17例、中分化28例、高分化15例)进行PTHrP检测,并分析PTHrP表达与胃腺癌组织分化程度、分期和转移之间的关系.结果 阳性细胞表现为胞浆染色,主要存在于癌组织和淋巴结转移灶,部分肿瘤间质中亦有一定表达,癌周正常组织无表达.中低分化组阳性率分别为100％(17/17)、100％(28/28),高分化组阳性率为46.7％(7/15),不同分化组之间差异有统计学意义(P＜0.01).不同分期之间阳性率差异无统计学意义.结论 胃腺癌组织高表达PTHrP,中低分化组织表达阳性率较高.     

胃癌组织中NDRG2蛋白表达的研究

目的探讨NDRG2蛋白在胃癌组织中的表达,分析其与胃癌患者相关临床病理学特征及生存期的关系。方法免疫组织化学法检测20例正常胃黏膜、40例早期胃癌和40例中晚期胃癌组织中NDRG2蛋白的表达。结果NDRG2蛋白在中晚期胃癌中的表达显著低于早期胃癌和正常胃黏膜组织;NDRG2蛋白表达与年龄、淋巴结转移、肿瘤大小及生存期相关。结论 NDRG2蛋白在中晚期胃癌组织中低表达,提示其可作为胃癌诊断的一种特异性标志物;NDRG2与胃癌多项临床病理指标相关,提示其可作为胃癌预后的一个重要指标。     

E钙黏蛋白、c-Src蛋白在胃癌中的表达及其与侵袭转移的关系

目的 通过检测E钙黏蛋白(E-cadherin,E cad)和c Src蛋白在胃癌中的表达,探讨其在肿瘤转移和侵袭过程中的作用.方法 采取胃癌组织50例,正常胃黏膜10例;应用免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化酶连接(SP)法检测E-cad、c-Src蛋白的表达.结果 ①胃癌组织中E cad的阳性表达率为46.0％(23/50),显著低于正常黏膜100％(10/10)(P＜0.01).转移组E-cad阳性表达率35.3％(12/34)明显低于非转移组68.8％(11/16)(P＜0.05).与临床分期、浸润分级的关系显示,Ⅲ～Ⅳ期和T3～T4级癌组织中E-cad表达分别明显低于Ⅰ～Ⅱ期和T1～～T2级(均P＜0.05).E cad表达还与组织学分级相关,胃癌分化程度低,其阳性表达率也低,分化程度高,阳性表达率也高(P＜0.05).②c-Src蛋白在Ⅲ～Ⅳ期的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05);T3～T4级c-Src蛋白表达高于T1～T2级(P＜0.05).结论 c-Src蛋白在胃癌中均呈高表达,而E-cad则反之.E cad表达减弱与胃癌侵袭转移潜能相关,可作为胃癌侵袭转移的生物学标志之一.