华蟾素对胃癌细胞SGC-7901生长和增殖的影响

目的探讨华蟾素对人胃癌细胞SGC-7901生长和增殖的影响。为其临床应用奠定基础。方法应用细胞培养技术,将不同浓度的华蟾素在一定的时间内体外干预SGC-7901细胞。分别采用MTT法、克隆形成试验、流式细胞技术(FCM)测定细胞生长、增殖情况和细胞周期变化。结果 SGC-7901细胞经华蟾素作用后细胞生长明显受抑,最高抑制率为(78.36±3.43)%;SGC-7901细胞克隆形成的数目受到抑制;细胞周期分布表现为S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1期细胞比例升高;上述作用均呈明显的剂量和时间依赖性。结论华蟾素可通过阻滞细胞周期而抑制胃癌细胞SGC-7901生长和增殖。     

迷迭香酸对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及机制

目的 探讨迷迭香酸(RA)对胃癌细胞SGC-7901生长、增殖、凋亡的影响及机制。方法 CCK8检测不同浓度RA对胃癌细胞SGC-7901生长的影响,筛选合适剂量;BrdU检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测氧化应激标志物;荧光探针检测活性氧(ROS);流式检测线粒体膜电位的变化;Western印迹检测线粒体损伤标志物(Bax/Bcl-2、Cleaved cas3/cas3)及Nrf2/HO-1通路(p-Nrf2/Nrf2、NQO1、HO-1)相关蛋白表达。结果 与对照组相比,RA浓度为10μmol/L时,RA对细胞生长的抑制作用较小,不具有显著差异。浓度为20μmol/L RA对细胞生长的抑制作用增加,差异显著(P<0.05)。CCK8实验结果将RA浓度分为4个组(RA 0、10、20、40μmol/L);与对照组(RA 0μmol/L)相比,除RA 10μmol/L剂量组差异无统计学意义外,20、40μmol/L剂量组Brdu阳性细胞百分数、线粒体膜电位均显著降低,细胞凋亡率、氧化应激标志物含量[低密度脂蛋白(LDL)、丙二醛(MDA)]、...     

苯丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用

目的 研究苯丁酸钠(SPB)在体外对胃癌细胞株SGC-7901生长、分化的影响.方法 应用MTT分析法、流式细胞仪、形态学观察法对在体外经不同浓度的SPB处理过的SGC-7901细胞进行检测.结果 SPB能抑制SGC-7901细胞的生长,并且有时间依赖关系及剂量依赖关系;应用流式细胞仪测定发现,经SPB处理的细胞其S期在16.48％,而未经处理的细胞其S期在31.07％;电子显微镜观察,细胞形态发生改变.结论 SPB在体外抑制胃癌细胞株SGC-7901的生长,为SPB治疗胃肿瘤提供了实验依据.     

槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGG-823生长的影响

目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，荧光显微镜了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901和BGC-823细胞增殖的作用明显，呈浓度和时问依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为14．12μm(SGC-7901)和28．13μm(BGC-823)。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10～20μm／L的槲皮素处理，SGC-7901细胞周期阻滞于G0／G1期，BGC-823细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡，是有效的抗癌药。     

ezrin基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在人胃癌SGC-7901细胞系中的表达

目的构建ezrin基因RNA干扰慢病毒载体并建立ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系,为ezrin基因的功能研究奠定基础。方法设计ezrin基因特异性RNA干扰靶序列,与PHR-SIN-CSGW-H1a载体定向连接,构建PHR-SIN-CSGW-H1a真核入门表达载体。通过与psPAX2和PMD2.G载体进行重组,获得ezrin基因真核表达重组慢病毒表达载体。利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染人胃癌SGC-7901细胞。结果成功构建PHR-Eai-psPAX2-PMD2.G真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度>1×107U/L。RT-PCR、Western blot结果表明,ezrin基因mRNA及蛋白表达显著降低。结论成功构建人ezrin基因特异性的重组慢病毒干扰载体,获得ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系。     

RNA干扰沉默CXCR4基因对胃癌细胞SGC7901增殖和侵袭力的影响

目的探讨特异性抑制胃癌细胞SGC7901中趋化因子受体4(CXCR4)的表达及RNA干扰对胃癌细胞SGC7901细胞增殖及侵袭力的影响。方法将腺病毒载体CXCR4-shRNA转染至胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测转染后CXCR4 mRNA的表达量;MTT法检测癌细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验对胃癌细胞侵袭力进行检测。结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901;(2)空白组与对照组细胞增殖迅速,两组之间无显著性差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著性差异(P<0.05);(3)shRNA-CXCR4腺病毒载体和空白组及对照组相比能显著抑制SGC7901细胞的侵袭力(P<0.05),抑制率为57.01%。空白组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能有效抑制胃癌细胞SGC7901的侵袭,并在一定程度上抑制癌细胞增殖。     

木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901作用的研究

目的探讨木黄酮对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞周期和细胞凋亡。细胞免疫化学观察木黄酮处理SGC-7901细胞后，SGC-7901细胞PCNA，FAS，C-mvc的变化。结果①MTT法证实木黄酮对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系。②流式细胞仪分析木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④木黄酮下调PCNA及C—myc表达，上调FAS表达。结论木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过下调C-mvc基因表达，上调Fas蛋白表达，下调PCNA表达，从而多途径诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。     

去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的观察去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,探讨其抗胃癌的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制率,其中实验组的去甲斑蝥酸钠浓度分别为0.4、1.0、2.5、6.0 mg/L,对照组不加去甲斑蝥酸钠。采用流式细胞仪检测SGC-7901细胞的增殖周期,并计算细胞增殖指数。结果浓度0.4、1.0、2.5、6.0 mg/L去甲斑蝥酸钠的实验组的OD值均低于对照组(t=2.871、5.295、10.100、13.836,P均0.05)。随着去甲斑蝥酸钠浓度的提高,对SGC-7901细胞的抑制率随之增大。经过流式细胞仪的检测,与对照组相比,实验组的G0/G1期细胞比例显著增高(P0.05),而S期细胞比例和细胞增殖指数明显降低(P0.05),均呈现出时间、浓度依赖性。结论去甲斑蝥酸钠在体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,体现出抗癌活性,在胃癌治疗方面具有广阔的应用前景。     

尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞PGE2合成及COX-2、VEGF表达的影响

目的观察尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞前列腺素E2（PGE2）合成及环氧合酶（COX）-2、血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其抑制胃癌血管生成的机制。方法对人胃癌SGC-7901细胞进行培养．免疫组织化学、放射免疫法检测不同浓度尼美舒利作用后细胞COX-2、PGE2、VEGF的表达。结果与阴性对照组相比。尼美舒利100、200μmol／L作用48h后SGC-7901细胞的COX-2、VEGF表达明显降低（P〈0．05），COX-2与VEGF的表达呈正相关（r=0．8080，P〈0．05）；随着尼美舒利浓度的升高，PGE2分泌逐渐降低。结论抑制COX-2的活性与表达、减少PGE。的合成及由此引起的VEGF表达降低，在抑制胃癌血管生长中可能具有一定作用。     

Inhibitory effect of vascular endothelial growth factors-targeted small interfering RNA on proliferation of gastric cancer cells

AIM： To examine the effects of vascular endothelial growth factor （VEGF）-targeted small interfering RNA （siRNA） on proliferation of gastric cancer cellsin vitro.
METHODS： Several siRNAs were transfected into human gastric cancer cell line SGC-7901 with Lipofectamine 2000. Cells not transfected with LipofectamineTM 2000 or scrambled （SCR） siRNA served as controls. The inhibitory effect of siRNA on the expression of VEGF mRNA and protein was detected by RT-PCR and ELISA. MTT assay was used to examine the inhibition rate of cell growth.The change in cell cycling of siRNA-treated cells was detected by flow cytometry.
RESULTS： siRNA targeting human VEGF effectively inhibited the proliferation of gastric cancer cell lineSGC-7901 and the distribution of cell cycle. The percentage of G0/G1 phase was significantly higher in siRNA1- and siRNA2-transfected cells than in control cells.The expression of VEGF mRNA was significantly inhibited in siRNA1- and siRNA2-transfected cells compared with that in control cells. VEGF protein notably decreased in siRNA-transfected cells, but had no effect on SCR siRNA.
CONCLUSION： VEGF siRNA inhibits proliferation of gastric cancer cells in vitro.     

莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响

目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞 COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响．方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25％时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞 COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化．用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和 PGE2的表达情况．结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR 产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、 COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在 70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带．对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2 均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91．0±18．2,127．8 ±12．1 ng／L vs162．0±15．1 ng／L,P<0．01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67．5±6．9 ng／L vs 78．7±5．6 ng／L, P<0．01)．结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游 PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤．     

血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞在体外生长及其受体表达的影响

目的:将已构建的重组腺病毒Ad-VEGF165进行扩增和纯化并观察其对人胃腺癌细胞(BGC-823)在体外生长及其受体表达的影响.方法:以人胚肾293细胞对重组腺病毒Ad-VEGF165和对照病毒Ad-GFP进行包装、扩增后感染BGC-823N胞,应用MTT比色法分析VEGF165对该种细胞体外生长的影响,并以免疫细胞化学方法检测该种细胞VEGFR-2的表达情况.结果:成功扩增及纯化了重组腺病毒Ad-VEGF165及对照病毒Ad-GFP,获得约3.2×1013pfu/L滴度的重组腺病毒和2.0×1013 pfu/L滴度的对照病毒.当感染复数(MOI)为20时转导率即接近100%而无明显细胞中毒现象.MTT结果显示Ad-VEGF165组吸光度明显高于Ad-GFP组(24 h:0.960±0.0 1 vs 0.737±O.01,P＜0.01:48 h:1.321±0.03 vs0.981±0.02,P＜0.01:72 h:1.663±0.03 vs 1.207±0.01,P＜0.01)及对照组(24 h:0.960±0.01 vs 0.724±0.03.P＜0.01:48 h:1.321±0.03 vs 0.968±0.01.P＜0.01:72 h:1.663±0.03 vs 1.185±0.02,P＜0.01).另外,在该细胞株上检测到了VEGFR-2的表达,且在Ad-VEGF165组其表达明显高于Ad-GFP组(62.5%vs37.6%,P＜0.01)和对照组(62.5%vs 34.1%,P＜0.01).结论:VEGF对胃癌细胞有直接的促生长作用,并可上调其主要受体VEGFR-2的表达水平,从而进一步证实了VEGF对胃癌细胞的自分泌作用.     

应用RNA干扰沉默血管内皮生长因子基因抑制HCT116细胞增殖的实验研究

目的:观察Pavu6 27-VEGFsiRNA重组体在细胞体内表达的血管内皮生长因子短发夹状RNA(shRNA)能否有效地抑制人大肠癌HCT116细胞株的增殖.方法:将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到大肠癌HCT116细胞株中,以空质粒Pavu6 27转染为对照,经G418筛选,流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率.结果:Pavu6 27-VEGFsiRNA重组体能有效地抑制HCT116细胞株的生长增殖,24、48、72h移植率分别为15.32±2.02%、28.54±3.29%、40.32±3.56%,与对照组(5.64±1.42%、8.65±2.30%、15.32±3.52%)相比有显著差异(P<0.05).细胞周期中G0/G1比例升高,S期比例明显下降,而空质粒Pavu6 27转染对HCT116细胞株增殖无抑制作用,对细胞周期改变无影响.结论:Pavu6 27-VEGFsiRNA重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能有效抑制人大肠癌细胞的增殖,为质粒介导的RNAi技术运用于大肠癌的基因治疗提供一定的实验依据.     

RNA interference-mediated gene silencing of vascular endothelial growth factor in colon cancer cells

AIM To inhibit the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in colon cancer cell line by RNA interference (RNAi). METHODS Followed the service of E-RNAi, we designed and constructed two kinds of shRNA expression vectors aiming at the VEGF gene, then transfected them into colon cancer HT29 cells by lipofectamineTM 2000. The level of VEGF mRNA was investigated by RT-PCR and Northern blotting. The protein expression of VEGF was observed by immunofluoresence staining and Western blotting. RESULTS We got two kinds of VEGF specific shRNA expression vectors which could efficiently inhibit the expression of VEGF in HT29 cells. RT-PCR, Northern blotting, immunofluoresence staining and Western blotting showed that inhibition rate for VEGF expression was up to 42%, 89%, 73% and 82%, respectively. CONCLUSION The expression of VEGF can be inhibited by RNA interference in HT29 cells.     

NM-3含药血清对体外胃癌细胞株SGC-7901生长和VEGF及其受体KDR、Flt-1表达的影响

目的:探讨NM-3含药血清对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用.方法:将SGC-7901胃癌细胞分成空白对照组、血清对照组、NM-3含药血清低、中、高剂量实验组共5组.在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率,分析细胞周期分布;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达.结果:NM-3含药血清3组随着时间的延长凋亡率增高,呈时间剂量依赖性,其高、中剂量组在6h(16.80%±0.40%,25.20%±0.86%)、24h(26.95%±3.25%,43.62%±3.53%)、72 h(39.85%±4.10%,54.35%±5.42%)内的细胞早期凋亡率与空白,血清两个对照组相比有显著性差异(5_34%±0.28%,5.66%±0.72%:6.91%±1.06%,8.90%±0.86%;6.87%±1.24%,8.06%±0.78%;P<0.01).随着NM-3药物剂量的增加,G_0/G_1期细胞增多,而S期及G_2/M期细胞则相应减少.细胞培养72h后,NM-3含药血清高,中,低剂量组与两对照组比较可显著抑制VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达(P<0.05).在72h后细胞凋亡率,细胞周期以及胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达上,高剂量组与中低剂量组均有明显差异(P<0.05).结论:NM-3含药血清可抑制胃癌组织的血管生长,并可诱导胃癌细胞凋亡.     

Suppression of growth of pancreatic cancer cell and expression of vascular endothelial growth factor by gene silencing with RNA interference

OBJECTIVE: To explore the anti‐angiogenesis and tumor cell growth suppressive effects resulted from gene silencing by RNAi in BxPC‐3 human pancreatic cancer cells. METHODS: The designation and transfection of vascular endothelial growth factor (VEGF)‐siRNA lentivirus was carried out in vitro. Real‐time PCR and western blot were conducted to measure the expression levels of VEGF mRNA and protein. Flow cytometry was employed to evaluate cell apoptosis and cell death. A lactate dehydrogenase (LDH) assay was used to assess the cytotoxicity of VEGF‐siRNA. A 3‐(4, 5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2, 5‐diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was used to picture the cellular growth. For the in vivo study, BxPC‐3 cells were injected subcutaneously into nude mice to form xenografts. The mice were divided into three groups according to the intervention used. The control group, the negative control group and the knockdown group of mice were injected with saline, an empty lentivirus vehicle and lentivirus carrying VEGF‐siRNA, respectively. None of the mice died during the study. When these mice were killed, the xenografts were collected and the tumor sizes of the different groups were compared. Finally, immunohistochemistry was used to assess the VEGF expression level and microvascular density. RESULTS: After the transfection of VEGF‐siRNA lentivirus, the cellular expression of VEGF mRNA decreased to 50% of the control and the VEGF protein in the BxPC‐3 cells decreased to 30% of the control. Apoptosis and cell death increased after transfection of the VEGF‐siRNA lentivirus. The LDH assay showed high cytotoxicity induced by VEGF‐siRNA lentivirus transfection. The MTT assay showed slower cellular growth in the knockdown cells. Tumor growth suppression was observed in nude mice that had received the VEGF‐siRNA lentivirus transfection, and the tumor sizes of the xenografts in this group were clearly smaller than those in other two groups. VEGF expression and microvascular density were significantly decreased. CONCLUSION: Vascular endothelial growth factor gene silencing via VEGF‐siRNA can effectively inhibit the production of VEGF and exert an anti‐angiogenesis and tumor cell growth suppressive effect both in vitro and in vivo.     

胃癌组织与血清中VEGF和bFGF的表达意义

目的：研究胃癌患者血清和组织中VEGF,bFGF的表达与胃癌临床特征之间的关系,研究二者的相关性及组织和血清之间的相关性,探讨VEGF,bFGF在胃癌的发生、发展、侵袭和转移中的作用方法：应用酶联免疫技术(ABC-ELISA方法)检测73例胃癌患者术前血清和20例健康体检者血清中的VEGF,bFGF的表达水平,同时应用免疫组织化学染色方法检测癌组织和癌旁组织中VEGF,bFGF的表达．结果：胃癌患者术前血清VEGF,bFGF表达水平均明显高于健康体检者(YEGF：101．8±53．3 ng/L vs 16．1±22．5ng/L,P＜0．05；bFGF：152．9±42．7ng/L vs 25．0±11．4ng/L,P＜0．05)．胃癌患者术前血清VEGF,bFGF的表达水平均随胃癌的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移而增高(P＜0．05),而与年龄、性别及病理类型无关．胃癌组织VEGF的阳性表达率为71．2%,癌旁组织中VEGF均未见阳性表达,二者之间有显著性差异(X~2=32．1,P＜0．05)；胃癌组织中bFGF的阳性表达率为63．0%、癌旁组织中bFGF阳性表达率为(10%),二者之间亦有显著性差异(X~2=17．7,P＜0．05)．胃癌患者组织VEGF,bFGF的表达水平均与胃癌的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移有关(P＜0．05),而与年龄、性别及病理类型无关．胃癌患者血清VEGF的表达水平与血清bFGF的表达水平呈明显正相关(r=0．439,P＜0．01),胃癌患者组织VEGF的表达水平与组织bFGF的表达水平呈明显正相关(r=0．391,P＜0．01)；胃癌患者术前血清VEGF的表达水平与组织VEGF的表达呈正相关(r=0．346,P＜0．01),术前血清bFGF的表达水平与组织bFGF的表达呈正相关(r=0．304,P＜0．01),均有显著性差异．结论：VEGF,bFGF在胃癌的发生、发展、转移及预后起着重要的作用,有望成为胃癌术前诊断、术后随访、复发转移监测、评价抗血管生成药物疗效和化疗效果判定的新的肿瘤标志物．