氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

为研究氧化型低密度脂蛋白引起血管平滑肌细胞凋亡及其凋亡的机制,采用细胞形态学ＤＮＡ末标记法,流式细胞仪,Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｔｔｉｎｇ观察氧化型低密度脂蛋白诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。结果发现,在氧化型低密度脂蛋白作用下,血管平滑肌细胞阻滞在分裂期的中期,并发生凋亡,ＤＮＡ末端标记法和流式细胞仪检测发现氧化型低密度脂蛋白引起细胞凋亡明显高于天然低密度脂蛋白（前者是后者的１０倍）。电镜下凋亡细胞     

激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡的影响

目的探讨激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264.7经氧化型低密度脂蛋白处理24h诱导凋亡,同时观察给予视黄醇类X受体特异性配体9-cisRA或SR11237对氧化型低密度脂蛋白诱导凋亡的干预作用,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪PI单染法和DAPI染色检测细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果RAW264.7细胞经氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理24h后细胞活力较对照组下降约60,细胞凋亡百分率较对照组升高约75,10-8mol/L和10-7mol/L9-cisRA及10-7mol/LSR11237能够显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导引起的细胞活力下降和凋亡(P<0.05)。给予氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)4h后细胞内活性氧水平显著升高约17倍以上,如联合给予9-cisRA(10-7mol/L)或SR11237(10-6mol/L),平均荧光强度分别下降约52和28,较氧化型低密度脂蛋白单独处理组有显著性差异(P<0.05)。结论激活视黄醇类X受体能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。     

氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

探讨氧化型极低密度脂蛋白诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的作用。应用低温超速离心法分离健康人血浆极低密度脂蛋白，用CuCl2氧化得到氧化型极低密度脂蛋白。琼脂糖凝胶电泳观察巨噬细胞凋亡DNA断裂“梯状”图谱；流式细胞仪和二苯胺法分别测定凋亡巨噬细胞百分率和：DNA片断百分率；光镜观察凋亡巨噬细胞形态变化。结果发现：①氧化型极低密度脂蛋白能诱导巨噬细胞发生凋亡及DNA断裂；②抗氧化剂二甲基硫脲能部分抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的：DNA断裂；③核转录因子核因子kB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐可完全抑制氧化型极低密度脂蛋白诱导的DNA断裂。提示氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡可能是动脉粥样硬化形成机制之一；氧化型极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的作用可能与自由基和激活核因子kB有关。     

氧化型低密度脂蛋白诱导猪主动脉平滑肌细胞凋亡

为了探讨氧化型低密度脂蛋白是否引起血管平滑肌细胞凋亡 ,把体外培养的猪主动脉平滑肌细胞与 15mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育 72h ,分别使用荧光染色技术和激光共聚焦显微技术观察细胞核的变化 ,应用流式细胞仪鉴别凋亡细胞。结果发现 ,15mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用 72h后 ,荧光显微镜下可见染色质高度凝集 ,有核碎裂现象 ;激光共聚焦显微镜下见染色质固缩 ,核变小 ;流式细胞术鉴别为凋亡细胞。此结果提示 ,氧化型低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞发生凋亡 ,有典型的形态学改变。     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及肝素对巨噬细胞脂质蓄积的抑制作用

用苏丹Ⅳ染色观察巨噬细胞内脂质聚积的变化；通过酶－荧光法检测巨噬细胞内胆固醇含量并检测125Ⅰ标记氧化型低密度脂蛋白降解量来反映巨噬细胞清道夫受体的活性，以探讨硫酸乙酸肝素蛋白聚糖及肝素对巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制。结果发现，氧化型低密度脂蛋白（100mg／L）组巨噬细胞的胞浆内可见较多苏丹Ⅳ着色红染颗粒，氧化型低密度脂蛋白（100mg／L）十硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（15．5mg／L）组0及氧化型低密度脂蛋白（100mg／L）十肝素（200mg／L）组巨噬细胞内红色颗粒明显少于氧化型低密度脂蛋白组；氧化型低密度脂蛋白十硫酸乙酰肝素蛋白聚糖组及氧化型低密度脂蛋白十肝素组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯的含量明显低于氧化型低密度脂蛋白组（P＜0．05，P＜0．01）；硫酸乙酰肝素蛋白聚糖组及肝素组125Ⅰ标记的氧化型低密度脂蛋白降解量均低于对照组。结果提示，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖和肝素可能是通过下调清道夫受体活性减少了巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取而抑制脂质在巨噬细胞内的聚集和泡沫细胞的形成。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1与动脉粥样硬化

作为氧化型低密度脂蛋白主要受体，血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1首先在内皮细胞表面发现，后来发现在巨噬细胞以及SMC表面也有表达。这种受体被氧化型低密度脂蛋白活化后，可导致内皮功能改变，诱导粘附分子的表达及内皮细胞的凋亡。这种受体能被一些炎症因子、氧化应激、机械刺激以及高血压、高血脂和糖尿病等诱导表达；能识别结合多种与动脉粥样硬化形成有关的配体，参与动脉粥样硬化进程。     

细胞调亡与动脉粥样硬化

平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。在动脉粥样硬化斑块中，巨噬细胞、平滑肌细胞与内皮细胞都经历着凋亡与坏死，凋亡占主导地位，参与了粥样硬化的形成过程。氧自由基基、某些生长因子、一氧化氮、内毒素以及氧化型低密度脂蛋白等可诱导细胞凋亡。细胞凋亡具有复杂的分子调探机制，多种基因参与了凋亡的发生。     

低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核细胞ABC1 mRNA表达的影响

为探讨低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核巨噬细胞ABCl表达的影响，用40μg/L佛波酯作用48h，将单核细胞诱导成巨噬细胞，再分别与20mg/L、120mg/L的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白作用24h，提取细胞中总RNA，用逆转录聚合酶链反应法检测其ABCl mRNA的表达。结果发现，小剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可引起THP-1细胞ABClmRNA不同程度的表达增高，小剂量的高密度脂蛋白对ABCl表达无明显影响；而大剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可使THP-1细胞ABClmRNA的表达不同程度降低，其中高密度脂蛋白组轻微降低。结果提示，不同浓度脂蛋白和氧化型脂蛋白对血中单核细胞ABCl表达水平的影响可能在动脉粥样硬化的发生发展过程起重要作用。     

氧化型低密度脂蛋白协同机械牵张力促进巨噬细胞ERK1/2活化

目的探讨机械牵张力、氧化型低密度脂蛋白单独或共同存在时对巨噬细胞ERK1/2磷酸化的影响。方法用墨汁染色法对体外培养的巨噬细胞株RAW 264.7进行鉴定;用硫酸铜氧化天然低密度脂蛋白获得氧化型低密度脂蛋白,并用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定和定量。体外培养静息状态的巨噬细胞分别给予氧化型低密度脂蛋白、机械牵张力以及机械牵张力+氧化型低密度脂蛋白处理不同时间和强度,收集的细胞蛋白用免疫印迹法检测细胞内ERK1/2磷酸化水平。结果巨噬细胞株RAW 264.7可吞噬墨汁,镜下细胞内有墨汁斑块或墨汁颗粒存在,或者有淡染呈云雾状的黑色物质存在。硫酸铜可氧化天然低密度脂蛋白成氧化型低密度脂蛋白,琼脂糖凝胶电泳显示天然低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白泳道在血浆β脂蛋白处出现单一的条带,并且氧化型低密度脂蛋白的迁移率明显较天然低密度脂蛋白高。氧化型低密度脂蛋白和机械牵张力刺激可分别引起细胞内ERK1/2活性增加,呈时间和强度依赖性;与氧化型低密度脂蛋白组和机械牵张力组相比,氧化型低密度脂蛋白和机械牵张力共同处理可使ERK1/2磷酸化明显增加。结论氧化型低密度脂蛋白、机械牵张力单独作用均可激活细胞内ERK1/2,而两者共同存在时可协同促进细胞内ERK1/2信号。为高血压时巨噬细胞如何参与动脉粥样硬化形成的机制探讨提供有用资料。     

硫氢化钠对THP-1源性巨噬细胞清道夫受体A和CD36表达的影响

目的研究PCSK9调控氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的机制,进而探索PCSK9在动脉粥样硬化中的作用。方法使用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,应用Lipofectamine2000转染PC-SK9siRNA和PCSK9表达载体进入THP-1源性巨噬细胞中作用24h后再加入80mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24h,West-ern blot检测Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达;加入Caspase8和Caspase9抑制剂处理24h与各组进行比较,酶联....     

Chelation of copper reduces inhibition by oxidized lipoproteins of endothelium-dependent relaxation in porcine coronary arteries

Summary We examined the effect of dialyzing oxidized low-density lipoprotein (oLDL) against Krebs-Ringer solution, in the absence (yielding d-oLDL) or presence (yielding EDTA-oLDL) of ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), to investigate the mechanism that underlies the inhibition of endothelium-dependent relaxation (EDR) by o-LDL. Oxidation of LDL by exposure to Cu²⁺ resulted in the formation of a thiobarbituric acid-reacting substance (TBARS) and lipid hydroperoxide (LPO). At a concentration of 5mg/dl, d-oLDL markedly attenuated EDR in the porcine coronary artery. Analysis of doLDL by gel filtration revealed that TBARS was distributed in both the lipoprotein and the aqueous phases, whereas LPO was present only in the lipoprotein particles. Lysophosphatidylcholine (LPC), which has been suggested to be responsible for the impairment of EDR by oLDL, was present not only in the lipoprotein but also in the aqueous phase. However, EDR inhibitory activity was observed only in the oLDL particles, not in the aqueous phase. Almost all Cu²⁺ associated with the oLDL particles was removed by dialysis of oLDL against Krebs-Ringer solution containing EDTA. EDTA-oLDL or native LDL, at concentrations as high as 75mg/dl, exerted only a moderate inhibitory action on EDR, Both TBARS and LPO in EDTA-oLDL were distributed only in the lipoprotein particles, not in the aqueous phase. These results demonstrate that the impairment of EDR by oLDL is related both to LPO and to transition metal ions such as Cu²⁺ associated with the lipoprotein particles, not to the amount of the TBARS or negative charge, and that factors other than LPC may affect EDR.This work was partially supported by the Ministry of Health and Welfare of Japan (05670603).     

肝硬化患者血浆氧化型低密度脂蛋白测定

本研究应用酶联免疫吸附法对肝硬化患者血浆氧化型低密度脂蛋白（Ｏｘ － ＬＤＬ） 进行测定。结果表明：正常对照组，肝硬化代偿期组和肝硬化失代偿期组血清Ｏｘ － ＬＤＬ 分别为（４２０ ．７±１１２ ．１）μｇ／Ｌ、（６３４ ．１ ±１６７ ．３）μｇ／Ｌ和（７１６ ．３ ±２５９．５）μｇ／Ｌ，后两组与正常对照组比较差异均有显著性（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。肝硬化失代偿期患者Ｏｘ － ＬＤＬ与ＡＬＴ 及胆红素呈正相关（ Ｐ＜ ０．０５）与白蛋白呈负相关（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。结果提示Ｏｘ － ＬＤＬ 是肝硬化发展过程中至肝损害的因素之一。Ｏｘ－ ＬＤＬ测定对肝硬化的病情判断有一定意义。     

脑梗塞患者血浆氧化修饰低密度脂蛋白水平的变化及意义

应用酶联免疫吸附法检测７０例脑梗塞患者和２５例健康对照者血浆氧化修饰低密度脂蛋白的浓度。结果显示,无论是否合并糖尿闰脑梗塞患者血浆ＯＸＬＤＬ水平均较对照组明显增高。     

普罗布考联合阿托伐他汀对冠心病患者氧化型低密度脂蛋白及其抗体的影响

目的比较冠心病患者使用普罗布考联合阿托伐他汀与单用阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白及其抗体的影响。方法将48例冠心病患者随机分为单药治疗组(阿托伐他汀20 mg/d)和联合治疗组(普罗布考1g/d+阿托伐他汀20 mg/d),分别测量两组患者服药前和服药1个月后氧化型低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白抗体和血脂水平。结果两组患者治疗后血清低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、总胆固醇和甘油三酯水平较治疗前明显降低(P<0.01);单药治疗组氧化型低密度脂蛋白抗体水平无明显变化;联合治疗组氧化型低密度脂蛋白抗体水平明显降低(P<0.01),且低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、总胆固醇的降低幅度大于单药治疗组(P<0.05)。结论普罗布考联合阿托伐他汀与单用阿托伐他汀均能降低冠心病患者血清氧化型低密度脂蛋白水平,但联合治疗组比单药治疗组降低更明显。单用阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白抗体无明显影响,但联合普罗布考可明显降低氧化型低密度脂蛋白抗体水平。     

小剂量(5mg)舒降之(Simvastatin)对老年人调脂作用的临床研究

目的观察小剂量舒降之对高血脂老年人的血脂作用，尤其是对氧化低密度脂蛋白的作用。方法本实验采用自身对照法，观察了３０例高血脂老年人口服舒降之５ｍｇ／日×４周治疗前后的血脂变化，用配对ｔ检验检测其差异显著性。结果小剂量舒降之不仅明显降低ＴＣ（从６．８４±０．９７到５．３２±０．８６ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＴＧ（从２．８３±１．９５到２．２２±１．３３ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＬＤＬ（从１４４．５６±６０．６６到１０７．７０±２８．５１ｍｇ／ｄｌ）、ＡｐｏＢ（从１２７．４１±６５．１１到８８．８５±４０．６４ｍｇ／ｄｌ），而且ＯＸＬＤＬ明显下降（认５０．３７±２５．４１到３４．０１±１７．７６ｕｇ／ｄｌ），下降率分别为２２％、２１％、２５．５％、３０．３％和３２．５％，均有统计学意义。冶疗高血脂症总有效率为９３．３％，未发现严重副作用。结论小剂量舒降之对老年人降低血胆固醇、抑制ＬＤＬ氧化、调整其他血脂紊乱安全而有效，可考虑长期服用。     

氧化低密度脂蛋白及其自身抗体与冠心病的相关性

目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及其自身抗体(ox-LDLAb)与冠心病(CHD)的相关关系,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),评价其临床诊断意义。方法分别提取血浆和血清,用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定血浆ox-LDL及血清ox-LDLAb浓度。结果冠心病患者ox-LDL、ox-LDLAb明显高于对照组(P<0.01),且急性心梗组(AMI)、不稳定心绞痛组(UAP)高于稳定心绞痛组(SAP)(P<0.05)。ox-LDL与ox-LDLAb)负相关。ROC曲线下面积ox-LDL为(0.805±0.039),0x-LD-LAb为(0.747±0.041),对急性冠脉综合征(ACS)有一定的鉴别力。结论血ox-LDL、ox-LDLAb水平的高低与冠心病严重程度呈正相关,可作为预测ACS和识别斑块不稳定的一项血清学指标。     

Significance of wine and resveratrol in cardiovascular disease: French paradox revisited

Many recent studies have reported promising health benefits from red wine consumption. The present article reviews some of the key studies, and the known mechanisms for these beneficial effects. Evidence from different experimental studies, including from the authors' laboratories, have suggested that these beneficial effects are due to polyphenols found in red wine, especially resveratrol in grape skins. These benefits include a reduction in cardiovascular morbidity and mortality, lung cancer and prostate cancer by approximately 30% to 50%, 57% and 50%, respectively. Polyphenols possess antioxidant, superoxide-scavenging, ischemic-preconditioning and angiogenic properties. Some of these properties of polyphenols may explain their protective effects on the cardiovascular system, as well as other body organs. In fact, results from several epidemiological, case-control and prospective studies have prompted the United States Department of Health and Human Services to recommend moderate alcohol consumption in its national health promotion and disease prevention initiative, Healthy People 2010. Further studies are warranted to describe the precise molecular mechanisms for these potential beneficial effects of red wine on the general health of the population, particularly on cardiovascular morbidity and mortality.     

慢性幽门螺杆菌感染对颈动脉粥样硬化患者血清氧化型低密度脂蛋白水平的影响

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp）感染与血清中氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）水平及颈动脉粥样硬化的关系。方法 选取在我院行颈动脉彩色超声诊断为颈动脉粥样硬化的知情同意者129例,用¹⁴C尿素呼气试验检测入选对象的Hp感染情况,同时采用酶联免疫吸附法测定其血清ox-LDL水平,然后分析它们之间的关系。结果 颈动脉粥样硬化患者Hp感染组血清ox-LDL、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯水平高于非Hp感染组,差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;随着颈动脉粥样硬化患者体内Hp感染程度的加重,其血清ox-LDL水平亦相应增高,F检验结果显示,不同Hp感染程度分组其血清ox-LDL水平差异具有统计学意义（F＝13.169,P<0.01）,且3组间两两比较,血清ox-LDL水平差异均具有统计学意义（P<0.05）;多元线性回归分析显示,Hp感染者血清ox-LDL水平升高。结论 幽门螺杆菌感染可能在一定程度上引起脂质代谢障碍,使血清ox-LDL水平升高,并因此加速颈动脉粥样硬化的进展。     

抗氧化低密度脂蛋白抗体的检测桨临床意义

目的 :探讨血清抗氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)抗体的检测方法 ,并观察分析血清抗ox LDL抗体水平对冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的评估价值。方法 :用酶联免疫吸附法 (ELISA法 )检测 10 0例冠心病患者 [17例急性心肌梗死 (AMI) ,41例不稳定型心绞痛 (UAP) ,42例稳定型心绞痛 (SAP) ]及 31例正常健康对照者 (对照组 )血清抗ox LDL抗体水平 ;并对 10 0例患者进行了 1年随访。结果 :血清抗ox LDL抗体水平在AMI组 (1.39± 0 .6 8)和UAP组 (1.35± 0 .6 2 )明显高于对照组 (0 .81± 0 .31,P <0 .0 1)和SAP组 (0 .94± 0 .36 ,P <0 .0 1) ;随访 1年后 ,有 2 2例患者发生心脏事件。血清抗ox LDL抗体水平在发病组 (1.6 7± 0 .6 9)明显高于病变稳定组(1.0 3± 0 .44 ,P <0 .0 1)。Logistic回归分析结果 :血清抗ox LDL抗体水平与患者预后关系密切 (P <0 .0 1)。结论 :血清抗ox LDL抗体水平与冠心病患者预后密切相关 ,可以作为冠状动脉粥样硬化斑块易损性的评估指标     

血液透析对慢性肾衰竭患者血浆氧化型低密度脂蛋白水平的影响

目的探讨血液透析对慢性肾衰竭患者血浆氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)水平的影响及其意义。方法用ELISA方法测定血浆oxLDL水平,用全自动生化仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、血肌酐(Scr)与血白蛋白(ALB)值。结果慢性肾衰竭组血浆oxLDL水平(3721.8μg/L±1736.8μg/L)明显高于对照组(349.0μg/L±176.5μg/L),P<0.05。慢性肾衰竭患者中,非血液透析组血浆oxLDL水平为930.9μg/L±905.3μg/L,取其+1.96s即2705.2μg/L为高限,非血液透析组oxLDL水平高于2705.2μg/L者所占比例(23.07%)明显低于短期血液透析组(79.58%)和长期血液透析组(75.00%),P<0.05;短期血液透析组与长期血液透析组间比较差异无显著性(P>0.05)。53例血液透析患者随机一次透析开始时血浆oxLDL水平高于2705.2μg/L者所占比例(71.69%)与透析结束时(79.25%)比较,差异无显著性(P>0.05)。慢性肾衰竭合并冠心病组血浆oxLDL水平高于2705.2μg/L者所占比例(97.87%,46例)明显高于慢性肾衰竭非合并冠心病组所占比例(8.89%,4例),P<0.05。结论慢性肾衰竭患者血浆oxLDL水平显著高于正常人,血浆oxLDL水平升高可导致其合并冠心病机率增加,血液透析虽是慢性肾衰竭患者肾替代治疗的有效方法,但不能降低血浆oxLDL水平。