骨转移靶向治疗药物研究进展

恶性肿瘤已成为人类的主要死亡原因.恶性肿瘤发展到晚期常发生骨转移,传统的放疗、化疗、手术治疗等不良反应大而且疗效有限.随着对恶性肿瘤骨转移生物学特征认识的深入,许多骨转移的靶点被发现,一些新的靶向治疗药物被开发出来.靶向治疗药物,因对骨组织具有高度选择性,能特异性阻断骨转移癌的发生发展,高效抑制或杀灭肿瘤细胞而受到越来越多的关注.本文就目前骨转移癌靶向治疗药物的最新进展作一综述.     

肺癌患者血清ODF和OCIF水平与骨转移的相关性研究

  目的   探讨检测破骨细胞分化因子（osteoclast differentiation factor,ODF）和破骨细胞生成抑制因子（osteo-clastogenesis inhibitory factor,OCIF）对肺癌骨转移诊断及病情评价的临床价值。   方法   分析2009年7月至2012年4月186例初诊为肺癌患者的资料。肺癌骨转移组和非骨转移组分别为104例和82例,采用ELISA法测定各组血清ODF和OCIF浓度。   结果   骨转移组患者血清ODF和OCIF分别为（32.22±6.22）ng/L、（41.23±8.13）ng/L,明显高于非骨转移组的（8.35±5.42）ng/L、（10.15±4.42）ng/L,有显著性差异（P < 0.01）。ODF和OCIF诊断肺癌骨转移ROC曲线下面积分别为0.91和0.87,具有良好的诊断价值。诊断肺癌骨转移的灵敏度、特异度,ODF分别为90.38%、86.59%;OCIF分别为86.54%、84.15%。ODF随骨转移部位数量增加而明显升高,OCIF随骨转移部位数量增加而明显降低。新发骨转移组和骨转移组血清ODF和OCIF浓度均显著高于非骨转移组,有显著性差异（P< 0.01）;新发骨转移组血清ODF和OCIF浓度与骨转移组比较,两组间无显著性差异（P>0.05）。   结论   肺癌患者发生骨转移时,血清ODF和OCIF含量明显增高,可作为判断肺癌患者骨转移及监测病情的参考指标,在临床上有广泛的应用前景。       

前列腺癌的骨转移机制

前列腺癌骨转移的分子与细胞机制仍不清楚.前列腺癌骨转移过程中肿瘤细胞的趋化性,肿瘤细胞与骨骼微环境之间各种分子的相互作用以及肿瘤细胞、破骨细胞、成骨细胞和骨基质之间的恶性循环是近年来前列腺癌骨转移研究的热点.     

破骨细胞对休眠肺腺癌细胞的激活作用及其分子机制探讨

目的:探讨破骨细胞对休眠肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）细胞H1975的激活作用及其潜在的分子机制。方法:用血清剥夺的方式建立肺腺癌细胞的休眠模型,检测休眠肺腺癌细胞的增殖与凋亡,以及衰老（β-半乳糖苷酶）和休眠相关标志物的蛋白表达;分离培养人外周血单个核细胞,用M-CSF和h-RANKL因子诱导人外周血单个核细胞分化为成熟的破骨细胞,TARP染色鉴定破骨细胞,收集破骨细胞的培养上清;破骨细胞培养上清与休眠肺腺癌细胞共培养,流式细胞术检测肺腺癌细胞周期、增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移能力,Western blot检测休眠相关以及AMPK信号通路相关蛋白的表达。结果:体外血清剥夺可以诱导肺腺癌细胞系H1975进入休眠状态,其细胞周期停滞在G0-G1期,增殖停滞,休眠相关标志物Nanog、NR2F1、p27、p21表达上调;建立体外人外周血单个核细胞诱导分化的破骨细胞培养体系;破骨细胞的培养上清具有促进休眠肺腺癌细胞周期恢复、细胞增殖以及细胞迁移的作用;同时,休眠相关蛋白表达的下调,其作用与AMPK信号通路的AMPK去磷酸化和mTOR磷酸化有关。结论:破骨细胞具有促进休眠肺腺癌细胞激活的作用,其分子机制与AMPK信号通路有关。     

人参皂苷Rb2体内抑制破骨细胞的作用及其机制研究

目的探究人参皂苷Rb2在体内调控破骨细胞的作用及机制。方法通过去势建立小鼠骨质疏松模型,分为4组(假手术组,去势组,低剂量组,高剂量组),腹腔注射不同浓度Rb2溶液[低剂量组5 mg/(kg·d),高剂量组20 mg/(kg·d),假手术组、去势组注射蒸馏水],常规饲养12周。使用Elisa试剂盒检测血清破骨细胞活性指标抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant factor acid phosphatase,TRAP)、I型胶原C端肽(C-terminal telopeptide-I,CTX-1)水平,股骨远端TRAP染色,从髓腔中提取和培养原代破骨细胞,TRAP染色并计数检测破骨细胞分化情况,Western-blot技术检测原代破骨细胞核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65蛋白及自噬相关分子自噬标志轻链3(autophagy marker light chain 3,LC3)、哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、5’-磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphateactivated protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,pAMPK)蛋白表达水平。结果去势小鼠血清TRAP(64.10±1.18)pg/ml、CTX-1(70.43±1.71)ng/ml浓度最高,其余各组血清指标明显降低,高剂量组尤甚[分别为(44.62±2.02)pg/ml和(49.55±2.72)ng/ml](P<0.01)。去势组股骨远端TRAP染色阳性细胞密集,阳性区域最大,随着Rb2浓度增加,TRAP染色阳性区域面积减少(P<0.05)。去势组多核破骨细胞数量最多(152.00±18.55/孔),低剂量组(118.40±18.46/孔)和高剂量组(99.60±13.89/孔)。TRAP染色阳性细胞数量均有不同程度减少,低剂量组最少(84.00±15.23/孔),各组P<0.01。与去势组相比,各组NF-κB在细胞质增加(P<0.05),在细胞核减少(P<0.01);各组mTOR表达减少,AMPK、pAMPK表达增加,LC3 II/LC3 I比值增高(P<0.05)。结论人参皂苷Rb2在体内通过抑制NF-κB信号通路以及调控mTOR介导的自噬信号通路抑制破骨细胞。     

siRNA下调Notch3表达对非小细胞肺癌骨转移能力的影响

目的:研究Notch3在肺癌骨转移中的作用.方法:通过RT-PCR方法检测Notch3在NSCLC及其伴骨转移患者的肺癌组织中的表达情况;利用慢病毒包装Notch3 siRNA载体抑制Notch3的表达后,通过体外迁移和侵袭试验观察Notch3 siRNA对肺癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;通过体外ELISA法检测骨转移相关分子pTHrP和IL-6的表达,研究阻断Notch3的表达后是否能够逆转TGF-β诱导的肺癌骨转移.结果:Notch3在NSCLC发生骨转移的患者肺癌组织中过表达.体外试验发现,通过慢病毒包装Notch3 siRNA载体抑制Notch3的表达后,NSCLC细胞的转移能力下降,且Notch3-si可明显抑制NSCLC细胞中由TGF-β介导的pTHrP和IL-6的表达.结论:Notch3高表达在促进NSCLC骨转移中发挥重要作用.     

破骨细胞生成抑制因子在雌激素受体阳性乳腺癌中的生物学作用

目的:探讨破骨细胞生成抑制因子(osteoprotegerin,OPG)蛋白在人乳腺癌中的生物学作用。方法:利用Kaplan-Meier plotter 数据库分析OPG在人乳腺癌病例中的表达对于病人预后生存的影响。MCF-7去激素培养后,加入17β-雌二醇刺激24 h后,提取总RNA,检测OPG在细胞内的表达情况。利用STRING数据库检索OPG相互作用蛋白。结果:OPG低表达明显减低雌激素受体阳性乳腺癌病人的预后生存时间,而雌激素受体阴性的乳腺癌病人的生存时间不受OPG表达的影响。在17β-雌二醇的刺激下,OPG基因表达水平明显减低。多个因子能够与OPG发生相互作用。结论:OPG可能参与雌激素受体阳性的乳腺癌的转化。     

CD147在肿瘤骨转移中作用的研究进展

CD147分子是一种广泛存在于人体各组织器官的属于免疫球蛋白超家族的糖蛋白,参与机体多种生理过程.CD147已被证实在多种体内外肿瘤细胞中表达增加,促进肿瘤的侵袭和转移,并促进肿瘤骨转移中破骨细胞的活化.其与肿瘤骨转移的关系是目前肿瘤细胞生物学研究领域的热点之一.     

同种异体骨移植后骨吸收和破骨细胞的形态学特点

目的探讨骨移植后骨吸收和破骨细胞的型态学特点。方法利用扫描电镜,结合光镜,观察8例临床植骨后因严重骨吸收被取出的标本,5例人类正常骨标本和20例大鼠肌内埋入的骨标本,分析严重骨吸收过程中破骨细胞和破骨区表面的形态学特征,以及破骨细胞的形态学演变。结果与正常对照骨标本不同,骨吸收部位有大量幼稚的单核破骨细胞聚集,伴有表面结构变异退变,内部纤维裸露和红细胞吞噬破骨区表现为局灶性切割而不是弥漫性骨质疏松。结论破骨的特点是出现单核破骨细胞和局灶性切割。     

伴破骨细胞样巨细胞的乳腺浸润性筛状癌一例

患者女,45岁.发现右侧乳腺肿物1 d, 于2007年9月10日入住我院乳腺外科.查体:双乳对称,无乳头内陷,未见溢血、溢液;右侧乳房外上象限距乳头2 cm处,扪及一质韧肿物,约2.5 cm×2.0 cm大小,质硬,边界不清,表面不光滑,活动度一般,无触痛,肿物表面皮肤无改变;右侧腋窝未扪及肿大淋巴结.     

胫骨内接种建立乳腺癌骨转移大鼠模型的特点

目的研究胫骨内接种MRMT-1细胞制作的乳腺癌骨转移大鼠模型在行为学、影像学、核医学、病理学和分子生物学等方面的特点。方法使用雌性SD大鼠,随机分为假手术组和模型组,使用胫骨内注射法制成乳腺癌骨转移模型。造模后第19天时进行疼痛测定;第21天取材,测定肿瘤体积,通过影像技术评估骨质缺损程度,核医学测定骨矿物质含量(BMC)和骨密度(BMD),HE染色观察形态,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数破骨细胞,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)、护骨素(OPG)和核因子kB受体活化因子配体(RANKL),荧光实时定量RT-PCR测定甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)。结果模型组在造模后第19天已出现机械痛觉超敏、机械痛觉过敏和热痛觉过敏(P0.01)。第21天取材后胫骨影像评分升高(P0.01),BMD下降(P0.05);肉眼观察肿瘤生长明显(P0.01),镜下可见溶骨病变为主的混合性骨质破坏;破骨细胞数量和活性增加(P0.01),PTHrP、OPG水平与OPG/RANKL比值均下降(P0.05、P0.01),而RANKL无明显变化。结论乳腺癌骨转移大鼠模型具有疼痛和骨质破坏的表现,但未表现出PTHrP和RANKL升高,其损伤途径是通过抑制OPG破坏了OPG-RANKL-RANK系统的平衡,引起破骨细胞过度激活,造成骨吸收作用亢进。     

TGF-β上调Notch3诱导上皮间质转化在促进肺癌骨转移中的作用

目的:研究TGF-β上调Notch3表达诱导EMT在肺癌骨转移中的作用.方法:免疫荧光、蛋白印记和RT-PCR方法检测Notch3在TGF-β诱导下上皮、间质标记物以及上皮间质转化相关转录因子Twist、Snail和ZEB-1的表达变化;利用慢病毒包装Notch3正义表达载体和ZEB-1 siRNA载体分别上调Notch3和抑制ZEB-1的表达后,采用免疫荧光、蛋白印记方法检测抑制EMT转录因子ZEB-1的表达后,对上皮间质标记物的影响;进而通过体外迁移和侵袭试验观察抑制ZEB-1的表达后对Notch3高表达细胞系的迁移和侵袭能力的影响;最后体外ELISA法检测骨转移相关分子pTHrP和IL-6的表达,探讨Notch3通过诱导EMT在促进肺癌骨转移中的作用.结果:Notch3 siRNA抑制其表达后能够逆转TGF-β诱导的上皮标记物和间质标记物的表达变化,这一现象是通过影响EMT转录因子ZEB-1实现的.进而利用慢病毒包装系统,构建了Notch3过表达细胞株和ZEB-1 siRNA细胞株,免疫荧光和蛋白印记试验发现,Notch3过表达载体能够抑制上皮标记物的表达,上调间质标记物的表达,促进EMT的发生,而抑制ZEB-1的表达后能够逆转这一现象.最后,体外侵袭试验和ELISA试验发现,Notch3高表达能够增加肺癌细胞的侵袭能力以及pTHrP和IL-6的分泌,而抑制ZEB-1的表达后可明显降低其转移能力以及pTHrP和IL-6的分泌.结论:Notch3参与了TGF-β诱导肺癌细胞上皮间质转化过程,并在NSCLC骨转移中发挥作用.     

骨疏康对1型糖尿病大鼠体外培养的破骨细胞影响的初步探讨

目的 探讨骨疏康对1型糖尿病大鼠体外培养的破骨细胞影响。方法 用RANKL和M-CSF诱导1型糖尿病大鼠的股骨骨髓进行体外培养生成类破骨细胞样细胞(OLC)。实验分为正常对照组,1型糖尿病组,正常对照+骨疏康组,1型糖尿病+骨疏康组。骨疏康的浓度为20μg/ml。细胞培养7天后,贴壁细胞固定,抗酒石酸盐酸性磷酸酶染色,破骨细胞计数。结果 1型糖尿病大鼠与正常大鼠组的破骨细胞数比较无明显差别(P>0.05);经骨疏康干预后,1型糖尿病大鼠与正常大鼠的破骨细胞数都明显减少(P<0.01)。结论 1型糖尿病早期破骨细胞形成与正常对照组无明显差异。中药骨疏康明显抑制正常大鼠和1型糖尿病大鼠的破骨细胞形成。     

肺癌A549细胞诱导RAW264.7破骨细胞分化中AMPK信号通路的作用

目的:探讨AMPK信号通路在体外肺癌细胞诱导破骨细胞分化中的作用。方法:将肺癌A549细胞与RAW264.7细胞共培养后随机分为阴性对照组、阳性对照组、AICAR组,药物干预后行TRAP染色观察破骨细胞的分化,流式细胞仪观察破骨细胞细胞凋亡情况,qPCR检测破骨细胞AMPK、mTOR和CTSK mRNA的表达,Western blot检测破骨细胞AMPK、p-AMPK、mTOR和p-mTOR蛋白的表达。结果:与阴性对照组比较,AICAR组破骨细胞数明显减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）;对诱导破骨细胞凋亡的作用无差异;上调AMPK的mRNA和蛋白表达,下调mTOR的mRNA和蛋白表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:AICAR可以抑制肺癌细胞诱导破骨细胞分化,而AMPK/mTOR信号通路可能参与了肺癌细胞诱导破骨细胞分化过程。     

一种从骨巨细胞瘤组织中纯化破骨细胞的简单方法

目的从人骨巨细胞瘤组织中分离纯化及鉴定破骨细胞。方法我们利用0．25％胰酶-EDTA和Ⅰ型胶原酶从人骨巨细胞瘤组织中纯化出大量破骨细胞，并进行表型特征的鉴定：包括抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)，采用RT-PCR方法检测降钙素受体、组织蛋白酶K和破骨细胞分化因子受体(RANK)表达。结果该方法所得细胞纯度可达79．7％，具有破骨细胞表型特征。结论该方法所得破骨细胞可用于生化和分子生物学研究，是进行骨代谢研究较好的破骨细胞来源。     

埃本膦酸钠对肺癌骨转移动物模型的干预作用

目的 探讨埃本膦酸钠对肺癌细胞骨转移动物模型的干预作用。方法 通过贴骨接种人小细胞肺癌H446细胞制作骨转移动物模型,皮下注射埃本膦酸钠干预．利用放射学检查及病理分析等手段观察埃本膦酸钠对肺癌细胞骨转移的干预效果。结果 放射学检查显示裸鼠接种H446细胞后引起明显的肿瘤性骨损伤,骨病灶处的99Tcm-MDP放射性浓聚．肿瘤细胞大量侵袭至骨髓腔中。经埃本膦酸钠干预后,此骨损伤病程被明显抑制。结论 埃本膦酸钠可明显地干预肿瘤细胞对骨的侵犯,减轻肿瘤引起的骨损伤,可作为一个治疗骨转移的选择药物。     

伴破骨细胞样巨细胞的乳腺癌二例临床病理分析

目的探讨伴破骨细胞样巨细胞的乳腺癌(COGC)的临床病理特征。方法收集2016年2月江苏省泰州市人民医院和2008年5月上海市普陀区中心医院COGC患者各1例,观察其组织学形态、免疫表型及临床病理特征,并复习相关文献。结果2例患者均为女性,年龄分别为48岁及57岁,均因乳房无痛性肿块就诊。光学显微镜下主要表现为浸润性筛状癌及非特殊类型浸润性导管癌,破骨细胞样巨细胞散布在肿瘤组织内,间质内有不同程度的出血和炎症细胞浸润。免疫组织化学示癌细胞雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)弥漫强阳性,破骨细胞样巨细胞CD68阳性。结论COGC是一种罕见肿瘤,其内的破骨细胞样巨细胞形态特殊,需要与多种类型的多核巨细胞鉴别,其诊断及鉴别诊断需要依据形态学特征及免疫表型。     

GPNMB、ERK、MMP3和MMP9在肾癌原发灶和骨转移灶中的表达及相关性分析CSCD

目的探讨GPNMB、ERK、MMP3和MMP9在肾癌原发灶和骨转移灶中的表达及意义并分析其表达的相关性。方法免疫组织化学法检测肾癌原发灶和骨转移灶中GPNMB、ERK、MMP3和MMP9的表达,并分析其结果与患者的临床指标之间的关系。结果 GPNMB在肾癌原发灶和骨转移灶中的表达量分别为3.65±1.87和5.91±3.68。GPNMB高表达组患者中发生中轴骨转移、四肢骨转移、中轴骨和四肢骨均转移的例数分别是4例、1例、3例,低表达组患者中的例数分别为10例、5例、0例(P=0.035)。ERK、MMP3和MMP9在GPNMB原发灶高表达组和低表达组中的表达量分别是7.25±2.55 vs.2.47±0.64、5.25±1.91 vs.2.33±0.49和7.00±2.98 vs.2.27±0.46(均P<0.05)。在GPNMB骨转移灶高表达组和低表达组中的表达量分别是7.45±3.67 vs.3.75±1.66、6.45±2.62 vs.3.25±0.75和7.27±3.66 vs.3.42±0.67(均P<0.05)。结论肾癌原发灶中GPNMB的表达可在一定程度上预测肾癌骨转移的范围,肾癌原发灶和骨转移灶中GPNMB的高表达与ERK、MMP3和MMP9高表达相关。     

马钱子碱对多发性骨髓瘤骨病骨代谢影响的体外研究

 目的　探讨马钱子碱体外对多发性骨髓瘤（MM）骨病骨代谢的影响,同时与硼替佐米比较体外对MM骨病的疗效。方法　应用马钱子碱和硼替佐米作用于MM细胞株U266,MTT法检测硼替佐米与马钱子碱对MM细胞株U266的半数抑制浓度（IC50）,将成骨细胞株MC3T3-E1加入有马钱子碱或硼替佐米作用的MM细胞株U266上清中培养,分为空白对照组、U266上清干预组、硼替佐米作用的U226细胞上清干预组、马钱子碱作用的U266细胞上清干预组,以RT-PCR法测定各组MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）、骨保护素 （OPG）及NF-κB受体活化因子的配体（RANKL）的mRNA水平。结果　硼替佐米作用于MM细胞株U266 48 h的 IC50为22.4 nmol／L,马钱子碱为 0.16 mg／ml;经马钱子碱作用的U266细胞上清液干预组的MC3T3-E1细胞中的ALP、OC及OPG的mRNA水平高于只经U266细胞上清液干预组（P＜0.05）,而RANKL的mRNA水平则降低（P＜0.05）,且4个基因mRNA水平增高或降低的程度大于经硼替佐米作用的U266细胞上清液干预组的MC3T3-E1细胞表达水平（P＜0.05）。结论　马钱子碱对MM骨病中骨代谢机制的影响可能通过成骨细胞对破骨细胞的调节而发挥作用;体外马钱子碱对MM骨病骨代谢的影响效果大于硼替佐米。     

PTHrP在乳腺癌及其骨转移中的表达及意义

目的:检测PTHrP在乳腺癌与骨转移性乳腺癌中的表达,探讨PTHrP在乳腺癌及其骨转移发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化SP二步法检测64例乳腺增生症及不同乳腺癌组织中PTHrP蛋白的表达。结果:PTHrP在乳腺增生症中基本不表达,在无骨转移的乳腺癌中表达明显低于伴有骨转移的原发乳腺癌以及骨转移性乳腺癌(P<0.05);伴有骨转移的原发乳腺癌与骨转移性乳腺癌PTHrP表达差异具有统计学意义(P<0.05);PTHrP在乳腺癌中的表达与年龄、肿瘤类型、PR、CerbB-2表达无关,与肿瘤的组织学分级、ER表达相关。结论:PTHrP可能参与乳腺导管上皮细胞的恶性转化并与乳腺癌骨转移有关。