精草润目液治疗大鼠干眼模型的实验观察

目的探讨精草润目液对干眼大鼠模型角膜上皮和泪液分泌量的影响,为精草润目液的临床使用提供实验依据。方法清洁级SD雌雄各半大鼠60只随机分为两组,分别制作角膜上皮损伤干眼模型和泪液分泌低下干眼模型,造模成功后将各模型大鼠再随机分为空白对照组(予自制滴眼液溶剂)、阳性药物对照组(角膜上皮损伤干眼模型予0.5%羧甲基纤维素钠滴眼液,泪液分泌低下干眼模型予0.2%卡波姆滴眼液)以及精草润目液低、中、高剂量组。角膜上皮损伤模型大鼠以角膜上皮损伤评分为观察指标,泪液分泌低下模型大鼠以泪液分泌量为观察指标,均于治疗7、14、21 d时比较不同干预组的指标差异。结果在角膜上皮损伤干眼模型大鼠,治疗21 d后,高剂量组的角膜损伤评分明显低于阳性药物治疗组(P0.05)。在泪液分泌低下干眼模型大鼠,治疗21 d后,高、中剂量组泪液分泌量明显高于阳性药物对照组(P0.05),而低剂量组的泪液分泌量各时间点始终低于阳性药物对照组(P0.05)。结论精草润目液能明显增加大鼠干眼模型的泪液分泌量,并减轻角膜上皮损伤,药物疗效与药物的浓度及治疗时间相关。     

电针对干眼模型小鼠眼表形态结构及干扰素调节因子5的影响

目的：观察电针对干眼模型小鼠眼表形态结构和干扰素调节因子5（IRF5）的影响,探讨电针治疗干眼的作用机制。方法：取若干只雄性C57BL/6J小鼠,采用皮下注射氢溴酸东莨菪碱的方法制备干眼模型,造模成功的小鼠随机分为模型组、西药组和电针组,每组10只,另取10只健康雄性C57BL/6J小鼠作为正常组。西药组小鼠予氟米龙滴眼液滴双眼,每日3次,每次各1滴,连续14d;电针组小鼠予电针双侧睛明和太阳穴,留针15min,连续14d;正常组和模型组正常饲养,不给予任何干预措施。于造模前、造模第21日和末次干预后次日分别采用角膜荧光素钠染色评分评价各组小鼠角膜上皮的损伤情况;干预结束后次日,使用角膜共聚焦显微镜观察各组小鼠角膜形态学变化,苏木素-伊红（HE）染色观察各组小鼠角膜和泪腺组织病理形态学表现,免疫组化法检测各组小鼠角膜组织中IRF5蛋白的表达情况,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组小鼠角膜组织中IRF5 mRNA的表达。结果：模型组与西药组、电针组小鼠造模第21日角膜荧光素钠染色评分均明显高于本组造模前和同时期正常组（P＜0.05）,电针组和西药组末次干预后次日上述评分均明显低于本组造模第21日和同期模型组（P＜0.05）。角膜共聚焦显微镜观察结果显示,模型组小鼠角膜见大量球状免疫细胞,活化的基质层细胞边界不清、大小不规则,细胞间隙不规则,神经宽度发生改变,神经分支反射率降低并呈现分支断续;电针组和西药组小鼠角膜基质层细胞形态和神经反射均有改善。HE染色病理图片显示,模型组小鼠角膜上皮细胞排列不规整,存在上皮细胞脱落,基质层胶原纤维排列不齐、肿胀;泪腺上皮细胞明显萎缩,腺腔扩张,局灶性淋巴细胞浸润。电针组和西药组小鼠角膜上皮细胞脱落和基质层胶原纤维排列情况均有改善,泪腺组织上皮细胞萎缩和淋巴细胞浸润亦得到改善。模型组小鼠角膜组织IRF5蛋白和mRNA相对表达量均明显高于正常组（P＜0.01）,电针组和西药组小鼠角膜组织IRF5蛋白和mRNA相对表达量均明显低于模型组（P＜0.01）。结论：电针可以改善干眼模型小鼠眼表组织炎症和损伤,其作用机制可能与抑制IRF5的表达有关。     

鬼针草治疗阿托品干眼兔模型的实验研究

目的:探讨鬼针草治疗实验性干眼症的疗效和作用机制。方法:将18只成年新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组、鬼针草治疗组,每组6只。模型组和鬼针草治疗组点用阿托品滴眼液建立干眼模型,鬼针草治疗组同时给予鬼针草灌胃,连续4周。实验前和实验后2周、4周对角膜荧光染色和泪液分泌量进行眼表评估,并在第4周取泪腺标本行免疫组织化学染色检测IL-1、TNF-α、Fas和bcl-2表达。结果:模型组2周角膜荧光染色阳性,4周加重,鬼针草治疗组2周时角膜荧光染色阳性,但较模型组轻,且4周时未加重;泪液分泌量方面,模型组实验2周、4周较实验前明显下降(P0.O5);鬼针草治疗组实验后SIT较实验前下降,但无统计学意义(P0.05),与模型组相比,明显优于模型组(P0.05);鬼针草治疗组泪腺腺泡上皮细胞中Fas和IL-1蛋白阳性表达量较模型组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:鬼针草能改善干眼兔的角膜上皮损伤和泪液分泌,能够抑制泪腺组织的凋亡和炎性反应,对干眼症泪腺组织具有保护作用。     

秦皮滴眼液对大鼠干眼模型角膜上皮损害和眼表炎症的疗效观察及机理研究

目的评价秦皮滴眼液对单纯环境因素诱导的大鼠干眼模型角膜上皮损害和眼表炎症的疗效及可能机理。方法将60只4～6周龄健康雌性Balb/c大鼠随机分为正常对照组、干眼模型组和秦皮治疗组3组,每组20只。利用温控-湿控调节系统调控环境中的温度、相对湿度制备干眼大鼠模型。正常对照组大鼠饲养于自然环境中,不予任何处理;干眼模型组大鼠饲养于温控模型房中,仅造模不予治疗;秦皮治疗组大鼠饲养于温控模型房中,造模并予以秦皮滴眼液治疗。3组大鼠分别于实验开始前和置于温控-湿控调节系统后第7 d、14 d、2l d、28 d行酚红棉线试验进行造模评估、泪液蕨样变试验、角膜苏木精-伊红染色法(HE)染色、结膜过碘酸-雪夫染色法(PAS)染色、免疫荧光染色法检测CD4+T细胞的数量。结果 (1)酚红棉线试验:14 d时干眼模型组泪液分泌较正常对照组开始减少(F=2.811,P=0.092);秦皮治疗组在21 d、28 d时与干眼模型组比较泪液分泌均有增加(F21 d=9.988,P21 d=0.002;F28 d=27.769,P28 d=0.000)。(2)泪液蕨样变试验:28 d时,干眼模型组造模大鼠泪液蕨类结晶排列明显稀疏断裂,甚至消失;秦皮治疗组在各时间点泪液蕨类结晶形态均较干眼模型组大鼠排列规则;(3)角膜HE染色:28 d时,干眼模型组大鼠角膜上皮细胞出现增生,上皮明显增厚;秦皮治疗组结构较为良好,厚度未见明显变化;(4)结膜PAS染色:28 d时,干眼模型组大鼠结膜杯状细胞数量较正常对照组减少;秦皮治疗组结膜杯状细胞数量多于干眼模型组(F=53.598,P=0.000);(5)CD4+T细胞数量:28 d时,干眼模型组大鼠结膜CD4+T细胞数量较正常对照组增多;秦皮治疗组结膜CD4+T细胞数量少于干眼模型组(F=88.229,P=0.000)。结论秦皮滴眼液可以减轻大鼠角膜CD4+T细胞浸润情况,从而抑制由于干眼引起的角膜上皮的病变和眼表炎症。     

润目灵颗粒对水液缺乏性干眼兔泪腺形态学及细胞凋亡的影响

目的探讨润目灵颗粒治疗水液缺乏性干眼的作用机制。方法用1%硫酸阿托品滴眼液滴眼制备兔水液缺乏性干眼模型,给予润目灵颗粒治疗14 d。对全部实验兔行Schirmer I试验,测定泪膜破裂时间,观察角膜染色,光、电镜观察其泪腺形态学的变化,免疫组化法对泪腺组织中凋亡相关基因蛋白进行检测。结果与模型组比较,Schirmer I试验检测显示,润目灵组泪液量明显增加(P0.01),泪膜破裂时间明显延长(P0.05,P0.01),角膜染色分值明显减小(P0.01),泪腺导管及腺泡上皮细胞中凋亡相关因子(factor-related apoptosis,Fas)及其配体(Fas ligand,Fas L)阳性表达的细胞数明显减少(P0.05),泪腺细胞的形态学损伤明显减轻。结论润目灵颗粒可能通过抑制水液缺乏性干眼兔泪腺组织的细胞凋亡及腺体萎缩,达增加泪液分泌、维持泪膜稳定的作用。     

逍生散对干眼角膜上皮细胞损伤模型的干预研究

目的观察逍生散对干眼角膜上皮细胞损伤模型的干预作用,探讨逍生散治疗干眼的作用及分子作用机制。方法人角膜上皮细胞加入苯扎氯铵溶液制备得干眼角膜上皮细胞损伤模型,加入低、中、高剂量逍生散含药血清和空白对照血清孵育后,分别于作用24小时、48小时、72小时时行光镜观察,检测细胞活性、细胞凋亡及角膜上皮细胞中IL-1、IL-6、TNF-α、MMP-9细胞因子的表达情况。结果中药中、高剂量组能明显抑制细胞体积增大、细胞松解及间隙变大,减少细胞脱壁及溶解、坏死,减少细胞凋亡;中药中、高剂量的细胞活性值和其他组差异有统计学意义(P0.05);中药中、高剂量组检测IL-1、IL-6、TNF-α及MMP-9的表达相对较低(P0.05),且呈现随药物浓度增加,抑制炎症因子效果相对越好的结果。结论逍生散含药血清中、高剂量组能明显升高细胞活性;减少细胞凋亡;逍生散可能通过降低IL-1的产生,进而降低产生IL-6、TNF-α等炎症因子以及可能通过降低IL-1的产生,调控MMP-9的数量和活性,发挥保护角膜上皮细胞的作用。     

逍遥散及其类方治疗干眼的研究进展

近年来,干眼发病率不断上升,越来越多人的生活质量因干眼受到影响。逍遥散以疏肝养血之效治疗眼病历史悠久,近年来在干眼治疗中的应用也逐渐增多。本文总结了以逍遥散为基础进行加减化裁的方剂在治疗普通干眼、围绝经期干眼、糖尿病性干眼、睑板腺功能障碍型干眼中的临床应用进展,发现逍遥散及其类方在治疗各种类型的干眼上疗效显著,其作用机制包括调节相关炎症因子、影响性激素、增加杯状细胞数量、减少角膜上皮细胞凋亡等,在临床上有重要的应用价值。     

电针对干眼豚鼠眼表感觉神经痛及P2X3受体和蛋白激酶C表达的影响

目的:观察电针对干眼豚鼠眼表感觉神经痛及角膜和三叉神经节(TG)中嘌呤信号P2X₃受体和蛋白激酶C(PKC)表达的影响，探究电针缓解干眼眼表感觉神经痛的机制。方法:将40只雄性英国三色短毛豚鼠随机分为空白组、模型组、普拉洛芬组、电针组和假针刺组，每组8只。皮下注射氢溴酸东莨菪碱溶液连续10 d诱导干眼模型，并且在干预期间保持造模操作直至干预结束。普拉洛芬组予普拉洛芬滴眼，3次/d,每次1滴；电针组针刺双侧“睛明”“攒竹”“丝竹空”“瞳子髎”“太阳”,其中“攒竹”“太阳”给予电针干预，15 min/次，每天1次；假针刺组采用钝针点刺穴位表面，取穴与电针组相同。3组均干预14 d。检测各组动物造模前、造模后和干预后眼表感觉神经痛相关指标；用霍乱毒素亚单位B结合荧光素488标记角膜和TG中感觉神经元；免疫组织化学法和Western blot法检测角膜和TG中P2X₃受体和PKC的表达。结果:造模后与空白组比较，模型组的角膜荧光素染色评分显著升高(P<0.01),睑裂高度明显降低(P<0.01),角膜机械知觉阈值差异无统计学意义(P>...     

基于干眼症细胞凋亡模型观察淫羊藿总黄酮含药血浆对foxp3mRNA的作用＊

目的 基于干眼症细胞凋亡模型观察淫羊藿总黄酮含药血浆对foxp3mRNA的作用。方法 对雄性新西兰大耳白兔的泪腺上皮细胞进行培养，实验采用3代泪腺上皮细胞，将其随机分为淫羊藿总黄酮、雄激素和空白组。建立干眼细胞模型，将含有淫羊藿总黄酮、丙酸睾酮和空白的血浆分别加入三组泪腺上皮细胞进行干预，然后加入Trizol试剂分离RNA，最终免疫反应相关因子Foxp3mRNA的表达采用定量PCR法来检测。结果 雄激素组和淫羊藿总黄酮组中Foxp3mRNA的含量高于空白组，差异显著(P < 0.01)；淫羊藿总黄酮组中Foxp3mRNA的含量高于雄激素组，差异显著(P < 0.01)。结论 含有淫羊藿总黄酮的血浆可增加干眼泪腺上皮细胞凋亡模型中Foxp3mRNA的含量。淫羊藿总黄酮含药血浆可增加Foxp3mRNA的含量来减少细胞凋亡。     

养阴润目丸对干眼模型大鼠结膜上皮细胞中IL-1、TNF-α、NF-κB表达的影响

目的:研究养阴润目丸对干眼模型大鼠结膜上皮细胞中白介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子-Kappa B(NF-κB)表达的影响。方法:将SD雄性大鼠60只随机分为5组,每组12只,分别为正常组、假手术组、养阴润目丸组、新泪然组、模型组。养阴润目丸组、新泪然组及模型组3组均采用去势法制造干眼模型。治疗3个月后,取大鼠结膜上皮细胞,采用免疫组化法检测IL-1、TNF-α、NF-κB的表达。结果:养阴润目丸组和新泪然组结膜上皮细胞中IL-1、TNF-α、NF-κB的表达明显少于模型组(均P0.05)。结论:养阴润目丸能有效治疗干眼的作用机制可能与下调结膜上皮细胞中IL-1、TNF-α、NF-κB的表达有关。     

消肿喷剂主药对体外炎症模型小鼠白细胞介素及NLRP3相关蛋白表达影响的研究

目的:研究消肿喷剂促进急性骨骼肌损伤炎症修复的作用机制,及炎症在急性骨骼肌损伤修复过程中的作用机制.方法:采用脂多糖(LPS)诱导C2C12小鼠成肌细胞,建立体外细胞炎性模型,ELISA试剂盒检测C2C12细胞上清中白细胞介素(IL-1β、IL-18)含量,qRT-PCR检测C2C12细胞ASC、Caspase-1、N...     

蠲痹历节清方抑制NLRP3炎症体抗大鼠急性痛风性关节炎机制研究

目的 观察蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NLRP3炎症体相关蛋白及白介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨蠲痹历节清方防治AGA大鼠可能存在的机制.方法 将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组,造模组造模成功后随机分成模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组、异甘草素组,并予相应药物干预,模型组及...     

溃结康对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3炎性体基因表达及下游炎性因子影响

目的探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3炎性体及下游炎性因子的影响。方法建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎(急性期、缓解期)模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.45 g/kg)、溃结康(12.8、6.4、3.2 g/kg)组。第8天(急性期)及第21天(缓解期)实验结束时,采集结肠组织,量取各组小鼠结肠长度,HE染色观察小鼠结肠病理变化,免疫组化染色法检测结肠组织MPO表达,酶联免疫法检测结肠组织IL-18、IL-33含量变化,实时荧光定量PCR检测结肠NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达。结果模型组单位结肠长度显著缩短,结肠组织损伤明显,MPO表达显著增加,结肠IL-18,IL-33水平明显升高,NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,急性期时,柳氮磺胺吡啶组及溃结康高剂量组单位结肠长度明显增加,MPO表达显著降低,IL-18释放减少,NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著下调(P<0.05或P<0.01),同时,溃结康中剂量组IL-18水平也显著降低,NLRP3 mRNA显著下调(P<0.05);溃结康低剂量组Caspase-1mRNA表达明显降低(P<0.05)。缓解期时,柳氮磺胺吡啶组及溃结康高、中剂量组单位结肠长度均明显增加(P<0.05或P<0.01);溃结康高剂量组NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著增加,溃结康中剂量组IL18、IL-33含量明显增加,ASC、Caspase-1mRNA表达明显上调,低剂量组IL-33含量也明显增加(P<0.05),NLRP3 mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论溃结康可能通过调节UC小鼠发病不同时期(急性期、缓解期)NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、Caspase-1)基因表达及下游炎症因子的释放抑制炎症反应,促进缓解期时结肠黏膜修复。     

针刺对宫内窘迫导致的缺氧缺血脑损伤大鼠海马炎性反应的影响

目的:观察针刺对宫内窘迫缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠的行为学、血清炎性细胞因子、海马组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体相关蛋白及小胶质细胞激活状态的影响,探讨针刺通过调控海马炎性反应干预HIBD的机制。方法:夹闭孕鼠子宫动脉10 min延迟剖宫产法建立HIBD大鼠模型。将HIBD大鼠随机分为模型组和针刺组,每组12只,以正常分娩的12只大鼠为正常组。针刺大鼠"本神",每次10 min,每日1次,连续14 d。采用HE染色法观察大鼠海马组织病理变化,三箱社交实验观察大鼠的社交能力,用ELISA法检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,用Western blot法检测大鼠海马组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白相对表达量,用免疫荧光染色法检测海马组织小胶质细胞阳性标记物离子钙接头蛋白(IBA-1)的阳性表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马神经元排列松散,出现细胞固化萎缩和整个细胞深染的现象,模型组大鼠探索陌生鼠时间明显减少(P<0.01),血清IL-1β、IL-18含量升高(P<0.01,P<0.05),海马NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量升高(P<0.05,P<0.01),海马CA1、CA3区IBA-1阳性表达增多(P<0.001,P<0.01);针刺组大鼠海马神经元结构较模型组有所改善,出现细胞固化、萎缩、深染的情况较少,与模型组比较,针刺组大鼠探索陌生鼠时间增加(P<0.01),血清IL-1β、IL-18含量降低(P<0.01,P<0.05),海马NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量降低(P<0.01),海马CA1、CA3区IBA-1阳性表达减少(P<0.01)。结论:针刺可有效改善宫内窘迫HIBD大鼠社交行为障碍,其机制可能与降低海马炎性反应蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达,减少海马小胶质细胞激活,降低血清IL-1β、IL-18含量,从而减轻炎性反应有关。     

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??OBJECTIVE To explore the protection mechanism of orthogonal compatibility of puerarin(A),ligustrazine(B), astragaloside IV(C) and catalpolon(D),the main active ingredients from yangyin tongnao granules, on SD rats damaged by ischemic reperfusion injury, and select the optimal combination. METHODS SD rats were randomly divided into sham operation group, model group, orthogonal compatibility group and positive control group. The rat middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was established. The compatibility of components was arranged by L₉(34) orthogonal design. The symptoms of neurological deficit in rats and the pathological changes in hippocampus were observed; TTC staining was used to detect the cerebral infarction volume. IHC was used to evaluate the expression of NLRP3 protein ischemic brain tissue. RT-PCR was used to detect the expressions of ASC, caspase-1, IL-1, mRNA, IL-18 and MMP-9 in the hippocampal of brain tissue. The RESULTS of orthogonal test were analyzed by range analysis. RESULTS The orthogonal combination groups could effectively improve neurological deficits in cerebral ischemia reperfusion injury, reduce infarction volume, inhibit the expression of NLRP3 inflammasome, decrease the expression of ASC, caspase-1, IL-1, IL-18 and MMP-9. The analysis of test results showed that the combination with ligustrazine 100 mg??kg^-1,puerarin 20 mg??kg^-1, astragaloside ?? 80 mg??kg^-1 and catalpol 20 mg??kg^-1 was the superior one. CONCLUSION The main active ingredients combination of yangyin tongnao granules played a protective mechanism on focal cerebral ischemia reperfusion injury rats. Its mechanism might be related to inhibition of NLRP3 inflammasome,down-regulation of ASC, caspase-1, IL-1, IL-18 and MMP-9.     

扶正解毒化瘀方对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞的调控作用

目的:观察扶正解毒化瘀方对脂多糖诱导的大鼠肺巨噬细胞中NLRP3炎性体通路及相关炎性反应递质的作用。方法:将大鼠NR8383细胞分为空白组、模型组、扶正解毒化瘀方组、哌拉西林他唑巴坦(TZP)组以及中药+TZP组。用制备扶正解毒化瘀方中药原液作用于脂多糖诱导的大鼠NR8383细胞,采用qPCR和Western blotting分别检测NLRP3炎性体通路的mRNA表达和蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干预前后炎性反应递质的水平。结果:扶正解毒化瘀方组和TZP组均能明显降低NLRP3、Caspase-1和ASC的mRNA表达,2组NLRP3和ASC的蛋白水平明显下降,Caspase-1和IL-1β蛋白水平也有下降趋势。扶正解毒化瘀方组和TZP组均能明显降低IL-18和IL-1β炎性反应递质水平,联合用药有增效作用。结论:扶正解毒化瘀方对NLRP3炎性体作用明确,可能通过NLRP3炎性体通路延缓机体免疫炎性损伤。     

丹皮酚对心肌缺血再灌注损伤保护中Toll样受体4、心肌焦亡影响的作用机制

目的:探讨丹皮酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制及对Toll样受体4(TLR4)、细胞焦亡的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、丹皮酚低剂量组(15 mg/kg)、丹皮酚高剂量组(30 mg/kg)。药物干预后,结扎左冠脉前降支0.5 h,再灌注4 h。再灌注结束后,采用生化分析法测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平; 2,3,5-氯化三苯基四氮唑蓝(TTC)染色法测定心肌梗死面积,免疫组化法测定TLR4蛋白水平; 免疫印迹(Western blot)法检测心肌组织NOD样受体家族Pyrin域3(NLRP3)、IL-1β、凋亡相关斑点蛋白(ASC)以及半胱天冬酶(Caspase)-1的表达。结果:与缺血再灌注组比较,丹皮酚低剂量组、丹皮酚高剂量组再灌注后LDH、CK-MB活性下降,心肌梗死面积减小,心肌组织TLR4、NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β表达水平降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。丹皮酚高剂量组的上述指标均低于丹皮酚低剂量组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:丹皮酚预处理可抑制TLR4表达,下调NLRP3/Caspase-1介导的细胞焦亡,降低CK-MB、LDH的活性,减少大鼠心肌梗死面积,阻止心肌缺血再灌注损伤进程,保护心肌组织。     

通腑泻肺方对脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3调控作用的实验研究

目的观察通腑泻肺方对脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3炎性体表达的影响,探索通腑泻肺方治疗脓毒症急性肺损伤的作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔法（CLP）复制脓毒症急性肺损伤动物模型。将32只清洁级健康成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组和治疗组,每组8只。空白对照组麻醉后腹主动脉采血致死;假手术组麻醉后开腹,翻动胃肠后关腹,24h后麻醉并腹主动脉采血致死;模型组于CLP后立即予生理盐水2mL灌胃1次,CLP后6h、12h,再分别给予生理盐水2mL灌胃1次。CLP后24h予麻醉并腹主动脉采血致死;治疗组于CLP后立即予通腑泻肺方中药灌胃1次,CLP后6h、12h。再分别给予通腑泻肺方中药灌胃1次,CLP后24h予麻醉并腹主动脉采血致死。观察各组大鼠的一般表现,ELISA法检测各组血清中Caspase-1含量,Western blot法检测各组大鼠肺组织中NLRP3、ASC含量,RT—PCR法检测肺组织中NLRP3、ASC的mRNA表达量。结果模型组和治疗组肺组织NLRP3、ASC的蛋白水平、mRNA表达水平以及血清中Ccaspase-1水平均显著高于空白对照组和假手术组（P〈0．01）;模型组肺组织NLRP3、ASC的蛋白水平、mRNA表达水平以及血清中Caspase-1水平显著高于治疗组（P〈0．01）。结论通腑泻肺方能够下调脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平,具有调控NLRP3炎性体合成的作用。     

脑心通调控NLRP3/Caspase-1通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞焦亡

目的:探索脑心通醇提物对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞BV2焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)体外诱导BV2细胞的同时,加入不同质量浓度脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,分别采用MTS法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NLRP3的mRNA水平;免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3/Caspase-1通路关键蛋白表达。结果:与空白组比较,LPS(1 mg·L^-1)能明显降低BV2细胞活性,显著升高IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.01),且可提升NLRP3蛋白表达水平以及Caspase-1剪切体和前体蛋白的比值(Caspase-1 p20/Caspase-1)。与LPS组比较,脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,逆转了LPS导致的细胞活性降低(P<0.01),50 mg·L^-1脑心通醇提物可显著降低IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),显著降低LPS诱导的NLRP3的高表达以及Caspase-1 p20/Caspase-1(P<0.01)。结论:脑心通能明显抑制LPS诱导的小胶质细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/Caspase-1通路密切相关。     

羟基红花黄色素A对非酒精性脂肪肝炎细胞的作用

目的:探讨羟基红花黄色素A对非酒精性脂肪肝炎(NASH)的影响及其作用机制.方法:实验分为对照组、模型组和羟基红花黄色素A组,模型组用500 μmol/L的游离脂肪酸(FFA)处理细胞24h,对照组为不做处理的人正常肝脏细胞L-02,羟基红花黄色素A组在模型组基础上用0.2 mg/mL的羟基红花黄色素A处理细胞24 h...