呼吸道白色假丝酵母菌基因分型与耐药性研究

目的 了解呼吸道白色假丝酵母菌的基因分型和不同基因型白色假丝酵母菌的药敏情况,并探讨基因分型与耐药性之间的关系.方法 采用PCR扩增白色假丝酵母菌基因组DNA的25S rDNA基因内含子区,根据扩增产物片段大小和数目分型,采用ATB FUNGUS3酵母菌药敏试剂盒对不同基因型白色假丝酵母菌进行药敏分析.结果 80株白色假丝酵母菌临床分离株分为3型:A型39株、B型30株、C型11株；A型是主要的基因型,占48.75％,B型占37.50％,C型占13.75％;3种基因型白色假丝酵母菌均未出现对两性霉素B耐药株,C型白色假丝酵母菌未出现对氟胞嘧啶耐药株,A、B、C型白色假丝酵母菌对氟康唑的耐药率分别为5.1％、6.7％、18.2％,对伊曲康唑的耐药率分别为5.1％、13.3％、27.3％,对伏立康唑的耐药率分别为2.6％、3.3％和9.1％,B型和C型白色假丝酵母菌对唑类药物的耐药率高于A型.结论 A型白色假丝酵母菌呼吸道感染基因分布中占首位,白色假丝酵母菌的基因分型对抗真菌药物的选择,控制真菌感染有重要意义.     

下呼吸道分离白色假丝酵母菌基因型、药敏试验和临床相关因素分析

目的了解医院近两年来下呼吸道分离白色假丝酵母菌的基因分型和不同基因型药敏试验结果与临床相关因素的关系。方法以随机扩增PCR对60例下呼吸道分离白色假丝酵母菌进行基因分型和药敏试验,分析感染患者的临床资料。结果下呼吸道分离的60株白色假丝酵母菌基因型可分为5型:A型30株(50.0%),B型13株(21.7%),C型10株(16.7%),D型5株(8.0%),E型2株(3.0%);方差分析表明,前3种基因型白色假丝酵母菌对氟康唑、5-氟胞嘧啶敏感性差异有统计学意义(P<0.05);A型白色假丝酵母菌与B型和C型对氟康唑的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);B型对5-氟胞嘧啶的敏感性与A型和C型差异有统计学意义(P<0.05);感染C型白色假丝酵母菌的患者死亡率与A、B型比较差异有统计学意义。结论随机扩增PCR法简捷、特异性强、重复性好,可作为白色假丝酵母菌的分型研究;白色假丝酵母菌对不同的药物敏感性可能与特定基因型有一定相关性,其毒力也可能有所不同。     

侵袭性白色假丝酵母菌院内传播的分子机制研究

目的调查北京朝阳医院2000-2010年侵袭性白色假丝酵母菌感染的流行病学特点,研究侵袭性白色假丝酵母菌的遗传多样化和基因型分布,探讨其院内传播的分子机制。方法对82株侵袭性白色假丝酵母菌进行菌种收集统计;采用科玛嘉显色培养基(Chromagar)结合VITEK-2Compact YST卡进行菌种初筛鉴定;PCR扩增其CAI区微卫星序列;应用CAI区SSCP图谱和GeneScan相结合对侵袭性白色假丝酵母菌进行基因型的比较分析;药敏试验采用ATB FUNGUS 3系统和E-test对5种抗真菌药物进行MIC值测定。结果 2000-2010年朝阳医院血流感染病原菌共2320株,检出侵袭性假丝酵母菌148株,占6.4%,其中白色假丝酵母菌检出61株占41.22%,为假丝酵母菌属感染的首位;无菌体液病原菌4093株,检出侵袭性假丝酵母菌属253株,占6.2%,白色假丝酵母菌最多150株,占59.29%;临床独立来源的侵袭性白色假丝酵母菌82株,基于微卫星片段CAI区共有38种基因型;6例患者不同来源标本分离的白色假丝酵母菌基因型完全相同;侵袭性白色假丝酵母菌感染中ICU最高占52.44%,值得重视;侵袭性白色假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、伏立康唑、泊沙康唑的敏感率均为100.00%;氟康唑为97.56%。结论白色假丝酵母菌仍然占侵袭性假丝酵母菌感染的首位,基因分型显示侵袭性白色假丝酵母菌呈多态性分布,发生侵袭的菌株基因型与定植的基因型有关。     

恶性肿瘤合并侵袭性肺部真菌感染病原菌分布及耐药性分析

目的 观察恶性肿瘤患者合并侵袭性肺部真菌感染(IPFI)病原菌分布及其耐药性的特点,为临床治疗提供依据.方法 对医院78例诊断为恶性肿瘤合并IPFI的各种合格标本进行检测及药敏试验,对病原菌分布特点和耐药性进行分析.结果 共检出各类真菌189株,第1位是假丝酵母菌属159株,占84.1％,其中白色假丝酵母菌检出率最高为104株占55.0％,热带假丝酵母菌31株占16.4％,光滑假丝酵母菌14株占7.4％,克柔假丝酵母菌10株占5.3％,曲霉菌属是第2大类真菌,检出23株,占12.2％;白色假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、卡帕芬净的耐药率均＜10.0％;热带假丝酵母菌对伊曲康唑的耐药率22.6％;光滑假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别为21.4％、50.0％;克柔假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别为60.0％、50.0％.结论 恶性肿瘤合并IPFI假丝酵母菌属占绝大多数,其中白色假丝酵母菌比例下降,非白色假丝酵母菌比例增多;所检出的真菌对常用抗真菌药物均存在不同程度的耐药性,部分真菌耐药性严重,提示应尽早进行病原学监测,并指导临床合理使用抗真菌药物.     

妇产科假丝酵母菌性阴道炎的菌种分布及耐药性

目的 了解妇产科患者假丝酵母菌性阴道炎的菌种分布及耐药性,为临床合理选择抗真菌药物提供参考依据.方法 严格按照卫生部《全国临床检验操作规程》,用萨布罗培养基分离真菌,采用常规方法鉴定假丝酵母菌属;药敏试验采用K-B法进行.结果 自387例阴道炎患者的阴道分泌物中检出6种假丝酵母菌,以白色假丝酵母菌分离率最高,为291株占75.2％,其次为热带假丝酵母菌39株占10.1％;6种假丝酵母菌对两性霉素B、制霉菌素的敏感率均为100.0％,对氟康唑、克霉唑、伊曲康唑等抗真菌药物的耐药率在6.2％～33.3％.结论 检出真菌已产生了不同程度的耐药性,且不同真菌耐药性具有较大的差异,因此,应重视真菌的检测及药敏试验,以指导临床合理用药.     

白色假丝酵母菌感染的临床分布与药敏及生物膜类型分析

目的探讨白色假丝酵母菌感染的临床分布与药敏率以及产膜能力,为临床合理使用抗真菌药物提供科学依据。方法收集2013年1月-2015年8月住院患者标本分离出7 612株真菌,真菌分离培养按《全国临床检验操作规程》进行,采用法国生物梅里埃公司全自动微生物VITEK-2Compact分析仪鉴定到种,体外药敏试验采用纸片K-B法,采用WHONET 5.6软件进行统计分析,通过结晶紫染色法对白色假丝酵母菌进行生物膜定量分析。结果分离的真菌中白色假丝酵母菌1 366株,占17.9%;白色假丝酵母菌主要分离自呼吸科389株及急诊科241株,分别占28.5%及17.6%;白色假丝酵母菌的标本来源主要以痰液最多,其次为尿液及分泌物,分别占68.3%、10.5%及5.8%;白色假丝酵母菌对两性霉素B、伏立康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、伊曲康唑的敏感率分别为100.0%、100.0%、99.9%、99.8%、98.0%;标准菌株SC5314为强产生物膜,临床分离的1 366株白色假丝酵母菌中弱产生物膜325株、中等产生物膜243株、强产生物膜798株。结论白色假丝酵母菌对两性霉素B、伏立康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、伊曲康唑依然保持较高的敏感性,白色假丝酵母菌的临床分布不同,临床治疗应合理选择抗真菌药物,同时加强对真菌耐药性的监测有助于减少耐药菌株的产生,也推动了生物膜产生能力与白色假丝酵母菌的耐药机理及致病性之间关系的进一步研究。     

医院内侵袭性假丝酵母菌感染的流行病学趋势及变迁

目的研究北京朝阳医院2000-2010年分离的侵袭性假丝酵母菌,了解医院侵袭性假丝酵母菌感染的流行病学趋势及变迁。方法对侵袭性假丝酵母菌进行菌种收集统计;采用科玛嘉显色培养基和VITEK-2Com-pact YST卡进行菌种初筛鉴定;用26SrDNA D1/D2区SSCP图谱分析进行精准分子鉴定;采用CAI区SSCP图谱和GeneScan相结合对侵袭性白色假丝酵母菌进行基因分型;药敏试验采用ATB FUNGUS 3系统和E-test对5种抗真菌药进行MIC值测定。结果 2000-2010年共检出血流感染病原菌2320株,其中假丝酵母菌属148株占6.4%;无菌体液标本4093株,其中假丝酵母菌属253株占6.2%;侵袭性假丝酵母菌感染中ICU最高,值得重视;临床独立来源的82株白色假丝酵母菌,基于微卫星片段CAI区共有38种基因型,基因型18-26(9.76%)、16-21(8.54%)、21-21(7.32%)、11-18(4.88%)、18-18(4.88%)、11-20(4.88%)、25-33(4.88%)分布占优势;6例患者不同部位分离的白色假丝酵母菌基因型完全相同;体外药物敏感率氟康唑为93.2%、伏立康唑为94.5%、两性霉素B为100.0%、卡泊芬净为100.0%、5-氟胞嘧啶为97.3%。结论侵袭性白色假丝酵母菌仍然是主要病原菌,但非白色假丝酵母菌感染有不同程度的上升趋势,基因分型显示侵袭性白色假丝酵母菌呈多态性分布,发生侵袭的菌株基因型与定植的基因型有关。     

243株假丝酵母菌属MIC结果分析

目的分析临床常见假丝酵母菌属对常用抗真菌药物的耐药性。方法采用法国生物梅里埃公司提供的ATB FUNGS 2试验板条,测定243株临床常见假丝酵母菌属的最低抑菌浓度（MIC）值。结果243株假丝酵母菌属以白色假丝酵母菌为主,占64.6%,其他依次为光滑假丝酵母菌（14.4%）、热带假丝酵母菌（11.1%）、近平滑假丝酵母菌（5.8%）、克柔假丝酵母菌（4.1%）;上述5种常见假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑和伊曲康唑4种抗真菌药物均产生了耐药性,其中克柔假丝酵母菌耐药率较高,对4种抗真菌药物的耐药率分别为20.0%、50.0%、30.0%和40.0%;上述5种常见假丝酵母菌对伊曲康唑耐药率均较对氟康唑高。结论临床常见假丝酵母菌属对常用抗真菌药物已具有一定的耐药性,应加强监测与控制。     

白色假丝酵母菌对氟康唑敏感性及耐药机制研究

目的研究本院临床分离的白色假丝酵母菌对氟康唑的耐药性及其ERG11基因突变情况。方法将临床标本接种至沙堡弱平板,用VITEK 2 Compact微生物分析系统鉴定所得菌株,保存所得白色假丝酵母菌;按照CLSI-M27-A3酵母菌微量肉汤稀释法进行氟康唑敏感性试验;选择部分代表菌株进行ERG11基因的PCR扩增、测序及比对分析。结果共分离得162株白色假丝酵母菌,其中来自痰液标本最多,占68.5%;氟康唑耐药株为11株,占6.8%;剂量依赖敏感株(S-DD)为16株,占9.9%;敏感株为135株,占83.3%;从7株氟康唑耐药和1株氟康唑敏感的白色假丝酵母菌ERG11基因中共发现22个点突变,其中错义突变3个,分别是V51E、D116E、E266D,其余均为同义突变;有2株氟康唑耐药菌株未发现错义突变。结论 ERG11基因的突变是白色假丝酵母菌对氟康唑耐药的重要机制,D116E可能是浙江地区白色假丝酵母菌对氟康唑耐药的主要突变位点;对于白色假丝酵母菌耐氟康唑机制的研究不应局限于ERG11基因的突变,应综合多方面因素。     

245例女性阴道假丝酵母菌病的真菌分布及耐药性分析

目的 探讨女性阴道假丝酵母菌病的真菌分布及耐药性,为临床治疗提供依据.方法 对临床从阴道分泌物中分离出的245株假丝酵母菌属采用科玛嘉假丝酵母菌显色培养基和YBC鉴定卡进行鉴定,并采用Rosco纸片扩散法对5种抗真菌药物进行药物敏感试验.结果 245株假丝酵母菌属中白色假丝酵母菌193株占78.8％、光滑假丝酵母菌33株占13.5％、热带假丝酵母菌10株占4.1％、克柔假丝酵母菌6株占2.5％、其他假丝酵母菌3株占1.2％;在5种抗真菌药物中,耐药率最高的是伊曲康唑为33.1％(x2=99.20,P＜0.05),氟康唑耐药率为27.8％、酮康唑为18.8％、两性霉素B为7.4％、5-氟胞嘧啶为4.9％.结论 女性阴道假丝酵母菌感染以白色假丝酵母菌为主,对抗真菌药物有不同程度耐药,临床应重视药敏试验,合理用药.     

耐唑类白色假丝酵母菌临床株CYP51基因的研究

目的 探讨白色假丝酵母菌临床株CYP51基因突变与对唑类抗真菌药物耐药的关系,从分子水平了解白色假丝酵母菌的耐药机制.方法 纸片扩散法初步筛选呼吸道感染对耐唑类白色假丝酵母菌,按NCCLS公布的M-27方案测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑的MIC,设计3对引物,对分离的2株耐唑类白色假丝酵母菌(2007H株,2007T株)进行PCR,扩增CYP51基因;扩增产物纯化后,进行测序并与GenBank序列(X13296)相比较分析.结果 PCR扩增产物大小与预期结果一致;测序分析表明.成功扩增到白色假丝酵母菌CYP51基因,与X13296序列相比较,两个耐药株都存在有义突变和无义突变,两株白色假丝酵母菌共有22个碱基突变;突变发生氨基酸替换的有F105L、K128T、Y132H、T199I、R267H、G464S和G467K,其中,两株菌都有Y132H和G467K突变,F71L、W244R、T311N和T352I为新发现的突变,同时,也发现了9个未发生氨基酸替换的突变.结论 白色假丝酵母菌对唑类抗真菌药物的耐药与CYP51基因突变有关,且为多位点突变,研究发现了新的突变点,它在耐药机制中的作用需进一步研究.     

重症监护病房深部假丝酵母菌属感染耐药性分析

目的:探讨重症监护病房(ICU)深部假丝酵母菌属感染的菌种分布特点及耐药性,指导临床合理用药。方法:采用ATB-FUNGUS 3药敏自动分析系统对ICU分离的假丝酵母菌属进行药物敏感性试验。结果:检出假丝酵母菌属103株,其中白色假丝酵母菌检出率最高(63.1%);其次为热带假丝酵母菌(19.4%)。假丝酵母菌属对两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、氟康唑、依曲康唑耐药率分别为1.9%、3.9%、10.7%、11.7%、23.3%。结论:ICU患者深部假丝酵母菌属感染以白色假丝酵母菌为主,药敏结果显示对依曲康唑耐药率最高,对两性霉素B耐药率最低。临床应根据药敏试验结果合理使用抗真菌药物。     

1690例标本中486株假丝酵母菌的分布及药敏分析

目的 了解假丝酵母菌的临床分布,以及对常用抗真菌药物的耐药性. 方法 采用回顾性资料分析2008年1月-2009年4月间,临床各种送检标本中假丝酵母菌的分离及耐药性情况. 结果从临床送检的痰、尿、分泌物等1 690例标本中检出5种假丝酵母菌共486株,检出率为28.61%,其中白色假丝酵母菌检出325株占66.87%;在各年龄段念珠菌的分布中,60岁以上患者所占比例最大为69.96%;体外药敏试验显示5种假丝酵母菌对两性霉素B、伊曲康唑、制霉菌素的敏感率均在93%以上,对氟康唑的耐药率达到11.5%. 结论白色假丝酵母菌仍是第一位的致病性真菌,并且以呼吸道假丝酵母菌感染最常见.5种假丝酵母菌对氟康唑的耐药率最高.     

老年患者真菌感染临床分布及耐药性分析

目的调查北京医院近期老年患者真菌感染的临床分布及耐药状况,为临床合理使用抗真菌药物提供依据。方法采用分离显色培养基、法国生物梅里埃公司API 20C AUX酵母菌鉴定系统进行鉴定。结果临床分离到1213株真菌,其中检出白色假丝酵母菌598株占49.3%、非白色假丝酵母菌615株占50.7%、真菌最多的部位是呼吸道占78.2%,其次为泌尿道占10.5%;体外药敏试验结果显示,克柔假丝酵母菌对FCA天然耐药,对5-氟胞嘧啶(5-FC)、两性霉素B(AMB)的耐药率分别为61.4%、10.3%,另外光滑假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌对氟康唑(FLC)、伊曲康唑(ITC),其他假丝酵母菌属对5-FC、AMB、伏立康唑(VRC)具有较高的敏感性。结论医院真菌感染中非白色假丝酵母菌明显增加,同时已出现不同程度的耐药菌株,临床医师应根据药敏结果合理选择抗真菌药物。     

1108株深部真菌医院感染耐药性分析

目的了解医院住院患者深部真菌感染的发病状况、病原菌特性及对常用抗真菌药物的敏感度,为临床治疗深部真菌感染选用药物提供参考依据。方法常规培养分离真菌鉴定,采用纸片扩散法进行体外药敏试验,应用WHONET5.3软件对药物敏感试验的数据进行分析。结果深部真菌检出最多的为白色假丝酵母菌,其次为热带假丝酵母菌,排在第3位的为光滑假丝酵母菌;深部真菌感染标本主要来自痰液和尿液,679株白色假丝酵母菌对氟康唑、5-氟胞嘧啶、两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑未保持较高的抗真菌活性,敏感率为100.0%;273株热带假丝酵母菌和156株光滑假丝酵母菌对两性霉素B保持100.0%敏感,对氟康唑、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑、伏立康唑的耐药率分别为2.9%、0.4%、0.4%、98.9%;156株光滑假丝酵母菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为21.2%、22.4%。结论深部真菌对抗真菌药物的耐药性具有种间差异,对唑类药物存在交叉耐药现象且耐药性有上升趋势。     

白色假丝酵母菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的建立医院感染白色假丝酵母菌的基因多态性DNA分型方法,了解白色假丝酵母菌医院感染的分子流行病学情况,并探讨其基因多态性与真菌药物敏感性检测结果的可能关系。方法收集临床各病区送检的住院患者白色假丝酵母菌感染标本30份和其相应患者资料、抗真菌药物敏感性检测结果,采用经优化的随机扩增多态性(RAPD)DNA方法,对30株白假丝酵母菌进行基因多态性分型,利用Phylip3.67聚类分析软件分别用邻接法和算术平均数的非加权成组配对法,对RAPD扩增条带结果进行聚类分析。结果随机引物OPE-03进行RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物;30株不同来源的菌株可大致分为3种亲缘关系;两种聚类分析结果相同,提示该实验结果可靠。结论白色假丝酵母菌基因多态性分布可能与菌株的来源有关;RAPD多态性可能与其耐药性有关;不同聚类分析方法的RAPD图谱分析结果相同。     

白假丝酵母菌耐药性及多药耐药基因CDR1和CDR2的表达

目的:探讨女性下生殖道白假丝酵母菌耐药性及多药耐药基因CDR1和CDR2的表达。方法:培养、分离女性下生殖道假丝酵母菌感染耐药菌株,进行菌种鉴定、药敏试验和耐药性分析,应用RT-PCR检测多药耐药基因CDR1和CDR2的表达。结果:272例培养阳性的菌株中白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌分别占79.8%、9.56%、8.10%和2.57%。217例白假丝酵母菌耐药菌株中特比耐芬耐药率最高,达94.93%,伊曲康唑和咪康唑的耐药率分别为15.21%和5.99%。RT-PCR显示白假丝酵母菌株耐药组CDR1和CDR2高表达。结论:女性下生殖道假丝酵母菌感染仍以白假丝酵母菌为主,非白假丝酵母菌感染呈上升趋势,白假丝酵母菌对常用抗真菌药物的耐药性呈上升趋势。白假丝酵母菌多药耐药基因CDR1和CDR2高表达,与临床白假丝酵母菌耐药密切相关。     

中晚期肺癌患者肺部真菌感染的临床特点与抗真菌药物治疗分析

目的探讨中晚期肺癌患者发生肺部真菌感染的临床特点与抗真菌药物治疗效果,为临床治疗提供经验与参考。方法随机选取2012年6月-2015年1月医院治疗的中晚期肺癌发生肺部真菌感染患者共78例作为研究对象,分析感染病原菌特点以及抗真菌药物治疗效果,数据采用SPSS 18.0软件进行统计分析。结果患者年龄、住院时间、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、化疗、侵入性操作及白细胞数量等级等是肺部真菌感染相关危险因素,差异有统计学意义(P<0.05);共检出37株真菌,以假丝酵母菌属为主,共30株占81.1%;白色假丝酵母菌对氟胞嘧啶、两性霉素B的耐药率均为0,克柔假丝酵母菌对所有抗真菌药物的耐药率均为0,热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌对氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B的耐药率均为0。结论中晚期肺癌患者肺部真菌感染多为假丝酵母菌属,应选取敏感抗真菌药物抑制感染。     

老年患者假丝酵母菌性肺炎的菌群分布及耐药性调查

目的探讨老年患者假丝酵母菌性肺炎的菌群分布及耐药性,为临床治疗用药提供试验依据。方法病例筛选严格参照卫生部《医院感染诊断标准》,假丝酵母菌属分离与鉴定按《全国临床检验操作规程》进行;药物敏感试验采用K-B法。结果 189株假丝酵母菌中,白色假丝酵母菌居首位,占63.5%,热带假丝酵母菌居第2位,占16.4%;189株假丝酵母菌对5种常用抗真菌药物的耐药率均<16.7%,其中两性霉素B、制霉菌素显示了100.0%的抗菌活性。结论临床对疑为真菌性肺炎的患者必须及时进行真菌培养,以早期发现病原性真菌和选择有效的抗真菌药物进行治疗。     

泌尿系统感染假丝酵母菌属分布与药敏分析

目的研究泌尿系统感染患者尿液标本分离的假丝酵母菌属等真菌的感染特点、分布及其对抗真菌药物敏感性,为临床治疗提供参考依据。方法回顾性分析2009年12月1日-2012年11月30日住院患者尿液标本中分离鉴定242株真菌,计算菌种构成比、科室分离率,统计分析主要致病真菌的药敏结果,采用SPSS17.0软件进行统计分析。结果共检测出242株真菌,以白色假丝酵母为主,共85株35.1%;其分布科室以综合ICU为主,共80株占33.1%;白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌对两性霉素B敏感,敏感率为100.0%。结论尿路感染的假丝酵母菌属发病率随着人口老龄化及各种医疗行为干预导致免疫低下患者有增高的趋势,应引起临床医师的高度关注;及早进行微生物学检测并根据药敏结果选择抗真菌药物,可有效地控制该类真菌引起的感染。