2型糖尿病肾病CX3CR1基因多态性相关因素及中医证型分析

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者CX3CR1-V249I基因突变与中医证型、尿微量白蛋白与肌酐比值(ACR)及炎症因子之间的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性的方法及反向测序法检测108例DN患者CX3CR1-V249I多态性情况,同时测定DN患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、ACR、低密度脂蛋白(LDL)、核因子-κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子Fractalkine(FKN)含量,并记录患者的中医证型。结果108例DN患者中CX3CR1基因VV型87例,Ⅵ型17例,Ⅱ型4例。中医证型与CX3CR1-V249I基因型之间具有相关性(χ2=10.136,P0.05),VV型基因多辨证为气阴两虚型,Ⅵ和Ⅱ型以阴虚燥热为主。与阴虚燥热型和阴阳两虚型比较,气阴两虚型患者具有更高的ACR水平[(948.3±36.4)mg/g比(919.3±31.5)mg/g、(921.8±37.9)mg/g,F=4.946,P0.05];与痰湿证、湿热证比较,兼血瘀证患者具有更高的ACR水平[(954.3±34.3)mg/g比(921.5±36.9)mg/g、(917.8±37.1)mg/g,F=7.283,P0.05]。CX3CR1-V249I基因突变与Hcy、ACR水平相关(t=3.601、2.692,P均0.05)。且V249I野生型(VV型)患者较突变型(Ⅵ型+Ⅱ型)患者NF-Κb[(0.94±0.16)ng/m L比(0.75±0.17)ng/m L,t=7.926,P0.05]、IL-6[(170.75±34.01)pg/m L比(147.43±27.23)pg/m L,t=5.472,P0.05]、TNF-α[(95.91±19.21)ng/m L比(81.12±13.50)ng/m L,t=2.887,P0.05]含量要高,FKN则在突变型患者表达更多[(1.10±0.19)ng/m L比(0.83±0.12)ng/m L,t=9.246,P0.05)。结论 DN患者CX3CR1-V249I基因多态性与Hcy、ACR、NF-κB、IL-6、TNF-α、FKN及中医证候相关。     

CX3CR1多态性与中药减少2型糖尿病肾病尿蛋白疗效的关系

目的：探讨中药对2型糖尿病肾病的治疗作用,同时结合CX3CR1-V249I基因多态性进行中药疗效分析。方法： 108例患者被随机分为对照组(西医治疗)和中药组(西医治疗联合中药)。全部患者在治疗开始前均接受CX3CR1-V249I基因多态性的检测。分别于治疗前、后抽血及收集尿液检测糖化血红蛋白、尿白蛋白、尿α1微球蛋白(α1MU)、血β2微球蛋白(β2MU)、FKN、NF-κ b、IL-6、TNF-α等指标。结果：所有患者中CX3CR1-V249I野生型87例,突变型21例。治疗后各组不同基因型患者尿中白蛋白、尿α1MU、血β2MU较治疗前均有明显下降(p＜0.05)。但中药组中突变型明显优于对照组(p＜0.05)。中药组治疗后血清中NF- κB、FKN、IL-6、TNF-α含量治疗后较治疗前明显减少(p＜0.05),在突变型患者中这种下降更明显,差异有统计学意义(p＜0.05)。结论：参芪地黄汤能有效减少2型糖尿病肾病患者尿白蛋白、尿α1微球蛋白(α1MU)、血β2微球蛋白(β2MU)、FKN、NF-κ b、IL-6、TNF-α含量,保护肾脏组织,这一作用在CX3CR1-V249I突变型患者中更加明显。     

fractalkine影响动脉粥样硬化信号的转导机制及卡托普利的干预作用

目的:通过鸟苷酸结合蛋白（G-蛋白）对不规则趋化因子fractalkine（FKN）诱导单个核细 胞合成核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,探讨FKN及其受体CX3CR1 可能存在的信号转导机制及卡托普利的干预作用。方法：将抗凝血用Ficoll密度梯度离心 法分离外周血单个核细胞,随机分为空白对照组、FKN组、PTX组、RO31-8220组、PDTC组及 卡托普利组,应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,应用酶联免疫法检测各 组培养液中TNF-α的表达水平。结果：FKN组与空白组比较NF-κB 、TNF-α表达明显增多( P<0.05);G-蛋白阻断剂PTX组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达明显减少(P<0.05); PKC阻断剂RO31-8220组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达减少(P<0.05);NF-κB抑制剂PDTC组TNF-α表达较FKN组明显减少(P<0.05);卡托普利组较FKN组NF-κB 、TNF-α表达部分减少(P<0.05)。结论：FKN/CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、 TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN/CX3CR1诱导单个核细胞合成NF-κB、 TNF-α,抑制炎症反应和抗动脉粥样硬化;FKN/CX3CR1影响动脉粥样硬化的信号转导机制可能是通过以下级联反应实现的：FKN+CX3CR1→G蛋白→PKC→NF-κB→TNF-α。     

趋化因子FKN对外周血单核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及蛋白激酶C在其中的作用

[目的]对单核细胞合成核因子-κB(nuclear factor-KappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探讨趋化因子(fractalkine,FKN)-CX3CR1可能存在的信号转导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的介导作用.[方法]①Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞.②每份提取的单核细胞分为空白对照组、FKN、R031-8220(PKC特异性阻断剂)组.③免疫细胞化学法检测各组单核细胞中NF-κB的表达.④酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.[结果]FKN、R031-8220与空白对照组的NF-κB的阳性细胞率分别为(34.80±2.69)%.(20.10±2.78)%与(3.80±0.95)%(三组间差异P＜0.05);TNF-α含量分别为(1506.1±69.3)pg/mL,(820.2±22.8)pg/mL,(80.5±5.5)pg/mL(三组间差异P＜0.05).[结论]FKN-CX3CR1能增加NF-κB、TNF-α单核细胞的表达:而FKN与CX3CR1结合以后,可能通过激活细胞内蛋白激酶C,进而诱导单核细胞合成NF-κB、TN-α.     

趋化因子FKN对外周血单个核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及卡托普利的干预作用

[目的]通过研究趋化因子(fractalkine,FKN)对单个核细胞合成核因子-κB(nuclearfactor-κappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探索了FKN-CX3CR1可能存在的信号传导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了卡托普利在这其中可能的干预作用.[方法]①抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.②将每份提取的单个核细胞分3组分别为:空白对照组、FKN组、卡托普利组.③应用免疫细胞化学法检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况.④应用酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.[结果]①FKN诱导组NF-κB(34.80±2.69)%和TNF-α(1506.1±69.3)pg/mL较空白组NF-κB(3.80±0.95)%和TNF-α(80.5±5.5)pg/mL表达显著增多(P＜0.05).②卡托普利干预组NF-κB(27.55±1.96)%和TNF-α(1119.3±116.2)pg/mL较FKN组NF-κB(34.80±2.69)%和TNF-α(1506.1±69.3)pg/mL表达显著减少(P＜0.05).[结论]FKN-CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN-CX3CR1诱导的单个核细胞合成NF-κB、TNF-α,抑制炎症反应.     

青藤碱对小鼠急性肺损伤保护作用及机制研究

目的探讨青藤碱对小鼠急性肺损伤保护作用及机制。方法将48只小鼠通过随机数字表法分为假手术组、模型组、青藤碱低剂量组和青藤碱高剂量组,每组12只。通过气道滴注脂多糖(LPS)(0.5mg/kg)建立急性肺损伤小鼠模型,给予不同剂量(40、160mg/kg)青藤碱治疗,ELISA检测血清炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)含量;Western blot检测胞外信号调控激酶1/2(ERK1/2)/核因子κB(NF-κB)信号通路的激活情况;苏木素-伊红(HE)染色检测肺脏病理变化;CD68免疫荧光检测巨噬细胞浸润情况。结果 (1)ELISA检测血清炎症因子含量:与模型组比较,低、高剂量青藤碱均可明显减少血清炎症因子含量[TNF-α:(28.20±8.32)pg/m L、(20.17±5.87)pg/m L比(38.00±9.20)pg/m L,P0.05;IL-6:(37.23±9.43)pg/m L、(25.64±4.34)pg/m L比(56.23±11.94)pg/m L,P0.05;IL-1β:(56.98±5.17)pg/m L、(43.09±4.45)pg/m L比(73.21±13.23)pg/m L,P0.05;MCP-1:(32.12±7.83)pg/m L、(24.35±7.46)pg/m L比(49.34±8.97)pg/m L,P0.05],且呈剂量依赖性(P0.05);(2)不同剂量青藤碱可以明显减轻肺脏巨噬细胞浸润及病理变化;(3)与模型组比较,青藤碱可以有效抑制ERK/NF-κB信号通路激活[pERK/ERK:(0.17±0.03)、(0.14±0.02)比(0.21±0.05),P0.05;IκB/GAPDH:(0.18±0.03)、(0.31±0.07)比(0.08±0.02),P0.05],并具有剂量依赖性(P0.05)。结论青藤碱可能通过抑制ERK/NF-κB通路缓解LPS诱导小鼠急性肺损伤。     

NF-κBp65、TNF-α在妊娠期糖尿病患者中高表达

目的探讨核转录因子-κBp65(NF-κBp65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在妊娠期糖尿病患者中的表达水平及意义。方法收集张家港市中医医院分娩的250例孕产妇的临床资料,将合并有妊娠期糖尿病的97例患者作为研究组,153例正常孕妇作为对照组,对两组孕妇血清和脐血中NF-κBp65、TNF-α的表达水平及在胎盘组织中的阳性率进行对比分析。结果研究组血清和脐血中NF-κBp65水平为(875.66±148.67)、(880.72±151.57)ng/L,明显高于对照组的(312.39±95.38)、(327.84±94.23)ng/L;且研究组血清和脐血中TNF-α水平为(7.72±0.23)、(8.17±0.36)ng/L,亦明显高于对照组的(5.54±0.59)、(5.79±0.43)ng/L,差异均有统计学意义(P0.05)。两组胎盘组织中均可见NF-κBp65和TNF-α阳性颗粒表达,研究组NF-κBp65和TNF-α阳性率分别为92.78%和95.88%,明显高于对照组22.88%和13.73%(P0.05)。结论妊娠期糖尿病孕妇NF-κBp65和TNF-α炎症因子的表达阳性率较正常孕妇高,提示二者对妊娠期糖尿病发生有一定的促进作用。     

苯甲酰芍药苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤保护作用及分子机制研究

目的探讨苯甲酰芍药苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能分子机制。方法将75只SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分成五组,每组15只:空白对照组(生理盐水200μL)、ALI组(2mg/kg LPS 100μL+生理盐水100μL)、阳性对照组(2mg/kg LPS100μL+血必净注射液100μL)、苯甲酰芍药苷低剂量组(2mg/kg LPS 100μL+2.5mg/kg苯甲酰芍药苷100μL)、苯甲酰芍药苷高剂量组(2mg/kg LPS 100μL+5.0mg/kg苯甲酰芍药苷100μL),通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ALI小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测肺组织IκB激酶(IKKβ)/核因子κB(NF-κB)表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC(RT-PCR)检测ALI小鼠肺组织mi R-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测mi R-520c-3p靶基因;A549转染mi R-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比[(5.64±0.14)、(4.75±0.11)比(6.21±0.64),P均0.05];ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷能明显降低ALI小鼠肺组织TNF-α、IL-6水平[TNF-α:(20.68±1.06)pg/m L、(7.34±0.37)pg/m L比(32.27±1.89)pg/m L,P均0.05;IL-6:(29.16±2.36)pg/m L、(14.26±1.06)pg/m L比(48.26±3.19)pg/m L,P均0.05];WB结果显示,与ALI组比较,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RTPCR结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷有效促进mi R-520c-3p在ALI中的表达[(0.51±0.13)、(0.74±0.09)比(0.34±0.11),P均0.05];Targetscan预测结果显示,mi R-506-3p直接靶向NF-k B p65亚基RELA基因3'UTR序列;补救实验显示,与苯甲酰芍药苷组比较,苯甲酰芍药苷+mi R-520c-3p inhibitor组TNF-α、IL-6 m RNA水平明显升高[TNF-α:(3.94±0.49)比(1.55±0.36),P0.05;IL-6:(6.95±1.21)比(2.11±0.42),P0.05]。结论苯甲酰芍药苷能有效缓解LPS引起的小鼠ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调mi R-520c-3p表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。     

雷公藤甲素通过调控Toll-样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)信号通路对糖尿病肾病模型小鼠足细胞的作用研究

目的观察雷公藤甲素治疗糖尿病肾病(DN)模型小鼠的疗效,并探讨其通过Toll-样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)信号通路对DN足细胞的作用机制。方法6只9周龄db/m和18只9周龄db/db雄性小鼠,按db/m正常对照组(等量0.9%生理盐水)、db/db DN对照组(等量0.9%生理盐水)、替米沙坦治疗组(5mg·kg^-1·d^-1)、雷公藤甲素组(50μg·kg^-1·d^-1)分组给药,治疗8周。记录各组小鼠一般情况、24h尿白蛋白定量、体质量、肾脏指数和血生化指标,光镜观察肾小球病变情况,免疫组化计算足细胞数量,Western blot检测肾脏足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin以及肾脏组织TLR4和NF-κB蛋白定量表达。结果与DN对照组比较,雷公藤甲素组小鼠治疗后24h尿蛋白定量[(98.28±11.10)mg/24h比(239.89±44.26)mg/24h]、血清肌酐[(38.82±3.66)μmol/L比(45.32±7.63)μmol/L]、总胆固醇[(3.05±0.54)mmol/L比(4.00±0.67)mmol/L]及三酰甘油[(1.23±0.15)mmol/L比(2.09±0.48)mmol/L]均明显下降(P均<0.01),血清白蛋白水平上升[(39.21±4.33)g/L比(25.46±1.54)g/L,P<0.01],肾小球肥大和足细胞损伤减轻[(95.50±5.01)个/肾小球比(58.78±2.86)个/肾小球,P<0.05],Nephrin[(2.05±0.44)比(1.15±0.22)]、Podocin[(1.32±0.25)比(0.72±0.20)]蛋白表达量上升(P均<0.01),TLR4[(0.37±0.04)比(0.61±0.04)]和NF-κB[(0.41±0.05)比(0.76±0.06)]蛋白表达量下降(P均<0.01)。结论雷公藤甲素可能通过抑制TLR/NF-κB信号通路相关因子表达,减轻糖尿病肾病模型小鼠足细胞损伤,减低蛋白尿,保护肾功能,起到治疗糖尿病肾病的作用。     

尿游离轻链测定对原发性高血压早期肾损害的诊断价值

目的探讨尿游离轻链测定对原发性高血压(EH)患者早期肾脏损害诊断的敏感性.方法以速率散射比浊法测定76例EH患者和35名健康体检者尿液中游离轻链(κ、λ)和α1微球蛋白(α1-MG)水平,并对检测结果进行统计学分析.结果EH组患者尿游离轻链κ(59.6±23.5)mg/L、λ(31.2±16.2)mg/L和α1-MG(13.5±3.0)mg/L均明显高于对照组(28.7±15.2)mg/L、(15.1±11.3)mg/L、(4.4±2.3)mg/t(t=2.841、2.786、3.161,均P＜0.01);EH组患者游离轻链κ、λ、α1-MG阳性率分别为21.1%、19.7%和23.7%,对照组κ、λ、α1-MG阳性率均为0,两组比较差异有显著性意义(x2=8.61、6.39、9.89,均P＜0.05);EH组患者κ/λ(1.91±0.52)与对照组(1.90±0.45)比较差异无显著性意义(t=1.332,P＞0.05);随着病程的增加,EH患者尿游离轻链κ、λ和α1-MG水平不断升高(F=15.57、12.67、32.45,均P＜0.01);EH患者尿游离轻链κ、λ与α1-MG呈显著正相关(r=0.893、0.889,均P＜0.01).结论尿游离轻链κ、λ测定对早期发现EH肾损害有重要意义,可作为EH患者肾损害的早期监测指标.     

小儿肝门静脉海绵样变性者NF-κB活性在手术前后的变化分析

目的观察并分析小儿肝门静脉海绵样变性者核因子-κB(NF-κB)活性在手术前后的变化。方法以2005年2月—2013年7月我院收治的43例小儿肝门静脉海绵变性者为研究对象,以40例正常儿童为对照组,检测对照组以及观察组儿童在手术前后血清单个核细胞(PBMC)中的NF-κB p65/Lamin B1的相对含量和NF-κB活性。结果观察组术前、术后PBMC中NF-κB p65的相对含量分别为(1269.3±349.8)ng/mg、(884.5±154.8)ng/mg,均高于正常对照组(106.1±12.7)ng/mg(P<0.05);与术前相比,术后相对含量降低(P<0.05);观察组术前、术后PBMC中NF-κB的活性分别为(2194.5±471.3)ng/mg、(1376.9±203.7)ng/mg,均高于正常对照组(221.1±33.6)ng/mg(P<0.05);与术前相比,术后相对含量降低(P<0.05)。结论经手术治疗后,小儿肝门静脉海绵样变性者PBMC中NF-κB p65的相对含量、NF-κB的活性均显著降低,表明手术在一定程度上有效缓解了肝门静脉高压的病症。     

FKN刺激人单个核细胞Akt活化及Akt活化与PI3K、NF-κB的关系

Fractalkine(FKN)是新发现的一种在动脉粥样斑块中过量表达的趋化因子,与其受体CX3CR1结合,介导白细胞黏附和趋化以及血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移,并刺激炎症因子的表达和血小板的活化,因此被认为参与介导动脉粥样硬化(AS)的炎症反应。蛋白激酶B(PKB,又名Akt)是与炎症和白细胞的趋化过程密切相关的信号分子,通过介导白细胞的黏附和趋化、VSMC的迁移及血小板的活化而在AS的形成和进展中发挥作用。关于FKN/CX3CR1的信号转导机制目前尚不明确,本实验的前期工作已经证实,FKN可以刺激人外周血单个核细胞NF-κB信号分子的活化[1,2],本次通过研究FKN可否刺激人外周血单个核细胞Akt活化,以及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、NF-κB与Akt活化的关系,进一步探讨FKN的信号转导机制。     

TJ-5抑制ubch5c介导NEMO泛素化调控NF-κB通路对MHD患者体内微炎症的影响

目的观察倍半萜内酯化合物TJ-5调控泛素结合酶(ubch5c)介导NF-κB必须调节蛋白(NEMO)泛素化对维持性血液透析(MHD)患者体内微炎症的影响。方法选取2018年2月-2019年2月浙江中医药大学附属湖州中医院收治的MHD患者60例,同期选取体检中心健康体检者20名。抽取MHD患者和健康者外周血,分离单一核细胞(PBMC)及CD4+T细胞。分离纯化得到的外周血CD4+T细胞使用不同浓度TJ-5处理,MHD患者血样本分离纯化得到的CD4+T细胞分为空白组(0μM/mL TJ-5处理)和高、低浓度组(10、5μM/mL TJ-5处理),每组20份,健康对照组(健康者不予处理)20份。ELISA法检测MHD患者外周血CD4+T细胞经TJ-5处理后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)表达情况;Western Blot法检测MHD患者和健康志愿者外周血CD4+T细胞核转录因子(P65)、I-κB(NF-κB抑制蛋白)蛋白及其磷酸化;采用镍柱亲和纯化获得ubch5c,通过体外泛素化实验检测泛素连接酶ubch5c活性变化情况;免疫共沉淀法检测NEMO线性泛素化情况。结果 MHD患者外周血Th17/Treg比例显著高于健康志愿者[(1.57±0.25)%比(0.93±0.11)%,P<0.05];与空白组比较,TJ-5处理后,低、高浓度组CD4+T细胞促炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6明显下调[TNF-α:(5.53±0.37)ng/L、(2.27±0.26)ng/L比(8.11±1.05)ng/L,P均<0.05;IL-1β:(1.59±0.30)pg/L、(0.84±0.22)pg/L比(2.75±0.46)pg/L,P均<0.05;IL-6:(30.94±6.47)pg/L、(12.81±5.51)pg/L比(41.26±7.25)pg/L,P均<0.05];抗炎性因子IL-10明显上调[(15.82±1.01)pg/L、(20.47±1.16)pg/L比(7.34±1.71),P均<0.05];与空白组比较,核转录因子(P65)、磷酸化p65(p-P65)水平显著下调[P65:(0.72±0.12)、(0.40±0.10)比(1.19±0.14),P均<0.05;p-P65:(0.27±0.15)、(0.18±0.11)比(0.32±0.11),P均<0.05];核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(I-κB)显著上调[(0.40±0.14)、(0.56±0.12)比(0.27±0.08),P均<0.05;磷酸化I-κB(p-I-κB)显著下调[(0.53±0.17)、(0.33±0.08)比(0.76±0.14),P均<0.05];ubch5c活性抑制率增高[(11.18±2.11)、(26.80±2.68)比(0.00±0.00),P均<0.05];NEMO线性泛素化减弱[(0.573±0.036)、(0.234±0.037)比(0.833±0.079),P均<0.05]。结论倍半萜内酯化合物TJ-5能拮抗CD4+T细胞ubch5c活性,抑制NEMO线性泛素化调控NF-κB通路及炎症因子表达,改善MHD患者微炎症。     

穗花杉双黄酮对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的探讨穗花杉双黄酮对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及机制。方法将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、阳性对照组和穗花杉双黄酮组(简称穗花杉组),每组15只。模型组、阳性对照组和穗花杉组大鼠均通过气道滴注3.0mg/kg LPS100μL,对照组大鼠气道滴注等体积的生理盐水,6h后阳性对照组大鼠腹腔注射2.5mg/kg地塞米松100μL,穗花杉组大鼠腹腔注射2.5mg/kg穗花杉双黄酮100μL,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48h后称重测定大鼠肺组织湿/干重比;苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肺组织病理;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;RT-PCR检测肺组织miR-140-5p表达;蛋白印迹法(WB)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)蛋白表达水平。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RTPCR检测TLR4、NF-κB表达。结果穗花杉组大鼠肺组织湿/干重比明显低于模型组[(4.77±0.19)比(5.84±0.27),P0.05];HE染色结果显示,穗花杉组大鼠肺组织结构较ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显变薄;ELISA结果显示,穗花杉组大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组[TNF-α:(395.16±41.23)pg/mg比(846.23±29.26)pg/mg;IL-6:(315.26±30.25)pg/mg比(876.54±45.23)pg/mg;IL-1β:(650.16±29.46)pg/mg比(1056.26±54.16)pg/mg,P均0.05];WB结果显示,穗花杉组大鼠肺组织TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示,穗花杉组大鼠肺组织和人肺上皮细胞miR-140-5P表达分别高于模型组和刺激组[(0.85±0.13)比(0.34±0.08);(0.81±0.15)比(0.27±0.14),P均0.05];miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB表达[TLR4:(0.95±0.12)比(2.31±0.08);NF-κB:(0.97±0.13)比(2.45±0.06),P均0.05]。结论穗花杉双黄酮对LPS诱导的大鼠ALI具有保护作用,其机制可能与促进miR-140-5p mimic表达,抑制ALI炎症过程关键蛋白TLR4、NF-κB表达以及其下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平有关。     

银质针导热配合热罨包外敷治疗肾阳虚型膝骨关节炎疗效观察

目的观察银质针导热配合热罨包外敷治疗肾阳虚型膝骨关节炎的临床疗效。方法选择膝骨关节炎患者150例,抽签法随机分为三组,观察组50例采用银质针导热疗法配合热罨包外敷,对照1组50例采用银质针导热疗法,对照2组50例采用透明质酸钠关节腔内注射。5周后,观察各组治疗前后HSS膝关节评分及关节滑液中IL-1β、IL-6、INF-α的变化。结果各组患者膝关节疼痛评分、功能评分、活动度评分、稳定性评分、屈曲畸形评分及总评分治疗后较治疗前明显提高,治疗后观察组疼痛评分[(25.50±2.90)分比(23.20±2.99)分、(21.30±3.16)分,P0.05]、屈曲畸形评分[(9.28±0.97)分比(8.76±1.25)分、(8.08±1.18)分,P0.05]、总评分[(87.60±6.14)分比(83.60±5.56)分、(77.20±7.37)分,P0.05]明显高于两对照组;各组治疗后关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显低于治疗前(P均0.01);其中治疗后观察组IL-1β[(0.030±0.004)ng/m L比(0.038±0.005)ng/m L、(0.044±0.006)ng/m L,P0.05]、TNF-α[(4.80±0.56)ng/m L比(5.03±0.56)ng/m L、(5.26±0.51)ng/m L,P0.05]明显低于两对照组(P0.01),对照1组又低于对照2组(P0.05)。观察组与对照1组的IL-6低于对照2组(P0.05)。结论银质针导热疗法配合热罨包外敷的综合疗法能有效缓解肾阳虚型膝骨关节炎患者的临床症状。     

肥胖症患者血清对人源单核细胞细胞上Toll样受体4/转录因子-κB信号通路的影响

目的 探讨肥胖症及伴相关代谢紊乱患者血清对人源单核细胞(THP-1)细胞表面Toll样受体4/转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的活化作用.方法 分别用10例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱患者血清干预THP-1细胞株24、48 h后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素(IL-1)β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的能力.Western印迹检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清液中IL-1 β和TNF-α的水平.结果 THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化的蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力差异有统计学意义(P＜0.05);THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,并随干预时间的延长而增高(P＜0.05).正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴高血糖组、肥胖伴血脂紊乱组以及肥胖伴3种代谢紊乱组血清孵育THP-1细胞48 h,TNF-α的浓度(ng/L)分别为(222±32)、(246±52)、(322±32)、(322±34)和(490±83),IL-1β(ng/L)分别为(94±19)、(133±19)、(174±22)、(180±30)、(279±38)(P＜0.05).结论 单纯性肥胖及肥胖伴不同组分代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导TLR4/NF-κB信号通路的活化,伴代谢紊乱组分越多的肥胖患者的血清诱导TLR4/NF-κB信号通路活化的能力越强.     

快速康复外科对腹腔镜远端胃癌根治术患者炎症反应和免疫功能的影响

目的探讨快速康复外科(FTS)对腹腔镜远端胃癌根治术患者炎症反应和免疫功能的影响。方法 244例腹腔镜远端胃癌根治术患者按围手术期处理方法不同分为快速康复外科(FTS)组126例和传统组118例,对两组患者术前和术后炎症指标、免疫指标和术后并发症进行比较。结果术后第3、7天,FTS组患者外周血淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著高于传统组[CD3+:(58.33±5.17)%比(51.78±5.40)%、(62.56±6.64)%比(55.58±7.16)%,P0.05;CD4+:(26.79±3.03)%比(23.34±2.63)%、(29.01±3.83)%比(25.16±2.97)%,P0.05;CD4+/CD8+:(1.27±0.12)%比(1.04±0.17)%、(1.49±0.24)%比(1.20±0.22),P0.05];术后第3、7天,FTS组患者外周血IgA、IgM、IgG水平显著高于传统组[IgA:(1.73±0.18)g/L比(1.53±0.20)g/L、(1.87±0.16)g/L比(1.62±0.23)g/L,P 0.05;IgM:(0.94±0.16)g/L比(0.70±0.27)g/L、(1.30±0.19)g/L比(1.02±0.21)g/L,P 0.05;IgG:(10.20±1.44)g/L比(8.22±1.48)g/L、(12.58±1.29)g/L比(10.13±1.50)g/L,P0.05];术后第1、3、7天,FTS组患者外周血IL-6、CRP、TNF-α水平显著低于传统组[CRP:(59.41±10.72)mg/L比(72.91±8.78)mg/L、(29.86±8.67)mg/L比(39.31±8.65)、(9.73±4.05)mg/L比(16.37±5.41)mg/L,P均0.05;IL-6:(59.19±9.21)ng/L比(79.87±12.01)ng/L、(19.14±8.59)ng/L比(27.69±6.69)ng/L、(10.21±4.64)ng/L比(15.56±4.72)ng/L,P均0.05;TNF-α:(150.98±10.28)ng/L比(165.24±16.08)ng/L、(125.06±15.63)ng/L比(147.56±17.99)ng/L、(107.96±15.98)ng/L比(123.44±13.45)ng/L,P均0.05];FTS组术后并发症发生率明显低于传统组,差异有统计学意义(P0.05)。结论快速康复外科能有效降低胃癌根治术患者炎症反应程度和术后并发症发生率,对机体免疫功能影响更小。     

金水宝对糖尿病肾病血液透析患者氧化应激及微炎症状态的影响

目的观察金水宝对糖尿病肾病维持性血液透析患者氧化应激及微炎症状态的改善作用。方法选择2013年2~5月湖北省中山医院血液净化中心透析时间超过6个月的36例糖尿病肾病血液透析患者,随机分为对照组(18例)和治疗组(18例)。对照组给予常规碳酸氢盐血液透析治疗,每周3次,每次治疗4 h;治疗组为常规碳酸氢盐血液透析基础上加用金水宝胶囊口服,0.33 g/粒,每次5粒,每日3次。两组均治疗3个月。两组研究对象均于研究开始前及治疗3个月后检测血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的变化。结果与治疗前比较,对照组患者治疗后IL-6[(19.70±1.11)ng/m L比(23.17±1.76)ng/m L]、TNF-α[(50.94±1.52)ng/L比(55.39±1.87)ng/L]、hs-CRP[(8.58±0.67)mg/L比(10.17±0.42)mg/L]、MDA[(5.51±0.33)nmol/L比6.59±0.25)nmol/L]水平均显著升高(P<0.01),SOD[(55.19±2.82)n U/m L比(46.51±1.89)n U/m L]、GSH-Px[(197.05±8.88)U/L比(171.39±7.83)U/L]显著降低(P<0.01);治疗组治疗后与治疗前比较,IL-6[(19.36±1.71)ng/m L比(14.79±2.95)ng/m L]、TNF-α[(51.13±1.42)ng/L比(45.66±1.74)ng/L]、hs-CRP[(8.72±0.85)mg/L比(6.44±0.95)mg/L]、MDA[(5.68±0.58)nmol/L比(4.81±0.58)nmol/L]水平均显著降低(P<0.01),SOD[(54.00±2.42)n U/m L比(63.90±3.53)n U/m L]、GSH-Px[(197.47±8.48)U/L比(237.77±9.44)U/L]均显著升高(P<0.01);两组治疗后IL-6、TNF-α、hs-CRP、MDA、SOD、GSH-Px组间差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论糖尿病肾病维持性血液透析患者体内普遍存在氧化应激及微炎症状态,金水宝胶囊可改善糖尿病肾病维持性血液透析患者体内的氧化应激及微炎症状态。     

桑枝多糖基于YAP/ TAZ信号通路调控db/db小鼠肾纤维化作用的研究

目的研究桑枝多糖基于YAP/TAZ信号通路调控db/db小鼠肾纤维化作用的影响。方法将40只24周龄自发型2型糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(20mg/kg)、桑枝多糖低剂量组(600mg/kg)、桑枝多糖高剂量组(1200mg/kg),每组10只,日常进行高脂饮食喂养,连续灌胃相应药物60天,每天1次。另将10只db/m小鼠为空白组,日常进行普通饲料喂养,模型组与空白组小鼠灌胃等体积生理盐水60天。给药第60天采集小鼠尿液,测量尿量及终点法测24h尿白蛋白(UP)含量。全自动生化分析仪测定小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量。末次给药后,小鼠禁食不禁水12h,测其空腹血糖(FBG)。HE染色观察小鼠肾组织病理学变化。采用ELISA法检测肾组织纤维化指标TGF-β1、纤连蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、胶原Ⅰ型(CollagenⅠ)含量及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量。Western blot法检测肾组织Yes相关蛋白(YAP)、TAZ蛋白表达。结果与模型组比较,桑枝多糖低、高剂量组小鼠Scr[(0.39±0.09)mg/dL、(0.32±0.07)mg/dL比(0.62±012)mg/dL]、BUN[(25.75±4.75)mg/dL、(20.62±3.68)mg/dL比(39.18±4.63)mg/dL]、UP[(3.45±0.42)mg/24h、(2.76±0.47)mg/24h比(6.38±2.03)mg/24h]含量显著降低(P均0.05);纤维化指标TGF-β1[(3.76±0.52)ng/mL、(2.53±0.38)ng/mL比(4.98±1.17)ng/mL]、FN [(5.29±1.13)ng/mL、(4.47±1.02)ng/mL比(6.13±1.07)ng/mL]、CTGF [(14.52±1.22)ng/mL、(11.24±0.87)ng/mL比(17.52±1.26)ng/mL]、CollagenⅠ[(10.93±0.85)ng/mL、(8.14±0.76)ng/mL比(14.81±1.34)ng/mL]及炎症因子TNF-α[(87.25±7.81)ng/L、(78.66±6.36)ng/L比(134.82±8.90)ng/L]、IL-6 [(34.72±3.35)ng/L、(21.16±2.51)ng/L比(58.65±5.71)ng/mL]、MCP-1[(0.38±0.04)ng/L、(0.29±0.06)ng/L比(0.51±0.05)ng/L]含量明显减少(P均0.05),YAP[(0.48±0.06)、(0.31±0.05)比(0.53±0.11)]、TAZ[(0.31±0.04)、(0.21±0.03)比(0.37±0.05)]蛋白表达显著降低(P均0.05)。结论桑枝多糖对db/db小鼠糖尿病肾病的肾纤维化有一定的保护作用,其作用机制可能与调节YAP/TAZ信号通路,降低肾脏组织纤维化因子形成及减少炎症因子含量有关。     

菝葜治疗两种不孕症大鼠模型疗效观察及初步机制研究

目的研究菝葜治疗排卵障碍型不孕症和输卵管炎性不孕症大鼠模型的疗效及其初步机制。方法 Sprague Dawley大鼠70只,采用雄激素致排卵障碍型不孕症大鼠模型,采用苯酚胶浆法致输卵管炎性不孕症大鼠模型,分别设立菝葜组、对照组、模型组和正常组。排卵障碍型不孕症大鼠菝葜组和对照组分别灌胃菝葜提取物12g/(kg·d)、枸橼酸克罗米芬4.5mg/(kg·d),模型组和正常组均灌胃蒸馏水12mg/(kg·d)。输卵管炎性不孕症大鼠除对照组灌胃妇科千金片3.0g/(kg·d),余三组同排卵障碍性不孕症。对排卵障碍型不孕症大鼠检测体质量差、子宫指数、卵巢指数、血清雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH);对输卵管炎性不孕症大鼠进行炎症评分,检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-2(IL-2)。结果排卵障碍型不孕症大鼠菝葜组体质量差比对照组和模型组明显减轻[(37.00±4.78)g比(44.37±2.26)g、(45.12±2.29)g,P0.01],卵巢指数比模型组偏高[(32.51±1.51)比(30.37±1.40),P0.05],子宫指数与模型组无差异(P0.05),血清E2、LH、FSH浓度比正常组和对照组均低,但比模型组明显偏高[E2:(619.75±25.40)pg/m L比(959.25±15.14)pg/m L、(781.00±42.69)pg/m L、(572.37±3.15)pg/m L;LH:(5.10±0.19)m IU/m L比(5.27±0.12)m IU/m L、(6.10±0.19)m IU/m L、(4.32±0.15)m IU/m L;FSH:(0.98±0.16)m IU/m L比(1.37±0.04)m IU/m L、(1.31±0.04)m IU/m L、(0.66±0.07)m IU/m L;P0.05或P0.01]。输卵管炎性不孕症大鼠菝葜组炎症评分比模型组明显降低[(1.71±0.35)分比(3.28±0.77)分,P0.01],与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),血清TNF-α和IL-2与模型组比较差异均有统计学意义[TNF-α:(0.46±0.04)ng/m L比(1.13±0.22)ng/m L;IL-2:(1.70±0.01)ng/m L比(1.00±0.17)ng/m L;P0.01],与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论菝葜对雄激素致排卵障碍型不孕症大鼠模型的体质量有较好的干预作用,对卵巢指数的增加有一定的帮助,对血清E2、LH、FSH有一定的良性调节;菝葜对输卵管炎性不孕症大鼠模型的炎症评分有明显改善,对血清TNF-α和IL-2具有很好的调节作用。