海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞腹腔异体移植以及对肾上腺的影响术

背景：应用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊技术包裹细胞进行异体移植,被证明是一种可避免受体产生免疫排异的有效方法。目的：观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化卵巢细胞种植于去卵巢大鼠腹腔后对受体大鼠。肾上腺的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007—03,2008—09在首都医科大学生殖医学研究中心完成。材料：取Wistar大鼠卵巢分离培养卵巢细胞,进行微囊化处理,制备包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊。方法：将40只雌性Wistar大鼠随机分为4组：去势组于无菌条件下切除双侧卵巢;微囊移植组手术摘除双侧卵巢后腹腔移植包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊;雌激素替代治疗组手术摘除双侧卵巢后腹腔注射乙烯雌酚0．2mg／kg,每3d注射1次。正常对照组不进行任何处理。主要观察指标：干预后30d放射免疫法检测大鼠血清中雌激素水平,观察肾上腺切片的形态学特点,并利用免疫组织化学SP法检测各组大鼠肾上腺皮质各层增殖细胞核抗原表达变化。结果：①放射免疫法检测正常对照组,雌激素替代治疗组以及微囊移植组雌激素水平明显高于去势组,而正常对照组,微囊移植组,雌激素替代治疗组之间雌激素水平差异无显著性意义。②去势组肾上腺皮质网状带增厚,网状带与球束状带比值增大,束状带和网状带增殖细胞核抗原阳性表达都增加;而微囊移植组及雌激素替代治疗组增殖细胞核抗原阳性细胞明显低于去势组,差异具有显著性意义。结论：微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,所分泌的雌激素可以纠正肾上腺皮质因卵巢摘除而导致的形态改变,并与雌激素替代治疗疗效相近。     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢激素分泌细胞异体移植对垂体形态学的影响

目的:已有研究证实海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊对机体无明显毒副作用且生物相容性好,应用这一技术包裹细胞,可明显延长异体内移植物的存活时间.将海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞体外培养后进行异体移植,观察其治疗卵巢功能丧失模型大鼠的可行性及垂体形态学变化.方法:实验于2006-03/2007-09在首都医科大学生殖医学研究中心完成.①实验动物:30只Wistar雌性大鼠,随机分为正常对照组,卵巢摘除组,微囊移植组,每组10只.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.②实验方法:卵巢摘除组:无菌条件下切除双侧卵巢:微囊移植组:海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠生物膜包裹传至P2代的大鼠卵巢细胞,制成微囊体外培养,收集24 h培养液以检测雌二醇分泌状态;将微囊化的卵巢细胞移植入已行双侧卵巢切除术的大鼠腹腔.用阴道涂片观察大鼠动情周期恢复情况.术后40 d麻醉后处死动物,放射免疫法检测血清雌二醇质量浓度,垂体组织常规石蜡包埋,连续切片,分别进行苏木精-伊红染色和雌、孕激素受体免疫组织化学染色.LEICA Q500IW自动图像分析仪对垂体细胞的面积,雌、孕激素受体吸光度值进行定量测定.结果:①放射免疫法检测培养液显示,微囊化的卵巢激素分泌细胞具有继续合成和分泌雌二醇的功能.②检测血清中雌二醇质量浓度结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义,正常对照组和微囊移植组之间差异无显著性.⑤动情周期未恢复.④苏木精-伊红染色可见卵巢摘除组大鼠垂体中有大量阉割细胞,平均面积＞180 μm2,与卵巢摘除组比较,微囊移植组大鼠垂体中细胞平均面积和阉割细胞数目均显著减少.⑤垂体雌、孕激素受体免疫组织化学吸光度值结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义.结论:微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,并可以减少垂体内阉割细胞的形态和数目,提高垂体细胞雌激素受体和孕激素受体的表达,提示移植后细胞对垂体有反馈调节作用.     

微囊化嗜铬细胞移植产生的镇痛效应及其机制

目的:了解微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植对大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量的变化,探讨海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞移植镇痛的机制和海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果. 方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成.取SD大鼠96只,随机分为空囊组、微囊化细胞组和裸细胞组,每组又分为4个亚组(2,4,6,8周组).在3组大鼠的脊髓蛛网膜下腔分别植入含空囊的Dulbecco改良的Eagle培养基、微囊化牛嗜铬细胞和单纯牛嗜铬细胞.分别测定移植术后各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量.结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液儿茶酚胺的含量在各时间点上都高于空囊组(P＜0.05);在4,6,8周时微囊化细胞组儿茶酚胺含量高于裸细胞组(P＜0.05).结论:牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植可以提高大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量,海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹有助于移植细胞长期地分泌镇痛物质.     

微囊化嗜铬细胞移植产生的镇痛效应及其机制

目的:了解微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植对大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量的变化,探讨海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞移植镇痛的机制和海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果。方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成。取SD大鼠96只,随机分为空囊组、微囊化细胞组和裸细胞组,每组又分为4个亚组(2,4,6,8周组)。在3组大鼠的脊髓蛛网膜下腔分别植入含空囊的Dulbecco改良的Eagle培养基、微囊化牛嗜铬细胞和单纯牛嗜铬细胞。分别测定移植术后各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量。结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液儿茶酚胺的含量在各时间点上都高于空囊组(P<0.05);在4,6,8周时微囊化细胞组儿茶酚胺含量高于裸细胞组(P<0.05)。结论:牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植可以提高大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量,海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹有助于移植细胞长期地分泌镇痛物质。     

人嗜铬细胞微囊化处理对大鼠异种移植的免疫隔离作用

背景:课题组前期在建立海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹活细胞制备技术的基础上,已证明微囊化嗜铬细胞有良好的镇痛效果,而该微囊包被材料的免疫隔离作用尚需明确.目的:观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化嗜铬细胞移植到大鼠眼前房和足胝部的免疫排斥反应,评价微囊化技术的免疫隔离作用.设计:随机对照动物实验.单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室.材料:选用雌性 SD大鼠48只,鼠龄3个月,由华中科技大学同济医学院实验动物部提供.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验所用海藻酸钠、多聚赖氨酸为美国Sigma公司产品,微囊发生器为德国赠送.方法:实验于2002-09/2003-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室完成.①取6名脑死亡健康成人的肾上腺髓质,经分离、消化、培养后,制备成人嗜铬细胞悬液.供者家属对实验知情同意,实验方案通过医院伦理委员会批准.采用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠法制作空微囊和微囊化细胞.②48只大鼠被随机分为3组:人嗜铬细胞移植组、空微囊移植组、微囊化人嗜铬细胞移植组,每组分眼前房和足胝部两个部位进行移植,每个部位8只.人嗜铬细胞移植组分别将2×1010 L-1细胞悬液注入大鼠右眼前房和左足胝部.空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞组分别吸取空微囊(100个微囊)或ME-HCC(100个微囊,每个微囊包裹400～500个细胞)注入大鼠右眼前房和左足胝部.主要观察指标:于移植术后第7天采用ELISA法测定血清白细胞介素2水平.采用激光散射比浊仪测定血清IgG和IgM水平.移植术后第28天取大鼠右侧眼球及左侧足组织作常规切片,苏木精-伊红染色,40倍光镜下观察组织形态.结果:大鼠48只均进入结果分析.①血清白细胞介素2,IgG,IgM水平:空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞移植组均低于人嗜铬细胞移植组,差异有显著性意义(t=8.544～21.64,P < 0.01).②大鼠眼前房和足胝部组织形态:人嗜铬细胞移植组大鼠的眼前房内和足胝部可见大量淋巴细胞和中性粒细胞浸润.空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞移植组大鼠眼前房和足胝部仅见少量淋巴细胞和中性粒细胞.结论:海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化所产生的良好生物相容性及其机械稳定性,使之有效地发挥了免疫排斥隔离作用.     

卵巢细胞微囊移植对去卵巢小鼠的骨胶原代谢的影响

背景:性激素对维持骨骼的完整性是必要的,体外培养的卵巢细胞可以分泌雌激素和孕激素,海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠微球可以在移植物和受体间提供一个屏障,有利于异体移植物的存活。目的:探讨异体移植的微囊化卵巢细胞在去卵巢小鼠体内的生存和分泌功能,以及对骨胶原代谢的作用。方法:用6周龄雌性昆明小鼠分离培养卵巢细胞,并用海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠盐微囊化分离培养的卵巢细胞。将24只8周龄雌性昆明小鼠随机分为3组(n=8),正常组:未进行卵巢切割;去卵巢组:切除卵巢;移植组:卵巢切除后立即将微囊化的卵巢细胞移植入腹腔。射免疫分析法检测微囊化卵巢细胞培养液和小鼠血清雌二醇和/或孕激素水平,VanGieson染色法显示骨基质中的Ⅰ型胶原纤维,测小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量。结果与结论:卵巢细胞和微囊化卵巢细胞培养液中分泌雌二醇和孕激素水平没有显著差异,移植90d后小鼠血清雌二醇浓度与正常组无显著差异,而去卵巢组血清雌二醇浓度明显低于正常组。VanGieson染色显示,移植组的胶原纤维分布与正常组相似,而去卵巢组的骨小梁减少、游离末端增多,脱钙骨基质变薄,胶原纤维减少。与正常组比较,去卵巢组小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量降低。提示,微囊化卵巢细胞异体移植后能继续生存并分泌雌激素,并能在某种程度上减缓由去卵巢引起的骨胶原的分解代谢。     

海藻酸钠微囊化成猪胰岛异种移植实验研究

目的 :观察实验性糖尿病大鼠腹腔内移植海藻酸钠微囊化成猪胰岛治疗效果。方法 :以海藻酸钠一多聚赖氨酸作为制备微囊的材料 ,将 18只糖尿病大鼠随机分为 3组 :对照组、未微囊化胰岛移植组、微囊化胰岛移植 ,分别进行腹腔内胰岛移植。结果 :移植前 3组血糖水平无显著差异 ,移植后 7d时 ,3组血糖分别为 2 2 6 7± 1 15mmol/L ,18 5 8± 2 6 2mmol/L和13 5 7± 1 88mmol/L ,微囊化胰岛移植组与前 2组相比均有显著差异 ,且生存期明显长于前 2组。结论 :海藻酸钠微囊化成猪胰岛可存活于糖尿病大鼠体内 ,并且具有有效生物活性。     

微囊化牛嗜铬细胞移植对甲醛致痛大鼠镇痛作用的效应

目的:探讨微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植的镇痛作用,分析海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果。方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成。①选取清洁级成年SD大鼠96只,随机数字表法分为:空囊组、微囊化细胞组、裸细胞组,32只/组。②空囊组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL含空囊的DMEM液,每只植入600～800个海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠空囊;微囊化细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠-牛嗜铬细胞悬液,含细胞5×106个;裸细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL牛嗜铬细胞悬液,含细胞5×106个。③分别于细胞移植术后2,4,6,8周测定各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量以及脊髓后角fos蛋白表达的变化,各时间点8只/组。结果:实验选取清洁级成年SD大鼠96只,全部进入结果分析。①海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞的形态:光镜下,包裹嗜铬细胞的微囊呈规则的圆球形,表面光滑,直径为150～250μm。牛嗜铬细胞散在分布于微囊内,细胞呈圆形,清晰可见。空囊半透明状,表面光滑。②移植术后不同时间各组脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量检测结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量在移植术后2,4,6,8周均高于空囊组(P<0.05)。微囊化细胞组移植术后2周与裸细胞组基本相似(P>0.05),其余各时间点均高于裸细胞组(P<0.01)。③移植术后8周各组大鼠脊髓内fos蛋白表达的变化:大鼠注射甲醛侧脊髓灰质后角内阳性神经元个数微囊化细胞组、裸细胞组均显著低于空囊组[(39.96±4.46),(50.62±3.29),(59.70±6.93),P<0.05]。同时,微囊化细胞组脊髓组织中阳性神经元个数明显低于裸细胞组(P<0.05)。结论:微囊化牛嗜铬细胞移植可以提高脑脊液中儿茶酚胺的含量,同时抑制甲醛致痛大鼠脊髓后角fos蛋白的表达。     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植改善帕金森病模型鼠的旋转行为

背景:细胞组织的微囊化移植是近年来帕金森病治疗的研究热点之一,目前发展较成熟、应用较多的是海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊,但其易于囊周纤维化、易破碎等缺点,使其临床应用受到了限制。应用国内研制的新型微胶囊材料海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊将PC12细胞微囊化后移植入帕金森病模型鼠纹状体内,观察其作用。目的:观察海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植治疗,改善帕金森病模型大鼠旋转行为的作用。设计:随机对照动物实验。单位:吉林大学第二医院和中国科学院大连化学物理研究所。材料:成年雄性Wistar大鼠40只,体质量(220±10)g;海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊;PC12细胞。方法:实验于2002-05/12在吉林大学第二医院动物实验室和中国科学院大连化学物理研究所完成。①应用国产新型材料壳聚糖制成的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞。②将成功建立的23只帕金森病大鼠模型随机分为3组,微囊化PC12细胞组10只、裸PC12细胞组7只、空微胶囊组6只。分别将海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞、裸PC12细胞、空微胶囊移植入帕金森病模型鼠损伤侧纹状体内。③以阿朴吗啡检测移植前后大鼠旋转行为的差异。观察黑质及纹状体内微包囊的形态并检测微胶囊内细胞的活性。主要观察指标:①移植前后大鼠的旋转行为。②黑质和纹状体的病理形态。③回收的微包囊的完整性及囊内PC12细胞的活性。结果:①微囊化PC12细胞移植组在移植4周时旋转行为显著低于移植前和空微囊移植组犤(6.9±2.8),(11.7±5.5),(10.5±1.6)r/min,P<0.05犦,症状改善至少持续3个月;裸PC12细胞移植组大鼠的旋转行为与移植前相比也有改善犤(5.6±1.1),(9.5±1.5)r/min,P<0.05犦,但仅持续了2个月,且部分大鼠颅内有致死性肿瘤形成。空微囊移植组移植前后大鼠的旋转行为无明显差异。②回收微胶囊内的PC12细胞再培养生长良好,并且具有生物活性。结论:微囊化PC12细胞脑内移植能够改善阿朴吗啡诱发的帕金森病模型鼠的旋转症状,海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠新型微胶囊具有免疫隔离和抑制肿瘤形成的作用,有着广泛的临床应用前景。     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊内细胞浓度与胰岛素和C肽的释放

背景:微囊化已经普遍应用于各种实验研究,微囊包裹的干细胞治疗糖尿病问题也成为当今的热点,但是囊内包裹的细胞浓度与胰岛素释放量的关系成为目前需要解决的问题之一.目的:运用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹胰岛素产生细胞,观察细胞浓度对胰岛素和C肽释放情况的影响.方法:制备大鼠胰腺损伤提取物,将小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素产生细胞.免疫荧光和双硫腙染色鉴定诱导后细胞内胰岛素的表达.然后将胰岛素产生细胞制成浓度分别为1×107 L-1,5×107 L-1,1×108 L-1,5×108 L-1,1×109 L-1,5× 109 L-1的细胞悬液,气体吹喷法制成微囊,用6-羧基乙二酸荧光素检测囊内细胞活力,用葡萄糖刺激微囊内细胞检查其胰岛素和C肽的分泌情况.结果与结论:胰腺损伤提取物诱导后双硫腙染色和细胞免疫荧光鉴定出胰岛素产生细胞内有胰岛素的表达;胰岛素产生细胞制成的微囊直径约为400 μm,大小均一,6-羧基乙二酸荧光素检测到囊内细胞的活力很好.用葡萄糖刺激不同细胞浓度的微囊,发现细胞浓度为1×108 L-1时,胰岛素和C肽的分泌达到最高.     

临床护士心理压力源与工作满意度调查分析

目的了解临床护士面临的主要心理压力源,为护理管理者有效地帮助护士减轻和消除心理压力提供依据。方法采用自评式问卷调查的方法 ,对内江市2所三级乙等医院287名从事临床护理工作的护士进行问卷调查。结果临床护士的心理压力源依次来源于工作强度、职业需求、工作环境、人际关系、家庭经济收入等方面。其中来源于工作强度、人际关系及家庭方面的压力源,不同年龄组护理人员在其压力程度上差异有统计学意义(P0.05)。结论从事临床护理工作的护士存在着多种心理压力源,这些压力源是导致护士工作不满意的主要原因,也是护理的安全隐患之一,护理管理者应予以足够的重视,并定期针对不同的人群进行心理健康知识培训,建立有效的支持系统,及时帮助他们调整心理状态,减轻和消除压力,从而提高护士对本职工作的满意度和患者对护理服务的满意度。     

精神疾病患者家属教育的情况分析

目的：通过对精神疾病患者家属教育的调查，探讨家属教育的内容和教育方式。方法：采用自拟问卷对参加系列教育的家属进行调查分析。结果：患者和家属接受教育次数越多，对疾病知识了解越多；在患者的亲属中患者的父母参加教育比率较大。结论：家属教育对治疗疾病起着积极的作用，应更具有针对性，同时还应该注意教育方式。