新型无白蛋白人二倍体细胞狂犬病疫苗对泰国100例严重狂犬病接触者的效力研究

本研究采用一种新型人二倍体细胞狂犬病疫苗(Lyssavac-HDC),该疫苗以狂犬病病毒Pittman-Moore 90RA 4EE2株为毒种,感染人二倍体细胞后,经蔗糖密度梯度离心纯化,β丙内酯灭活,再除去灭活剂,加入明胶、L-半胱氨酸、磷酸钾和乳糖等作为稳定剂制备而成。作者在泰国100例严重狂犬病接触者中对该疫苗的免疫原性、副反应及效力进行检测。     

不同的狂犬病疫苗免疫后细胞免疫和体液免疫的特征

作者应用脾细胞移动抑制试验、成脾细胞转化试验和抗体中和试验,比较了下述3种狂犬病疫苗对小鼠的免疫效应:(1)Fermi型疫苗,经酚处理的感染绵羊的脑组织悬液;(2)纯化疫苗,将在羊脑内增殖的病毒纯化至85～90%,并用β-丙内酯灭活;(3)组织培养疫苗,将MNIIVP-74固定株置入日本鹌鹑胚胎细胞中培养,再以β-丙内酯灭活.用上述3种疫苗分别接种小鼠腹腔1次.结果发现,3种疫苗免疫后小鼠脾细胞移动抑制的强度和动力学相同.接种后2天     

气相色谱法检测灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯

目的:建立检测灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯的方法。方法:采用直接进样的气相色谱法。色谱柱为HP-DB624毛细管柱,程序升温;采用氢火焰离子化检测器(FID),载气为氮气,流速为1.0 ml/min;氢火焰离子化检测器温度为250℃,进样口温度为150℃。以乙腈为对照品稀释溶剂,样品溶液经离心后直接进样。结果:乙腈和样品中其他成分对β-丙内酯的测定无干扰。β-丙内酯的检测质量浓度线性范围为1.082¹ 082.0μg/ml(r=0.999 4);检测限和定量限分别为0.2、1.0 ng;方法精密度和耐用性良好。在4批样品中未检出残留的β-丙内酯。结论 :建立的方法操作简便、通用性强,可满足灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯监控的需要。     

柯萨奇病毒A16型灭活疫苗保护效果研究北大核心CSCD

目的:研究柯萨奇病毒A 16型候选疫苗株(CA 16-KM)经灭活后免疫小鼠,对病毒攻击的保护效果。方法:用Vero细胞进行CA 16-KM株培养,病毒收获后经浓缩、蔗糖密度梯度离心进行纯化及β-丙内酯灭活,用酶联免疫吸附法(ELISA法)对灭活后的CA 16-KM病毒液进行抗原含量的测定并在Vero细胞上盲传3代对灭活后CA 16-KM毒株的残余毒力进行检测。灭活后的病毒加入氢氧化铝佐剂(质量浓度为1 mg·mL^(-1)),经离心及PBS重悬,制成实验性灭活疫苗。分别于第0天和第14天经肌肉注射免疫8周龄ICR母鼠,对照组用等体积PBS代替。分娩后24 h内的新生乳鼠用100 LD_(50)的CA 16强毒株(CA16-CC)经颅内注射进行攻毒,攻毒后连续21 d观察其临床症状,研究该灭活疫苗对新生乳鼠的保护效果。结果:经β-丙内酯灭活后的CA 16-KM在Vero细胞上盲传3代均无细胞病变效应(CPE)出现,灭活后的CA 16-KM抗原含量为320 EU·mL^(-1)。经注射实验性疫苗的乳鼠攻毒后全部存活,表明CA 16-KM株制备的灭活疫苗诱导的免疫反应可对新生乳鼠产生100%的保护作用。结论:β-丙内酯对CA 16-KM毒株的灭活效果较好;CA 16-KM疫苗候选株灭活后具有良好的免疫原性,可以保护新生乳鼠抵抗CA 16病毒的攻击,也许是研制CA 16灭活疫苗的理想毒株。     

多部位皮内接种狂犬病疫苗

人二倍体细胞株(HDCS)狂犬病疫苗是安全有效的制品,但因价格昂贵,难于在第三世界使用。作者为探索在这些地区更经济和有效地使用这种疫苗的可能性,采用经β丙内酯灭活的 HDCS 狂犬病疫苗(抗原价10.8)给10名未接种过狂犬病疫苗的健康志     

病毒基因组选择性灭活的原则Ⅴ.β丙内酯灭活病毒条件的合理选择

灭活疫苗生产中的感染性灭活广泛采用不可逆修饰核酸成分的化学试剂,特别是β丙内酯(PL)。本文探讨了PL初始浓度、溶液成份、温度和pH对PL灭活MS2噬菌体感染性的动力学影响。MS2噬菌体用常规方法获得并纯化,聚乙二醇沉淀后悬浮在0.15MNaCl中。用大肠杆菌CA180作双层琼脂噬斑测定其感染性(滴定)。用硫代硫酸钠滴定法测定纯化样本、缓冲液和199培养液中的PL浓     

甲型肝炎疫苗的免疫原性

甲型肝炎病毒(HAV)HFS/GBM株在人胚肾细胞中传10代,正常人成纤维细胞(HFS)上传25代,经终末稀释传5代纯化后,经黑猩猩和人体试验证明已减毒。培养液中的HAV,经硫酸铵沉淀浓缩,0.05%β丙内酯灭活,再经氯化铯(CsCl)密度梯度离心纯化后作免疫接种试验。灭活后残余感染性检测:灭活的HAV接种在HFS上37℃吸附4小时,洗     

大孔吸附树脂分离纯化白术水煎液中白术内酯Ⅲ的工艺研究

目的:研究大孔吸附树脂纯化白术内酯Ⅲ的最佳纯化工艺.方法:用吸附、解吸附试验从六种大孔树脂中筛选出最佳树脂,并考察不同工艺条件对纯化结果的影响.结果:纯化白术内酯Ⅲ的最佳工艺为:上样液中白术内酯川的浓度为40μg/mL,用70％的乙醇进行洗脱,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂用量为9倍柱体积.结论:AB-8型大孔树脂适合白术水煎液中白术内酯Ⅲ的精制.     

β丙内酯处理可削弱BHK—21细胞制备的实验性狂犬病疫苗中残余DNA的生物学活性

目前β丙内酯(BPL)广泛地用于细胞培养疫苗制备过程中的病毒灭活,它还可与疫苗中残余的细胞DNA起反应。作者检测了BPL对用BHK-21细胞制备的实验性狂犬病疫苗中残余DNA的结构和生物学活性的影响。     

一种新的高免疫原性鸭胚狂犬病疫苗

人二倍体细胞狂犬病疫苗(HDCV)价格昂贵,限制了其使用范围.发展中国家需要大量狂犬病疫苗,为此,发展了一种新的更经济的高免疫原性鸭胚疫苗.新疫苗由狂犬病毒P-M株制备,从鸭胚组织提取病毒后,病毒上清液经过滤、分层、沉淀及β-丙内酯灭活加以提纯和浓缩,制成高度纯化的鸭胚疫苗(PDEV).每剂疫苗至少含有2.5IU与完整病毒颗粒有关的糖蛋白抗原,这种抗原是病毒颗粒衣壳的主要部分,     

狂犬病特异性抗体定量测定Ⅰ.改良的反向免疫电泳法

作者用一种标准化的改良的反向免疫电泳法(MCIE)测定狂犬病疫苗接种者血清的效价。MCIE采用的抗原为BHK-21细胞培养的狂犬病病毒Pitman Moore(PM)株,用β丙内酯灭活并作超离心处理。从73名接触前或后的狂犬病疫苗接种者中采集血清样本,     

新近发展的纯化鸡胚细胞狂犬病疫苗在人体中的反应原性和免疫原性

作者将狂犬病病毒Flury LEP C-25株在原代鸡胚成纤维细胞中培养增殖后,用滤膜去除细胞碎片,β丙内酯灭活病毒后经区带超离心纯化。所用疫苗效价为8.7IU/ml。将88名21～38岁的志愿者分成6组,按下列不同的免疫程序接种疫苗。反应原性:31.2%的人出现全身症状,其中中强度反应者占15.1%。56.5%的人出现局部反应,其中中强度反应者占16.4%。第1、2针接种后不良反应发生率最高。放射免疫分析结果表明,在多次接种纯化鸡胚细胞狂犬病疫苗者中没能检出鸡类蛋白IgE抗体。     

人用H5N1禽流感病毒疫苗生产工艺的优化

目的 建立优化的人用H5N1禽流感病毒疫苗生产的工艺。方法 在不同的稀释倍数、收获时间及灭活剂添加量下,通过测量收获液的病毒滴度和血凝效价,来确定病毒的最佳生产条件,并对离心法和凝胶过滤层析法的纯化效果进行对比。结果 103~104半数鸡胚感染量(50% egg infective dose,EID50)病毒接种鸡胚,收获的鸡胚尿囊液的病毒滴度和血凝效价最高,分别为10-8.3EID50和1∶480;在56~72 h血凝效价最高。甲醛浓度1∶10 000灭活144 h为灭活最佳条件。两种纯化方法得到的样品纯度和卵清蛋白的去除率相近,但离心纯化法和凝胶过滤层析纯化法病毒回收率有较大的差异,分别为19%和70%。结论 成功建立了高产毒的鸡胚基质H5N1禽流感病毒培养、灭活及纯化工艺。     

临时配制的螺内酯混悬剂稳定性的考察

目的：探讨以单糖浆和纯化水为稀释剂分别临时配制螺内酯混悬液的稳定性。方法：采用高效液相色谱法测定螺内酯混悬液在室温下分别放置0 h,4 h,8 h,24 h的含量。结果：在稳定性试验中,以纯化水为稀释剂的混悬剂与以单糖浆为稀释剂的混悬剂在各个时间点测定的浓度无显著变化。结论：在室温（25 ℃）条件下,螺内酯片剂磨粉后加入到单糖浆和纯化水中放置24 h内稳定性均较好,可以为临床临时配制螺内酯液体制剂提供依据。     

Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的研制

目的 以Vero细胞为基质,研制安全有效的乙型脑炎灭活疫苗.方法 将经Vero细胞适应的乙型脑炎病毒P3株接种Vero细胞,培养后收获病毒液.采用β-丙内酯灭活,通过超滤浓缩、硫酸鱼精蛋白沉淀、蔗糖密度梯度离心等方法纯化病毒,最终配制成预防乙型脑炎病毒感染的疫苗.通过临床试验考察疫苗的安全性及免疫原性.结果 该疫苗的主要考核指标,如病毒滴度、总蛋白含量、Vero细胞DNA残留量、效价等均符合国家标准.临床观察结果显示,接种本疫苗后局部及全身反应轻微;各年龄组乙型脑炎病毒中和抗体阳转率均>90%.结论 采用本法制备的疫苗安全有效.     

四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化

目的 优化四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件.方法 设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件.结果 得出的最佳条件是:探针以30 pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5 h.结论 优化出了耐药基冈芯片制作和杂交的最佳条件,总结出芯片制作优化的方法.     

冷-灭活血浆分层:生产无传染性血浆蛋白的新概念

作者采用β-丙内酯结合紫外线照射(β-PL/UV)方法灭活原血浆中的肝炎病毒。β-PL能使肝炎病毒DNA烷基化而达到灭活目的,而且它与水反应迅速,加到血浆中几小时后完全转变为无毒的β-羟丙酸。血浆经β-PL处理后,从一个受到紫外线辐射的、不断旋转的圆筒内流出。用改变流速使照射剂量     

用日本鹌鹑胚细胞培养的病毒制备狂犬病疫苗

狂犬固定毒MNIIVP-74株适应于日本鹌鹑胚(JQE)细胞,病毒经超滤浓缩10～30倍,最后含人血清白蛋白0.4%和蔗糖7.5%,用1:4,000β丙内酯22℃4小时灭活,制成冻     

小鼠对口服狂犬病灭活疫苗的免疫应答:皂角苷的增强作用

作者用狂犬病病毒ERA株的BHK-21/C13细胞培养液经β丙内酯灭活,醋酸锌浓缩,再以含2%胎牛血清的Tris缓冲液重悬,制成含2.5国际单位的疫苗。用~(125)I标记抗原、或■粗制皂角苷后,给瑞士Webster或CD-1雌■从食管内注入0.4ml疫苗,或开腹在腹腔内注入0.2ml疫苗。用荧光抑制微量试验检测血清中和抗     

复合溶剂选择性纯化紫杉醇的工艺研究

目的:研究复合溶剂选择性纯化紫杉醇的方法和工艺条件。方法:采用不同种类的溶剂在不同条件下对紫杉醇进行精制,以高效液相色谱法测定的紫杉醇粗品含量和主要杂质峰峰面积为指标,考察最佳的溶剂种类和工艺参数。结果:最佳工艺为纯化强极性杂质较高的紫杉醇,采用紫杉醇-丙酮-乙酸乙酯-正己烷(1g∶8mL∶6mL∶7mL)于-25℃冷冻24 h;纯化弱极性杂质较高的紫杉醇,采用紫杉醇-丙酮-三氯甲烷-正己烷(1g∶8mL∶6mL∶7mL)于-25℃冷冻24 h。结论:采用丙酮、正己烷分别与乙酸乙酯或三氯甲烷纯化紫杉醇,对于不同极性的杂质具有良好选择性,可用于紫杉醇的选择性纯化。