培养基中碳源和氮源对甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物合成的影响

目的：研究碳源和氮源对甘草愈伤组织生物量积累和黄酮类化合物形成的影响。方法：在培养基中添加不同质量分数的蔗糖和果糖以及不同比例的NH⁺₄和NO^-₃,进行甘草愈伤组织的诱导和培养,并用HPLC检测愈伤组织中黄酮类化合物的含量。结果：2种碳源中,甘草愈伤组织生物量积累和黄酮类化合物合成均以果糖为碳源时高。在用2%果糖作为碳源时,培养物中5种黄酮类化合物的含量总和是3%蔗糖作为碳源的2倍。果糖作为碳源,在2%～6%时,随着质量分数的增加,培养物中5种黄酮类化合物的含量总和呈下降趋势,但其中甘草查尔酮的含量却增加5倍以上。硝态氮有利于甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物的积累。当NH⁺₄/NO^-₃浓度比例为1/2时,甘草愈伤组织中5种黄酮类化合物含量的总和达最大值,为151.47 μg·g^-1。铵态氮抑制甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物的形成。结论：果糖作为碳源最有利于甘草愈伤组织生物量积累和黄酮类化合物的生物合成。硝态氮有利于甘草愈伤组织生长和黄酮类化合物的积累。     

黄芩愈伤组织培养及黄芩苷合成调控的研究

目的研究黄芩愈伤组织培养和黄芩苷合成调控的规律。方法采用植物细胞培养技术诱导愈伤组织;HPLC法测定黄芩苷的量。结果黄芩愈伤组织生长和黄芩苷积累的优势培养条件为在基本培养基MS中氮源浓度为60mmol/L(NH4 ∶NO3-为1∶1),KH2PO4浓度0.5~1.5mmol/L,附加80g/L蔗糖,0.3mg/LIAA,2mg/L6-BA和200mg/L蛋白胨,温度(25±1)℃,暗培养。培养40d后收获愈伤组织,生物量达28.7g/L,黄芩苷为167.4mg/g,明显高于野生黄芩的最高量。结论黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长后合成。蔗糖对黄芩苷的合成具有明显的调节作用,在蔗糖质量浓度小于3%时,能有效促进愈伤组织的生长,但对黄芩苷的合成没有刺激作用;当蔗糖质量浓度在3%~8%时,愈伤组织表现出明显的生长和次生代谢功能,黄芩愈伤组织的生长及黄芩苷合成明显增加;当蔗糖质量浓度在8%时,两者均达到最大值。     

组培条件对云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的影响

目的 :寻找适合于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的培养条件。方法 :对在不同光照条件下和不同培养基上的愈伤组织进行生长分析和紫杉醇含量测定。结果与结论 :黑暗、0.1mg·L^-1BAP和 1.0mg·L^-1 2,4 D的激素组合 ,B5,DCR或 6,7V基本培养基有利于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇 ;培养基中NO₃ -浓度高有利于愈伤组织的生长 ,NH4⁺ 浓度高抑制愈伤组织的生长 ,但显著提高紫杉醇含量。     

培养基类型、植物生长物质浓度对王枣子愈伤组织诱导和继代的影响＊

目的 优化王枣子愈伤组织的诱导和探究疏松愈伤组织的继代条件，为王枣子悬浮细胞培养奠定初步基础。方法 以王枣子无菌苗幼叶为外植体，采用单因素试验研究不同培养基类型对愈伤组织诱导的影响；采用L₉(3² )正交试验设计，研究2，4-D、KT不同浓度配比对王枣子疏松愈伤组织的增殖培养的影响。结果 愈伤组织的诱导率在MS、1/2MS和B₅培养基上呈上升趋势。MS的出愈时间最晚，1/2MS的出愈时间次之；在B₅培养基上出愈时间最早，且愈伤组织的质地和生长状态较好。正交试验的结果显示，愈伤组织的在B₅培养基上添加2，4-D 2.5 mg·L^-1 +KT 1.0 mg·L^-1增殖倍数最小为19.78倍，添加2，4-D 1.5 mg·L^-1 +KT 0.2 mg·L^-1 达到最大增殖倍数27.34倍；王枣子疏松愈伤组织增殖试验中2，4-D(P<0.01)的影响效应比KT(P=0.091)大。结论 B₅培养基是最佳的王枣子愈伤组织诱导培养基，B₅培养基中添加2，4-D 1.5 mg·L^-1 +KT 0.5 mg·L^-1 为疏松愈伤组织增殖的最佳配比。     

水杨酸和茉莉酸甲酯对远志愈伤组织生长和相关酶活性及化学成分的影响

目的研究水杨酸(salicylic acid,SA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对远志愈伤组织生长和相关酶活性及化学成分的影响。方法以远志继代愈伤组织为材料,加入SA(0、4、8、12、16、20、24、28、32mg/L)和MeJA(0、100、200、400、600、800、1 000μmol/L)不同浓度下暗培养30 d后,测定远志愈伤组织生长量、丙二醛(MDA)含量、抗氧化酶活性、总酚、总黄酮含量及远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖含量。结果 MeJA对远志愈伤组织的生长具有抑制作用,12 mg/L水杨酸(SA)对远志愈伤组织的生长具有促进作用。SA和MeJA对远志愈伤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性及丙二醛(MDA)含量均具有促进作用,且随着SA和MeJA浓度的增大,SOD、CAT、POD活性先上升后下降,MDA含量持续上升。SA质量浓度为20 mg/L时,CAT、SOD活性达到最大值,分别为248.45、4 451.06U/mg,SA质量浓度为16 mg/L时,POD活性达到最大值,为7.22 U/mg;SA质量浓度为32 mg/L时,MDA含量达到最大值,为25.09 nmol/mg;MeJA浓度为600μmol/L时,CAT、SOD、POD活性达到最大值,分别为273.30、1 451.06、15.27 U/mg;MeJA浓度为1 000μmol/L时,MDA含量达到最大值,为27.10 nmol/mg。SA对远志愈伤组织中总黄酮的积累具有抑制作用,对总酚无显著影响;MeJA对远志愈伤组织中总酚、总黄酮的积累具有促进作用,MeJA浓度为600μmol/L时,总黄酮含量最高;MeJA浓度为400μmol/L时,总酚含量最高。SA和MeJA均对远志愈伤组织中远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖的积累具有促进作用,SA浓度为32 mg/L时,远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖含量最高;MeJA浓度为1 000μmol/L时远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖含量最高。结论 MeJA对远志愈伤组织生长具有抑制作用,12 mg/L的SA对其具有促进作用。SA和MeJA对SOD、POD、CAT活性,MDA含量及远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖的积累均具有促进作用。SA对远志愈伤组织中总黄酮的积累具有抑制作用,对总酚无显著影响,MeJA对远志愈伤组织中总酚、总黄酮的积累具有促进作用。     

掌叶大黄种子特性研究及无菌培养体系的构建c

目的 研究掌叶大黄种子形态和发芽特性并构建无菌苗和愈伤组织培养体系，为其快繁和次生代谢调控研究提供基础。方法 从大小、净度、千粒质量、生活力、发芽率及发芽势等方面进行10批掌叶大黄种子特性分析；利用正交试验筛选大黄无菌苗建立的消毒体系及愈伤组织诱导的激素配比；HPLC法分析无菌苗和愈伤组织中10种有效成分的含量。结果 10批不同产地来源掌叶大黄的果实及种子外观形态无显著差异，含水量、生活力、发芽率及发芽势有明显差异，和政县与渭源县大黄发芽特性最高；75%乙醇30 s、10% H₂O₂ 15 min为大黄种子无菌苗建立的最佳消毒组合；愈伤组织诱导最佳激素为6-苄氨基腺嘌呤（1.0 mg/L）+6-糠氨基嘌呤（2.0 mg/L）+1-萘乙酸（1.5 mg/L）；不同消毒剂处理种子对无菌苗10种成分的积累无显著影响（P>0.05），愈伤组织可检测出7种有效成分，含量显著低于无菌苗，大黄酚-8-O-葡萄糖苷含量较其他成分高。结论 以千粒质量、生活力、发芽率及发芽势等指标明确甘肃和政县与渭源县种子特性优良，成功建立掌叶大黄无菌苗与愈伤组织培养体系，为掌叶大黄下一步研究奠定基础。     

提高芍药愈伤组织中芍药苷和芍药内酯苷的含有量

目的进一步优化芍药愈伤组织中积累芍药双苷(芍药苷和芍药内酯苷)的培养条件。方法以芍药愈伤组织中芍药双苷的量为响应值,采用Plackett-Burman实验设计对8个影响愈伤组织生长和芍药双苷积累的植物激素(NAA、2,4-D、6-BA、TDZ)的质量浓度、蔗糖的含有量、Ca2+量、NH4+∶NO3-的比例及光照中筛选出了3个关键因素,通过最陡爬坡逼近和响应面优化方法确定这些因素的最适水平。结果三个因素的最佳条件为:40.20 g/L蔗糖、0.33 mg/L 6-BA和1.08 mg/L NAA。结论在此最优培养条件下,芍药愈伤组织合成芍药双苷的能力比优化前提高了33%,芍药双苷占愈伤组织干重含有量达到37.60 mg/g。     

不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长及皂苷含量积累的影响

目的 研究不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累规律的影响.方法 改变培养基中碳源、氮源、磷酸盐、钙盐的浓度,比色法测定愈伤组织中皂苷的含量.结果 金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累的最适培养基成分为蔗糖40 g·L-1,KNO3∶NH4NO3为(1.9:1.65)g·L-1,1 mmol·L-1KH2PO4,4.5 mmol·L-1CaCl2.结论 蔗糖作为碳源最有利于金铁锁愈伤组织生物量的积累和金铁锁皂苷的生物合成.混合氮源有利于金铁锁愈伤组织生长和皂苷含量的积累.     

延胡索的组织培养和生物碱产生

培养基成分的正交设计和单因子试验表明:蔗糖、维生素、NH₄⁺K⁺、H2po^-和植物激素对延胡索愈伤组织生长和生物碱产生有明显影响。提示筛选合适培养基是促进细胞生长和生物碱产生的重要途径之一。定性定量分析表明,来源于块茎,地下茎和花瓣愈伤组织,都有产生生物碱的能力,愈伤组织在分化情况下,其生物碱组成与生药基本一致。     

杠柳细胞悬浮培养体系中蔗糖浓度与氮源的考察

 目的 考察MS培养基中蔗糖浓度和氨态氮与硝态氮的比例（NH⁺₄∶NO^-₃以及初始总氮量对杠柳悬浮细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛积累的影响。方法 以3%蔗糖浓度为对照,设置1%、2%、4%、5%浓度梯度;设置NH⁺₄-NO^-₃分别为0∶1、1∶0、2∶1、1∶1、1∶2共5个处理;总氮含量以MS基本培养基（总氮含量60 mmol·L^-1为对照,实验组总氮含量分别为对照组的1/4、1/2和2倍。结果 4%的蔗糖最有利于杠柳细胞生长,5%的蔗糖有助于杠柳毒苷的合成,3%的蔗糖有利于4-甲氧基水杨醛的合成,4%的蔗糖最有利于杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛产量的提高。NH⁺₄-NO^-₃ 为1∶2有助于细胞生长和杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的合成。总氮含量为N（60 mmol·L^-1时细胞生长最好;总氮含量为1/2N（30 mmol·L^-1时杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量最高,且产量也最高。结论 蔗糖浓度、氮源中氨态氮与硝态氮比例以及总氮含量的改变均可显著影响杠柳细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛的积累。     

短葶山麦冬愈伤组织诱导与多糖积累动态研究

目的:研究比较短葶山麦冬茎尖、叶片、块根和果实等不同外植体诱导发生愈伤组织的成功率及多糖积累动态状况。方法:比较2,4-D、蔗糖不同浓度及光照条件等对短葶山麦冬茎尖愈伤组织诱导及愈伤组织继代保持的影响,并对愈伤组织多糖含量动态变化及愈伤组织、试管苗和非试管苗块根中多糖进行了比较研究。结果与结论:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率高;2,4-D浓度为1.5～2.0 mg/L时有利于短葶山麦冬茎尖诱导愈伤组织,诱导率达87.5%。添加0.5～1.0 mg/L 2,4-D、20 g/L蔗糖时,茎尖愈伤组织的增殖系数最大,且愈伤组织形态和生长势良好。光照条件不影响愈伤组织的继代保持。茎尖愈伤组织中的多糖含量随培养时间的延长而增加,超过60d后,愈伤组织中多糖含量趋于稳定;培养40～60 d后多糖含量较高,此时愈伤组织生长达到最高速率。短葶山麦冬试管苗产生的块根中多糖含量高于非试管苗块根,愈伤组织多糖含量最低,但其生产多糖的速度较其他2种方式快。     

氮源和碳源对冬凌草愈伤组织生长及迷迭香酸的积累的影响

目的 研究碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长及其内迷迭香酸积累的影响.方法 改变培养基中蔗糖浓度和碳源种类,考察不同碳源及其浓度对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响.在总氮源不变的情况下改变NO3-/NH4+的比例,考察不同NO3-/NH4+比例对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响.结果 蔗糖是冬凌草愈伤组织培养中的最佳的碳源,其浓度为3%时,有利于冬凌草愈伤组织的生长和迷迭香酸的积累;NO3-/NH4+比例为1∶1时,愈伤增值倍数最高;NO3-/NH4+比例2∶1时,迷迭香酸的积累量最大.结论 实验确定了冬凌草愈伤组织培养的最佳碳源种类、浓度及氮源比例,表明不同碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长和次生代谢物合成有显著影响.     

丹参无菌培养体系构建及有效成分含量的HPLC分析

目的 构建丹参无菌培养体系并进行无菌材料有效成分含量测定,为丹参快繁及次生代谢调控研究提供基础。方法 利用正交实验筛选丹参叶片诱导愈伤组织的激素配比,并进行芽、根的诱导,建立组织培养体系;HPLC法分析有效成分含量。结果 丹参愈伤组织诱导最佳培养基为MS＋6-BA（2.0 mg/L）＋NAA（1.0 mg/L）＋2,4-D（0.5 mg/L）,最适生芽培养基为MS＋6-BA（2.0 mg/L）＋NAA（1.0 mg/L）,生根培养基为1/2 MS＋NAA（0.5 mg/L）。丹参7种有效成分在无菌苗、愈伤组织和再生苗中均可检测到,含量有显著差异（P<0.05）,其中迷迭香酸与丹酚酸B含量较高。结论 成功建立了丹参愈伤组织培养体系并获得生长旺盛的再生苗;3种无菌材料有效成分积累存在差异,为丹参进一步研究奠定基础。     

外源激素配比对药用植物锁阳愈伤组织诱导的影响

目的 筛选最佳激素组合,提高锁阳组织培养效率.方法 以锁阳肉质茎维管组织作为外植体,以MS为基本培养基,基于正交实验设计研究三种外源激素配比(NAA、2,4-D和6-BA)以及蔗糖和琼脂浓度对锁阳愈伤组织诱导的影响.结果 NAA、2,4-D和6-BA三种激素对锁阳愈伤组织诱导均有显著影响,不同激素之间对出愈率的作用效应大小为2,4-D ＞NAA＞6-BA,诱导锁阳愈伤组织最佳激素配比为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA(2.0mg/L).培养基中琼脂浓度和蔗糖浓度对锁阳愈伤组织诱导率有一定影响,蔗糖浓度以30g/L,琼脂浓度以4.5g/L时愈伤组织诱导率最高.结论 锁阳愈伤组织诱导最适培养基为MS+NAA (1.0mg/L)+2,4-D (1.5mg/L)+6-BA (2.0mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(4.5 g/L).     

新疆紫草愈伤组织高效诱导及快速增殖研究

 目的 高效诱导新疆紫草愈伤组织,并实现愈伤组织的快速增长。方法 用不同的培养基及不同的激素组合诱导外植体形成愈伤组织;用不同的蔗糖浓度和激素浓度研究愈伤组织的生长。结果 快速诱导愈伤组织的条件为:直接将种子(去皮)消毒后接种于改良N6培养基,添加激素NAA 0.4mg·L^-1+2,4-D 0.2mg·L^-1+KT1.0 mg·L^-1,pH值5.6,温度25℃,暗培养。愈伤组织的快速增长培养基为:改良N6培养基,添加KT 1.0 mg·L^-1,蔗糖浓度3％,pH值5.6,25℃,暗培养。结论 以去皮种子为外植体是新疆紫草愈伤组织高效诱导的关键,KT的浓度对愈伤组织快速增长起决定性作用。     

不同因子对长春花愈伤组织中药用成分积累的影响

 目的 研究继代次数、继代龄(继代组织块的年龄)、生长素、金属离子等因子的改变对长春花愈伤组织生长及吲哚生物碱类药用成分积累的影响。方法 测定不同因子的影响下,长春花愈伤组织的鲜重,并对吲哚总碱进行提取、含量测定和比较。结果 随继代次数的增加,长春花愈伤组织中吲哚总碱含量有所下降;20 d继代龄最利于组织生长;2,4-二氯苯氧乙酸的存在对吲哚总碱的积累有一定的抑制作用,但却有利于愈伤组织生长,两种生长素组合比单一的生长素更利于组织生长,也较利于吲哚总碱积累;钙离子浓度为220 mg·L^-1,锌离子浓度为8.6哗·L^-1时,对提高吲哚总碱产量最有效。结论 继代次数、继代龄、生长素、金属离子对长春花愈伤组织生长及吲哚生物碱类药用成分的积累有较大影响。     

秦艽愈伤组织缓慢生长保存及其生理指标研究△

目的:筛选秦艽愈伤组织缓慢生长保存的适宜方法,进一步研究保存后愈伤组织形态指标与生理指标之间的相关性。方法:向培养基中添加不同浓度生长抑制剂、高渗化合物及不同基本培养基保存秦艽愈伤组织,在室温下保存6个月后统计愈伤组织的形态学指标。测定不同浓度甘露醇、矮壮素和蔗糖处理中秦艽愈伤组织的生理指标。结果:1.0mg·L-1ABA和9%蔗糖处理中愈伤表面产生大量胚状体,生长良好。5%甘露醇和PEG处理中愈伤黄绿色,生长良好。PP333中愈伤生长一般,CCC中愈伤老化。9%蔗糖处理中可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质含量明显高于其它浓度和甘露醇、矮壮素处理。结论:1.0mg·L-1ABA,9%蔗糖保存秦艽愈伤组织效果最好;5%甘露醇和PEG保存效果良好。可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质3个生理指标可以在一定程度上反映秦艽愈伤组织在延缓保存时的存活情况。     

秦艽愈伤组织缓慢生长保存及其生理指标研究

目的：筛选秦艽愈伤组织缓慢生长保存的适宜方法,进一步研究保存后愈伤组织形态指标与生理指标之间的相关性。方法：向培养基中添加不同浓度生长抑制剂、高渗化合物及不同基本培养基保存秦艽愈伤组织,在室温下保存6个月后统计愈伤组织的形态学指标。测定不同浓度甘露醇、矮壮素和蔗糖处理中秦艽愈伤组织的生理指标。结果：1.0 mg·L-1 ABA和9%蔗糖处理中愈伤表面产生大量胚状体,生长良好。5%甘露醇和PEG处理中愈伤黄绿色,生长良好。PP333中愈伤生长一般,CCC中愈伤老化。9%蔗糖处理中可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质含量明显高于其它浓度和甘露醇、矮壮素处理。结论：1.0 mg·L-1ABA,9%蔗糖保存秦艽愈伤组织效果最好;5%甘露醇和PEG保存效果良好。可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质3个生理指标可以在一定程度上反映秦艽愈伤组织在延缓保存时的存活情况。     

土贝母组织培养的研究

目的:研究土贝母茎段、叶片外植体愈伤组织的诱导和培养方法及其与土贝母皂苷积累的关系。方法:在MS或B₅培养基上,试验不同种类、不同含量的植物生长物质及其组合对土贝母茎段和叶片愈伤组织诱导和增殖的影响。结果:茎段愈伤组织诱导的最佳培养基配方是MS附加2,4-D 2.0 mg.L^-1,NAA 0.5 mg.L^-1和BA 1.0mg.L^-1;叶片愈伤组织诱导的最佳培养基配方是MS附加2,4-D 0.5 mg.L^-1和NAA 2.0 mg.L^-1。愈伤组织在MS附加2,4-D 2.0 mg.L^-1,NAA 0.5 mg.L^-1和BA 1.0 mg.L^-1的培养基上积累土贝母皂苷的含量最高;在B5附加2,4-D2.0 mg.L^-1,NAA 0.5 mg.L^-1和BA 1.0 mg.L^-1的培养基上经多次继代培养后,可形成较为均一、稳定的愈伤组织系。结论:建立了土贝母茎段、叶片外植体愈伤组织的诱导和培养方法,为植物组织细胞培养生产土贝母皂苷提供实验依据。     

植物生长物质对红景天愈伤组织诱导和培养的影响

目的:考察植物生长物质对四裂红景天愈伤组织诱导和培养的影响并分析愈伤组织中红景天苷含量。方法:运用正交设计实验,在MS固体培养基中添加不同种类、不同含量的植物生长物质,进行愈伤组织的诱导和培养,并用HPLC检测愈伤组织中红景天苷的含量。结果:培养基中含有2,4-D1mg·L^-1,NAA2mg·L^-1,6-BA0.5mg·L^-1,KT0.1mg·L^-1时,愈伤组织诱导效果最好,诱导率为83.3%。当生长物质配比为2,4-D1mg·L^-1,6-BA0.1mg·L^-1和KT0.5mg·L^-1时,最适于愈伤组织的培养,培养30d后干重达11.77g·L^-1,红景天苷的含量为干重的0.28%。结论:红景天愈伤组织在诱导和培养2个阶段所需的生长物质种类和含量有很大差异;诱导的愈伤组织能够合成红景天苷。