正常高值血压痰湿壅盛证大鼠模型的建立及代谢组学分析

目的 通过构建正常高值血压痰湿壅盛证大鼠模型，分析该模型大鼠的血清代谢物，阐释正常高值血压痰湿壅盛证大鼠模型的代谢特征。方法 采用纯化高脂饲料喂养及腹腔注射Nω-硝基-L-精氨酸（L-NNA，剂量7.625 mg·kg^-1）的方式构建模型，正常组大鼠喂养普通生长繁殖饲料并腹腔注射等量生理盐水，通过观察两组大鼠一般情况，测量大鼠体质量和尾动脉血压，检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血糖、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量对模型进行评价；运用液相色谱-质谱联用技术分析大鼠血清代谢物变化，采用流动相0.05%甲酸水溶液（A）-0.05%甲酸乙腈溶液（B）梯度洗脱（0~3 min，2%B；3~9 min，2%~40%B；9~18 min，40%~98%B），电喷雾离子源（ESI），正、负离子模式检测，采集范围m/z 80~1 000；结合单变量和多变量统计分析筛选组间差异代谢物并进行代谢通路富集分析。结果 与正常组比较，模型组大鼠毛色较暗、懒动、便溏，血压稳定保持在160/88 mmHg左右（1 mmHg≈0.133 kPa），体质量、血糖、TG、TC、LDL-C、MDA含量明显升高（P<0.05，P<0.01），GSH-Px含量显著降低（P<0.01）；正、负离子模式下共筛选出差异代谢物115个，其中45个上调，70个下调［变量投影重要性（VIP）值>1，P<0.05且差异倍数（FC）≥2］，包括吲哚乙醛、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、黄嘌呤等，主要通过甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、色氨酸代谢、花生四烯酸代谢等途径调控血压。结论 采用纯化高脂饲料喂养结合腹腔注射L-NNA的方式可以成功构建正常高值血压痰湿壅盛证大鼠模型，吲哚乙醛、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、黄嘌呤可作为该模型大鼠特征性血清差异代谢物。     

主动脉弓缩窄术建立心力衰竭大鼠模型的病理过程观察与非靶向代谢组学分析

目的 研究主动脉弓缩窄（TAC）致大鼠心力衰竭的病理过程与心肌组织代谢产物变化规律。方法 对大鼠进行TAC术，术后分为TAC-30 d组与TAC-60 d组，另设立同时段的假手术组作对照。对各组大鼠进行超声心动图和心肌组织病理染色；利用酶联免疫吸附测定法检测血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）和三磷酸腺苷（ATP）含量；液相色谱-质谱联用技术观察心肌组织代谢产物与关联通路的变化特征，流动相水（A，含25 mmol·L^-1乙酸铵和25 mmol·L^-1氨水）-乙腈（B）梯度洗脱（0~0.5 min，95%B；0.5~7 min，95%~65%B；7~8 min，65%~40%B；8~9 min，40%B；9~9.1 min，40%~95%B；9.1~12 min，95%B），电喷雾离子源，正、负离子检测模式，采集范围m/z 70~1 050。结果 与假手术30 d组比较，TAC-30 d组的左室收缩末期内径（LVIDs）显著下降（P<0.01），左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（FS）、左室后壁舒张末期厚度（LVPWd）、左室后壁收缩末期厚度（LVPWs）显著上升（P<0.01）；心肌细胞排列紊乱、水肿，胶原纤维增生；NT-proBNP含量显著上升、ATP含量显著下降（P<0.01）；15种代谢产物表达异常，涉及嘧啶代谢通路、泛酸和辅酶A生物合成通路。与假手术60 d组比较，TAC-60 d组的LVEF、FS显著下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、LVIDs、LVPWd明显上升（P<0.05，P<0.01）；心肌细胞水肿明显增大，肌纤维变性，出现凝固性坏死，大量胶原纤维沉积；NT-proBNP含量显著上升、ATP含量显著降低（P<0.01）；21种代谢产物表达异常，涉及嘧啶代谢通路、淀粉和蔗糖代谢通路。结论 TAC术后30 d为心肌肥厚阶段，脂代谢障碍，嘧啶代谢紊乱，能量失衡；TAC术后60 d为心力衰竭阶段，脂代谢障碍加重，糖代谢过度激活，嘧啶代谢持续紊乱。     

基于代谢组学和网络药理学探究人参固本口服液治疗肾纤维化的作用机制

目的 基于代谢组学和网络药理学开展人参固本口服液治疗肾纤维化小鼠的作用机制研究。方法 将36只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、人参固本口服液组,除空白组外,均采用单侧输尿管结扎术制备小鼠单侧输尿管梗阻模型。术后人参固本口服液组灌胃给予4.2 g·kg^-1浸膏粉的水溶液,连续给药14 d,空白组和模型组灌胃给予等量蒸馏水。末次给药后,收集尿液,采用超高效液相色谱-三重四极杆-串联质谱法（UPLC-QQQ-MS/MS）进行检测,以0.1%甲酸水溶液为流动相A,乙腈-异丙醇（70∶30）为流动相B,梯度洗脱（0~1 min,5%B;1~5 min,5%~30%B;5~9 min,30%~50%B;9~11 min,50%~78%B;11~13.5 min,78%~95%B;13.5~14 min,95%~100%B;14~16 min,100%B;16~16.1 min,100%~5%B;16.1~18 min,5%B）,柱温40 ℃,流速0.4 mL·min^-1,电喷雾离子源（ESI）,采集范围m/z 50~900;通过网络药理学对人参固本口服液成分的靶点与肾纤维化的靶点进行交互分析,网络拓扑分析筛选出关键成分和关键靶点,采用功能注释生物信息学分析数据库（DAVID）预测人参固本口服液治疗肾纤维化的信号通路。结果 共鉴定出人参固本口服液治疗肾纤维化的7个差异代谢物,涉及8条代谢通路。网络药理学分析发现,人参固本口服液中36个核心成分与该7个差异代谢物相关,主要为人参皂苷类、三七皂苷类及核苷酸类化合物。基于“药材-成分-靶点-通路”网络,共筛选出23个关键靶点,与差异代谢物共同涉及亚油酸代谢、精氨酸生物合成、三羧酸循环（TCA）、精氨酸与脯氨酸代谢等通路。结论 该研究基于代谢组学与网络药理学技术,确定了人参固本口服液治疗肾纤维化中7个差异代谢物、36个潜在药效成分、23个核心靶点和4条关键通路,可为该药的临床应用及机制研究提供实验依据。     

基于“方证对应”理论探讨主动脉弓缩窄致心力衰竭大鼠模型的中医证型与代谢标志物

目的 观察3种中药注射液对主动脉弓缩窄（TAC）致心力衰竭大鼠模型的疗效差异，基于“方证对应”理论探讨模型的中医证型，从代谢角度揭示方证的生物学基础。方法 对大鼠进行TAC术，造模成功将其后分为模型组、丹红注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参麦注射液组（6.0 mL·kg^-1）、参附注射液组（6.0 mL·kg^-1）和曲美他嗪组（10 mg·kg^-1），另设立假手术组作对照。药物干预15 d后，对各组进行超声心动图、血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）与心肌组织病理染色检测，对比疗效以遴选有效注射液；运用比色法检测有效注射液干预后的血清糖脂代谢指标，利用超高效液相色谱-质谱法观察心肌组织代谢产物与关联代谢通路。结果 与假手术组比较，模型组左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（FS）显著下降（P<0.01），左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）和NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）。与模型组比较，丹红注射液组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDd、LVIDs、NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）；参附注射液组的NT-proBNP水平明显下降（P<0.05）；参麦注射液组的LVIDd明显上升（P<0.05），NT-proBNP水平显著上升（P<0.01）；曲美他嗪组LVEF和FS显著上升（P<0.01），LVIDs和NT-proBNP水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。丹红注射液组与曲美他嗪组的血清葡萄糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平明显回调（P<0.05，P<0.01）；丹红注射液组的9种心肌产物回调，涉及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，乙醛酸和二羧酸酯代谢，甘油磷脂代谢；曲美他嗪组的10种心肌产物回调，涉及甘油磷脂代谢。结论 丹红注射液对TAC致心力衰竭模型的疗效显著且优于参附注射液与参麦注射液，推测该模型与心血瘀阻证密切关联；丹红注射液干预模型的生物学机制涉及调节糖脂代谢、氨基酸代谢、丁酸代谢紊乱。     

基于代谢组学和网络药理学探讨细辛-干姜药对对COPD大鼠肺、肝脂质代谢的影响

目的 探讨细辛-干姜药对（XGHP）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺、肝脏脂质代谢的影响。方法 40只SD雄性大鼠，分为正常组（10只）和模型组（30只），采用香烟烟雾+气管注射脂多糖（LPS）+冷刺激复制COPD寒饮伏肺证模型，造模成功后分COPD组、XGHP组（5.4 g·kg^-1·d^-1），氨茶碱组（0.5 g·kg^-1·d^-1），各10只，治疗结束后，检测各组大鼠血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）检测各组大鼠肺、肝组织的差异代谢物，网络药理学预测差异代谢物的靶点，取两脏交集靶点，作基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。分子对接计算XGHP中的主要成分与网络药理学中相关靶点的结合能力。运用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺、肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）、脂肪酸结合蛋白4（FABP4）mRNA和蛋白表达水平。结果 XGHP明显升高COPD大鼠血清中的TG、TC、LDL-C的水平（P<0.05），明显降低HDL-C的水平（P<0.05）。GC-MS分析，COPD组和XGHP组中肺脏差异代谢物有8个，肝脏差异代谢物17个。网络药理学预测两脏差异代谢物的共同靶点59个，主要富集在PPAR信号通路。分子对接结果显示，XGHP中的主要成分与PPARα、FABP4均结合良好。Real-time PCR和Western blot结果显示XGHP能有效上调COPD大鼠肺、肝组织PPARα、FABP4 mRNA和蛋白表达水平（P<0.05）。结论 XGHP能改善COPD大鼠血脂水平，可能与增加PPAR信号通路上PPARα、FABP4 mRNA和蛋白的表达水平相关，从而调节肺脏和肝脏脂质代谢。     

基于非靶向代谢组学的肝阴虚小鼠模型评价

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS），从非靶向代谢组学的角度评价甲状腺片混悬液联合10%四氯化碳（CCl₄）建立小鼠肝阴虚模型的情况，为中医证候模型的建立奠定基础。方法 将24只雄性ICR小鼠随机平均分为空白组、模型组，模型组连续14 d灌胃甲状腺片混悬液（0.003 2 g·kg^-1）且每周1次腹腔注射10% CCl₄（5 mL·kg^-1）建立肝阴虚模型，空白组仅腹腔注射等量橄榄油并灌胃等量蒸馏水，实验期间喂食正常饲料，造模完成后每组随机选取6只小鼠生化检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、白细胞介素（IL）-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及肝脏中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、总蛋白（TP）、羟脯氨酸（HYP）等指标的水平。取肝组织切片进行苏木素-伊红（HE）染色并观察病理变化。每组剩余6只小鼠采用UPLC-Q-TOF-MS结合主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）筛选肝阴虚小鼠模型的差异代谢物，利用京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库分析差异代谢物的相应代谢通路。结果 与空白组比较，模型组小鼠出现体质量减轻，疲倦易困，毛发杂乱无光泽，尿液增多，易怒等肝阴虚表现；生化指标ALT、cAMP/cGMP、IL-6、AST、MDA、cAMP、TNF-α明显升高（P<0.05，P<0.01），SOD、IL-10、cGMP明显降低（P<0.05，P<0.01），HYP、TP变化差异无统计学意义；模型组切片图可见肝脏脂肪变性，肝板细胞的放射状排列出现扭曲；内源性物质分离明显，血清样品中鉴别出252个差异代谢物，主要涉及嘌呤代谢、类固醇激素生物合成、嘧啶代谢等代谢途径；肝脏样品中鉴别出229个差异代谢物，主要涉及核苷酸代谢、嘌呤代谢、类固醇激素生物合成、嘧啶代谢、抗叶酸耐药、胰岛素抵抗、初级胆汁酸生物合成、前列腺癌症、硫中继系统、花生四烯酸代谢等代谢途径。结论 通过血清、肝脏代谢组学分析，结合生化指标检测，成功建立并评价了CCl₄联合甲状腺激素的小鼠肝阴虚模型，为中医阴虚证候模型提供生物学依据及实验基础。     

柴芍六君汤对慢性萎缩性胃炎肝郁脾虚证模型大鼠胃黏膜组织代谢物表达的影响＊

目的 从代谢组学角度探讨柴芍六君汤改善慢性萎缩性胃炎（CAG）肝郁脾虚证大鼠代谢紊乱的可能作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白组10只、造模组22只。造模组采用化学诱导、饥饱失常和夹尾刺激法建立CAG肝郁脾虚证大鼠模型，造模10周后进行模型评价。将成模大鼠随机分为模型组和柴芍六君汤组，每组10只。柴芍六君汤组予浓度为0.51 g·mL^-1柴芍六君汤10 mL·kg^-1·天^-1灌胃，空白组和模型组予等体积灭菌饮用水灌胃，共给药4周。一般行为学观察，苏木素-伊红（HE）染色观察胃黏膜组织病理形态，核磁共振氢谱技术（¹H-NMR）识别胃黏膜组织代谢物表达变化，代谢通路分析。结果 造模组大鼠神态疲惫，行为抑郁，大便溏结不调，胃黏膜固有腺体明显萎缩、炎性细胞浸润，符合CAG肝郁脾虚证表现。经柴芍六君汤给药后，模型大鼠一般行为学和胃黏膜组织病理改善。¹H-NMR代谢组学检测出15个与CAG肝郁脾虚证密切相关的胃黏膜组织代谢物，柴芍六君汤干预后回调泛酸、2-羟基丁酸、甲基丙二酸、甲硫醇、乳酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、溶血磷脂酰胆碱、谷氨酸、N-乙酰基天冬氨酸、顺式5-四氢十六烷基肉碱、腺苷、脂质含量（P < 0.05或P < 0.01），共得到D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，精氨酸生物合成代谢这3条关键代谢调节通路。结论 柴芍六君汤能够保护和修复CAG肝郁脾虚证模型大鼠胃黏膜，回调差异代谢物的紊乱，其主要治疗机制可能与D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、精氨酸生物合成代谢通路调控有关。     

基于血清代谢组学和流式细胞术探讨百药煎不同炮制品及其复方治疗溃疡性结肠炎作用机制

目的 通过比较百药煎不同炮制品及其复方香梅丸对溃疡性结肠炎（UC）大鼠的药效学与代谢组学差异,探讨其治疗UC的潜在作用机制。方法 80只SD大鼠适应性饲养3 d,随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组（0.4 g·kg^-1）,百药煎组（1.89 g·kg^-1）、焦百药煎组（1.89 g·kg^-1）、百药煎炭组（1.89 g·kg^-1）、香梅丸低、高剂量组（1.89、5.67 g·kg^-1）,每组10只。空白组灌胃给予生理盐水,其余7组每日灌胃给予5%右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液5 mL,连续给药8 d,诱导UC模型。造模完成后,各给药组分别灌胃给予相应剂量药液,空白组和模型组灌胃等量生理盐水,连续给药8 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-10、IL-1β水平;苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理变化;流式细胞仪检测各组大鼠外周血中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）比例;利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）检测大鼠血清代谢物,结合主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）对差异代谢物进行表征,根据变量重要性投影（VIP）值>1.0且P<0.05筛选差异代谢物,根据人类代谢组数据库（HMDB）分析潜在代谢通路。结果 与空白组比较,模型组结肠组织充血,黏膜可见溃疡,结肠长度显著降低（P<0.01）,质量明显升高（P<0.05）,外周血中Th17/Treg比例明显升高,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高,IL-10水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,各给药组UC大鼠结肠组织病理均有改善,散在溃疡,炎性细胞浸润减少,结肠长度明显升高,质量明显降低（P<0.05）,外周血中Th17/Treg比例明显降低,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,IL-10水平显著升高（P<0.01）。不同给药组治疗UC效果为香梅丸高剂量组>香梅丸低剂量组>百药煎炭组>焦百药煎组>百药煎组。代谢组学结果共筛选出26个差异代谢物,与空白组比较,模型组中有14个代谢物上调,5个代谢物下调,百药煎组、焦百药煎组、百药煎炭组、香梅丸低、高剂量组可分别回调14、9、14、12、17个代谢物。主要涉及柠檬酸盐循环通路、泛酸和辅酶A生物合成通路、芳香烃受体（AhR）信号通路、糖酵解/糖异生通路等代谢通路。结论 百药煎炒炭后治疗UC效果明显提高,与白芷和乌梅炭配伍后疗效更加突出,可为百药煎复方制剂的开发提供依据。     

关黄柏水提物在大鼠血清、尿液和粪便中原型成分及其代谢产物的UPLC-Orbitrap Fusion Lumos Tribrid-MS鉴定

目的 应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱质谱法（UPLC-Orbitrap Fusion Lumos Tribrid-MS）分析关黄柏水提物在正常大鼠血清、尿液及粪便中的原型成分及其代谢物,探讨关黄柏在大鼠体内的药效物质基础。方法 采用ACQUITY UPLC^? CSH^TM C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0~15 min,2%~25%B;15~25 min,25%~50%B;25~28 min,50%~98%B）,流速0.3 mL·min^-1,进样量10 μL,柱温40 ℃。运用加热电喷雾离子源（HESI）,扫描范围m/z 100~1 000,正离子模式采集数据。通过比较给药后样品和空白样品的差异,对灌胃给予关黄柏水提物后大鼠血清、尿液和粪便中的原型成分及其代谢产物进行鉴定。结果 灌胃给予关黄柏水提物后,从大鼠血清、尿液及粪便中鉴定和表征了70个外源性成分,包括15个原型成分和55个代谢产物。其中15个原型成分包括12个生物碱和3个柠檬苦素,55个代谢产物包括52个生物碱和3个柠檬苦素。关黄柏水提物在大鼠体内的代谢途径主要包括脱饱和、甲基化、氧化、硫酸化及葡萄糖醛酸结合等反应。结论 生物碱在大鼠体内进行Ⅰ相代谢和Ⅱ相代谢,柠檬苦素类在大鼠体内主要进行Ⅰ相代谢,可为进一步解析关黄柏体内过程,阐明其药效物质基础提供实验依据。     

基于尿液代谢组学探究龟龄集中附子炮制方法的减毒机制

目的 利用代谢组学方法，通过分析多条代谢通路，从氨基酸代谢、氧化应激和能量代谢等方面揭示附子炮制减毒的作用机理。方法 将24只大鼠随机分为空白组、生品组、炮制品组（附子醋制后蜜制），每组8只，生品组和炮制品组每天分别灌胃0.64 g·kg^-1的附子生品和附子炮制品，空白组每天灌胃等量生理盐水，连续给药7 d后，收集大鼠尿液、血清及心脏组织，利用苏木素-伊红（HE）染色法对心脏进行病理学检查，采用微板法和免疫抑制法分别对血清和心脏组织中的乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶同工酶（CK-MB）进行活性检测，比较附子炮制前后对大鼠心脏的影响；应用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）进行尿液代谢组学分析，利用多元统计分析筛选与附子炮制减毒相关的差异代谢物，并进行通路富集分析，探究附子炮制减毒的作用机制。结果 大鼠心脏组织HE染色结果显示，生品组大鼠的心脏组织可见明显的浆细胞、粒细胞等炎性细胞浸润的现象，表明生附子具有心脏损伤性；炮制品组大鼠的心脏组织HE染色结果与空白组无明显差异，表明经过炮制之后附子毒性明显降低。与空白组比较，生品组大鼠血清及心脏组织中LDH和CK-MB活性明显上升（P<0.05），炮制品组大鼠血清及心脏组织中LDH和CK-MB活性明显下降（P<0.05），提示炮制后附子的心脏损伤性降低。尿液代谢组学共筛选了108个附子生品明显影响的内源性代谢物，其中附子炮制品明显回调了其中51个差异代谢物，通路富集结果显示，与生附子毒性相关的通路主要包括色氨酸代谢，精氨酸和脯氨酸代谢，苯丙氨酸代谢，氨酰tRNA生物合成，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等，炮制品附子减毒相关的体内代谢通路主要包括氨酰tRNA生物合成代谢，色氨酸代谢，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，苯丙氨酸代谢，咖啡因代谢等。结论 龟龄集中所载附子醋制后蜜制的炮制工艺可明显减弱作用生附子的心脏损伤性，减毒机制主要涉及氨基酸代谢、氧化应激和能量代谢等方面，为附子炮制减毒机制及临床安全应用相关研究提供实验依据。