siRNA对人红白血病细胞株（K562／ADM）阿霉素耐药性的影响

目的：研究小分子干扰RNA片段（small interfering RNA，siRNA）对人红白血病细胞株（K562／ADM）细胞mdr1基因表达及功能的影响，探索一新的耐药的逆转途径。方法：siRNA根椐GeneBank已知序列设计，在脂质体介导下转染K562／ADM细胞：用流式细胞仪检测K562／ADM细胞Pgp的表达及细胞周期的改变；用TUNEL法检测其凋亡；用MTTT检测其对阿霉素ADM的敏感性。结果：siRNA转染后K562／ADM细胞Pgp的表达明显下降，凋亡率明显提高，对阿霉素ADM的敏感性明显提高。结论：siRNA有效逆转了mdr1介导的耐药性，不失为一种新型、有效的肿瘤耐药逆转途径。     

mdr1单因素耐药白血病细胞株的构建

目的 构建mdrl单因素耐药白血病细胞株,为研究RNA干扰逆转mdr1所致耐药提供细胞模型。方法 将含mdr1 cDNA全长的真核表达载体通过脂质体转染人对化疗药物敏感的K562细胞内,G418筛选获得转基因单克隆细胞．用RT-PCR检测有无mdr1表达、流式细胞技术检测细胞表面P-gp蛋白含量、Rh123泵出实验检测P-gp功能、MTT检测细胞对药物的敏感性。结果 转mdr1基因细胞K562／mdr1能较高水平表达mdr1,明显表现出对化疗药物的耐药性。结论 通过转基因方法构建mdr1单因素耐药细胞株可为RNA干扰逆转mdr1提供更精确的细胞研究模型。     

SiRNA逆转人红白血病细胞株(K562/ADM)阿霉素耐药性的实验研究

目的:研究小分子干扰RNA片段(small inteffering RNA,siRNA)对人红白血病细胞株K562/ADM细胞mdr1基因表达及药物敏感性的影响,探索新的耐药逆转途径.方法:siRNA根椐GeneBank已知序列设计,在脂质体介导下转染K562/ADM细胞;用流式细胞仪检测K562/ADM细胞Pgp的表达;用MTT检测其对阿霉素ADM的敏感性;用PCR-ELISA法检测K562/ADM细胞的端粒酶活性.结果:siRNA转染后K562/ADM细胞Pgp的表达明显下降,对阿霉素ADM的IC50从8.7μg/ml降到5 μg/ml,端粒酶活性明显下调.结论:siRNA有效逆转了mdr1介导的耐药性,不失为一种新型、有效的肿瘤耐药逆转途径.     

多药耐药mdr-1基因体外转染兔骨髓造血细胞及其表达与功能的研究

目的：探讨浓缩病毒上清转染法在体外将多药耐药mdr—1基因转入兔骨髓造血细胞的条件及检测转染后mdr—1基因在兔骨髓造血细胞中的表达及功能。方法：用秋水仙碱(90ng／ml)筛选含人类全长mdr—1cDNA的产病毒包装细胞PA317—HaMDR1／A1后进行细胞培养并制备浓缩病毒上清。采集新西兰大白兔骨髓并分离富含造血细胞的单个核细胞。骨髓造血细胞与浓缩病毒上清及细胞因子组合共培养。采用免疫组织化学法检测转染率，PCR法检测外源性mdr—1基因的整合，柔红霉素(daunorubicin DNR)泵出试验检测导入的mdr—1基因的功能。结果：秋水仙碱筛选后，产病毒包装细胞P糖蛋白(P-g;ucp[rpteom P-gp)表达增强：外源性mdr—1基因能成功的导入兔骨髓造血细胞，转染2日、4日、6日的转染率分别为22％、37％、39％，但转染4日组细胞生长状态最好；转入的mdr—1基因能发挥药物外排泵的功能。结论：采用浓缩病毒上清转染法能成功的将外源性mdr—1基因导人兔骨髓造血细胞中并获得稳定的功能性表达，为进一步研究mdr—1基因转染骨髓造血细胞后自体回输在大剂量化疗中对骨髓保护作用的研究提供了依据。     

槲皮素对K562/A02细胞多药耐药基因及糖蛋白表达的影响

目的：观察槲皮素对K562耐药细胞多药耐药基因及蛋白表达的影响，探讨其临床应用的可能性。方法：以浓度为0．5～100μmol／L的槲皮素处理K562／A02细胞，24h后，采用逆转录-多聚酶链反应(RTPCR)方法检测细胞内mdrl基因表达，应用流式细胞仪检测P糖蛋白(Pgp)含量变化。结果50μmol／L以上浓度处理组的mdrl基因表达较空白对照组明显下调。经0．5～100μmol／L槲皮素处理的K562／A02细胞荧光标记Pgp有随槲皮素浓度增加而减弱的趋势。结论：较高浓度的槲皮素可下调K562／A02细胞mdrl基因的表达。槲皮素可下调K562/A02细胞Pgp的表达。     

Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控

目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。     

MDR1、GSTπ特异性siRNA真核表达载体的构建及表达

目的构建多药耐药基因（MDR1）、谷胱甘肽S-转移酶（GSTπ）特异性小干扰RNA（siRNA）真核表达载体并检测其表达.方法参照siRNA模板设计原则,设计并化学合成2条siRNA模板序列,退火后将其插入质粒pSilencer2.1-U6,限制性酶切和基因测序进行鉴定.脂质体介导下转染K562/Adr细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1、GSTπ mRNA的表达,荧光免疫组化检测Pgp、GSTπ蛋白的表达.结果重组质粒pSilencer2.1-MDR1、GSTπ经酶切、测序分析表明siRNA模板序列成功插入预计位点,并且序列正确.用pSilencermdr1、pSilencer2.1-GSTπ分别转染K562/Adr细胞株,mdr1 mRNA表达量下降了71.5%,GSTπ mRNA表达量下降了39.8%,荧光免疫组化显示Pgp、GSTπ表达均显著减少（P＜0.01）.结论成功构建了MDR1、GSTπ特异性siRNA真核表达载体,该载体可不同程度逆转K562/Adr细胞的多药耐药.     

抗BCR-ABL mRNA核酶诱导K562细胞凋亡效应的研究

目的探索利用抗慢性髓细胞性白血病BCR-ABL mRNA的核酶表达载体转染K562细胞诱导细胞凋亡的效应.方法应用X-tremeGENEQ2介导pAVGS4转染K562细胞,设置空载体作为对照,在转染后的24、48、72和96 h分别用Annexin V PI双染色、TUNEL等法通过流式细胞仪检测K562细胞凋亡率的变化,在转染后72 h利用电子显微镜观察细胞形态学变化.结果pAVGS4转染K562细胞72 h,电镜显示实验组可见大量典型的凋亡细胞,而对照组凋亡细胞少见;Annexin V PI和TUNEL法通过流式细胞仪检测均发现在转染后24 h,实验组和对照组K562细胞的凋亡率无明显差别(P＞0.05),随着转染后时间的推移实验组细胞凋亡率进行性增加,而空载体对照组的凋亡率变化不大.结论pAVGS4可有效诱导K562细胞发生凋亡,核酶M1RNA有望成为分子靶向治疗有用的工具之一.     

WT1基因特异性siRNA对K562细胞表达及增殖的影响

目的:研究WT1基因特异性小干扰RNA (small RNA interference, siRNA)对K562细胞表达及增殖的影响,为白血病的基因治疗提供新的思路.方法:以慢性粒细胞白血病细胞系-K562为研究对象,化学合成并转染针对K562细胞WT1基因的siRNA,倒置显微镜观察细胞的生长状态及形态学改变;MTT法检测细胞增殖状态;半定量RT-PCR检测siRNA对WT1基因表达的抑制作用;流式细胞仪法检测K562细胞凋亡.结果:siRNA转染K562细胞后, 细胞生长受抑,增殖能力减弱,其增殖抑制作用于转染后48、72 h最明显, 增殖抑制率分别为50.6%和54.1%.半定量RT-PCR显示WT1mRNA表达水平明显低于对照组;WT1 siRNA转染48 h后有42.19 %的K562细胞发生凋亡.结论:WT1基因特异性siRNA可显著抑制K562细胞增殖,促进凋亡,为白血病的基因治疗提供了新的思路.     

细胞因子诱导K562/MDR1分化为具有多药耐药特征的树突状细胞的实验研究

目的:研究多药耐药基因1( multidrug resistance genel,MDR1)转染的K562细胞是否能够在细胞因子诱导下向树突状细胞(DC)诱导分化,获得多药耐药特性的K562来源的DC.方法:将K562/MDR1和K562细胞分别用GM-CSF+ IL-4诱导培养DC,并以TNF-α促进DC成熟,于第14天收获细胞K562/MDR1 -DC及K562-DC.通过流式细胞仪(FCM)检测细胞分化前后的CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-ABC和HLA-DR的表达;异基因混合淋巴细胞反应(Allo-M LR)检测其抗原递呈功能;流式细胞仪检测PgP的表达及细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积浓度;MTT法测定K562/MDR1 -DC及K562-DC对化疗药物长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)的IC50.结果:K562/MDR1和K562细胞均能在适当细胞因子组合下分化为具有DC形态特征和表型特征的K562/MDR1 -DC及K562-DC,K562/MDR1 -DC在Allo-MLR反应中显示出比K562-DC更强的抗原递呈功能.与K562-DC相比,K562/MDR1 -DC具有膜PgP分子的高表达和对胞内DNR的外排作用,对化疗药物VCR、ADM有较高的IC50.结论:转染MDR1基因不影响K562向树突状细胞分化的能力;并且K562/MDR1-DC具有Pgp的高表达,获得多药耐药特征.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。