益气解毒中药清金得生片诱导人肺腺癌细胞株HSP70表达的研究

目的探讨清金得生片治疗肺腺癌的作用机制。方法采用MTT比色及免疫组织化学染色(SABC)法检测清金得生片药物血清对人肺腺癌细胞株的抑制率及HSP70表达水平。结果清金得生片药物血清能促进人肺腺癌细胞株HSP70表达,并呈药物血清浓度依赖性地抑制人肺腺癌细胞株生长。结论清金得生片可能是通过诱导人肺腺癌细胞株HSP70表达的免疫效应而达到治疗肿瘤作用。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

清金得生片联合化疗对Lewis荷瘤小鼠Fas、FasL mRNA表达的影响

目的 观察清金得生片联合化疗对Lewis荷瘤小鼠Fas、FasL mRNA表达的影响。方法 Lewis肺癌荷瘤小鼠随机分为模型组、清金组、顺铂组、清金加顺铂组,给药10 d后,取肿瘤组织,采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠Fas、FasL mRNA的表达。结果 清金加顺铂组瘤体组织Fas mRNA的表达显著高于模型组(P ＜ 0.05),各给药组间差异无统计学意义;与模型组比较,清金组、顺铂组、清金加顺铂组瘤体组织FasL mRNA的表达差异均有统计学意义(P ＜ 0.05),各给药组间差异无统计学意义。结论 清金得生片联合化疗的抗肿瘤作用与调节Fas/FasL系统,从而逆转肿瘤的免疫逃逸有关。     

金复康口服液对裸鼠人肺腺癌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨金复康口服液诱导裸鼠人肺腺癌LAX-83移植瘤细胞凋亡的作用及其分子机制。方法以LAX-83人肺腺癌瘤株在裸鼠皮下移植传代,将造模的裸鼠随机分为荷瘤对照组、金复康治疗组、顺氨氯铂(DDP)对照组。药物干预21d后,观察各组裸鼠瘤重及抑瘤率,并检测肿瘤组织中细胞凋亡情况及凋亡相关基因的蛋白表达。结果金复康治疗组抑瘤率为49.64%,平均瘤重与荷瘤对照组比较有显著差异(P<0.05),与DDP对照组比较无显著性差异(P>0.05);电镜下可见典型的早期凋亡细胞和凋亡小体。FCM检测细胞凋亡率为(17.51±3.56)%,TUNEL法观察凋亡细胞数为7.07±1.53,与荷瘤对照组及DDP对照组比较均有显著差异(P<0.01);免疫组化结果表明,金复康治疗组和DDP对照组均能降低Bcl-2基因蛋白表达,增加Bax和Fas基因蛋白表达,与荷瘤对照组比较P<0.01,两组对P53基因蛋白表达与荷瘤对照组比较,P>0.05。结论金复康口服液有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,可降低Bcl-2基因蛋白表达,增加Bax和Fas基因蛋白表达。     

清金得生片对化疗荷瘤小鼠的增效减毒作用研究

目的:观察清金得生片对化疗荷瘤小鼠的增效减毒作用.方法:采用Lewis肺癌株造成荷瘤小鼠模型后,再以环磷酰胺腹腔注射化疗荷瘤小鼠模型,实验分为清金得生片组、环磷酰胺加清金得生片高、中、低剂量组、环磷酰胺加贞芪扶正冲剂组、环磷酰胺组、生理盐水对照组,进行外周血白细胞计数,T淋巴细胞亚群、胸腺和脾脏指数、抑瘤率的测定.结果:环磷酰胺化疗导致的荷瘤小鼠白细胞(WBC)总数、T淋巴细胞亚群中的CD3、CD4百分率、胸腺和脾脏指数明显低于生理盐水对照组(P＜0.05),而清金得生片组及化疗同时加清金得生片的各用药组荷瘤小鼠白细胞总数和T淋巴细胞亚群中CD3、CD4百分率、CD4/CD8比值、胸腺和脾脏指数、抑瘤率均明显高于环磷酰胺组.结论:清金得生片对化疗荷瘤小鼠的造血系统和免疫功能具有一定的保护作用,并增强了化疗药物的疗效.     

亚砷酸对人肺腺癌细胞株TNF-α、Fas、bcl-2表达的影响

目的观察亚砷酸(As2O3)对人肺腺癌细胞株(LAC)TNF-α、Fas及bcl-2表达的影响,以探讨亚砷酸诱导肺癌细胞凋亡的机制。方法以双抗体夹心ABC-ELISA法定量检测体外培养的人肺腺癌细胞株中TNF-α、Fas、bcl-2的表达情况。结果与空白对照组相比,各浓度组As2O3作用于人肺腺癌细胞株72h后,bcl-2蛋白表达无明显变化(P>0.05);但TNF-α、Fas表达增加,且各浓度组相比差别有显著意义(P<0.05)。结论不同浓度As2O3作用于人肺腺癌细胞株72h后bcl-2表达无明显变化,但TNF-α、Fas蛋白表达增加,且与浓度有相关性,表明其诱导肺癌细胞凋亡机制可能是通过上调促凋亡基因TNF-α、Fas表达来实现的。     

清金得生片抗小鼠Lewis肺癌作用的病理形态观察

目的：探讨清金得生片抗小鼠Lewis肺癌的作用机制。方法：将C57小鼠常规接种Lewis肺癌，随机分5组，设清金得生片高剂量组（3．5g／kg）、中剂量组（2．1g／kg）、低剂量组（1．05g/kg）、FT-207组、生理盐水组，连续灌胃给药10天，停药24h后拉颈处死，取肿瘤称重量，测量体积，肿瘤组织用10％甲醛固定，切片、HE染色。结果：清金得生片各剂量组肿瘤重量明显轻于生理盐水组，肿瘤体积明显比生理盐水组小，肿瘤重量抑制率为26．52％～46．96％，肿瘤体积抑制率为26．45％～45．06％。镜下可见部分瘤细胞体积缩小，核致密，染色质浓缩边集，个别瘤细胞核断裂形成大小不等的胞核小体，肿瘤细胞核分裂数明显减少，在大片坏死残留的肿瘤细胞周围有大量的淋巴细胞和白细胞浸润。结论：清金得生片有抑制Lewis肺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，以及提高机体免疫功能的作用。     

大黄素对人肺腺癌细胞Anip973增殖周期及凋亡基因的影响

目的 探讨大黄素对人肺腺癌Anip973细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡基因的影响。方法 采用甲基噻唑（MTT）比色法和生长曲线测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养的Anip973细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化,用免疫印迹法检测Caspase-3蛋白表达。结果 大黄素可在G0／G1期阻滞人肺腺癌Anip973细胞的增殖,使S期细胞比率降低,并激活Caspase-3蛋白;在一定范围内,大黄素的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高。结论 大黄素能抑制人肺腺癌Anip973细胞生长,其抗肿瘤机制是通过激活Caspase-3,诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。     

蛞蝓提取物对肺癌细胞P53及端粒酶基因hTERT表达的影响

目的:了解蛞蝓提取物对肺癌细胞P53、端粒酶基因hTERT表达的影响。方法:体外培养肺癌细胞株,用免疫组化SP法进行检测。结果:蛞蝓提取物可抑制肺癌A549细胞端粒酶基因hTERT表达,并改变突变型P53表达。结论:蛞蝓提取物对肺癌细胞的抑制作用有可能是通过抑制突变型P53及端粒酶基因hTERT表达而实现的。     

鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究

目的探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水。20天后,取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞。通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法,观察细胞凋亡情况;S—P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的bcl-2基因表达无明显变化,bax基因表达升高。结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调bax基因有关。     

华蟾素对晶状体上皮细胞增殖及bcl-2 mRNA、bax mRNA表达影响

目的 探讨华蟾素对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)增殖及凋亡抑制基因bcl-2 mRNA、凋亡促进基因bax mRNA表达的影响。     

补肾活血方对兔骨性关节炎软骨细胞中bax、bcl-2表达影响的实验研究

目的 观察兔软骨细胞bcl-2、bax的表达来探讨补肾活血方治疗骨性关节炎作用机理. 方法 将48只新西兰白兔随机分为空白组、模型组、阳性对照组和补肾活血方组,通过免疫组化现察关节软骨中bcl-2、bax的表达. 结果 免疫组化染色显示模型组、阳性对照组和补肾活血方组bcl-2阳性表达率与空白组比较均显著增加(P<0....     

补肾活血法对子宫内膜异位症模型大鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨补肾活血法治疗子宫内膜异位症的细胞凋亡机制. 方法 将雌性8～12周龄SD大鼠分为模型组、西药组、中药组及中西药合并组,每组15只.造模成功后,分别给药4周,采用光镜、电镜、TUNEL法及免疫组化法检测药物干预前后模型大鼠异位子宫内膜的病理形态学、凋亡细胞的阳性率及凋亡调控蛋白bcl-2、bax的阳性表达. 结果 中西药合并组的异位内膜组织发生凋亡的改变最为明显,凋亡指数最高,并可明显下调bcl-2蛋白的阳性表达和提升bax蛋白阳性的表达,从而使bcl-2/bax比值下降,其次为中药组、西药组和模型组. 结论 子宫内膜异位症的发生与细胞凋亡能力的下降有关.补肾活血中药能促进异位内膜细胞发生凋亡,使异位病灶萎缩、消退细胞.     

冠心平片对人血管内皮细胞的保护作用

目的探讨冠心平片抗过氧化氢(H2O2)诱导人血管内皮细胞(VEC)的凋亡作用及可能机制。方法选择新西兰大白兔15只,随机分成正常组、维拉帕米组、冠心平小剂量组、冠心平中剂量组、冠心平大剂量组,每组3只,分别给予生理盐水、维拉帕米缓释片0.02g/kg、冠心平片2.8g/kg、冠心平片5.6g/kg、冠心平片11.2g/kg,用蒸馏水溶解配置灌胃给药,10ml/kg,每天1次,连续3天,末次给药后1h,耳缘静脉采血,制备含药血清。采用100μmol/L浓度H2O2作用于对数生长期的VEC建立细胞凋亡损伤模型,建模同时用不同剂量冠心平含药血清进行干预。处理后收集细胞,进行流式细胞术检测VEC的凋亡率;采用免疫细胞化学法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2相关联的x基因(bax)与B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)蛋白的表达;采用PCR检测bax与bcl-2 mRNA的相对量。结果与模型组比较,冠心平大剂量组、冠心平中剂量组、维拉帕米组细胞凋亡率明显降低(P<0.05或P<0.01);维拉帕米组、冠心平小剂量组、冠心平中剂量组、冠心平大剂量组bax蛋白面密度、bax/bcl-2平均面密度与模型组比较均显著下降(P<0.05),bcl-2蛋白面密度显著上升(P<0.05或P<0.01),冠心平中剂量组与大剂量组细胞bax/bcl-2比值降低(P<0.05或P<0.01)。结论冠心平含药血清可以拮抗H2O2诱导VEC的凋亡效应,其机制可能与调节凋亡基因bax、bcl-2的表达有关。     

活血复方对大鼠脑缺血再灌注模型神经行为学和大脑海马神经细胞凋亡的影响

目的观察活血复方对大鼠缺血再灌注模型神经行为学和大脑皮质及海马神经细胞凋亡的影响。方法采用右侧颈总动脉夹闭缺血再灌注手术,建立大鼠脑缺血再灌注及神经细胞凋亡模型,并观察大鼠神经行为学改变,HE染色光镜观察大脑皮质及海马病理形态改变,在缺血再灌注不同灌注时相TUNEL法检测神经凋亡细胞,并定量分析凋亡相关基因bcl-2及bax的变化,以及活血复方对脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响。结果缺血再灌注组神经行为学计分较假手术组为高;皮质及海马神经细胞出现退化、变性、坏死等病理变化;术后6h皮质及海马细胞神经细胞凋亡百分比升高。活血复方能有效改善大鼠神经行为症状,降低皮质及海马神经细胞凋亡百分比,增加bcl-2表达,减少bax表达,与模型组相比具有显著差异。结论活血复方可以减缓缺血再灌注后皮质及海马神经细胞凋亡的影响,较好地改善大鼠脑缺血再灌注模型的神经行为症状。     

含碘中药对甲亢大鼠细胞凋亡基因bcl-2及bax表达的影响

目的:观察不同浓度含碘中药对甲亢大鼠模型甲状腺组织bcl-2、baxmRNA表达的影响.方法:制作大鼠甲状腺机能亢进模型,灌服不同浓度含碘中药复方及其他对照药物进行治疗,然后RT-PCR法检测各组大鼠甲状腺组织bcl-2、bax mRNA水平.结果:含碘较低的中药复方较之含碘高的中药复方在增加bcl-2mRNA表达及减少bax mRNA表达上具有显著性的差异.结论:小剂量含碘中药复方对实验性甲亢大鼠甲状腺细胞具有保护作用.     

扶正抑瘤颗粒对H22瘤细胞bax、bcl-2及 caspase-3蛋白表达的影响

目的观察扶正抑瘤颗粒对H 22瘤细胞bax、bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响.方法采用免疫组织化学方法检测瘤组织切片中bax、bcl-2及caspase-3的蛋白表达.结果扶正抑瘤颗粒各治疗组bax及caspase-3的IOD值均高于模型组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05);扶正抑瘤颗粒各治疗组bcl-2的IOD值均低于模型组,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论通过促进bax及caspase-3的蛋白表达、抑制bcl-2基因的蛋白表达来诱导H22瘤细胞凋亡,进而发挥抑瘤效应.