益气解毒中药清金得生片诱导人肺腺癌细胞株HSP70表达的研究

目的探讨清金得生片治疗肺腺癌的作用机制。方法采用MTT比色及免疫组织化学染色(SABC)法检测清金得生片药物血清对人肺腺癌细胞株的抑制率及HSP70表达水平。结果清金得生片药物血清能促进人肺腺癌细胞株HSP70表达,并呈药物血清浓度依赖性地抑制人肺腺癌细胞株生长。结论清金得生片可能是通过诱导人肺腺癌细胞株HSP70表达的免疫效应而达到治疗肿瘤作用。     

贞芪酪蛋白肽复合物血清对人肺腺癌A549细胞分化抑制作用及相关机制研究

目的 :探索贞芪酪蛋白肽(ligustri-astragali casein co-peptid, LACP)复合物对人肺腺癌A549细胞分化的诱导作用及作用机制。 方法 :MTT法检测贞芪酪蛋白肽含药血清5%,10%,15%,20%浓度对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;通过贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞核质比和端粒酶活性的影响观察其诱导分化作用;免疫细胞化学方法观察贞芪酪蛋白肽药物血清对A549细胞Bax/bcl-2基因表达的影响。 结果 :4种不同浓度的贞芪酪蛋白肽含药血清均对A549细胞增殖有抑制作用,其中以浓度为20%的贞芪酪蛋白肽血清的抑制率最高;能降低细胞的核质比,并抑制人肺癌细胞端粒酶活性的作用;贞芪酪蛋白肽血清能促进A549细胞凋亡基因bax/bcl-2的表达,与无药血清对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 :贞芪酪蛋白肽含药血清对人肺腺癌细胞A549有一定抑制作用;有诱导人肺癌细胞A549分化的作用,其主要机理可能是抑制了A549细胞端粒酶活性;贞芪酪蛋白肽诱导A549细胞凋亡的作用机制之一可能是促进促凋亡基因bax/bcl-2的表达。     

温胆汤改良方对Aβ(25-35)诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的:温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡相关蛋白bcl- 2、bax表达的影响。方法:温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于Aβ25-35诱导NG108-15 细胞建立的AD细胞模型,镜下观察细胞生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化检测bcl- 2、bax蛋白的表达。结果:与模型组比较,含药脑脊液组和含药血清组细胞凋亡率降低（p<0．05）, bel-2表达无显著性差异（p>0．05）,bax蛋白表达减弱（p<0．01）,bcl-2／bax比值升高（p<0．01）。结论:温胆汤改良方能有效地抑制AD细胞模型凋亡,其作用机理可能与其干预凋亡相关基因bax的表达,升高bcl-2／bax比值有关。     

温胆汤改良方对Aβ25-35诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的：温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡．相关蛋白bcl-2、bax表达的影响。方法：温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立的AD细胞模型，镜下观察细胞生长状况，流式细胞术检测细胞凋亡，免疫组化检测bcl-2、bax蛋白的表达。结果：与模型组比较，含药脑脊液组和含药血清组细胞凋亡率降低（p〈0．05），bcl-2表达无显著性差异（p〉0、05），bax蛋白表达减弱（p〈0．01），bcl-2／bax比值升高（p〈0．01）。结论：温胆汤改艮方能有效地抑制AD细胞模型凋亡，其作用机理可能与其干预凋亡相关基因bax的表达，升高bcl-2／bax比值有关。     

马红丸含药血清对人肝癌smmc-7721细胞bcl-2和baxmRNA表达的影响

目的 探讨马红丸(马钱子、红娘子、全蝎等)含药血清对人肝癌smmc-7721细胞bcl-2和bax mRNA表达的影响.方法 采用血清药理学方法制备马红丸(MHP)和阿霉素(ADM)含药血清以及对照血清,作用于smmc-7721细胞.MTT 法检测含药血清对srmmc-7721细胞增殖的影响;测定含药血清对smmc-7721细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测含药血清对smmc-7721细胞bcl-2mRNA和bax mRNA表达的影响.结果 30％体积的马红丸和阿霉素含药血清作用于srmmc-7721细胞72 h,明显抑制细胞的增殖(P＜0.01),培养液中LDH的释放量和细胞凋亡率明显高于空白血清组(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高(P＜0.01).结论 30％马红丸含药血清作用于人肝癌smmc-7721细胞72 h,可明显抑制细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞中bcl-2mRNA表达,促进bax mRNA表达有关.     

扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌细胞株PC-3体外增殖能力的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测其对PC-3细胞凋亡及细胞周期的影响,并以Western blot分析扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞体外增殖抑制作用明显,呈浓度及时间依赖性。流式结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可诱导PC-3细胞凋亡,并能够增加G_2/M期细胞比例,降低S期细胞比例,呈浓度依赖性。Western blot结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可下调bcl-2蛋白的表达,而上调bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:扶正利湿抗癌方含药血清可以通过调节bcl-2和bax蛋白的表达发挥体外抑制PC-3细胞增殖的作用。     

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。     

苦参碱对肺腺癌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的探讨中药提取物苦参碱对人肺腺癌细胞系SPC-A-1的凋亡诱导作用及其发生的机制。方法用不同浓度的苦参碱对体外培养的SPC-A-1细胞进行干预。分别采用MTT、免疫细胞化学染色、流式细胞仪检测的方法,观察其对SPC-A-1细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;并对凋亡相关bcl-2与bax蛋白表达的变化进行定性检测。结果经不同浓度的苦参碱处理后的SPC-A-1细胞,其生长受到明显的抑制,细胞凋亡指数随药物浓度增加而明显增加;实验组bax表达明显高于对照组。结论一定浓度的苦参碱能抑制SPC-A-1细胞的增殖,促进其凋亡;其机制可能与调控bcl-2、bax表达有关。     

鹤蟾片诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究鹤蟾片对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大鼠含药血清,MTT法检测鹤蟾片含药血清对A549细胞的生长抑制率。利用PI染色观察和流式细胞术研究该含药血清对A549细胞凋亡的影响。RT-PCR检测含药血清对细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA表达的调节作用。结果鹤蟾片含药血清明显抑制A549细胞生长,并使该细胞呈凋亡形态学改变。10%、20%含药血清组的细胞凋亡率为20.5%、33.2%,与对照组(6.1%)比较,差异均有统计学意义(P0.05)。含药血清组的细胞EGFR表达明显低于对照组(P0.05)。结论鹤蟾片具有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,分子机制可能与抑制EGFR基因的转录有关。     

陕重楼提取物对人肝癌SMMC_(-7721)细胞bc_(l-2)和Bax基因表达的影响

目的:探讨陕重楼乙酸乙酯提取物含药血清对肝癌SMMC-7721细胞bcl-2和Bax基因的影响。方法:采用血清药理学方法,以20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg药量提取物给SD大鼠灌胃,分离血清配制成10%含药血清培养基后,加入人肝癌细胞SMMC-7721中培养48h,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学测定法检测bcl-2和Bax蛋白在肝癌细胞中的表达情况,观察陕重楼乙酸乙酯提取物对人肝癌SMMC-7721细胞中bcl-2和Bax基因表达的影响。结果:高、中、低浓度提取物10%含药血清制作的细胞爬片在人肝癌细胞系SMMC-7721中的bcl-2蛋白阳性细胞计数率分别为6.50%、8.47%和8.85%,Bax蛋白阳性细胞计数率分别为44.12%、43.88%和37.66%。结论:与肝癌细胞系SMMC-7721空白对照组的bcl-2、Bax蛋白阳性细胞计数率相比,给药组培育48h后肝癌细胞系中bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白的表达上调,bcl-2/Bax比值降低,陕重楼乙酸乙酯提取物应用在线粒体途径促进细胞凋亡过程中能发挥协同作用,并可能通过此途径诱导肿瘤细胞的凋亡。     

清金得生片抗小鼠Lewis肺癌作用的病理形态观察

目的：探讨清金得生片抗小鼠Lewis肺癌的作用机制。方法：将C57小鼠常规接种Lewis肺癌，随机分5组，设清金得生片高剂量组（3．5g／kg）、中剂量组（2．1g／kg）、低剂量组（1．05g/kg）、FT-207组、生理盐水组，连续灌胃给药10天，停药24h后拉颈处死，取肿瘤称重量，测量体积，肿瘤组织用10％甲醛固定，切片、HE染色。结果：清金得生片各剂量组肿瘤重量明显轻于生理盐水组，肿瘤体积明显比生理盐水组小，肿瘤重量抑制率为26．52％～46．96％，肿瘤体积抑制率为26．45％～45．06％。镜下可见部分瘤细胞体积缩小，核致密，染色质浓缩边集，个别瘤细胞核断裂形成大小不等的胞核小体，肿瘤细胞核分裂数明显减少，在大片坏死残留的肿瘤细胞周围有大量的淋巴细胞和白细胞浸润。结论：清金得生片有抑制Lewis肺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，以及提高机体免疫功能的作用。     

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的 探讨复方中药紫龙金(简称紫龙金)对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNcaP的体外作用机制。方法 应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响,应用RT-PCR方法检测前列腺特异性抗原基因(PSA)和雄激素受体(AR),凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响;应用western blot方法测定对bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G1/G1期阻滞和诱导凋亡作用,作用72h时IC50为0．79mg／ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl-2的表达,降低bcl～2蛋白表达,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0／G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl-2基因表达,降低bcl-2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。     

异硫氰酸苯乙酯抑制PI3K/Akt通路激活从而促进肺癌细胞凋亡

目的：观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）诱导肺癌NCI-H446细胞凋亡的分子机制。方法：体外培养NCI-H446细胞,分别用10,30和50μmol/L PEITC作用24h,MTT法和流式细胞术分别检测细胞的增殖与凋亡;Western blot检测Akt磷酸化、细胞内凋亡相关蛋白bcl-2及Bax的含量。结果：不同PEITC处理后,可显著抑制NCI-H446细胞增殖,并诱导其凋亡。PEITC处理后,细胞内bcl-2含量显著高于对照组,同时,bax含量有所降低。PEITC也能抑制NCI-H446细胞中Akt的磷酸化水平。结论：PEITC可能通过影响PI3K/Akt的活性而发挥促凋亡作用。     

白附子混悬液对荷瘤小鼠p16、bcl-2的表达及端粒酶活性的相关性研究

[目的]探讨白附子混悬液(SGTR)对荷瘤小鼠端粒酶活性的调节及对p16、bcl-2的相关表达的研究。[方法]采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测小鼠血清中端粒酶浓度;用免疫组织化学方法测定H22肿瘤组织中p16和bcl-2蛋白的表达情况来推断SGTR对肿瘤细胞凋亡机制的作用。[结果]SGTR可上调p16蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);下调bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),抑制H22荷瘤小鼠体内端粒酶活性(P<0.01)。[结论]SGTR通过抑制端粒酶活性、下调凋亡基因bcl-2的表达及上调抑癌基因p16的表达从而促进肿瘤细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。     

益肺逐积方诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制

目的:通过体外实验观察益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性、细胞凋亡以及表皮生长因子受体(EGFR),G蛋白偶联受体30(GPR30)蛋白表达的影响,探讨中药复方益肺逐积方抑制肺癌细胞活性,诱导肺癌细胞凋亡的作用机制。方法:将人肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,益肺逐积方高、低质量浓度组分别加入2,1.5 g·L~(-1)益肺逐积方培养液,5-氟尿密啶(5-FU)组加入2.5 g·L~(-1)5-FU培养液,溶剂组加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液,分别作用24,48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性的影响;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色观察益肺逐积方作用不同时间后人肺腺癌A549细胞的凋亡形态学变化;流式细胞术(FCM)测定益肺逐积方作用下人肺腺癌A549细胞的凋亡率;利用倒置显微镜观察益肺逐积方作用24,48 h后A549细胞的形态学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定人肺腺癌A549凋亡细胞EGFR,GPR30蛋白的表达。结果:与溶剂组比较,1.5,2 g·L~(-1)益肺逐积方均能抑制人肺腺癌A549细胞活性(P0.05),诱导A549细胞发生不同程度的凋亡形态学改变;流式细胞术检测显示,益肺逐积方作用24,48 h后,可使人肺腺癌A549细胞其发生晚期凋亡(P0.05);Western blot结果显示,益肺逐积方可以不同程度地下调人肺腺癌A549细胞GPR30,EGFR蛋白的表达(P0.05)。结论:益肺逐积方可抑制人肺腺癌A549细胞活性、诱导其发生晚期凋亡,并使其发生凋亡形态学改变,这可能与下调EGFR,GPR30蛋白表达有关。     

瑞香狼毒诱导HL-60细胞凋亡和调节SGC-7901细胞bcl-2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

化瘀祛痰方药及其拆方对H_2O_2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组。各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡;实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达;比色法检测caspase-3活性;蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少。全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组。拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、cas-pase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加。结论化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一。     

莪术油诱导小鼠HepA肝癌细胞凋亡及其对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究莪术油诱导HepA肝癌细胞凋亡的生物学活性,探讨莪术油对肝癌细胞bcl-2表达水平的影响及其作用的分子机制。方法用莪术油进行小鼠肝癌体内抑制实验,运用细胞凋亡原位末端标记及免疫组化方法分析莪术油对小鼠肝癌细胞凋亡的影响。结果莪术油能有效降低小鼠肝癌细胞bcl-2的表达,诱导细胞凋亡。结论莪术油对小鼠肝癌细胞具有明显抑制作用,其主要作用机制为降低bcl-2蛋白表达、诱导肿瘤细胞凋亡。     

反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的:观察反左金丸水提物(waterextractsofRetro-zuojinPill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bcl-2和bax表达的影响。方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化以及Westernblot方法检测WERZP对人胃癌细胞SGC-7901中bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果:WERZP作用SGC-7901细胞24h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10mg·mL^-1WERZP作用SGC-7901细胞24h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±0.23),(55.91±0.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5～10)mg.mL^-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达。结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一。