不同冷冻保护剂对人精子染色体及超微结构影响的研究

目的 旨在了解不同冷冻保护剂（CPM）对人精子染色体畸变率及精子超微结构相对正常精子百分率的影响。方法 应用甘油、甘油－卵黄－柠檬酸钠（GYC）及甘油－卵黄－柠檬酸钠－L－谷氨酰胺（GYCG）三种冷冻保护剂，检测冻贮前后精子染色体畸变率和超微结构相对正常的精子百分率。结果 （1）精子染色体畸变率及精子性染色体的比例在三种冷冻保护剂冷冻前后均无显著改变；（2）在三种冷冻保护剂组冷冻复温后，精子超微结构相对正常的精子百分率显著下降，但GYCG组高于甘油、GYC组。结论 本研究中三种冷冻保护剂不会增加精子染色体畸变率，也不会引起精子性染色体比例失衡，GYCG较其他两种冷冻保护剂具有更显著的保持人精子结构的作用。     

利血平对人精子顶体反应的影响

用间接免疫荧光法对利血平作用后的人精子顶体反应进行了观察和分析。结果表明:利血平对由ionophore A23187(A23187)诱导的人精子顶体反应有明显的抑制作用,其抑制强度随利血平浓度的降低而减弱。提示利血平有希望成为一种新的外用避孕药。     

IL-1对冷冻复温人精子顶体反应的影响

目的：研究复温温度和白细胞介素－1（IL－1）对冷冻精子复温后存活率和顶体反应率的影响。方法：采用精液速冻法，不同浓度IL－1作用于解冻后的精液，以三色染色法检测顶体反应率。结果：对冻融精子37℃水浴复温效果优于41℃，10ng/ml,50ng/ml IL-1可减少精子存活率和顶体反应率。结论：一定剂量IL－1可降低精子存活率和顶体反应率，可能是由于IL－1可使Na^ -K^ -ATP酶活性降低，而对丙二醛（MDA）无影响。     

冷冻方法和冷冻保护剂对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响

目的：探讨冷冻方法和冷冻保护剂类型对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响。 方法：16例男性不育患者精液分别于冷冻前、加入甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)和甘油两种冷冻液以快速和慢速冷冻6个月后,采用伊红染色分析精子活率和尾部低渗肿胀率。 结果：冷冻后精子活率和尾部低渗肿胀率明显低于冷冻前(P<0.001, P<0.05);GYC和甘油两种冷冻保护剂对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响差异无显著性(P>0.05);速冻和缓慢冷冻对精子活率和尾部低渗肿胀率的影响差异亦无显著性（P>0.05）。 结论：冷冻后精子活率和尾部低渗肿胀率明显降低,不同冷冻方法和冷冻保护剂类型对精子活率和尾部低渗肿胀率无影响。     

人精子冷冻前后超微结构的变化

将来自10名正常男性的精液标本进行冷冻保存,复温后电镜观察.结果示冷冻精子复温后精子超微结构发生不同程度的改变,其主要改变为精子顶体肿胀,顶体内、外膜分离,外膜形成波浪状皱褶,有的核局部出现凹陷.线粒体基质密度降低、结构模糊等.但精子基本结构保持完整.提示冷冻精子超微结构改变的主要原因是在冷冻过程中,由于冰晶形成的影响.水分内移.细胞肿胀,因而造成其活动率的明显下降.但是并不影响授精能力。     

冷冻方法和冷冻保护剂对人精子顶体酶活性影响

目的:了解冷冻方法和冷冻保护剂对人精子顶体酶活性影响。方法:对精液标本进行速冻和缓慢冷冻保存,应用分光光度比色法测定精子顶体酶活性。结果:速缓冷冻法对精子顶体酶活性无显著性影响(P>0.05)。甘油-卵黄-柠檬酸钠(GYC)组顶体酶活性明显高于单一甘油组。结论:冷冻速度对人精子顶体酶活性没有影响(P<0.05),应用GYC作为CPM可使人精子顶体酶活性保持很高活性。     

尿毒症患者肾移植前后精子形态学及顶体反应变化的研究

目的 了解尿毒症患者肾移植前后精子形态及精子受精能力的变化.方法 对20例尿毒症患者接受肾移植手术前后的精液进行精子运动参数、精子形态学及顶体反应率的检测.结果 尿毒症患者肾移植手术前的精液主要参数明显低于正常对照组(P＜0.05).接受肾移植手术后前向运动精子百分率有显著提高(P＜0.05),而精子密度与术前无统计学差异(P＞0.05).肾移植术后,正常形态精子百分率有明显提高,为(19.58±7.73)%,但仍低于正常对照组(P＜0.05).尿毒症患者肾移植手术前精子顶体反应率平均为(11.20±4.38)%,低于正常对照组(32.44±12.91)%(P＜0.05),接受肾移植手术后,精子顶体反应率为(14.18±5.97)%,较术前稍增高,但无统计学差异(P＞0.05).结论 尿毒症患者肾移植术后生育能力有所改善,但其精子受精能力仍低于正常男子.     

冷冻对人精子结构及功能的影响

目的：研究冷冻对人精子结构和功能的影响。方法：采集健康已生育25-35岁男性供精者精液作标本。7.5%单甘油为冷冻保护剂（Cryopreservative agent,CPA,每份精液分别采用速、缓降温法冷冻,冻前、后分别作精液规分析、精尾低渗肿胀试验、精子超微结构、精子穿卵试验。结果：复温后未加CPA者,均未见有复苏存活的精子;加CPA者,精子存活率、活动率、精尾低渗肿胀率、精子超微结构相对完整的百分率、穿卵率均显著下降,速冻法比缓冻法下降更明显。结论：7.5%单一甘油对人类精子具有显著的冷冻保护作用。精液冻贮对精子的结构及功能均有不同程度的损害。不同的降温速度对亿精子产生不同的冷冻损伤,缓冻法降温冻贮人类精液的方法简单经济,能较好地较长时期的保护人精子功能和结构完整性。     

三种冷冻保护剂对人精子活力及生育潜力影响的研究

目的 通过比较甘油、甘油－卵黄－柠檬酸钠（GYG）和甘油－卵黄－柠檬酸钠－L－谷氨酰胺（GYCG）三种冷冻保护剂（CPM）的冷冻保护效果,旨在寻求简单、安全、有效、经济的精子冻贮方法。方法 应用甘油、GYG和GYCG三种冷冻保护剂（CPM）,通过冻贮前后精液常规分析,精尾低渗肿胀率（HOSR）、精子穿卵率（SPR）等精子功能的检测指标评价三种CPM的冷冻保护效果。结果 三种CPM对精子功能的冷冻保护作用各不相同,但GYCG较其他两种CPM具有更显著的保护人精子功能的作用。结论 在三种CPM中,GYCG的冷冻保护效果明显优于GYC和单一甘油,预示应用GYCG作为CPM可使人精子保持较高的生育潜力,具有安全、价廉、简单等优点,适合在我国推广应用。     

两种精子优选法对精子活率、尾部低渗肿胀率和形态正常精子百分率的影响

目的：评价Percoll密度梯度离心和上游精子分离方法对人精子活率、尾部低渗肿胀率和形态正常精子百分率影响。方法：收集12例男性不育症患者精液样本,分别采用Percoll密度梯度离心和上游精子分离方法(简称上游法)进行精子优选,应用伊红-Y染色分析优选前后精子活率和尾部低渗肿胀率,应用改良巴氏染色法分析优选前后精子形态。结果：①Percoll法和上游法优选后精子活率和尾部低渗肿胀率均明显高于优选前（P<0.01）,两种优选法间比较精子活率和尾部低渗肿胀率差异均无显著性（P>0.05）。Percoll法和上游法优选后B-G型精子尾部低渗肿胀率均明显高于优选前（P<0.01）,两种优选法间比较B-G型精子尾部低渗肿胀率差异均无显著性（P>0.05）。②Percoll密度梯度离心法和上游法优选后形态正常精子百分率均明显高于优选前（P<0.05）,上游法优选后形态正常精子百分率明显高于Percoll法优选后形态正常精子百分率（P<0.05）。上游法优选后锥型头、无定型头和颈/中段缺陷形态异常精子百分率均明显少于优选前（P<0.05）;Percoll法优选后锥型头、无定型头和尾部缺陷形态异常精子百分率均明显少于优选前（P<0.05）;上游法优选后无定型头、颈/中段缺陷和尾部缺陷形态异常精子百分率明显低于Percoll优选后（P<0.05）。结论：Percoll法和上游法优选后精子活率、尾部低渗肿胀率和形态正常精子百分率较优选前明显改善, 此两种优选法均可广泛应用于生殖医学,其中上游法优于Percoll法。     

重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的：在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。 方法：体外采集已生育健康男子精液,采用非连续密度梯度法分离精子,将获能的精子悬液分成阴性对照组(C组,200 μL精子悬液加1 μL DMSO)、阳性对照组(A组,200 μL精子悬液加A23187至终浓度为10 μmol•L^-1)和ZP3组(200 μL精子悬液加ZP3至终浓度为10 mg•L^-1),考马斯亮蓝染色法检测重组人ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果：C组、A组和ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为(5.00±1.70)%、(46.10±7.49)%和(13.20±2.70)%,各组间比较差异有显著性(P<0.05)。 结论：重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。     

精子顶体酶活性检测方法研究

本文报告检测精子顶体酶活性的方法，是以Ｎａ一苯甲酰一ＤＬ一精氨酸一ｐ一硝酰基苯胺（ＢＮＰＮＡ）为底物，检测新鲜去精浆精子顶体酶活性。文中分析了实验的温度、时间、反应体系中精子浓度等因素对实验结果的影响，提出了最佳实验条件及注意事项。     

两种处理方法对精子顶体完整性和DNA损伤的影响

目的研究上游法和密度梯度离心法处理对精液常规参数、顶体完整性及DNA损伤的影响。方法 90例男性精液标本用上游法和密度梯度离心法处理,检测处理前后精液常规参数、精子顶体完整率及精子DNA碎片指数。结果两种方法处理后,精子浓度明显下降（P〈0.01）,精子活率、活力明显提高（P〈0.01）;正常形态精子比例和顶体完整率显著提高（P〈0.05）,DNA碎片指数显著降低（P〈0.01）,两种处理方法比较差异无统计学意义。结论两种处理方法均可以使顶体完整精子比例较处理前明显提高,DNA损伤精子比例较处理前明显降低,但两法之间无统计学差异。两种处理方法均可以不同程度优化精液质量,实验室可根据精液情况选择处理方法。     

人类稀少精子细管法超快速冷冻的实验研究

目的研究人类稀少精子超快速冻存方法,寻求稀少精子冷冻保存的最优方式。方法选取20份在上海市人类精子库捐精的20名健康志愿者的精液。将精液稀释后密度调至(3～5)×106/mL(每个高倍视野3～5条精子),按照不同冷冻方式分为四组进行冷冻:A组应用0.5 mL麦管和精子冷冻剂,以程序降温方式冷冻;B组应用毛细玻璃管和精子冷冻剂,以程序降温方式冷冻;C组应用毛细玻璃管和改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)型冷冻保护剂,以程序降温方式冷冻;D组应用毛细玻璃管和改良GYC型冷冻保护剂,以超快速降温方式冷冻。比较四种方法复苏后精子活率和正常形态率。结果冷冻前精子活率为(68.6±21.3)%;A、B、C、D组复苏后活率分别为(32.2±17.2)%、(41.5±18.4)%、(44.9±18.0)%和(50.2±19.7)%,B、C、D各组复苏后活率高于A组(P<0.05),D组高于其他三组(P<0.05)。冷冻后A、B、C、D组精子正常形态率分别为(14.2±4.1)%、(15.0±4.7)%、(14.5±5.2)%和(15.9±4.9)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用超快速降温冷冻模式冷冻稀少精子,具有较高的冷冻复苏率。改良GYC冷冻保护剂具有与精子冷冻剂相似的冷冻保护效果。