BCG干预对哮喘小鼠调节性T细胞生成的影响

目的：研究表明减毒活菌卡介疫苗(BCG)能上调机体的TH1反应,从而对以TH2反应为主的哮喘等过敏性疾病起抑制作用。该文观察BCG干预后哮喘小鼠调节性T细胞生成的变化,以探讨其可能的作用机制。方法：昆明小鼠以卵白蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型。于OVA致敏前及后5d分别以BCG皮内注射干预,在最后一次抗原激发后24h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血。计数BALF中的细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)的个数。并采用流式细胞仪分析外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的百分比。开腹取脾,制备脾单细胞悬液并培养48h,收集上清液。ELISA法测定上清液中的IL-10的含量。结果：OVA致敏激发组小鼠BALF中的细胞总数为(27.27±5.36)×107/L;EOS为(6.59±1.32)×107/L较正常对照组(1.52±0.36)×107/L和0明显增高(P<0.01),而BCG干预组其BALF中的细胞总数为(13.71±3.17)×107/L及EOS的计数为(1.43±0.37)×107/L较OVA致敏激发组降低(P<0.01);哮喘组外周血CD4+CD25+Treg的百分比为(11.59±1.33)%与正常对照组(13.66±1.68)%比较明显下降(P<0.01)。而BCG干预组CD4+CD25+Treg的百分比为(14.40±2.70)%较哮喘组上升(P<0.05),同时,BCG干预组脾细胞培养上清液中IL-10的水平为7.79±1.34pg/mL,较哮喘组5.54±0.66pg/mL升高(P<0.01)。结论：BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎症反应,其干预机制可能与促进调节性T细胞生成有关。     

卡介苗干预对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液干细胞因子、巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的 观察哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)干细胞因子(SCF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的表达,及卡介苗(BCG)干预对其表达的影响.方法 昆明小鼠30只随机分为哮喘组、BCG干预组、对照组,每组10只.以卵清蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型.BCG干预组小鼠在OVA致敏前7、3、1 d以BCG皮内注射干预.末次激发24h后收集小鼠BALF,进行BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组BALF中SCF、M-CSF水平.结果 哮喘组小鼠BALF中细胞总数[(27.06±4.25)×107L-1]、EOS计数[(7.58±1.30)×107L-1]较对照组[(4.93±1.43)×107L-1、0]明显增高(Pa<0.01);BCG干预组小鼠BALF中细胞总数[(18.87±2.96)×107L-1]、EOS计数[(3.78±1.44)×107L-1]较哮喘组显著降低(Pa<0.01);哮喘组SCF水平[(280.25±14.20)ng/L]与对照组[(223.59±15.61)ng/L]比较显著增高(P<0.01),而BCG干预组SCF水平[(266.77±31.15)ng/L]与哮喘组比较无显著差异(P>0.05);哮喘组M-CSF水平[(204.30±10.39)ng/L]与对照组[(181.33±8.63)ng/L]比较显著增高(P<0.01),而BCG干预组M-CSF水平[(189.97±8.50)ng/L]与哮喘组比较显著下降(P<0.01).结论 致敏前多次给予BCG干预能显著抑制哮喘小鼠呼吸道炎性反应.哮喘小鼠BALF中SCF及M-CSF的表达增高,BCG干预能降低哮喘小鼠M-CSF的表达.抑制SCF或M-CSF的表达可能成为治疗哮喘的潜在靶点.     

哮喘小鼠树突状细胞表达及减毒卡介苗干预的影响

目的探讨哮喘小鼠树突状细胞(DC)表达及减毒卡介苗(BCG)干预的影响。方法以卵蛋白腹腔注射、雾化吸入和BCG皮下注射复制哮喘和BCG干预小鼠模型。流式细胞仪检测小鼠脾单个核细胞DC和共刺激分子CD80、CD86表达;免疫组化法检测小鼠肺DC表达;ELISA法检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6、IL-12的含量。结果哮喘、BCG干预、对照组小鼠的脾单个核细胞DC表达分别为(16.18±9.49)%、(8.62±3.53)%、(1.84±0.69)%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);哮喘、BCG干预、对照组小鼠的肺DC表达分别为(1 581±177)个/mm、(668±101)个/mm、(268±29)个/mm,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。哮喘、BCG干预、对照组小鼠的CD80表达分别为(6.4±3.3)%、(10.8±3.1)%、(7.1±4.0%),BCG干预组与哮喘和对照组间的差异有统计学意义(P<0.05),哮喘组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘、BCG干预、对照组小鼠的CD86表达分别为(9.6±2.9)%、(7.3±4.5)%、(4.9±4.4)%,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘、BCG干预、对照组小鼠BALF中的IL-6含量分别为(28.65±2.39)pg/ml、(18.63±1.88)pg/ml、(12.80±2.98)pg/ml,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘、BCG干预、对照组小鼠BALF中的IL-12含量分别为(4.78±0.22)pg/ml、(6.33±0.31)pg/ml、(7.38±0.28)pg/mlG,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠外周循环与呼吸道局部DC表达均增加,在哮喘的发生、发展过程中起着重要作用。BCG可通过调节DC,CD80、CD86、IL-6、IL-12等表达,以拮抗哮喘气道炎症反应。     

减毒卡介活菌疫苗干预对哮喘小鼠肺GATA-3表达的影响

目的研究减毒卡介活菌疫苗（BCG）干预对哮喘小鼠呼吸道炎症及肺组织GATA-3表达的影响。方法昆明小鼠24只随机分为哮喘组、BCG治疗组、正常对照组。以卵清蛋白（OVA）致敏激发建立哮喘模型,于OVA致敏前及后5 d分别以BCG皮内注射干预。计数肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数及嗜酸性粒细胞（EOS）个数。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定BALF中IL-4水平。免疫组织化学法观察BCG对哮喘小鼠肺组织GATA-3表达的影响。结果1.哮喘组小鼠BALF中的细胞总数及EOS计数较正常对照组明显增高（Pa〈0.001）,而BCG治疗组BALF中的细胞总数及EOS的计数较哮喘组显著降低（Pa〈0.001）。2.哮喘组小鼠BALF中IL-4的水平较正常对照组明显上升,二组比较差异有显著性（P〈0.01）;而BCG治疗组小鼠BALF中IL-4的水平较哮喘组明显下降,差异有显著性（P〈0.01）。3.BCG治疗的哮喘小鼠其肺部组织GATA-3的表达较哮喘小鼠明显减弱。结论BCG能抑制哮喘小鼠肺组织GATA-3的表达,导致IL-4等TH2型细胞因子的减少,从而减轻呼吸道的炎症反应。     

卡介苗新生期接种和呼吸道合胞病毒感染对小鼠实验性哮喘的联合作用

目的观察卡介苗（BCG）新生期接种和呼吸道合胞病毒（RSV）感染对小鼠实验性哮喘的联合作用.方法新生期小鼠分5组：对照组、鸡卵白蛋白（OVA）组、BCG＋OVA组、RSV＋OVA组、BCG＋RSV＋OVA组,除对照组外,其他各组为哮喘组都进行OVA致敏和激发.最后一次激发后24 h内测气道高反应性,进行支气管肺泡灌洗,观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞数及分类,ELISA方法检测肺泡灌洗液中细胞因子含量和血清中OVA特异性IgE水平,肺组织HE染色进行炎症病理学分析.结果（1）各哮喘组BALF中白细胞总数及各类炎症细胞数都比对照组显著升高.BCG＋OVA组的白细胞总数、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞计数显著低于其他哮喘组（P＜0.05或0.01）.（2）各哮喘组与对照组比较BALF中IL-4水平显著增高（P＜0.05）,IFN-γ水平显著减低（P＜0.05）,4组哮喘组之间两两比较差异无统计学意义.各实验组IL-10水平差异无统计学意义.（3）各哮喘组血清中OVA特异性IgE水平都比对照组明显增高（P＜0.05或0.01）,各哮喘组之间比较差异无统计学意义.（4）随吸入乙酰甲胆碱浓度增加各组气道反应性明显增加.RSV＋OVA组和BCG＋RSV＋OVA组的气道反应性最高,其后依次是OVA组、BCG＋OVA组、对照组.RSV＋OVA组和BCG＋RSV＋OVA组间比较差异无统计学意义.（5）各哮喘组的炎症评分都显著高于对照组.BCG＋OVA组的细支气管周围炎症和支气管周围嗜酸性粒细胞浸润百分率显著低于另外三组（P均＜0.05）,肺泡炎症反应明显低于OVA组和BCG＋RSV＋OVA组（P均＜0.05）.结论新生期BCG接种在OVA致敏/激发的小鼠哮喘模型中能减轻哮喘炎症和气道高反应性,但这种抗哮喘作用可被RSV感染逆转.     

褪黑素对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响及抗感染作用

目的 探讨褪黑素(MT)对哮喘大鼠CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Tr)的影响及抗感染作用.方法 SPF级SD大鼠32只随机分成4组,每组8只.哮喘组:造模第1、7天,大鼠腹腔注射卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液体,第14天,用10g/L的OVA溶液对大鼠进行雾化激发,1次/d,20min/次,连续7d;MT组:致敏、诱导哮喘方法同哮喘组,在每次激发前30min,腹腔注射MT0.1mg/kg;地塞米松组:致敏、诱导哮喘方法同哮喘组,在每次激发前30min,腹腔无菌注射地塞米松0.5mg/kg;对照组:注射、雾化方法同哮喘组,以9g/L盐水替代OVA和氢氧化铝致敏液及雾化液.各组于最后1次雾化激发后取其外周血涂片染色,计数其外周血嗜酸性粒细胞(EOS)百分比;收集其肺泡灌洗液(BALF),计数其炎性细胞总数;制作肺组织石蜡切片,HE染色计数其呼吸道周围EOS数目;用免疫增强浊度法检测其血清IgE水平;用流式细胞术检测其外周血CD4 CD25 Tr水平.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 哮喘组外周血CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞值与呼吸道周围EOS细胞数呈高度负相关(r=-0.73 P<0.05),与BALF细胞总数亦呈高度负相关(r=-0.78 P<0.05),与血清IgE水平未见显著相关.CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞值哮喘组显著高于其他各组(Pa<0.01),其他3组比较,差异无统计学意义(Pa>0.05).MT组呼吸道周围EOS计数、外周血EOS比例、BALF细胞总数及IgE水平显著低于哮喘组(Pa<0.01).结论 CD4 CD25 Tr参与哮喘的发病.MT能显著降低哮喘大鼠CD4 CD25 Tr的数目,对哮喘大鼠CD4 CD25 Tr的调节作用与地塞米松相当,可有效减轻哮喘大鼠呼吸道炎性反应和血清IgE上升水平.     

草分枝杆菌F.U.36对哮喘小鼠调节性T细胞和TLR4表达的影响

目的：探讨早期给予草分枝杆菌F.U.36注射液干预对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及TLR4表达的影响。方法：将雌性BALB/c小鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和哮喘草分枝杆菌F.U.36治疗组(哮喘/Utilin组),每组10只。通过注射和雾化吸入鸡卵蛋白(OVA)制备哮喘模型。哮喘/Utilin组第一次致敏前2周腹腔注射草分枝杆菌F.U.36注射液0.57 μg,隔日一次,共3次。于末次激发后24 h处死。取小鼠左肺组织作病理切片观察炎症改变;同时利用流式细胞检测技术检测各组小鼠脾单个核细胞CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分率及CD4+CD25+调节性T细胞上的TLR4平均荧光强度。结果：哮喘小鼠脾单个核细胞CD4+CD25+ 调节性T细胞百分率明显降低(P0.05);经草分枝杆菌F.U.36早期干预的哮喘小鼠脾单个核细胞CD4+CD25+调节性T细胞百分率和该细胞上表达的TLR4平均荧光强度较哮喘组均明显升高(P<0.01)。结论：早期应用草分枝杆菌F.U.36干预性治疗,可通过促进CD4+CD25+细胞上TLR4的表达和该细胞数目的增加以纠正哮喘小鼠机体的免疫紊乱而发挥其治疗作用。     

T-bet在哮喘小鼠中的表达及卡介苗干预的实验研究

目的 研究T-bet在卵白蛋白(OVA)致敏小鼠、哮喘小鼠中的表达及卡介苗(BCG)干预对其表达的影响.方法 雄性昆明小鼠随机分成致敏组、哮喘组、卡介苗干预组和正常对照组.用OVA致敏、激发,建立哮喘模型.免疫印迹法检测肺组织中T-bet蛋白的表达水平,ELISA法测定肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4的水平.结果 致敏小鼠肺组织中T-bet蛋白表达0.463±0.369,较正常对照组小鼠明显下降,哮喘小鼠肺组织T-bet蛋白表达0.658±0.345,与致敏组比较,差异无统计学意义;BEG干预后,肺组织T-bet表达1.322±0.349,较哮喘组明显增加.致敏小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ水平为(15.50±2.25)pg/ml,较正常对照组小鼠明显减少,IL-4为(39.90±2.12)pg/ml,较正常对照组小鼠明显增多;哮喘小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ为(12.64±2.92)pg/ml,与致敏小鼠比较,差异无统计学意义,IL-4为(48.34±3.83)pg/ml,较致敏小鼠明显增多;BCG干预后,IFN-γ明显增多,IL-4明显减少.结论 卡介苗能在转录因子水平促进T-bet表达,从而在转录因子水平纠正Th1/Th2比例失衡,对哮喘起保护作用.     

血管活性肠肽对哮喘小鼠气道炎症及Th17/Treg平衡的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对哮喘小鼠气道炎症的影响,以及对Th17细胞/调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法将30只BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组、VIP组,每组10只。利用卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作急性哮喘小鼠模型;对照组致敏和激发阶段均以生理盐水代替OVA;VIP组每次OVA激发前,先以VIP溶液(20μg/m L)雾化吸入30 min。留取各组小鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织等标本。利用苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中Th17/Treg相关细胞因子水平;免疫组化及Real-time PCR检测肺组织中Th17细胞特异性转录因子RORγt及Treg特异性转录因子Foxp3表达情况。结果病理组织学结果显示VIP组小鼠肺组织气道炎症表现较哮喘组减轻。哮喘组小鼠BALF中IL-17浓度高于对照组(P0.01),VIP组IL-17浓度较哮喘组降低(P0.01),但仍高于对照组(P0.01)。哮喘组BALF中IL-10浓度低于对照组(P0.01),VIP组IL-10浓度较哮喘组升高(P0.01),但仍低于对照组(P0.01)。哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA及蛋白表达高于对照组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达低于对照组(P0.01);VIP组肺组织RORγt mRNA及蛋白表达水平低于哮喘组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达水平高于哮喘组(P0.05)。结论哮喘小鼠存在Th17/Treg免疫失衡,VIP可通过调控Th17/Treg免疫失衡而改善哮喘小鼠气道炎症。     

新生期卡介苗接种对实验性哮喘小鼠肺Th17细胞和IL-17的影响

目的：通过实验性哮喘小鼠模型探讨新生期卡介苗（bacillus Calmette-Guérin,BCG）接种对肺Th17细胞和IL-17的影响。方法：新生期小鼠分3组：对照组,卵白蛋白组（OVA）,BCG干预组（BCG/OVA）。除对照组外,其余两组均给予OVA致敏和激发。观察支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中细胞总数及分类,ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-17含量,流式细胞术检测肺Th17细胞。结果：两哮喘组BALF中细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞比例均明显高于对照组,而BCG/OVA组上述细胞均显著低于OVA组。两哮喘组BALF中IFN-γ水平明显低于对照组,IL-17显著高于对照组,同时BCG/OVA组IL-17水平明显低于OVA组。流式细胞术显示,两哮喘组Th17细胞比例均明显高于对照组,但两哮喘组间差异无统计学意义。结论：Th17细胞/IL-17在实验性哮喘小鼠发病中起作用,新生期BCG接种可抑制气道IL-17的产生,其抑制的IL-17可能并非主要由Th17细胞产生,而来源于其他细胞。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：650-653］     

Range of Motion of the Joints of the Lower Extremities of Newborns

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早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。