神经干细胞移植对脑缺血/再灌注损伤大鼠HIF-1α和HIF-3α表达的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马区低氧诱导因子1α(HIF-1α)和低氧诱导因子3α(HIF-3α)表达的影响。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、NSCs组。再灌注72 h后神经功能损害评分表(NSS)法行神经功能评分,免疫组化法检测海马区HIF-1α和HIF-3α蛋白表达。结果 NSCs移植后可见PKH26标记的NSCs在海马区有表达。与模型组比较,NSCs组NSS评分显著降低(P<0.05),海马区HIF-1α和HIF-3α蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论神经干细胞移植可上调脑缺血/再灌注损伤大鼠海马区HIF-1α和HIF-3α表达,促进脑缺血损伤神经功能恢复。     

腺苷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中低氧诱导因子-1α表达的影响

目的观察腺苷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨腺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 Sprague-Dawley大鼠72只随机分为假手术组(F组)、腺苷预处理假手术组(AF组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理缺血再灌注组(AR组),每组18例。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。IR组和AR组大鼠于手术前3 d每日腹腔注射1.5 mg·kg-1腺苷(溶于2 mL生理盐水中),F组和AF组大鼠于手术前3 d每日腹腔注射2 mL生理盐水,连续3 d。各组大鼠进行神经功能缺损评分,免疫组织化学方法观察大鼠脑组织中HIF-1α的表达。结果 F组和AF组大鼠术后无神经功能缺损体征,IR组和AR组大鼠再灌注6、12、24 h后均出现明显神经功能缺损体征。IR组和AR组大鼠神经功能缺损评分显著高于F组和AF组,AR组大鼠神经功能缺损评分显著低于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。AF组大鼠脑组织中HIF-1α的表达与F组比较差异无统计学意义(P>0.05);缺血再灌注后6、12、24 h,IR组大鼠脑组织中HIF-1α的表达显著高于F组和AF组(P<0.01);AR组大鼠脑组织中HIF-1α的表达显著高于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论腺苷预处理可增加局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中HIF-1α的表达,从而发挥保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织HIF-1α表达的观察

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor—1α,HIF—1α）的表达及意义。方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,动物分为缺血2h再灌注6h、1、2、3、4d及假手术对照组。应用免疫组化法检测HIF-1α蛋白、原位杂交及RT—PCR法检测HIF-1α mRNA的表达变化。结果免疫组化及原位杂交法检测显示：大鼠缺血再灌注6h,缺血侧脑组织梗死灶周边HIF-1α及HIF-1α mRNA阳性反应已出现,随再灌注时间的延长阳性表达增强,一直持续到第3天,第4天显著下降;RT—PCR检测HIF-1α mRNA在6h后已有表达,随再灌注时间的延长,HIF-1α mRNA的表达呈上升的趋势,在第3天达高峰,第4天显著下降。结论脑缺血再灌注损伤可以诱导HIF-1α表达增强,提示HIF-1α对缺血性脑损伤有保护作用。     

缺血再灌注损伤后大鼠视网膜细胞凋亡与低氧诱导因子1α表达的关系

目的研究缺血再灌注损伤后大鼠视网膜细胞凋亡与低氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化并探讨两者的相关性。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组和缺血再灌注损伤1 d、3 d和5 d组（n=6）。眼前房灌注生理盐水调节大鼠眼压至110 mmHg并持续50 min,制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。制备视网膜切片,测量内网层（IPL）、内核层（INL）厚度及节细胞层（GCL）细胞数;采用DNA原位末端标记（TUNEL）法检测视网膜凋亡细胞;免疫组织化学染色观察损伤后不同时间HIF-1α在视网膜细胞中的表达;采用RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达。结果缺血再灌注损伤1 d、3 d和5 d组大鼠的IPL和INL厚度显著小于正常对照组（P〈0.01）,GCL细胞少于正常对照组（P〈0.05）。视网膜细胞凋亡位于GCL;缺血再灌注损伤1 d、3 d和5d组的细胞凋亡率均明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。缺血再灌注损伤1 d、3 d、5 d组视网膜GCL的HIF-1α蛋白表达阳性细胞比例分别为（47.88±14.71）%、（50.28±13.11）%、（43.09±10.04）%,与视网膜细胞凋亡率呈正相关（r=0.953）。缺血再灌注损伤3 d组视网膜细胞HIF-1αmRNA表达明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论缺血再灌注后大鼠视网膜细胞凋亡与HIF-1α的表达均增加,两者呈正相关;HIF-1α的表达可能参与视网膜细胞凋亡。     

低氧诱导因子-1α在缺血和缺血/再灌注后大鼠心肌中的免疫组化表达型式

目的观察在心肌缺血和缺血/再灌注时大鼠心肌有无低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其表达的时-空间型式。方法选取220～280 g健康Wistar大鼠48只,随机分为3组:①正常对照组;②单纯缺血组;③缺血/再灌注组。利用免疫组织化学技术检测各组心肌HIF-1α的表达。结果正常对照组大鼠心肌组织未见HIF-1α表达。单纯缺血组大鼠心肌组织在缺血2 h即有HIF-1α的阳性表达,缺血12 h表达面积及强度达到最高,缺血24 h又有所下降。大鼠心肌组织中HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达。在心肌缺血组大鼠心肌中的HIF-1α表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限。缺血/再灌注组大鼠心肌组织在缺血45 min/再灌注1 h后即有HIF-1α表达,再灌注3 h后表达面积达到高峰,再灌注5 h又略有下降。单纯缺血组和缺血/再灌注组大鼠心肌组织的HIF-1α最高表达量差异无统计学意义。缺血/再灌注组大鼠心肌中的HIF-1α表达部位也呈区域性分布。结论心肌缺血或缺血/再灌注后大鼠心肌均有HIF-1α的表达,二者表达的时间过程相似,均在数小时内即达到高峰,且表达量差异无统计学意义;HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达,在心肌组织中的表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限,提示只在缺血部位有表达。     

螯合锌离子对局灶性脑缺血再灌注大鼠半暗带区低氧诱导因子-1α表达的影响

目的 利用大脑中动脉梗塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠模型,观察脑缺血再灌注后脑组织低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达的动态变化,并给予脑缺血大鼠锌离子螯合剂［N,N,N’,N ’-tetrakis（2-pyridylmethyl）ethylenediamine,TPEN］进行干预,研究锌离子对MCAO大鼠脑组织HIF-1α表达的影响,探讨锌离子介导脑缺血再灌注损伤的相关机制。方法 采用数字表法将45只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组：假手术组（Sham）、MCAO组和MCAO+TPEN组（于MCAO前30 min腹腔注射TPEN,剂量为15 mg/kg）,每组15只。使用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血90 min再灌注模型。术中监测大鼠肛温及平均动脉压,使其维持在正常范围。分别于再灌注3、12和24 h处死大鼠,迅速取脑,用免疫组化染色检测大鼠脑组织冰冻切片内缺血半暗带区HIF-1α的表达水平,用免疫荧光双标对HIF-1α在缺血脑组织的表达进行细胞定位。结果 假手术组大鼠未见HIF-1α染色阳性细胞,MCAO组大鼠脑组织缺血半暗带区HIF-1α的表达随再灌注时间延长逐渐增加（P<0.01）。给予15 mg/kg TPEN后,缺血再灌注各时间点大鼠脑组织缺血半暗带区内HIF-1α的表达比MCAO组明显减少（P<0.01）。缺血再灌注大鼠脑组织缺血半暗带区内,HIF-1α免疫荧光染色与神经元标志物NeuN免疫荧光染色共定位。结论 大鼠局灶性脑缺血再灌注后,脑组织神经元内HIF-1α表达随再灌注时间延长递增。螯合细胞内锌离子下调缺血再灌注大鼠脑内HIF-1α浓度,提示锌离子可能通过促进HIF-1α表达介导脑缺血损伤。     

黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内血管新生及HIF-1α/VEGF信号转导通路的影响

目的:探究黄芪注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内血管新生及缺氧诱导生长因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)/血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号转导通路的影响.方法:72只大鼠随机分为对照组、模型组和黄芪注射液组,每组24只,线栓法复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,评价术前、术后、给药7 d后的神经功能评分,免疫组化法检测脑缺血再灌注损伤皮质微血管密度,RT-PCR 法检测脑缺血再灌注损伤皮质 HIF-1α mRNA 和 VEGF mRNA,Western Blotting法检测脑缺血再灌注损伤皮质HIF-1α和VEGF的蛋白表达.结果:给药7d后黄芪注射液组神经功能评分明显低于模型组(P<0.01),微血管密度、HIF-1α mRNA和VEGF mRNA表达水平、HIF-1α和VEGF蛋白表达水平均高于模型组(P<0.01).结论:黄芪注射液促进脑缺血再灌注损伤大鼠脑内血管新生,其作用机制可能为激活HIF-1α/VEGF信号转导通路.     

全脑缺血大鼠脑组织MiR210和stat3的表达与HIF-1α的相关性

目的：研究全脑缺血再灌注损伤大鼠海马信号转导和转录激活因子3（stat3）及大脑皮层MiR210的表达变化,探讨MiR210及stat3与缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）之间的相关性及调节机制。方法将66只SD大鼠随机分为假手术组、全脑缺血组（GI组）及stattic＋全脑缺血组（stattic＋GI组）。采用改良四血管阻断法制备大鼠全脑缺血模型,免疫印迹法检测海马 stat3、p-stat3及 HIF-1α蛋白的表达,实时定量 PCR 法检测大脑皮层 MiR210及HIF-1αmRNA的变化。结果与假手术组相比,GI组海马 stat3、p-stat3及 HIF-1α蛋白表达均明显增加（P＜0．05）,大脑皮层MiR210及HIF-1αmRNA表达亦明显增加（P＜0．05）;与GI组相比,stattic＋GI组海马p-stat3及HIF-1α蛋白表达均明显减少（P＜0．05）,而stat3蛋白变化不明显（P＞0．05）;大脑皮层HIF-1αmRNA水平明显减少（P＜0．05）。结论全脑缺血再灌注损伤后,MiR210及stat3表达发生明显变化,且两者与HIF-1α之间可能存在调控关系。     

HIF-1α在大鼠肺缺血—再灌注损伤中的作用

目的 观察大鼠肺缺血再灌注中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大鼠肺缺血中的作用.方法 150只雄性Wistar大鼠随机分为3组:肺再灌注组(I/R)50只,肺缺血再灌注行可溶性TNFRI-Fc融合蛋白处理组(TF)50只,对照组(S)50只.I/R及TF组建立肺缺血再灌注模型,分别于缺血再灌注后0、1、2、4和8 h取材.采用组织病理学、组织芯片技术、免疫组织化学染色技术与图象分析技术,观察肺组织病理学改变及HIF-1α的表达.结果 HIF-1α的阳性表达位于肺泡上皮细胞胞核,其表达强度肺再灌注组高于肺缺血再灌注行可溶性TNFRI-Fc融合蛋白处理组与对照组,随缺血再灌注时间的延长HIF-1α表达增强,再灌注组的表达强度高于肺缺血再灌注行可溶性TNFRI-Fc融合蛋白处理组正常对照组(P<0.05).结论 HIF-1α参与肺缺血再灌注损伤后的损伤.     

低氧预处理大鼠缺血再灌注脑组织缺氧诱导因子-1α的表达

目的 :探讨低氧预处理对脑缺血再灌注组织缺氧诱导因子 - 1α表达的影响。方法 :SD大鼠 80只随机分为 3组 ,即假手术组 10只 ,缺血再灌注组 35只 ,低氧预处理组 35只。低氧预处理组连续吸入V(O2 ) :V(N2 ) =8:923h作低氧预处理 ,12h后再经插线左大脑中动脉栓塞 (MCAO)作缺血再灌注模型 ,缺血再灌注组不行低氧预处理 ,在大鼠大脑中动脉缺血 3h再灌注后 2h ,6h ,12h ,2 4h ,4 8hTTC法测定脑梗死体积 ,同时采用免疫组织化学方法观察低氧预处理对缺血再灌注大鼠脑组织缺氧诱导因子 - 1α蛋白表达的影响。结果 :与缺血再灌组相比 ,低氧预处理组大鼠的脑梗死体积明显降低 ,缺氧诱导因子 - 1α蛋白的表达增加 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :低氧预处理对脑缺血再灌注有明显的保护作用 ,缺氧诱导因子 - 1α表达增加可能是其机制之一     

培高利特对脑缺血/再灌注损伤海马神经元HIF-1α表达的影响

目的研究培高利特（pergolide）对沙土鼠前脑脑缺血/再灌注（I/R）损伤海马CA1区神经元低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）表达的影响。方法采用沙土鼠5 min I/R损伤模型。54只雄性沙土鼠随机分为3组：假手术组、I/R组、培高利特组。分别于再灌注第1、3、7天行免疫组织化学染色法,检测海马CA1区神经元HIF-1α的表达。结果假手术组沙土鼠海马CA1区HIF-1α有较弱的表达。与假手术组相比,I/R组海马CA1区再灌注1天HIF-1α的表达无明显改变（P〉0.05）;至再灌注3天及7天HIF-1α表达消失（P〈0.01或P〈0.05）。培高利特可显著诱导海马CA1区神经元中HIF-1α的表达,以再灌注1天表达最多（P〈0.01）,随再灌注时间的延长表达缓慢减少,至第7天仍有较高水平的表达（P〈0.01）。结论培高利特可显著诱导脑I/R损伤后海马CA1区神经元HIF-1α的表达,可能是其脑保护作用的机制之一。     

大鼠慢性脑低灌注模型再灌注脑组织HIF-1α、VEGF表达的意义

目的 察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠慢性脑低灌注后再灌注脑组织中表达的意义.方法 SPF级雄性SD大鼠24只,随机分为两组,假手术组(S组)和再灌注组(R组),每组12只.建立大鼠慢性脑缺血模型,6周后恢复血流灌注,于再灌注前即刻(R0)、再灌注1 h(R1)、24 h(R2)及72 h(R3)行激光多普勒血流探测仪(LDPI),检测脑皮层血流灌注量;其后采用qRT-PCR法,检测HIF-α-mRNA、VEGF-mRNA在脑组织中的表达.结果 大鼠慢性脑缺血再灌注后1 h,实验侧脑皮层血流灌注量较对侧下降(73.12±26.75)%,再灌注后24 h脑皮层血流灌注量有所恢复,72 h仍未达到基线水平;与S组比较,各组大鼠再灌注后的不同时点HIF-1α-mRNA、VEGF-mRNA均表达增高(P<0.05).结论 HIF-1α、VEGF在大鼠慢性脑低灌注再灌注后表达上调,参与大鼠脑血管增殖及活性增强的病理过程,改善脑血流动力学.     

HIF-1α及VEGF在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。70只SD大鼠随机分为缺血再灌注组和对照组,每组35只。缺血再灌注组大鼠结扎左侧颈总动脉,对照组大鼠左侧颈总动脉不结扎。每组按再灌注后不同时间段再分为1、6、12、24、48、72、144h组,每组5只大鼠。以免疫组织化学法检测视网膜中HIF-1α和VEGF的表达。结果缺血再灌注组在再灌注后6h开始检测到HIFV-1α和VEGF有表达,24h表达最强。对照组未检测到HIF-1α和VEGF的表达。结论HIF-1α在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用,VEGF在视网膜缺血再灌注损伤中的表达可能受HIF-1α的诱导而发挥作用。     

右美托咪定通过HIF-1α对缺血性脑卒中线粒体功能的调控

目的 基于HIF-1α对线粒体功能调节作用,探讨右美托咪定对缺血性脑卒中大鼠神经功能的保护。方法 将48只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和右美托咪定组、右美托咪定+YC-1组。除假手术组大鼠,各组大鼠采用Longa法构建脑缺血再灌注模型,期间腹腔注射右美托咪定（50 μg/kg）或YC-1（5 mg/kg）。24 h后先评估大鼠神经功能与脑梗死体积占比,再取脑组织后提取线粒体检测线粒体膜电位与线粒体呼吸链复合物活性,最后通过试剂盒检测ROS、GSH与ATP水平,以Western blot检测HIF-1α表达。结果 脑缺血组大鼠神经功能评分降低,出现了脑梗死区域。与脑缺血组相比,右美托咪定明显增加了大鼠的神经功能评分,减少了脑梗死体积占比。此外,右美托咪定上调了线粒体膜电位水平,提高了线粒体呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ活性。与此同时,右美托咪定组大鼠脑组织中HIF-1α表达明显上调,ROS水平下降的同时GSH与ATP水平明显增加。然而,右美托咪定+YC-1组大鼠脑组织中HIF-1α表达明显降低,且线粒体膜电位明显减低,呼吸链复合物活性降低。最终大鼠神经功能评分增加,脑梗死体积占比增加。结论 右美托咪定通过上调HIF-1α表达,改善了线粒体功能,从而降低氧化应激反应,减少脑梗死区域,最终发挥神经功能保护作用。     

2-甲氧基雌二醇对全脑缺血大鼠HIF-1α及RTP801的作用研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2ME2）对全脑缺血大鼠HIF-1α及凋亡相关基冈RTP801的作用。方法将成年雄性SD大鼠104只随机分为对照组（n=8）、全脑缺血组（n=48）和全脑缺血2-甲氧基雌二醇干预组（n=48）,后两组按再灌注时间不同各分为6个亚组。采用改良的Pulsineli4-VO方法行全脑缺血大鼠模型制作。Nissl染色进行海马神经元计数,免疫组化及RT—PCR技术进行HIF-1α及RTP801mRNA表达检测。结果全脑缺血2ME2干预组与全脑缺血组相应时间点亚组相比,神经细胞计数明显增加,HIF-1α表达减少,RTP801mRNA表达减低（P〈O．05）。结论在全脑缺血急性期．2ME2抑制HIF-1α及凋亡相关基因RTP801表达,具有一定的神经保护作用。     

脂肪源性干细胞移植对脑缺血/再灌注损伤大鼠趋化因子及其受体表达影响的实验研究

目的探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤梗死区CXC趋化因子1(CXCL1)和CXC趋化因子2(CXCL2)及其受体CXCR2表达的影响。方法 24只实验动物随机分为假手术组、模型组和脂肪源性干细胞(ADSCs)组。ADSC组尾静脉注射PKH26标记的ADSCs细胞悬液,缺血72 h后行神经功能损害评分(NSS),免疫蛋白印迹法检测梗死区CXCL1、CXCL2和CXCR2蛋白表达。结果 ADSCs移植后可见PKH26标记的ADSCs在梗死区表达。与模型组比较,ADSC组NSS评分降低(P<0.05),梗死区CXCL1、CXCL2和CXCR2蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论 ADSCs移植具有促进脑缺血损伤神经功能恢复的作用,其机制可能与其下调炎症趋化因子CXCL1和CXCL2及其受体CXCR2表达,抑制炎性反应有关。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑低氧诱导因子1αmRNA的表达及参麦注射液的干预作用

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达及参麦注射液的干预作用.方法 新生7 d龄SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、参麦组,又各分为缺血缺氧后2、12、24 h,3、7、14 d 6个哑组,每亚组9只.采用反转录(RT)-PCR法检测鼠脑HIF-1α mRNA;流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡.结果 (1)缺氧缺血后2 h,生理盐水组和参麦组右侧海马神经元凋亡率即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达到峰值后开始下降[(16.80±1.44)%、(11.95±1.13)%],14 d各组差异均无统计学意义(均P>0.05).参麦组海马神经元凋亡率在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显低于生理盐水组(均P<0.05).(2)缺血缺氧后2 h生理盐水组、参麦组新生大鼠右侧大脑中HIF-1α mRNA的表达即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达峰值后开始下降[(她32±4.03)%、(35.63±3.73)%],14 d各组表达差异均无统计学意义(均P>0.05);参麦组大脑中HIF-1α mBNA的表达在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显高于生理盐水组(均P<0.05).结论 新生大鼠HIBD时HIF-1α mBNA表达增强,参麦注射液可提高新生大鼠HIBD后的HIF-1α mRNA的表达,减少新生大鼠缺氧缺血后神经元凋亡的发生.     

HIF-1а及VEGF在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达及相关性

目的研究缺血再灌注损伤大鼠脊髓组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1а）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达相关性以及两者在腰椎间盘退变过程中的意义。方法3O只SD大鼠随机分为实验组﹙A组,15只﹚和对照组﹙B组,15只﹚,每组各分为6h、12h、48h 组,每亚组各5只。采用Nas1und腹主动脉阻断方法建立脊髓缺血再灌注损伤手术模型。分别获取实验组、对照组不同时间点脊髓组织,采用免疫组化技术,显示出HIF-1α因子、VEGF因子的表达状况,并描述缺血再灌注脊髓组织中HIF-1α因子与VEGF因子的表达相关性。结果 HIF-1α因子、VEGF因子在正常脊髓中表达很少或几乎不表达,而在缺血再灌注脊髓组织中二者表达均明显增加。HIF-1α因子和VEGF因子在缺血再灌注脊髓组织中表达程度正相关（p<0.01,r=0.625）。结论在大鼠脊髓缺血再灌注脊髓组织中均表达增加,且HIF-1α因子、COX-2因子表达存在相关性。     

冬虫夏草对糖尿病肾病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在大鼠糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾组织中的表达及冬虫夏草(Cordyceps sinensis,CS)干预后对其的影响,探讨冬虫夏草的抗缺氧损伤的肾保护机制。方法：健康雄性Wistar大鼠通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制作成糖尿病模型,4周时测定24 h尿蛋白>30 mg/d为DN模型大鼠(n=30),随机分为糖尿病肾病组(DN组,n=15)和冬虫夏草组(CS组,n=15),另取15只正常大鼠作为对照组(NC,n=15)。CS组予CS提取原液5.0 g/(kg?d)灌胃,NC和DN组均予以等量饮用水灌胃,分别于灌胃2,4,6周时随机处死三组大鼠各5只,检测24 h尿蛋白定量、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetyl glucosaminidase,NAG酶)、血清肌酐水平;HE及MASSON染色观察肾脏组织形态学变化;反转录PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA表达;免疫组织化学方法检测肾组织中HIF-1α及VEGF蛋白的表达。结果：与NC组相比较,DN组肾小管空泡变性明显,肾小球系膜区基质增多,24 h尿蛋白排泄量、尿NAG酶、血肌酐显著升高,肾组织HIF-1α和VEGF mRNA及其蛋白表达均显著增加(均P<0.05),两者的表达均随着病程延长而逐渐增强,且两组HIF-1α与VEGF表达呈正相关(r=0.850,r=0.887,均P<0.05);与DN组相比较,CS组大鼠肾小管病变程度减轻,24 h尿蛋白排泄量、尿NAG酶、血肌酐降低,肾组织HIF-1α和VEGF mRNA及其蛋白表达均下调(均P<0.05),但仍明显高于NC组(P<0.05),但CS治疗第4周、第6周HIF-1α的mRNA及蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论：DN病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达上调,两者呈正相关,提示DN肾组织存在慢性缺氧。CS可通过下调DN肾组织HIF-1α及VEGF的表达起到抗慢性缺氧损伤的肾保护作用。     

盐酸右旋美托咪啶通过提高HIF-1α的表达减轻糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤

目的本研究探讨盐酸右旋美托咪啶（Dex）是否通过提高HIF-1α的表达减轻糖尿病大鼠肾缺血再灌注后损伤。方法高 脂高糖饮食8周后的SD大鼠,30 mg/kg链脲佐菌素（STZ）腹腔注射,建立糖尿病大鼠模型。以大鼠双肾动脉结扎60 min再灌注 120 min 的方法制作肾缺血再灌注损伤模型。分为普通大鼠组（Con）,假手术组（sham）,普通大鼠肾缺血再灌注损伤模型组 （Con+I/R [ischemia-reperfusion, I/R]）,普通大鼠肾缺血再灌注损伤模型Dex治疗组（Con+I/R+Dex）,糖尿病大鼠组（DM）,糖尿 病大鼠Dex治疗组（DM+Dex）,糖尿病大鼠地高辛（Dig）灌胃组（DM+Dig）,糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤模型组（DM+I/R）,糖 尿病大鼠肾缺血再灌注损伤模型Dex治疗组（DM+I/R+Dex）,糖尿病大鼠地高辛灌胃后肾缺血再灌注损伤模型Dex治疗组 （DM+Dig+I/R+Dex）。夹闭双肾动脉前2 h给予腹腔注射Dex,其它组别腹腔注射等量生理盐水。地高辛作为HIF-1α的抑制 剂,对于地高辛组予地高辛片0.05 mg/（kg· d）灌胃1周。所有组别大鼠肾缺血再灌注后取血样,分离血浆,多功能生化仪检测肌 酐（Scr）和尿素氮（BUN）含量,Western blot 测定HIF-1α、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax,ELISA 检测HIF-1α、p-eNOS、eNOS, TUNEL法测定肾小球细胞凋亡比例。结果普通大鼠和糖尿病大鼠在肾缺血再灌注后Scr、BUN、HIF-1α、p-eNOS、eNOS表达 水平及细胞凋亡比例均显著升高（P<0.05）;肾缺血再灌注损伤模型Dex治疗后Scr、BUN、p-eNOS、eNOS表达水平明显降低, HIF-1α表达水平明显升高,差异有统计学意义（P< 0.05）;与Con+I/R相比,DM+I/R组Scr、BUN、p-eNOS、eNOS进一步升高;与 DM+I/R组相比,DM+I/R+Dex组Scr、BUN、p-eNOS、eNOS、cleaved caspase-3、Bax表达水平及凋亡细胞比例明显降低,HIF-1α 及Bcl-2表达明显升高;与DM+I/R+Dex组相比,DM+Dig+I/R+Dex组cleaved caspase-3、Bax表达水平及凋亡细胞比例明显升 高,HIF-1α及Bcl-2表达水平显著下降。结论Dex可能通过提高2型糖尿病大鼠HIF-1α的表达,抑制肾脏细胞的凋亡,减轻肾脏 细胞缺血再灌注后损伤。