整合子与金属酶介导的铜绿假单胞菌耐药性研究进展

整合子与金属酶的出现使铜绿假单胞菌的耐药机制更趋复杂，给临床抗感染治疗带来极大威胁。笔者就整合子的分类、基本结构、基因盒的捕获和在耐药基因传播中的作用，以及获得性金属酶的出现和其在铜绿假单胞菌多重耐药机制中的作用作一综述。     

Ⅰ类整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性研究

目的研究整合子在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布及耐药性情况。方法用PCR法检测铜绿假单胞菌中I类整合子基因,对整合酶阳性菌株与铜绿假单胞菌PU21行转移接合实验,采用琼脂对倍稀释法分析整合酶阳性菌株及接合转移成功菌株的药敏情况。结果 57株铜绿假单胞菌经PCR法30株检测含有I类整合酶,药敏结果显示I类整合子阳性菌株较阴性菌株耐药率明显升高,I类整合子阳性菌株21株转接成功,转移接合子与I类整合子阳性菌株比较,对亚胺培南、复方新诺明和环丙沙星的耐药性有所降低。结论铜绿假单胞菌中有I类整合子的分布,I类整合子阳性菌株及转移接合子较阴性菌株对多种抗生素更易产生耐药。     

铜绿假单胞菌整合子携带的金属β内酰胺酶研究进展

铜绿假单胞菌是条件致病菌,近年来该菌的多重耐药菌株日益增多,尤其是在该菌中发现整合子可以携带很多耐药基因如金属β-内酰胺酶基因等。本文就铜绿假单胞菌中整合子携带的金属β-内酰胺酶基因IMP、VIM、SPM和GIM的研究进展作一综述。     

在铜绿假单胞菌临床分离株1类整合子中发现携带新型耐药基因盒

目的:研究铜绿假单胞菌中1类整合子的分布和结构特征及与多重耐药的关系.方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测铜绿假单胞菌1类整合酶基因(int Ⅰ)并扩增其可变区;DNA测序技术分析1类整合子可变区的耐药基因;对1类整合子阳性菌采用琼脂平皿稀释法测定其MIC并进行转移接合明确其耐药基因转移情况;脉冲场凝胶电泳法(PFGE)了解这些阳性菌的遗传相关性.结果:47株铜绿假单胞菌临床分离株中,29株携带1类整合子,未检测到3类整合子.这29株包含的整合子均扩增出长度约4.3 kb的可变区,核酸序列分析发现存在新型耐药基因盒组合形式aac(6')-Ⅱ-aadA13-cmlA8-oxa-10,Genbank基因号为EU182575.其中基因盒aadA13以往未在铜绿假单胞菌中发现.同时第3个开放阅读框与已知基因cmlA5有95%的同源性,为编码氯霉素外排泵的基因盒,将其命名为cmlA8.PFGE结果分析显示29株阳性菌株具有高度的同源性.结论:本院流行的铜绿假单胞菌携带包含新型基因盒及组合形式的Ⅰ类整合子,再次证实1类整合子参与了铜绿假单胞菌的耐药和多重耐药.     

整合子系统与铜绿假单胞菌多重耐药性

多重耐药性铜绿假单胞菌是临床抗感染治疗中的一个棘手的问题,除了外排系统,外膜通透性障碍等天然耐药机制之外,整合子介导的多重耐药基因也是造成铜绿假单胞菌多重耐药的主要原因之一。本文就整合子的结构与分类、基因盒的种类与表达以及与铜绿假单胞多重耐药性的关系进行综述。     

铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶及耐药性的研究

目的:了解本院临床分离铜绿假单胞菌产生金属β-内酰胺酶的耐药现况与其耐药基因携带率,并分析与亚胺培南耐药关系,为预防临床感染及治疗提供重要指导.方法:临床收集2010-2012年患者标本并分离培养铜绿假单胞菌,菌株耐药性采用纸片扩散法进行检测,而金属β-内酰胺酶采用双纸片协同法检测,运用聚合酶链反应的方法检测其耐药基因.结果:在216株铜绿假单胞菌中检测出80株产金属β-内酰胺酶,占37.03%,其IMP与VIM基因检出率分别为28.75%(23/80)与11.25%(9/80),其中9株携带VIM基因的菌株都对亚胺培南抗生素耐药,而Ⅰ类整合子检出率高达82.5%(66/80),其中亚胺培南耐药菌株中Ⅰ整合子阳性率占85.71%(48/56).结论:携带金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌在临床医院内广泛传播,需要加强院内感染监测及管理,并合理使用抗生素.     

铜绿假单胞菌中整合子的分布与结构及其与耐药的关系

目的了解分离于青岛骨伤医院临床标本的铜绿假单胞菌对15种常用抗生素的耐药率;明确整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用。方法采用微量肉汤稀释法检测70株铜绿假单胞菌的对15种常用抗生素耐药率;采用煮沸法提取70株铜绿假单胞菌基因组DNA;PCR扩增Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子基因,通过测序分析其所携带耐药基因。结果 70株铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦(CPZ/SB)耐药率为1.43%,对其他抗生素的耐药性在20.00%~67.14%之间;检出Ⅰ类整合子阳性28株(40.0%),包括aacA4、aadA1、catB8和dfrA17四种基因盒。未检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌株对头孢吡肟、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株。结论铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药性因临床株而异,其中Ⅰ类整合子阳性的菌株耐药率高,提示该整合子在铜绿假单胞菌多重耐药中发挥重要作用。     

I类整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性研究

目的 研究I类整合子在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布及耐药性情况。方法 PCR法检测铜绿假单胞菌中 I 类整合子基因,对整合酶阳性菌株与铜绿假单胞菌PU21行转移接合实验,采用琼脂对倍稀释法分析整合酶阳性菌株及接合转移成功菌株的药敏情况。结果 57 株铜绿假单胞菌经PCR法检测30株含有 I 类整合酶,药敏结果显示 I 类整合子阳性菌株较阴性菌株耐药率明显升高（P<0.05）,I 类整合子阳性菌株21株转接成功,转移接合子与 I 类整合子阳性菌株比较,对亚胺培南、复方新诺明和环丙沙星的耐药性有所降低。结论 铜绿假单胞菌中有 I 类整合子的分布,I 类整合子阳性菌株及转移接合子较阴性菌株对多种抗生素更易产生耐药。     

一株多重耐药铜绿假单胞菌的双整合子基因结构分析

目的 检测临床多重耐药铜绿假单胞菌的整合子,并进行结构及定位分析.方法 PCR扩增耐药基因和整合子、电泳胶回收DNA片段并进行序列比对分析.结果 在一株多重耐药铜绿假单胞菌(PAVim2)中检测到双整合子,其中一个为Ⅰ类整合子,一个为Tn402样的Ⅰ类整合子,两者基因结构为5'CS-IntI-sul1-3'CS和5'CS-IntI-Vim2-Rh506.结论 双整合子结构的发现为铜绿假单胞菌多重耐药研究有临床意义.     

Ⅰ类整合子与耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药机制探讨

目的：探讨Ⅰ类整合子在耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药中的作用。方法：收集天津市4所大型医院共67株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌,进行Ⅰ类整合子筛选及药敏试验。结果：67株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中有46株检出Ⅰ类整合子（68．7％）;Ⅰ类整合子阳性IRPA和Ⅰ类整合子阴性ⅠRPA的多种药物耐药率无统计学差异。结论：Ⅰ类整合子可能不是导致耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因在生物被膜的表达

目的 研究携带Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌在浮游状态和生物被膜状态Ⅰ类整合酶基因(intI1) mRNA的表达水平,探讨生物被膜中整合子相关的基因转移的分子机制.方法 采用竞争RT-PCR方法定量检测intI1在两株临床分离的铜绿假单胞菌(PA10和PA39)生物被膜菌和浮游菌中mRNA的表达水平.首先用PCR方法从Ⅰ类整合子阳性铜绿假单胞菌全基因组DNA中扩增竞争体DNA (cDNA),再以cDNA为模板体外转录合成竞争体RNA (cRNA);再将不同稀释度的cRNA分别与铜绿假单胞菌的浮游菌和生物被膜菌的总RNA提取物进行竞争RT-PCR,产物经电泳分析,以已知cRNA的量确定待测样本中intI1 mRNA的表达量.结果 两株铜绿假单胞菌在其浮游状态和生物被膜状态都有intI1 mRNA表达;两菌的浮游菌和生物被膜菌intI1 mRNA表达量分别近似相等;但两菌生物被膜菌intI1 mRNA的表达量都较其浮游菌高(约15倍).结论 铜绿假单胞菌在生物被膜状态下Ⅰ类整合子intI1 mRNA的表达上调是耐药性广泛传递和多重耐药性形成的可能原因之一.     

产金属酶铜绿假单胞菌感染的监测和处理

铜绿假单胞菌广泛存在于医院环境中，尤其在危重病房，是引起医院内获得性肺炎感染的主要病原菌。过去亚胺培南作为对付革兰阴性菌的最强有力的抗生素，对铜绿假单胞菌也有极高的抗菌活性。随着碳青酶烯类抗生素的广泛应用，铜绿假单胞菌的耐药菌株逐渐增多，有的医院耐药率已达40％左右。     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子基因与耐药性的关系

目的检测临床分离铜绿假单胞菌对10种常用抗生素的敏感性及其Ⅰ类整合子的分布,探讨整合子的存在与细菌耐药性的相关性。方法收集临床分离鉴定的铜绿假单胞菌58株,纸片扩散法测定其对10种常用抗生素的敏感性,PCR法检测Ⅰ类整合子整合酶基因,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的关系。结果 58株铜绿假单胞菌对10种常用抗生素的耐药率为29.31%~74.14%,Ⅰ类整合子的检出率为70.69%。Ⅰ类整合子阳性菌株对左氟沙星及庆大霉素表现出较高的耐药率,其耐药率明显高于Ⅰ类整合子阴性菌株(χ2=12.35、5.635,P<0.05)。结论铜绿假单胞菌的耐药性与Ⅰ类整合子密切相关,Ⅰ类整合子对铜绿假单胞菌耐药起着重要作用。     

铜绿假单胞菌产酶与耐药相关性的初步研究

目的 探讨铜绿假单胞菌产AmpC酶、金属酶与其耐药的相关性。方法 从湘雅医院各临床科室送检的标本中分离出82株铜绿假单胞菌，采用纸片扩散法检测AmpC酶，纸片协同法检测金属酶，并选用7种广谱抗生素进行药敏实验。结果 82株铜绿假单胞菌中，AmpC酶和金属酶阳性率分别为32.9％和8．5％。AmpC酶阳性菌株对头孢他啶（CAZ），头孢他啶／棒酸（CDO2），头孢塞肟（CTX），头孢塞肟／棒酸（CDO3），氧氟沙星（OFX），阿米卡星（AK）表现高度耐药，对亚安培南（IPM），头孢比肟（FEP），氨曲南（ATM）敏感；金属酶阳性菌株仅对阿米卡星（AK）敏感，对其余抗生素表现高度耐药。结论 湘雅医院临床标本分离的铜绿假单胞菌产AmpC酶和金属酶阳性率高，两种酶与铜绿假单胞菌多重耐药性相关。铜绿假单胞菌产酶的检测有助于控制院内感染和指导临床用药。     

34株多重耐药铜绿假单胞菌β内酰胺酶基因及Ⅰ类整合子检测分析

目的:探讨我院临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶相关基因及Ⅰ类整合子(int Ⅰ 1和qacE△1-sul1)的携带情况,为临床抗感染治疗和控制医院感染提供依据.方法:采用K-B法对临床分离的铜绿假单胞;进行药敏试验,选出34株多重耐药菌株,用PCR法检测其相关耐药基因16种.结果:在34株多重耐药铜绿假单胞菌...     

70例铜绿假单胞菌产酶与耐药性的检测

目的：探讨铜绿假单胞菌产AmpC酶、金属酶与其耐药的相关性。方法：分离70株铜绿假单胞菌，采用纸片扩散法检测AmpC酶、纸片协同法检测金属酶，并选用7种广谱抗生素进行药敏实验。结果：70株铜绿假单胞菌中，AmpC酶和金属酶阳性率分别为35．7％和7．14％。AmpC酶阳性菌株对头孢他啶（CAZ），头孢他啶／棒酸（CD02），头孢噻肟（CTX），头孢噻肟／棒酸（CD03），氧氟沙星（OFX），阿米卡星（AK）表现高度耐药，对亚胺培南（IPM），头孢吡肟（FEP），氨曲南（ATM）敏感；金属酶阳性菌株仅对阿米卡星（AK）敏感，对其余抗生素表现高度耐药。结论：铜绿假单胞菌产AmpC酶和金属酶阳性率较高，两种酶与铜绿假单胞菌多重耐药性相关。     

亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合酶基因的研究

目的了解我院临床分离的耐亚胺培南（IMP）的铜绿假单胞菌（PA）中Ⅰ类整合酶基因（intIl）和耐消毒剂-磺胺相关基因（qacE△1-sulI）的存在状况,追溯我院耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPA）的来源及其耐药机理。方法采用VITEK-AMS60全自动微生物仪进行菌株鉴定和药敏试验,随机挑选自临床分离的60株铜绿假单胞菌（其中30株IMP耐药的PA,30株IMP敏感的PA）。采用聚合酶链反应（PCR）技术及序列分析法检测I类整合子遗传标记（intI1和qacE△1-sulI）基因。结果IMP耐药组对抗生素的耐药率明显高于IMP敏感组;30株IMP耐药的PA中有23株（76．7％）intI1阳性。11株（36．7％）qacE△1一sulI阳性;另30株IMP敏感的PA中有12株（40．O％）intll阳性,3株（10．0％）qacE△1-sulI阳性．阳性基因主要来自神经外科,其次是神经内科和外科ICU病房。结论I类整合子遗传标记基因（intIl和qacE△l-sulI）与PA的耐药和多重耐药具有相关性,特别是IRPA中intIl基因携带率很高,提示intIl基因可能是PA耐IMP及多重耐药的一个重要原因．临床应合理使用抗生素,减少耐药菌株的产生,同时对重点科室的感染控制措施。加强对耐药基因在病原菌种属间传播和扩散的监测工作．     

临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与ISCR1研究

目的 了解临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单保菌Ⅰ类整合子与插入序列共同区1(ISCR1)的分布情况.方法 2010年1月至2013年12月共收集我院126株多重耐药鲍曼不动杆菌和89株多重耐药铜绿假单胞菌,采用PCR法扩增Ⅰ类整合酶、Ⅰ类整合子基因盒、ISCR1、ISCR1可变区.Ⅰ类整合基因盒和ISCR1可变区的PCR产物分别用HinfⅠ、RasⅠ进行酶切,相同类型酶切图谱的PCR产物随机挑取一例进行测序,测序结果在GenBank中用BlastN进行核酸序列同源性搜索.结果 在多重耐药鲍曼不动杆菌中,检出79例Ⅰ类整合酶,67例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有6种类型;59例ISCR1阳性,其中9例ISCR1可变区阳性.在89株多重耐药铜绿中,检出41例Ⅰ类整合酶,36例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有10种类型;9例ISCR1阳性,其中4例ISCR1可变区阳性.有8株鲍曼不动杆菌和2株铜绿假单胞菌同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1可变区结构.结论 在多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,Ⅰ类整合子和ISCR1分布较广.     

铜绿假单胞菌获得性金属β-内酰胺酶及其相关基因研究

目的 了解该院铜绿假单胞菌(Pae)金属酶的产生及其相关基因携带情况.方法 采用多种方法进行Pae金属酶初筛、确证试验,并检测4种金属酶基因.结果 产金属酶菌株初筛阳性率为53.5%,用头孢他啶(CAZ)/乙二胺四乙酸(EDTA)、CAZ/2-巯基丙酸(2-MPA)、亚胺培南(IMP)/EDTA、IMP/2-MPA检测阳性率分别为13.95%、15.12%、17.44%、18.60%.PCR扩增结果仅IMP-1出现阳性,阳性率达16.28%,其余3种金属酶基因均为阴性.结论 不同方法对金属酶检测结果不尽相同;携带IMP-1金属酶基因是该院Pae耐碳青霉烯类等多种药物的主要原因.     

一株携带多种耐药基因的铜绿假单胞菌研究

目的了解铜绿假单胞菌的多重耐药情况和有关机理。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、耐消毒剂和磺胺基因（qacE△1—sul1）的检测。并对CARB基因进行了测序。结果PCR显示CARB、TEM型β-内酰胺酶基因，aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ AMEs基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因和耐磺胺基因扩增阳性，oprD2基因扩增检测呈缺失型。CARB基因扩增产物测序，经BLAST程序分析（WWW．ncbi．nlm．nih．gov）为CARB-3型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因，管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的Ⅱ代导管的抑菌效果需重新评价。