自产碱性磷酸酶—ELisA间接法对日本血吸虫病兔早期诊断的观察

本文报道自产碱性磷酸酶(自产AKP)ELisA间接法对日本血吸虫病兔的早期诊断。采用日本血吸虫卵粗抗原4μg/ml,每孔滴入0.2ml,4℃包板过夜,并以正常兔血清1:200,日本血吸虫病兔血清1:400,自产AKP——羊抗兔IgG工作稀释度1:200,为适宜条件。受试家兔中5只感染日本血吸虫尾蚴50条,另5只感染1200条。感染后,每隔三天,进行ELisA检测。结果:受试家兔血清于感染后第12天全部出现阳性;同时,采用上述适宜条件,进行ELisA检测5只肝吸虫病兔血清,结果全为阴性。显示自产AKP—ELisA间接法检测日本血吸虫病兔具有早期诊断的价值,并有一定的特异性。     

旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原的制备及应用价值的初步探讨

用非离子去垢剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４分离制备旋毛虫肌肉期幼虫膜抗原，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、铵银染色后显示１４种组分，分子量在９９～２８ｋｄ之间，主带分子量为９４、９０、４７、３２及２８ｋｄ。间接ＥＬＩＳＡ表明该抗原与血吸虫、犬弓首线虫、肝吸虫及斯氏肺吸虫感染兔血清不发生交叉反应。经４８小时培养获得的旋毛虫肌肉期幼虫的排泄分泌抗原和用溴化十六烷基三甲胺剥脱的旋毛虫肌肉期幼虫表面抗原与血吸虫和肝吸虫感染兔血清均发生交叉反应。     

日本血吸虫表皮膜蛋白的研究 Ⅱ.生化及免疫活性分析

日本血吸虫表皮膜蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后至少显示19个蛋白带,其中3条蛋白带含醣,分子量分别为24KD、17.5KD和15KD。用免疫印班技术能检出与日本血吸虫病人血清反应的表皮膜抗原组分,其分子量分别为125KD、100KD和57KD     

具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的 :寻找具有保护性的弓形虫功能性表位 ,为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法 :通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株 ,观察了体内、外单克隆抗体的保护性效果 ;用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg ,并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME4 9株抗原的交叉反应。结果 :建立了 7个分泌弓形虫McAb的细胞株 ,Western blot显示 7个McAb可识别 4种不同分子量的抗原 ,体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖。在感染后第 3d即可检测到CAg,未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应 ,但是与弓形虫ME4 9株出现了交叉反应带。结论 :7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力 ,有潜在的诊断价值     

流行性出血热病毒抗原组份的分析

用免疫转印技术对流行性出血热(EHF)病毒的抗原组份进行了初步分析。发现两种不同来源的兔抗EHF兔疫血清和20份4～21病日的EHF病人血清,均可与分子量在68,000和66,000道尔顿左右的两种病毒多肽成份发生反应,正常人和非EHF病人血清以及正常兔血清则否,表明这两种多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成份。     

ELIB检测脑囊虫病人循环抗原

采用猪囊尾蚴抗原免疫纯系家兔制备免疫兔血清,以酶联免疫印渍(ELIB)法检测40例脑囊虫病人血清中循环抗原。脑囊虫病人分别出现1条～4条 特异反应带,各带分子量分别为53.0、23.0、19.0、17.5 KD;各带出现率分别为90.0％、75.0％、67.5％和87.5％。20例单纯绦虫病患者和20例正常人,除1例绦虫病人呈交叉反应(19.0KD)外均为阴性。结果表明来源广、制备方便的免疫兔血清检测诊断脑囊虫病具有较高的特异性和敏感性。     

流行性出血热患者对野、家鼠型病毒多肽抗原的抗体应答

应用兔抗流行性出血热(EHF)病毒血清及EHF病人血清对野、家鼠型EHF病毒多肽抗原进行免疫识别,发现两型病毒多肽抗原间稍有差异。不同流行地区EHF病人血清大多数可与两型病毒49.6ku(50kd)多肽反应,提示该多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成分。并对EHF病人血清中针对两型病毒多肽抗原的抗体检出率与临床病程及病型的关系进行了观察。     

人巨细胞病毒PPUL44蛋白单克隆抗体CH13抗原决定簇位点的确定

目的 :确定人巨细胞病毒 PPU L44蛋白单克隆抗体 CH13在 PPU L44上的抗原决定簇位置 ,探讨随机多肽文库在研究相互作用蛋白质的氨基酸序列方面的应用。方法 :用 CH13在一个随机多肽文库中筛选出能与CH13结合的克隆 ,测定上述克隆随机多肽的 DNA序列 ,用随机多肽的氨基酸同源序列与 PPUL44蛋白质的氨基酸序列比较。结果 :能与 CH13结合的随机多肽的氨基酸序列显示出高度的一致性 ;随机多肽同源序列NEGEAFGPDVSG与 PPUL44蛋白位于第 32 1～ 332的氨基酸序列高度同源 ;而随机多肽序列 FQIL VCVESVL R与 PPU L44位于第 181～ 184的氨基酸序列有 4个相邻的氨基酸一致。结论 :CH13的抗原决定簇位于 PPU L44蛋白第 32 1～ 332氨基酸序列附近 ;CH13与 PPU L44位于第 181～ 184氨基酸序列可能有一定反应。随机多肽文库在研究相互作用蛋白质的氨基酸序列方面具有广泛的应用前景。     

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。     

具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的：寻找具有保护性的弓形虫功能性表位。为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法：通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株，观察了体内，外单克隆抗体的保护性效果；用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg，并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME49株抗原的交叉反应。结果：建立了7个分泌弓形虫McAb的细胞株，Western-blot显示7个McAb可识别4种不同分子量的抗原，体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖，在感染后第3d即可检测到CAg，未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应，但是与弓形虫ME49株出现了交叉反应带。结论：7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力，有潜在的诊断价值。     

旋毛虫肌蚴可溶性抗原与日本血吸虫病患者血清的交叉反应

应用ＥＬＩＢ技术观察旋毛虫肌蚴抗原（ＴｓＭＬＳＡ）与６种寄生虫病人血清的交叉反应，结果表明：ＴｓＭＬＳＡ中３１～１００ＫＤａ，内的蛋白大部分被急性血吸虫颊人血清所识别，而慢性血吸虫病人血清仅识别其中的４４／４５，５１／５３，６２／６４及１００ＫＤａ蛋白，小于６０ＫＤａ者可与丝虫病，钩虫病，蛔虫病和肝吸虫病人血清呈不同程度的交叉反应，以前三者为最明显，４５ＫＤａ蛋白可被部分正常人血清识别，提示，旋毛     

鸡卵核提取物中检测4种结缔组织病自身抗体的抗原分析

目的　检测鸡卵核提取物中结缔组织病自身抗体的抗原成份。方法　应用SDS -PAGE及考马斯亮兰染色技术对鸡卵核提取物进行蛋白组份分析 ;应用Western -blot技术对鸡卵核蛋白抗原进行免疫识别分析。结果　鸡卵核提取物中可见 13个蛋白成份 ,分子量分别为 78、 76、 72、 6 4、 5 7、 5 5、 5 0、 48、 46、 42、 38、 32和2 4KD。皮肌炎和多发性肌炎 (DM /PM )及进行性系统性硬皮病 (PSS)病人血清识别的抗原区带相同 ,有 2个组份 ,其分子量为 78和 5 0 /4 6KD ;混合性结缔组织病 (MCTD)病人血清识别的抗原区带有 3个 ,其分子量分别为78、 72和 5 0 /4 6KD ;系统性红斑狼疮 (SLE)病人血清识别的抗原区带有 3个 ,其分量分别为 778、 5 0 /4 6和42KD ;正常人血清未见识别带。结论　鸡卵核提取物中存在有结缔组织病自身抗体识别的抗原组分 ;其中 72KD蛋白是诊断MCTD的特异性抗原 ,42KD蛋白是诊断SLE的特异性抗原     

鸡卵核提取物中诊断混合性结缔组织病的特异性抗原分析

目的：分析鸡卵核提取物中检测混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）的特异性抗原成份。方法：应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及考马斯亮兰染色技术对鸡卵核提取进行蛋白组份分析;应用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术对鸡卵核蛋白抗原进行免疫识别分别。结果：鸡卵核提取物中可见１３个蛋白成份,分子量分别为７８,７６,７２,６４,５７,５５,５０,４８,４６,４２,３,３２和２４ＫＤ。皮肌炎和多发性肌炎（ＤＭ／ＰＭ）及硬皮病（ＰＳＳ）病     

华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

日本血吸虫不同发育阶段与旋毛虫抗原交叉性的研究

运用ＥＩＴＢ技术分析日本血吸虫（Ｓｊ）尾蚴、肝期童虫及雌雄成虫与旋毛虫（Ｔｓ）肌蚴抗原的交叉性。结果显示：Ｓｊ尾蚴、肝期童虫、成虫各阶段不同程度地被抗－ＴｓＳＡＲＳ，ＴｓＩＲＳ识别，其识别的抗原分子量在１５￣１００（尤５０￣７０）ｋＤ之间，两种抗血清识别的带型基本相同。所识别的各期Ｓｊ抗原中以尾蚴抗原最多，次为肝期童虫。３０天成虫仅雌虫抗原与上述两种抗血清在９７ｋＤ处显出一条弱带。抗－Ｓｊ♂ＡＲＳ     

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

马来丝虫和牛指状腹腔丝虫抗原化学及免疫学特性的分析

应用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶联免疫印迹技术，分析了马来丝虫成虫抗原、微丝蚴抗原及牛指状腹腔丝虫成虫原化学及免疫学特性。结果表明三者分别有６条、４条和２条丝虫抗原特异性组分，这些丝虫特异性组分与肠道线虫病人血及健康人血清均无交叉和假阳性反应，而ＳＡ－Ａｇ价廉易得，用于丝虫病免疫依断和人群血清学监测可望获得较 好效果。     

旋毛虫成囊前期幼虫17 000抗原组分的免疫诊断价值

目的研究旋毛虫成囊前期幼虫抗原(PELA) 17 000组分的免疫诊断价值.方法应用聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和转印技术分离PELA 17 000蛋白组分,用ELISA检测实验感染旋毛虫的Wistar大鼠和旋毛虫病患者血清抗体,并以PELA和成囊期幼虫抗原(ELA)为对照.结果对于感染旋毛虫的大鼠,17 000组分和PELA的首次血清阳性反应出现在感染后第10 d,而ELA则在感染后第14 d,其差异具有统计学意义(P<0.05);对48份旋毛虫病患者血清,17 000抗原的阳性率为95.8%, PELA和ELA的阳性率均为100%,3种抗原之间差异均无统计学意义(P>0.05).17 000抗原与其他寄生虫病患者及健康人血清无反应,而PELA和ELA均与肺吸虫病、鞭虫病患者血清有反应,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论与PELA和ELA相比,PELA 17 000组分对旋毛虫病的早期诊断具有更大的价值.