中枢神经系统白血病脑脊液中肿瘤坏死因子α的检测

中枢神经系统白血病脑脊液中肿瘤坏死因子α的检测李大启王宝珍王占聚徐建民我们检测了３０例白血病患者脑脊液（ＣＳＦ）中的肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）水平，并探讨其临床意义。材料和方法１病例选择白血病患者３０例，男２１例，女９例，中位年龄３９（１２～６５）...     

增生性瘢痕组织中肿瘤坏死因子α R1 mRNA的表达及意义

目的：从基因水平探讨肿瘤坏死因子受体(TNF-α R1)在增生性瘢痕组织发生、发展过程中的作用，为增生性瘢痕的基因治疗探索一条有效途径。方法：以正常瘢痕为对照，利用RT-PCR技术检测1年以上增生性瘢痕组织成纤维细胞中TNF-α R1 mRNA的表达情况。结果：1年以上增生性瘢痕组织中TNF-α R1 mRNA的表达稳定，与正常瘢痕比较含量明显下降。结论：增生性瘢痕的形成与TNF-α R1的表达低下有一定关系。用基因治疗的方法提高早期增生性瘢痕中TNF-α的含量或者提高靶细胞膜上TNF-α R1的数目与活性可能为增生性瘢痕的康复治疗的有效途径。     

诱导分化剂对白血病细胞产生肿瘤坏死因子α作用探讨

急性白血病患者原代白血病细胞的ＨＬ－６０细胞在诱导分化前后产生肿瘤坏死因子α的作用被研究。急性淋巴细胞白血病患者原代白血病细胞在诱导分化前后均不能产生ＴＮＦα，而急性非淋巴细胞白血病患者的原代白血病细胞在５种诱导分化剂诱导分化后能产生ＴＮＦα，白血病细胞产生ＴＮＦα与细胞分化密切相关。     

白血病细胞分泌肿瘤坏死因子α及受诱导分化剂影响

作者观察２８例急性白血病患者原代白血病细胞和ＨＬ－６０细胞自发分泌及在脂多糖（ＬＰＳ）诱导下分泌肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）情况，并用咐醇酯（ＴＰＡ）等５种诱导分化剂诱导原代白血病细胞和ＨＬ－６０细胞，探讨白血病细胞诱导分化与ＴＮＦα分泌之间关系。结果：６例急性单核细胞白血病患者的白血病细胞在ＬＰＳ诱生下可以分泌ＴＮＦα，其中３例在无ＬＰＳ时还可自发分泌ＴＮＦα。用ＴＰＡ等诱导分化后部分原代白血病细     

急性白血病骨髓基质细胞肿瘤坏死因子α分泌活性及其意义

目的：探讨急性白血病（ＡＬ）骨髓基质细胞肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）分泌活性。方法：应用体外骨髓基质细胞培养法及ＴＮＦα生物活性检测法，对ＡＬ患者２０例及正常对照者１０名的骨髓基质细胞培养上清中的ＴＮＦα活性水平进行检测，并同步检测了患者血清、骨髓白血病细胞培养上清中的ＴＮＦα活性。结果：ＡＬ骨髓基质细胞形成能力较差，但其ＴＮＦα活性明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；少部分急性髓系白血病（ＡＭＬ）骨髓白血病细胞能自发分泌ＴＮＦα；患者血清中的ＴＮＦα活性显著高于正常对照（Ｐ＜０．００１）。结论：ＡＬ患者骨髓基质细胞存在量和质的异常，ＴＮＦα的异常分泌可能是导致ＡＬ增殖的一个重要因素     

瘦素对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

背景:瘦素是脂肪组织分泌的一种多肽激素,研究显示瘦素在动脉粥样硬化形成中发挥了一定重要的作用。目的:观察瘦素对鼠源性巨噬细胞系RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α表达的影响,并从核转录因子κB活性变化角度探讨其可能机制。设计:对照观察实验。单位:华中科技大学同济医学院生物化学及分子生物学系。材料:实验于2005-04/2006-02在华中科技大学同济医学院生物化学及分子生物学系及附属协和医院普外科实验室完成。将培养的RAW264.7细胞分为不同浓度瘦素处理组(12.5,25,50,100μg/L)、IkappaB激酶抑制剂组及空白对照组。每组3瓶,重复实验3次。方法:将鼠源性巨噬细胞株RAW264.7细胞以1×109L-1密度接种于6孔板中,用含体积分数为0.1的小牛血清的RPMI-1640培养基培养。待RAW264.7细胞生长至80%时,换用无血清培养基Opti-MEM继续培养24h后,将细胞分为不同浓度瘦素处理组(12.5,25,50,100μg/L)及空白对照组,瘦素孵育4h后采用反转录-聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α在mRNA水平的表达。上述分组细胞经瘦素分别孵育1,3,6和9h后采用双抗夹心酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子α在蛋白水平的表达。上述分组细胞经瘦素孵育不同时间后采用凝胶迁移率实验检测细胞核内核转录因子κB活性。将RAW264.7细胞分为以下4组:空白对照组、IkappaB激酶特异性抑制剂PS1145(10μmol/L)处理组、瘦素(50μg/L)处理组、瘦素(50μg/L) PS1145(10μmol/L)组,各组孵育时间均为6h,分别检测细胞核内核转录因子κB活性及肿瘤坏死因子α在mRNA水平的表达。主要观察指标:①不同浓度瘦素对RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α:mRNA表达水平的影响;蛋白分泌的影响。②不同浓度瘦素对RAW264.7细胞核内核转录因子κB活性的影响。③抑制IkappaB激酶活性对瘦素诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α的影响。结果:①RAW264.7细胞经不同浓度的瘦素处理后,肿瘤坏死因子α在mRNA水平呈瘦素剂量依赖性增加,50μg/L瘦素处理组达峰值。②蛋白水平的表达呈瘦素剂量时间依赖性增加,50μg/L瘦素处理6h即可达峰值。③核转录因子κB的活性亦与瘦素浓度正相关,50μg/L瘦素处理6h后核转录因子κB活性最高(P<0.05)。④抑制IkappaB激酶活性可部分抑制肿瘤坏死因子α的表达。结论:瘦素可直接促进RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α的表达和分泌,并呈剂量时间依赖性,其机制可能与瘦素激活核转录因子κB有关。这可能是瘦素致动脉粥样硬化的机制之一。     

瘦素对RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

背景：瘦素是脂肪组织分泌的一种多肽激素，研究显示瘦素在动脉粥样硬化形成中发挥了一定重要的作用。目的：观察瘦素对鼠源性巨噬细胞系RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α表达的影响，并从核转录因子κB活性变化角度探讨其可能机制。设计：对照观察实验。单位：华中科技大学同济医学院生物化学及分子生物学系。材料：实验于2005-04／2006—02在华中科技大学同济医学院生物化学及分子生物学系及附属协和医院普外科实验室完成。将培养的RAW264．7细胞分为不同浓度瘦素处理组（12．5，25，50，100μg／L）、I kappa B激酶抑制剂组及空白对照组。每组3瓶，重复实验3次。方法：将鼠源性巨噬细胞株RAW264．7细胞以1&;#215;10^9 L^-1密度接种于6孔板中，用含体积分数为0．1的小牛血清的RPMI-1640培养基培养。待RAW264．7细胞生长至80％时，换用无血清培养基Opti—MEM继续培养24h后，将细胞分为不同浓度瘦素处理组（12．5，25，50，100μg／L）及空白对照组，瘦素孵育4h后采用反转录-聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α在mRNA水平的表达。上述分组细胞经瘦素分别孵育1，3，6和9h后采用双抗夹心酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子α在蛋白水平的表达。上述分组细胞经瘦素孵育不同时间后采用凝胶迁移率实验检测细胞核内核转录因子κB活性。将RAW264．7细胞分为以下4组：空白对照组、I kappa B激酶特异性抑制剂PS1145（10μmol／L）处理组、瘦素（50μg／L）处理组、瘦素（50μg／L）＋PS1145（10μmol／L）组，各组孵育时间均为6h，分别检测细胞核内核转录因子κB活性及肿瘤坏死因子α在mRNA水平的表达。主要观察指标：①不同浓度瘦素对RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α：mRNA表达水平的影响；蛋白分泌的影响。②不同浓度瘦素对RAW264．7细胞核内核转录因子κB活性的影响。③抑制I kappa B激酶活性对瘦素诱导RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α的影响。结果：①RAW264．7细胞经不同浓度的瘦素处理后，肿瘤坏死因子α在mRNA水平呈瘦素剂量依赖性增加，50μg／L瘦素处理组达峰值。②蛋白水平的表达呈瘦素剂量时间依赖性增加，50μg／L瘦素处理6h即可达峰值。③核转录因子κB的活性亦与瘦素浓度正相关，50μg／L瘦素处理6h后核转录因子κB活性最高（P〈0．05）。④抑制I kappa B激酶活性可部分抑制肿瘤坏死因子α的表达。结论：瘦素可直接促进RAW264．7细胞肿瘤坏死因子α的表达和分泌，并呈剂量时间依赖性，其机制可能与瘦素激活核转录因子κB有关。这可能是瘦素致动脉粥样硬化的机制之一。     

肿瘤坏死因子α对慢性粒细胞白血病源树突状细胞表达树突状细胞趋化因子1的影响

目的观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外诱导的慢性粒细胞白血病（CML）来源的树突状细胞（DCs）表达树突状细胞趋化因子1（DC-CK1）水平的影响。方法分离初诊20例CML患者外周血单个核细胞,用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）100μg/L、重组人白细胞介素4（rhIL-4）100μg/L培养5天,然后分为实验组和对照组两组,实验组加入TNF-α50μg/L,对照组只加培养基,第7天收获细胞。通过细胞形态学（倒置显微镜、Wright染色）及免疫表型对培养的DCs进行鉴定;荧光原位杂交（FISH）对DCs进行细胞遗传学检测;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测DC-CK1的表达水平。结果培养后实验组细胞的树枝样突起更明显,而且实验组DCs表面分子的表达比对照组上调,差异有统计学意义（P〈0.05）,同时经FISH证实了DCs的白血病来源;最后ELISA检测显示实验组DCs培养上清中DC-CK1的含量为（175.094±52.487）ng/L（n=10）,明显低于对照组的（658.926±84.105）ng/L（n=10）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 TNF-α抑制CML源树突状细胞表达DC-CK1。     

白血病细胞肿瘤坏死因子产生的研究

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）是由单核－巨噬细胞产生的单核细胞刺激因子，最近有人报道Ｔ及Ｂ淋已细胞也能产生ＴＮＦ，提示ＴＮＦ－α来源的多样化。本研究提示用ＴＰＡ、ＯＫ４３２刺激诱导只有单核细胞产生ＴＮＦ－α，而ＰＨＡ－Ｐ可使淋巴细胞和单核细胞均产生ＴＮＦ－α。用ＯＫ４３２对不同类型白血病细胞进行诱导，发现Ｍ＿４及Ｍ＿（５ｂ）型白血病细胞可产生大量ＴＮＦ－α。细胞表面ＣＤ＿（１４）抗体阳性率越高ＴＮＦ－α产率也越高。提示ＴＮＦ－α的产生可作为单核细胞分化的一种指标，用以对细胞因子与白血病增殖作深入的研究。     

高脂饮食对结肠炎小鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨高脂饮食对结肠炎小鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及作用机制。方法 雌性BALB/C小鼠10只随机分为实验组和对照组各5只,2组小鼠均给予100mg/kg三硝基苯磺酸乙醇溶液灌肠诱导结肠炎,实验组给予高脂饮食喂养,对照组给予普通饮食喂养,观察2组小鼠一般状态、体质量改变和粪便性状,检测粪便隐血,灌肠1周后行结肠组织病理学检查,采用ELISA法检测结肠组织肿瘤坏死因子-α表达情况,采用鲎试剂检测结肠组织脂多糖水平。结果 2组小鼠灌肠后第2天出现懒动、厌食、皮毛凌乱、腹泻,第3天出现血便、体质量下降;实验组小鼠疾病活动指数(6.02±0.73)、结肠损伤组织学评分(6.87±2.02)、结肠组织肿瘤坏死因子-α((34.57±3.64)ng/L)和脂多糖水平((349.46±45.27)EU/L)高于对照组(4.48±0.36、4.23±1.38、(23.25±2.18)ng/L、(263.77±38.43)EU/L)(P<0.05)。结论 高脂饮食可加重小鼠实验性结肠炎的病变程度,可能与高脂饮食加重肠道功能紊乱导致细菌脂多糖过多进入机体引起严重炎症反应有关。     

肿瘤坏死因子-α对内皮细胞组织因子和组织因子途径抑制物表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达TF及TFPI的影响.方法:设不同时间组,TNF-α 10 ng/mL分别培养0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h,另设不同溶度组,TNF-α 0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、20ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL分别培养6 h;ELISA法测定TF及,TFPI抗原的表达;RT-PCR检测TF及TFPI基因的表达.结果:各浓度的TNF-α对HUVECs的细胞活力无明显影响;TNF-α促进TF抗原的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α 10 ng/mL作用6 h时最明显(P＜0.01);TNF-α促进TF mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在3 h时达到高峰(P＜0.01);TNF-α对HUVECs表达TFPI抗原及TFPI mRNA无明显影响.结论:TNF-α可以诱导HUVECs细胞表达TF:TNF-α对HUVECs细胞TFPI的表达无明显影响.     

山莨菪碱对急性肺损伤肿瘤坏死因子-α的影响及意义

目的 研究创伤性急性肺损伤（ＡＬＩ）家兔体内肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨山莨菪菪碱（６５４－２）对创伤性ＡＬＩ及多器官功能障碍（ＭＯＤＳ）的防治作用及可能机制。方法 采用家兔创伤性ＡＬＩ模型,实验动物随机分为正常对照组（８只）创伤模型组（１０只）、６５４－２治疗组（１０只）。用ＥＬＩＳＡ方法检测不同时相点血浆中ＴＮＦ－α的呈。用免疫组织化学法结合原位定量分析检测肺、肝、心、肾组织ＴＮＦ－     

增生性瘢痕组织中肿瘤坏死因子αR1mRNA的表达及意义

目的从基因水平探讨肿瘤坏死因子受体(TNF-α R1)在增生性瘢痕组织发生、发展过程中的作用,为增生性瘢痕的基因治疗探索一条有效途径.方法以正常瘢痕为对照,利用RT-PCR技术检测1年以上增生性瘢痕组织成纤维细胞中TNF-α R1mRNA的表达情况.结果1年以上增生性瘢痕组织中TNF-α R1mRNA的表达稳定,与正常瘢痕比较含量明显下降.结论增生性瘢痕的形成与TNF-α R1的表达低下有一定关系.用基因治疗的方法提高早期增生性瘢痕中TNF-α的含量或者提高靶细胞膜上TNF-α R1的数目与活性可能为增生性瘢痕的康复治疗的有效途径.     

丹参对类风湿关节炎患者滑膜细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨丹参对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响。方法抽取RA患者关节液进行体外培养分离滑膜细胞,在细胞培养至3～5代时,给予丹参处理,在处理48h后收集培养上清,ELISA检测TNF-α的表达水平。结果当丹参浓度依次以0,6.25,12.5,25,50,100mg/L递增时,TNF-α浓度分别为（161.68±7.55）pg/ml、（161.68±8.79）pg/ml、（163.49±25.68）pg/ml、（137.33±35.98）pg/ml、（81.32±22.84）pg/ml和（86.89±28.48）pg/ml。丹参浓度为50mg/L和100mg/L时,与加入丹参前比较差异有统计学意义（P值分别为0.001和0.004）。结论丹参可以抑制RA滑膜细胞TNF-α的分泌,并且这一抑制作用可能是其用于RA治疗的理论基础。     

脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子和肿瘤坏死因子-α表达的相关性及肝素对其水平的影响

目的:观察脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其相关性;并观察小剂量肝素对两者的影响。方法:雌性Wistar大鼠49只,随机分为假手术组(7只)、脓毒症组(21只)、肝素干预组(21只),以CLP法复制大鼠脓毒症模型,于不同时间点测定大鼠血清MIF及TNF-α水平。结果:脓毒症组及肝素干预组大鼠血清MIF和TNF-α水平显著高于假手术组(均P<0.05),肝素干预组各时间点大鼠血清MIF及12、24h时间点TNF-α水平显著低于相应脓毒症组(均P<0.05),两组血清MIF与TNF-α水平变化呈正相关(脓毒症组r=0.859,肝素干预组r=0.711)。结论:脓毒症大鼠血清MIF及TNF-α水平均显著升高,早期应用小剂量肝素可减轻炎症反应,两种炎性因子的变化呈正相关。     

青藤碱对体外人外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的观察青藤碱对体外培养人外周血单个核细胞TNF-α表达的影响。方法将分离的正常人外周血单个核细胞分成5组,分别给予0.9%氯化钠注射液、高剂量青藤碱、中剂量青藤碱、低剂量青藤碱和地塞米松;孵育48 h后,提取细胞培养液上清液,用放免法检测肿瘤坏死因子α的含量,用半定量RT-PCR法检测外周血单个核细胞中TNF-αmRNA的表达。结果高剂量青藤碱组和地塞米松组细胞培养液的上清液TNF-α含量明显低于0.9%氯化钠注射液组(P<0.05),高剂量青藤碱组的TNF-α的含量水平明显低于中、小剂量青藤碱组(P<0.05),且其外周血单个核细胞TNF-α的mRNA表达水平较0.9%氯化钠注射液组有显著下降(P<0.05)。结论抑制人外周血单个核细胞表达TNF-α可能是青藤碱治疗强直性脊柱炎的机制之一。     

二氧化碳和氦气气腹对幼猪红细胞免疫及腹腔液中肿瘤坏死因子α的影响

目的:分别以二氧化碳、氦气模拟气腹动物模型,观察其红细胞免疫功能及腹腔液中肿瘤坏死因子α含量的变化,探讨腹腔镜手术中气腹状态对机体红细胞免疫功能的影响。方法:实验于2004-12/2006-12在西京医院实验外科完成。①实验动物:清洁级幼猪30只,随机数字表法分为3组:二氧化碳气腹组、氦气气腹组、正常对照组,10只/组。②实验方法:幼猪麻醉后,于剑突下正中作小切口,刺入气腹针后连接气腹机,二氧化碳气腹组、氦气气腹组分别注入二氧化碳和氦气,保持气腹压力为1.33～1.60kPa,气体流量为0.3L/min,持续性膨腹30min。正常对照组未进行造模。③实验评估:造模后1,4d,ELISA法检测各组幼猪腹腔灌洗液中细胞数量及其释放肿瘤坏死因子α的含量。各组幼猪分别于造模前1d、造模后1,4d采集外周静脉血,测定红细胞C3b受体花环率(高倍镜下计数200个红细胞,以1个红细胞上结合2个或2个以上酵母菌为阳性花环)、红细胞免疫复合物花环率(结果判断同前)、肿瘤红细胞花环率(高倍镜下计数100个癌细胞,以结合3个或3个以上红细胞为阳性花环)。结果:幼猪30只全部进入结果分析。①腹腔液细胞数量及肿瘤坏死因子α含量检测:造模后氦气气腹组腹腔液中细胞数明显多于二氧化碳气腹组、正常对照组[(10628±326),(5721±271),(5648±262)个/L;t=1.7×10-23,P均<0.05]。与正常对照组腹腔细胞释放肿瘤坏死因子α的含量比较,二氧化碳气腹组明显减少,氦气气腹组明显增多[(462±51),(273±28),(785±68),P均<0.05]。②红细胞免疫功能检测:造模前各组红细胞C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率、肿瘤红细胞花环率均基本相似(t=0.61～0.92,P均>0.05);造模后1,4d,二氧化碳气腹组红细胞C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率、肿瘤红细胞花环率均显著低于氦气气腹组和正常对照组(t=8.22×10-5～1.2×10-3,P均<0.05)。二氧化碳气腹组造模后1,4d红细胞C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率、肿瘤红细胞花环率均明显低于造模前(t=1.9×10-6,1.7×10-4,6.12×10-4,P均<0.05)。结论:不同气体产生的气腹对机体及腹腔内局部免疫功能影响各异,二氧化碳气腹对红细胞免疫功能和腹腔细胞释放肿瘤坏死因子α功能强于氦气气腹。