结晶型NiS诱发恶性转化细胞中的p16基因和FHIT基因的变化

目的 检测结晶型NiS诱发永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化过程中脆性组氨酸三联体基因(FHIT)和p16基因的变化,探讨镍化合物致癌的分子机制。方法 采用RT-PCR、DNA序列分析、银染PCR—SSCP方法检测恶性转化细胞、成瘤细胞中FHIT基因和p16基因的变化。结果 与对照组16HBE相比,转化细胞、成瘤细胞p16基因第2外显子、第2-3外显子末见突变,mRNA表达末见异常;FHIT基因第5,6,7,8外显子及第1-4外显子、第5-9外显子末见突变,但发现转化细胞、成瘤细胞FHIT基因的mRNA失表达或出现异常转录本;对其中FHIT基因第5-9外显子的一异常转录本测序分析显示,FHIT第6,7,8外显子缺失,第5,9外显子异常拼接,且中间插入一个36bp的小片段。结论 在结晶型NiS诱发16HBE恶性转化过程中,p16基因在DNA和mRNA水平末见异常改变,提示p16基因在镍致癌过程中可能不发挥作用;FHIT基因在mRNA水平出现缺失或异常转录本,表明FHIT基因在镍致癌过程中可能发挥一定作用;镍诱导的FHIT基因异常,可能是将外源致癌物、染色体脆性部位不稳定性和细胞恶变相联系起来的一个分子事件,FHIT基因可能是镍等外源致癌物作用的主要靶基因之一。     

mRNA-DD法鉴定、筛查脊索瘤相关基因的实验研究

目的:本研究采用mRNA-DD法鉴定、筛查与脊索瘤发生的相关基因,为脊索瘤的分子机制、基因诊断和基因治疗的研究提供靶基因.方法:应用mRNA-DD方法,对1例脊索瘤肿瘤和瘤旁正常组织的差异条带进行扩增、纯化、测序分析,鉴定与脊索瘤相关的基因,并应用RT-PCR方法对18例脊索瘤进行筛查.结果:mRNA-DD检测结果在l例脊索瘤中发现9条差异片段,对其中2条进行测序分析,发现分别与RNF-11和CTC-50DM5基因具有高度同源性.对全部18例脊索瘤筛查结果显示RNF-11和CTC-50DM5基因在脊索瘤和瘤周正常组织中表达差异均具有统计学意义(P＜0.001),其中RNF-11基因表达在瘤周组织中明显增高,而CTC-50DM5基因表达在脊索瘤组织中明显增高.结论:RNF-11基因可能是与脊索瘤相关的肿瘤抑制基因,而CTC-50DM5基因可能是与脊索瘤相关的癌基因.     

皮肤鳞状细胞癌FHIT基因的异常改变及意义

目的检测脆性组氨酸三联体基因在皮肤SCC中外显子5和8的缺失和突变情况,分析该异常在皮肤SCC发生中的作用机制。方法PCR-SSCP方法检测皮肤SCC患者皮损FHIT基因外显子5和8的缺失和突变状况。结果10例CSCC组织中,E5有3例缺失,E8有8例缺失,其中有2例同时缺失E5和E8,对扩出的外显子进行SSCP分析没有检测到其突变。结论皮肤SCC中存在外显子5和8的缺失异常,没有发现其突变,这种异常与该肿瘤的发生可能有关,其具体的发生机制需做更进一步的探讨。     

抑癌基因FHIT第8和第5外显子在原发性肝癌中纯合性缺失与点突变的研究

目的　对 2 0例原发性肝细胞肝癌 (HCC)的抑癌基因 FHIT外显子 5、外显子 8的纯合性缺失和点突变进行检测。方法　收集 HCC手术标本 ,提取癌细胞 DNA,采用 PCR方法研究 FHIT外显子 5、外显子 8的纯合性缺失 ;使用 PCR- SSCP方法研究 FHIT外显子 5和外显子 8的点突变。结果　发现在 2 0例 HCC中外显子 5的纯合性缺失率为 10 .0 (2 / 2 0 ) ,外显子 8的纯合性缺失率为 30 .0 % (6 / 2 0 ) ;有 1例外显子 5和外显子 8均缺失 ;FHIT的异常率为 35 .0 % (7/ 2 0 )。在被检的肿瘤组织细胞中 ,未发现 FHIT外显子 5和外显子 8存在点突变。在被检的正常细胞中未发现 FHIT缺失和点突变的情况。结论　 FHIT的缺失只发生在 HCC的肿瘤细胞中。在 HCC中 ,外显子 (尤其是外显子 8)的纯合性缺失是 FHIT基因失活的重要方式之一。点突变可能不是 HCC中 FHIT失活的主要方式     

FHIT基因在肺癌中的缺失与HPV感染的研究

目的　探讨肺癌发生的分子生物学机制。方法　采用逆转录 -巢式聚合酶链反应 (reverse tapepolymerasechainreaction)的方法对 42例肺癌及 10例正常肺组织中的FHIT(Fragilehistidinetriad)基因的缺失情况进行检测 ,并用PCR技术检测了肺癌组织中人乳头状瘤病毒 (humanpapillomavirus ,HPV)的DNA片段。 结果　 66.7% (2 8/4 2 )肺癌组织中检测到FHIT基因的缺失 ,而正常组织中未检测到FHIT基因的缺失 ,二者差别有显著意义 (P <0 .0 1)。 42例肺癌组织中有 8例检测到HPV的片段 ,阳性率为 19% (8/4 2 ) ,正常组织中未检测到HPV的片段 ,且在 8例HPV阳性的标本中均有FHIT基因缺失。结论　 (1)FHIT基因的缺失在肺癌的发生中起一定的作用。 (2 )FHIT基因的缺失与肺癌的不同病理分型、分化程度、临床分期无关。与吸烟有一定的相关性。 (3 )HPV的感染与肺癌的发生有一定关系 ,且与FHIT基因缺失有正相关关系。     

FHIT基因改变与人宫颈癌的发生

在多种肿瘤组织及细胞系中均发现有FHIT基因外显子和等位基因的缺失，在癌组织中突变的FHIT基因产物缺乏、无表达或无活性，现有的文献显示FHIT基因在宫颈癌组织及宫颈上皮内瘤中的存在、表达状况与正常宫颈上皮组织中有差异。     

FHIT基因改变与人宫颈癌的发生

在多种肿瘤组织及细胞系中均发现有FHIT基因外显子和等位基因的缺失,在癌组织中突变的FHIT基因产物缺乏、无表达或无活性.现有的文献显示FHIT基因在宫颈癌组织及宫颈上皮内瘤中的存在、表达状况与正常宫颈上皮组织中有差异.     

云锡矿工肺癌中FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达

背景与目的:云南锡矿工人肺癌发生率极高.已有研究表明,脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)异常与肺癌的发生、发展密切相关.本研究旨在探讨云锡矿工肺癌中FHIT外显子3、4、5、8缺失及其蛋白表达异常.方法:采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测30例云锡矿工肺癌组织、云锡矿工肺癌细胞株YTMCC及22例其他地区非矿工肺癌组织中FHIT外显子3、4、5、8的缺失.用免疫组化法检测90例人肺癌组织FHIT蛋白表达,并对43例云锡矿粉诱发的不同阶段F344大鼠肺癌肺组织进行FHIT蛋白检测.结果:FHIT基因异常在YTMLC细胞表现为FHIT基因3和8两个外显子的缺失,而矿工和非矿工肺癌组织可出现3、4、5、8中1个或几个外显子的杂合性缺失,云锡矿工肺鳞癌中FHIT基因外显子缺失及蛋白失表达率分别为68.2%及70.6%,矿工肺鳞癌和腺癌、非矿工肺鳞癌和腺癌FHIT基因杂合性缺失与正常肺组织相比差异均有显著性(P＜0.01).矿粉诱发F344大鼠肺癌变早期即有FHIT的失表达,在8例鳞状上皮非典型增生、原位癌及早期肺鳞癌FHIT蛋白失表达率达100%.结论:在矿工及非矿工肺癌中,FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达异常均常见.肺癌早期及癌前病变即有很高的FHIT失表达率,对FHIT检测分析有可能作为肺癌早期筛查的指标之一.     

胃肠道间质瘤c-kit基因突变的研究

目的　探讨c kit基因在胃肠道间质瘤 (GIST)中的突变状况。方法　用PCR扩增和基因测序的方法 ,检测 5 2例GIST及 2 8例对照肿瘤c kit基因第 11号外显子序列 ,其中 30例GIST另检测了c kit基因第 9和第 13号外显子序列。结果　 2 5例恶性GIST中 ,14例有c kit基因 11号外显子突变 (5 6 .0 % ) ;2 7例良性及交界性GIST中 ,仅 2例有突变 (7.4 % )。良恶性GIST中 ,c kit基因突变的差异有显著性 (χ2 =14 .39,P <0 .0 1)。 5 2例GIST中 ,14例为杂合性突变 ,2例为纯合性突变。突变方式有点突变和片段的缺失或重复等 ,缺失和重复的片段为 3～ 4 8bp不等 ,碱基数是 3的倍数。原发及复发组织突变方式相同 ,突变病例瘤旁正常组织及伴发的腺癌无突变。对照肿瘤无c kit基因突变。GIST中c kit基因 11号外显子的突变位点多不固定 ,但有集中趋势 ,点突变和片段的缺失集中在5 5 0～ 5 70密码子 ,片段的重复集中在 5 70～ 5 85密码子。结论　 11号外显子的突变是恶性GIST的分子生物学机制之一 ,可作为辅助判断GIST良恶性的参考指标。c kit基因突变提示GIST是不同于消化道平滑肌瘤及神经鞘瘤的独立疾病。     

宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化及其与基因失活的关系

背景与目的:脆性组氨酸三联基因(fragile histidine triad gene,FHIT)作为抑癌基因与多种实体瘤的发生有关,并在多种肿瘤中因甲基化而失活。本研究拟探讨宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化状况及其与基因失活的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation鄄specificPCR,MSP)和免疫组织化学法分别检测10例正常宫颈鳞状上皮、40例宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛的甲基化发生状况和FHIT蛋白表达情况。结果:(1)正常宫颈鳞状上皮组织中未发现存在FHIT基因甲基化状态,而宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛的甲基化率为40.0%(16/40);(2)临床Ⅱ期宫颈癌病例中FHIT基因甲基化的发生率为56.5%(13/23),明显高于Ⅰ期的14.3%(2/14)(P<0.05);(3)宫颈癌组织中存在FHIT蛋白表达降低或缺失,阳性率仅为30.0%(12/40),显著低于正常宫颈组织的100.0%(10/10)(P<0.05)。结论:FHIT基因5'端CpG岛甲基化是宫颈癌中该基因失活的机制之一,可能与宫颈癌的发生发展有关。