肝癌组织和肝癌旁组织中γ-谷氨酰转肽酶糖链结构分析

目的比较肝癌组织和肝癌旁组织中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活力及其N-连接型糖链结构的变化.方法用荧光分光光度法测定肝癌组织和肝癌旁组织中的γ GT活力,并用固相凝集素亲和层析测定γ-GT的糖链与刀豆球蛋白(ConA)和曼陀罗凝集素(DSA)结合百分比,以研究肝癌γ-GT糖链结构的变化.结果肝癌组织中γGT活力均较肝癌旁组织明显增高.两者相比,肝癌组织中γ GT与ConA柱不结合的组分明显升高,弱结合和强结合的组分显著降低;在DSA柱上则相反,不结合的γ-GT组分显著降低,弱结合和强结合的γ-GT组分显著升高.结论肝组织癌变后,其γ-GT活力明显增高,而且伴随着γ-GT糖链结构的明显变化二天线糖链结构明显减少,三、四天线糖链结构明显增高.提示带多天线糖链结构的γ-GT可能是一种肝癌标志物.     

肝癌组织和肝癌旁组织中γ—谷氨酰转肽酶糖链结构分析

目的：比较肝癌组织和肝癌旁组织中γ－谷氨酰转肽酶（γ-GT）活力及其N－连接型糖链结构的变化。方法：用荧光分光光度法测定肝癌组织和肝癌旁组织中的γ-GT活力，并用固相凝集素亲和层析测定γ-GT的糖链与刀豆球蛋白（ConA）和曼陀罗凝集素（DSA）结合百分比，以研究肝癌γ-GT糖链结构的变化，结果：肝癌组织中γ-GT活力均较肝癌旁组织明显增高，两者相比，肝癌组织中γ-GT与ConA柱不结合的组分明显升高，弱结合和强结合的组分显著降低，在DSA柱上则相反，不结合的γ-GT组分显著降低，弱结合和弱结合的γ-GT组分显著升高，结论：肝组织癌变后，其γ-GT活力明显增高，而且伴随着γ-GT糖链结构的明显变化：二天线糖链结构明显减少，三、四天线糖链结构明显增高，提示带多天线糖链结构的γ-GT可能是一种肝癌标志物。     

N-acetylglucosaminyltransferase III in human serum, and liver and hepatoma tissues: increased activity in liver cirrhosis and hepatoma patients

An N-acetylglucosaminyltransferase III which catalyzes the addition of N-acetylglucosamine through a beta 1-4 linkage (bisecting N-acetylglucosamine) to the beta-linked mannose of the trimannosyl core structure of N-linked oligosaccharides of glycoproteins was measured in human serum, and liver and hepatoma tissues. The enzyme activity in serum was significantly elevated in patients with hepatomas and liver cirrhosis, and the activity markedly decreased on the transcatheter arterial embolization treatment. High activities were also found in the hepatoma and cirrhotic liver tissues, indicating that the serum activity reflected the activity in the tissues. The assaying of the enzyme activity in serum appears to be useful for the detection and monitoring of primary hepatomas.     

鼻咽癌癌组织中Midkine基因表达的研究

目的研究Midkine(MK)基因在鼻咽癌(NPC)组织中的表达。方法用Trizol法提取鼻咽癌组织和正常鼻咽组织的RNA,经RT-PCR获得扩增的MK DNA,溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果45例鼻咽癌组织中有37例在447 bp处出现1条MK的特征条带。7例鼻咽部正常组织均表达阴性。24例颈淋巴结转移患者中20例鼻咽癌组织MK mRNA表达阳性(表达率为83.33%),21例无颈淋巴结转移中17例鼻咽癌组织MK mRNA表达阳性(表达率为80.95%)。结论MK mRNA在鼻咽癌组织特异表达,MK有望作为鼻咽癌筛查的指标之一。     

胃癌组织中MMP-11 mRNA的表达及临床意义

目的研究基质金属蛋白酶11(MMP-11)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用荧光定量PCR方法检测40例胃癌组织和40例癌旁组织中的MMP-11mRNA的表达。结果荧光定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织中MMP-11mRNA的表达水平发现癌组织中的MMP-11mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.05),MMP-11mRNA的表达与胃癌淋巴转移以及分期相关(P<0.05),与患者年龄、性别及分化程度及大小无关。结论 MMP-11mRNA在胃癌组织中的高表达,与胃癌的发生发展密切相关。MMP-11很有可能在胃癌的发病机制中起着重要的作用。     

Chromogranin A expression in normal and malignant human tissues

We used a recombinant cDNA probe for human chromogranin A to measure the expression of mRNA encoded by this gene in a variety of normal human tissues and tumor specimens using Northern blot and in situ hybridization analysis. With few exceptions, the expression of chromogranin A mRNA appears to be restricted to normal tissues and tumors of neuroendocrine lineage. However, we have detected mRNA expression of this gene in 1 of 14 cell lines and 2 of 13 tumor specimens of colon adenocarcinoma. The finding of chromogranin A expression in some colon carcinomas suggests that a previously unrecognized subgroup of these tumors has neuroendocrine features. The detection of this subgroup demonstrates the potential for improving tumor classification through the use of techniques and reagents developed by recombinant DNA technology.     

细胞外基质蛋白1基因及蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的在基因和蛋白水平探讨细胞外基质蛋白1（ECM1）在乳腺癌中的表达及意义,并比较两种检测方法的应用价值。方法应用实时荧光定量PCR基因检测方法和免疫组织化学法分别检测乳腺组织（正常组织和癌组织）中ECM1基因（mRNA）和蛋白的表达,并比较正常乳腺组织和乳腺癌组织之间的ECM1表达差异。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析评估应用价值。结果乳腺癌组织中ECM1在基因和蛋白水平表达均明显高于正常组织（P〈0.01）,两者均有较好的诊断价值[实时荧光定量PCR基因检测曲线下面积（AUC）为0.834±0.038,免疫组织化学检测AUC为0.773±0.048]。结论 ECM1在乳腺癌组织中过表达,具有潜在的作为乳腺癌肿瘤标记物的应用价值。     

人宫颈癌组织环加氧酶2mRNA剪接异构体的表达

背景宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展与环加氧酶2密切相关.目的探讨人宫颈癌组织中是否存在环加氧酶2选择性剪接异构体的表达及其可能意义.设计非随机对照实验.单位重庆医科大学生物化学与分子药理学重点实验室,重庆医科大学附属第一医院妇产科.对象选择13例重庆医科大学附属第一医院妇产科2002-03/2002-04宫颈癌住院患者的癌组织及正常组织.方法设计一对全新引物,并采用反转录聚合酶链反应技术,从宫颈癌组织中分离环加氧酶2 mRNA,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析.主要观察指标①观察癌组织与正常组织反转录聚合酶链反应琼脂糖电泳结果.②分析癌组织与正常组织电泳条带测序结果.结果①正常宫颈组织未发现环加氧酶2目的条带(252 bp),而宫颈癌组织则出现两条条带,除环加氧酶2目的条带外,还有一新的电泳带(534 bp),经克隆和测序证实,该新条带除目的条带的环加氧酶2 DNA的第7、8外显子序列外,还包含第7、8外显子间的内含子序列,即保留的内含子(282 bp).②根据阅读框推测,在保留的内含子第48～50碱基出现终止密码.结论发现宫颈癌组织中存在环加氧酶2基因的选择性剪接异构体(Genbank accession numberBU493602),其所编码蛋白可能较已报道的环加氧酶2酶蛋白小.     

Simultaneous expression of type I procollagen mRNA and albumin in cirrhotic human liver.

The gene expression of human type I procollagen was investigated in cirrhotic human liver by using in situ hybridization with nonradioactive DNA probes. Using in situ hybridization can provide direct evidence for the cell type capable for type I collagen synthesis in tissues. T-T dimerized DNA probes were used and DNAs hybridized in situ were detected immunohistochemically using specific antibodies against T-T dimer. The data demonstrated that type I collagen is synthesized in hepatocytes and stellate cells in pseudolobules and in fibroblasts in Glissons capsules in cirrhotic human livers. We indicated hepatocytes morphologically and functionally by using immunohistochemical localization of albumin, which was used as a marker of hepatocyte, since albumin is synthesized exclusively by hepatocytes.     

人宫颈癌组织环加氧酶2mRNA剪接异构体的表达

背景：宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展与环加氧酶2密切相关.目的：探讨人宫颈癌组织中是否存在环加氧酶2选择性剪接异构体的表达及其可能意义.设计：非随机对照实验.单位：重庆医科大学生物化学与分子药理学重点实验室,重庆医科大学附属第一医院妇产科.对象：选择13例重庆医科大学附属第一医院妇产科2002-03/2002-04宫颈癌住院患者的癌组织及正常组织.方法：设计一对全新引物,并采用反转录聚合酶链反应技术,从宫颈癌组织中分离环加氧酶2 mRNA,然后对电泳条带进行克隆、测序和分析.主要观察指标：①观察癌组织与正常组织反转录聚合酶链反应琼脂糖电泳结果.②分析癌组织与正常组织电泳条带测序结果.结果：①正常宫颈组织未发现环加氧酶2目的条带（252 bp）,而宫颈癌组织则出现两条条带,除环加氧酶2目的条带外,还有一新的电泳带（534 bp）,经克隆和测序证实,该新条带除目的条带的环加氧酶2 DNA的第7、8外显子序列外,还包含第7、8外显子间的内含子序列,即保留的内含子（282 bp）.②根据阅读框推测,在保留的内含子第48～50碱基出现终止密码.结论：发现宫颈癌组织中存在环加氧酶2基因的选择性剪接异构体（Genbank accession number：BU493602）,其所编码蛋白可能较已报道的环加氧酶2酶蛋白小.     

人肝癌组织和外周血中甲胎蛋白基因片段扩增及临床应用

目的 研究外周血肝癌发生相关甲胎蛋白(AFP)基因在肝癌早期诊断和鉴别诊断中的价值。方法：从肝癌组织和肝病患者外周血中制备总RNA，经随机引物和逆转录酶作用合成cDNA，再以逆转录巢式聚合酶链反应(RT—PCR)扩增AFP基因，并分析其临床价值。结果 RT—巢式PCR扩增的AFP基因片段为159bp，与原设计一致；在20份肝癌及其癌周和远癌组织中，AFP基因阳性率分别为100％、65％和0％；肝癌患者外周血AFP基因检出率为53．7％，明显高于肝硬化、急、慢性肝炎和肝外肿瘤组患者(P＜0．01)；在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中AFP基因阳性率分别为33．3％、26．3％和71．8％；伴肝外转移者全数阳性；AFP＜50ng/ml肝癌AFP基因阳性率为50％，且与肝癌大小无关。结论 外周血AFP基因检测是肝癌诊断与鉴别诊断、肝外转移或术后复发的有用标志物。     

大肠癌c-met基因mRNA定量表达研究

目的：检测c-met基因在大肠癌中的表达情况及其在大肠癌侵袭转移过程中的变化规律。方法：采用荧光实时定量PCR方法检测30例大肠癌及切端正常大肠组织c-met基因的mRNA转录水平，采用免疫组织化学sP法检测其蛋白表达情况。结果：c-met在63％（19／30）的正常大肠组织和90％（27／30）的大肠癌组织中阳性表达。大肠癌组织中c-met在mRNA转录和蛋白水平的表达均高于正常大肠组织（P〈0．05）。c-met的表达与大肠癌的淋巴结转移、浸润深度和Dukes分期明显相关，差异具有显著性（P〈0.05）；而与大肠癌的病理组织学类型和分化程度无关（P〉0．05）。结论：c-met在大肠癌的侵袭与转移中发挥着重要作用。检测c-metmRNA含量可作为判断大肠癌浸润、转移的良好参考指标。并可为将来大肠癌的诊断、分期和治疗开辟一个新的方向     

Allele-specific differences in apolipoprotein C-III mRNA expression in human liver

BACKGROUND: Sequence variations at the apolipoprotein (apo)C-III gene locus have been associated with increased plasma triglycerides. In particular, the S2 allele of an SstI polymorphism in the 3' untranslated region has been associated with hypertriglyceridemia in many populations. The aim of this study was to determine whether the variant S2 allele is related to increased mRNA expression in vivo. METHODS: We measured allele-specific apoC-III expression in liver biopsies of five obese subjects, using restriction isotyping and a primer extension method, both based on the SstI polymorphism. RESULTS: The expression of mRNA by the S1 and S2 alleles was similar in two patients, whereas the mRNA encoded by the S2 allele was 14%, 26%, and 29% more abundant than the wild-type mRNA in the remaining three patients. Because other polymorphisms at the apoC-III gene locus have been implicated in the S2-associated hypertriglyceridemia, we determined apoC-III haplotypes comprising promoter polymorphisms at -935, -641, -630, -625, -482, -455, as well as the SstI sites and a BbvI site, both located in the 3' untranslated region. None of these polymorphisms nor any haplotype exhibited a perfect association with allele-specific expression, but variation at the T-482C site correlated in four of five subjects with the relative allele abundance. CONCLUSION: These data provide preliminary evidence for allele-specific differences in apoC-III mRNA expression in vivo and suggest that such differences may contribute to associations of apoC-III gene polymorphisms with hypertriglyceridemia.     

妊娠中肾细胞因子mRNA在人食管癌组织中的表达

目的 研究妊娠中肾细胞因子（midkine, MK)mRNA在食管癌组织中的表达。方法 用Trizol提取食管癌组织和相应癌旁正常组织RNA，经RT－PCR获得扩增的MK cDNA，溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果 6例食管癌组织在450bp处均出现一条MK的特征条带，其中1例低分化食管癌MK条带最深。6例癌旁正常组织均检测不出MK mRNA。此外，2例食管癌组织除显示MK的特征条带外，在280bp处出现一条截短型MK（tMK)区带。结论 MK在食管癌组织特异表达，表达程度可能与细胞分化程度相关。