腹主动脉灌注瑞芬太尼聚己内酯减轻脊髓缺血再灌注损伤的实验研究

观察腹主动脉灌注瑞芬太尼聚己内酯(REM-PCL)对脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)的作用。36只新西兰大白兔随机分为假手术组(S组)、对照组(C组)和REM-PCL组(R组),每组12只。采用肾下腹主动脉阻断法,建立SCIRI模型。分别于缺血前、再灌注15min、再灌注30min、再灌注60min及再灌注120min监测脊髓微循环血流量(SCMBF)及血流速度(BFR)变化,并于缺血前、再灌注6h、12h和24h进行神经功能评分。分别于缺血前、缺血45min、再灌注30min、60min、6h、12h及24h监测血清神经特异性烯醇化酶浓度(NSE)、白细胞介素-lβ(IL-lβ)及白细胞介素-8(IL-8)浓度变化。分别于缺血前、缺血45min、再灌注30min和60min时测定脊髓神经细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、线粒体肿胀度(MSD)水平并观察其运动神经元异常率改变。结果显示C组缺血后MSD、NSE、IL-lβ、IL-8、ROS、MDA水平及运动神经元异常率均升高(P0.01),脊髓神经细胞线粒体SOD、GSH-PX及T-AOC水平均降低(P0.01)。R组运动神经元异常率损害明显轻于C组(P0.01),NSE、IL-lβ、IL-8、ROS、MDA和MSD水平均明显低于C组(P0.01),SOD、GSH-PX及T-AOC水平均高于C组(P0.01),再灌注期间神经功能评分较C组恢复迅速(P0.01)。研究表明,腹主动脉灌注REM-PCL可以通过抑制炎性反应及提高线粒体抗氧化能力减轻SCIRI。     

缺血预处理快速效应对兔急性缺血脊髓的保护作用

目的:探讨缺血预处理快速相对兔腹主动脉短暂阻断致缺血脊髓的保护作用。方法:36只雄性新西兰兔随机分成3组(n=12):即缺血再灌注损伤组(IR组)、缺血预处理组(IPC+IR组)及假手术组(Sham组)。IR组阻闭兔腹主动脉肾下段20min,复制兔脊髓缺血损伤模型;IPC+IR组预先阻闭腹主动脉肾下段6min,再灌注30min后再次阻闭腹主动脉肾下段20min;Sham组除不夹闭腹主动脉外,其余处理同IR组。再灌注后8h、12h、24h和48h分别对动物神经功能评分,然后,处死动物取脊髓(L_5-7),分别行组织病理学观察及测定脊髓组织中Na⁺,K⁺-ATP酶的活性。结果:Sham组及IPC+IR组神经功能评分各时点均明显高于IR组(P＜0.01);Sham组及IPC+IR组脊髓前角正常神经细胞数明显多于IR组(P＜0.01);Sham组及IPC+IR组脊髓组织中Na⁺,K⁺-ATP酶的活性明显高于IR组(P＜0.01)。结论:缺血预处理快速相对兔急性缺血脊髓有显著的保护作用,这种保护作用可能与稳定Na⁺,K⁺-ATP酶的活性有关。     

动脉移植BMSCs对脊髓缺血再灌注损伤大鼠脊髓细胞凋亡和caspase-9基因的影响

目的 探讨肾下腹主动脉移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对缺血再灌注损伤脊髓细胞凋亡、caspase-9表达及功能恢复的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、移植组,每组8只.假手术组仅行手术操作;缺血再灌注组阻断肾下腹主动脉120 min后开放,恢复脊髓再灌注5 min后经动脉留置管推注1 mL培养基;移植组恢复再灌注5 min后推注100万BMSCs悬液1 mL.术后1、3和7d对大鼠进行BBB评分;用RT-PCR、Western blot 检测术后7d大鼠缺血节段脊髓内caspase-9基因和蛋白表达,TUNEL观察细胞凋亡.结果 缺血再灌注组和移植组大鼠BBB评分于术后1、3和7d均显著低于假手术组(P＜0.01),移植组术后3、7 d BBB评分高于缺血再灌注组(P＜0.01);移植组和缺血再灌注组损伤脊髓caspase-9 mRNA和蛋白表达水平较假手术组增加(P＜0.01),缺血再灌注组增加更为显著(P＜0.01).缺血再灌注组和移植组损伤脊髓内出现大量凋亡细胞,而移植组凋亡细胞数少于缺血再灌注组(P＜0.01).结论 肾下腹主动脉移植BMSCs可通过抑制缺血再灌注损伤脊髓caspase-9表达,减轻脊髓局部细胞凋亡,改善其神经功能恢复.     

川芎嗪对缺血再灌注损伤心肌重要呼吸酶的影响

目的:观察川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤心肌线粒体中琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素氧化酶(CCO)的影响及可能机制。方法:结扎冠状动脉30 min后再灌20 min,复制缺血再灌注模型。测定心肌线粒体中SDH、CCO、SOD和GSH·PX活力及MDA和细胞色素含量。结果:缺血再灌组(IR)SDH和CCO活力显著低于假手术对照组;缺血再灌加川芎嗪组(IR+L)的SDH和CCO活力显著高于缺血再灌组(P＜0.01),MDA含量明显降低,SOD及GSH·PX活力也明显升高。结论:川芎嗪对缺血再灌注损伤心肌中SDH和CCO活力降低有显著的拮抗作用,其机理可能是通过提高对氧自由基的清除及抑制脂质过氧化     

缺血预处理对脊髓缺血再灌注损伤HIF-1α表达的影响

目的探讨缺血预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠120只,随机分为4组:Sham组置入球囊导管但不阻断胸主动脉;I/R组球囊导管阻断胸主动脉12min造成脊髓缺血再灌注损伤;缺血预处理(Ischemic preconditioning,IPC)先短暂阻断胸主动脉3min,恢复灌注10 min实施缺血预处理,之后阻断胸主动脉造成脊髓缺血再灌注损伤;IPC+2ME2组缺血预处理前30min腹腔注射HIF-1α抑制剂2ME2(15 mg/kg),缺血预处理后阻断胸主动脉造成脊髓缺血再灌注损伤。分别于再灌注损伤后为4 h、12 h、24 h、3 d和7 d进行神经功能评分,并取脊髓L4-6缺血节段,脊髓组织病理学观察脊髓前角内健存运动神经元,Real time-PCR法检测HIF-1αmRNA表达。结果与Sham组比较,I/R组神经运动功能评分降低,脊髓灰质前角内健存运动神经元数量减少,HIF-1α表达增加(P<0.05)。与I/R组比较,IPC组神经运动功能评分增高,脊髓灰质前角内健存运动神经元数量增多,HIF-1α表达更多(P<0.05)。IPC+2ME2组HIF-1α表达上调受到抑制,神经运动功能评分降低,脊髓灰质前角内健存运动神经元数量减少(P<0.05)。结论缺血预处理可能通过上调HIF-1α表达减轻脊髓缺血再灌注损伤。     

1,6-二磷酸果糖预处理对家兔急性肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察1,6-二磷酸果糖(FDP)预处理对急性肾缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:新西兰大白兔27只,随机均分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)、1,6-二磷酸果糖预处理组(F组)。采用左肾切除右肾动静脉夹闭60 min再灌注180 min致肾损伤的模型,术前连续4d给予FDP。缺血-再灌注180 min后分别检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物岐化酶(SOD)活性,观察肾组织的病理变化及肾小管计分,并对3组进行比较。结果:与S组比较,I组的Scr、BUN、MDA水平明显升高(P0.05),SOD活性明显降低(P0.01)。F组的Scr、BUN、MDA水平均较Ⅰ组明显降低(P0.01或P0.05),而SOD活性明显增强(P0.01)。F组肾组织病理变化轻于Ⅰ组。结论:FDP预处理对兔急性肾缺血-再灌注损伤具有保护作用,该保护作用的机制可能与增强SOD活性,清除过多的氧自由基,减少MDA的生成有关。     

亚甲蓝减轻大鼠离体心脏缺血/再灌注引起的线粒体损伤

目的:探讨亚甲蓝(methylene blue,MB)对大鼠离体心脏缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)线粒体损伤的作用。方法:将Spragure-Dawley大鼠随机分为对照组(control组)、I/R模型组和MB治疗组(I/R+MB组),建立Langendorff离体心脏灌注模型(n=6)。手术前2 h,MB组大鼠按2 mg/kg腹腔注射MB。对照组持续灌注K-H液110 min,I/R组与I/R+MB组平衡灌注20 min后停灌30 min,再灌注60 min。实时记录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室最大压力变化速率(±dp/dt_(max))和左室舒张末压(LVEDP)。测定冠脉流出液中肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。测定心肌组织中活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)和三磷酸腺苷(ATP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。苏木精-伊红染色观察组织病理学变化。分离心肌组织线粒体,测定线粒体肿胀程度和线粒体膜电位(MMP)。结果:与对照组相比,I/R组的心功能恶化,冠脉流出液中的CK-MB和LDH活性升高,心肌组织中的ROS和MDA增加,SOD活性降低,ATP减少,线粒体肿胀程度升高,MMP下降(P0.05);与I/R组相比,I/R+MB组的心功能改善,CK-MB和LDH的释放减少,组织中的ROS和MDA减少,SOD活性和ATP含量升高,线粒体肿胀程度降低,MMP升高(P0.05)。结论:MB通过减轻线粒体损伤对大鼠离体I/R心脏发挥保护作用。     

异氟醚和卡托普利联合预处理对兔心肌缺血再灌注心肌酶学的影响

目的通过心肌酶学等检测指标评估异氟醚、卡托普利联合预处理对缺血再灌注的心肌保护作用。方法新西兰大白兔48只随机分成6组(n=8),假手术组(S组)仅开胸分离冠状动脉左前降支;缺血组(I/R组):缺血30 min后再灌注120min;缺血预处理组(IPC组):缺血5 min、再灌注5 min循环3次后处理同缺血组;异氟醚组(I组):给予1.1%异氟醚吸入30 min洗脱15 min后处理同I/R组;卡托普利组(C组)24 h给予卡托普利片25 mg/kg后处理同I/R组;联合预处理组(I+C组)24 h给予卡托普利片25 mg/kg后处理同I组。各实验组分别检测不同时点的心肌酶和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的变化,在再灌注结束即刻取血检测丙二醛(MDA)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果各处理组心肌酶学指标均高于S组(P<0.05或P<0.01),但增高程度低于I/R组(P<0.05),IPC组和I+C组又较I组和C组低(P<0.05)。各组MDA均增高,SOD降低(P<0.01),但与I/R组比,各药物处理组MDA降低,SOD较高(P<0.01)。IPC组和I+C组MDA和SOD分别较I组和C组降低和升高(P<0.05)。结论异氟醚、卡托普利联合预处理明显减轻兔心肌缺血再灌注心肌酶学改变,较单独应用异氟醚、卡托普利预处理的心肌保护作用增强,其效果与缺血预处理相似。     

注射用内给氧对缺血再灌注损伤兔肝脏SOD、GSH-PX活性和MDA含量的影响

目的 探讨注射用内给氧对缺血再灌注（ischemia／reperfusion，I／R）损伤兔肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。方法 48只健康新西兰长耳大白兔随机分为四组：假手术组（A组）、缺血再灌注组（B组）、缺血再灌注＋周围静脉注射用内给氧组（C组）、缺血再灌注＋肝动脉注射内给氧组（D组），每组12只。采用Pringle氏法建立肝脏I／R模型。比较四组大白兔缺血再灌注后1、2、24h肝组织的抗氧化能力（SOD、GSH-PX）、脂质过氧化产物丙二酮（MDA）含量。结果 与A组比较，B、C、D三组肝组织SOD、GSH．PX活力降低，MDA含量增高（P〈0．05）；与B组比较，C、D两组肝组织SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低（P〈0．05）；C组与D组比较，各参数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 注射用内给氧对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用，可降低MDA含量，提高SOD活力和GSH-PX活性。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达

目的观察大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达。方法 48只成年健康Wistar大鼠,采用Naslund腹主动脉阻断法制作脊髓缺血再灌注损伤模型。随机分为空白对照组(n=6)、假手术组(n=6)和损伤组(n=36),观察脊髓缺血再灌注损伤后,脊髓的病理变化、细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达变化的规律。结果观察脊髓缺血再灌注损伤后Caspase-1阳性细胞在损伤后12h表达明显,1d损伤区域及周边出现表达高峰。Caspase-3阳性细胞在损伤后12h表达明显,2d损伤区域及周边出现表达高峰。TUNEL阳性细胞也在脊髓损伤后12h表达明显,2d出现表达高峰。空白对照组、假手术组:Caspase-1、Caspase-3免疫组化少有表达,少见TUNEL阳性细胞。结论脊髓缺血再灌注损伤后存在神经细胞凋亡,Caspase-1、Caspase-3均参与损伤的调节。