β雌激素受体沉寂表达载体的构建及表达

目的构建雌激素受体β(ERβ)亚型沉寂表达载体,并观察其转染成骨细胞后抑制ERβ基因表达的效果。方法参考人ERβ基因mRNA序列,设计、合成ERβ-shRNA的DNA Oligo后行PCR扩增,获得的shRNA双链DNA片段与pLVTHM-GFP质粒双酶切后连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α感受态细胞。取鉴定正确的pLVTHM-GFP/ERβ-shRNA重组质粒转染人成骨hMG63细胞,实验分空白载体组、空白对照组和ERβ-siRNA组,转染48h后于倒置荧光显微镜下观察各组细胞的转染效果,并采用流式细胞术检测转染效率。抽提各组细胞的总RNA,经RT-PCR生成cDNA,Realtime-PCR检测ERβ基因的抑制效率。结果倒置荧光显微镜下观察显示,ERβ-siRNA组hMG63细胞90%以上呈现绿色荧光。流式细胞术检测ERβ-shRNA转染hMG63细胞的转染效率为92.3%。Realtime-PCR检测结果表明,ERβ-siRNA组ERβ表达量(0.17±0.01)仅约为空白载体组(1.00±0.01)的17.3%(P0.001),ERβ-siRNA对hMG63细胞ERβ基因的抑制效率约为83%。结论成功建立了人ERβ沉寂表达的成骨细胞模型,慢病毒载体介导的ERβ-siRNA能有效抑制成骨细胞ERβ基因的表达,满足了研究成骨细胞中ERβ相关功能的需要。     

雌激素受体-β在中枢神经系统的分布及作用的研究进展

雌激素受体 β是介导雌激素发挥作用的又一个重要的受体 ,大量的研究发现该受体在基底前脑、间脑、中脑、海马、杏仁体、大脑皮质、小脑皮质等均有广泛分布 ,且具有性别差异。其可能参与了雌激素对认知、情绪、内分泌、神经营养、生殖、肿瘤发生等多种神经功能的调节。     

脑内雌激素受体的研究进展

二十世纪70年代Naftolin等的研究工作奠定了脑芳香化酶(Aromatase,AROM)假说的基础,该假说认为在腩组织局部,AROM可以将雄激素转化为雌激素(主要是雌二醇,E2).以往的研究认为脑内AROM的表达只见于出生前后一短暂时期,成年后则不表达,外周E2是成年脑E2的唯一来源.近年随着研究技术的进步,在成年某些脑区如海马、下丘脑也检出AROM的表达,且不仅见于神经元胞体也见于突触前成分,证明成年脑仍然能够合成E2[1].     

雌激素对大鼠心脏雌激素受体α和β表达的影响

目的研究雌激素受体（ER）α和β在新生、成年和卵巢切除大鼠心脏的表达。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法,分析新生和成年大鼠心脏各部的ERα和βmRNA及ER蛋白质的表达,探讨不同剂量的17β雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和βmRNA、ER蛋白质的表达调控及对心房、心室重量和它们与体重比变化的影响。结果ERα mRNA在新生大鼠心脏各部表达较低,而成年大鼠心脏各部ERα mRNA的转录水平提高3～20倍,这种差别体现在ERα蛋白质的表达水平不同。反之新生大鼠心脏ERβ mRNA表达水平较高,而成年大鼠心脏ERβ mRNA的表达降低2～7倍。卵巢切除减少成年大鼠心房ERαmRNA和蛋白质的表达,减轻心房重量及心房／体重比;17肛雌二醇替代却能反转这些改变,同时随着血浆17β-雌二醇水平的增高,这种影响在一定程度上呈剂量依赖关系。卵巢切除和178一雌二醇替代并不改变心脏和心室／体重比,也不影响ERβ mRNA的表达。结论雌激素受体α和β在新生和成年大鼠心脏的表达存在差别,ERβ可能在大鼠心脏的发育过程中起重要作用,ERα足雌激素对成年大鼠心脏调控的优势受体;雌激素的主要靶器官是心房,且通过其受体的介导促进心房肌细胞的增生。     

神经肽Y在自发性癫痫大鼠海马内过表达

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中,神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)的表达变化。方法 RT-PCR检测自发性癫痫大鼠和正常对照组Wistar大鼠海马中NPY mRNA表达,ELISA试剂盒法检测NPY蛋白浓度变化。结果自发性癫痫大鼠海马中NPY mRNA表达水平和NPY蛋白的浓度比正常对照组Wistar大鼠明显上调(P0.01)。结论 NPY mRNA和蛋白过表达可能与自发性癫痫发生机制有关。     

17β-雌二醇对未成熟雌性大鼠体液免疫及胸腺内雌激素受体的影响

本研究以生理浓度范围的 17β 雌二醇处理未成熟的SD雌性大鼠 ,探讨 17β 雌二醇对其性激素分泌、体液免疫功能和胸腺内雌激素受体的影响。实验分三组 ,分别为高剂量组 (0 1mg )、低剂量组 (0 0 5mg )和对照组 ,给药 4周后用放射免疫法检测了血清雌二醇和睾酮水平 ;用酶联免疫吸附法测定白细胞介素 6 (IL 6 )、肿瘤坏死因子α (TNF α )和免疫球蛋白G(IgG )的水平 ;用免疫组化法测定胸腺内雌激素受体水平。结果表明 17β 雌二醇一方面可以下调IL 6、TNF α,另一方面可以提高IgG水平 ,并且可以提高胸腺内雌激素受体水平。由于本实验结果和睾酮并无关系 ,我们认为雌二醇在生理浓度下对免疫系统有一定的调节作用 ,该作用有可能是通过雌激素受体来实现。提示随着生殖周期的变化 ,E2 水平可能影响某些疾病的发生和发展     

正常及去势大鼠组织内雌激素受体mRNA表达水平的研究

通过切除大鼠卵巢复制实验性骨质疏松动物模型，从小块胫骨组织内提取ＲＮＡ，对正常对照、切除卵巢雌激素治疗组的标本进行逆转录－聚合酶链反应（ＰＴ－ＰＣＲ）检测，直接从生理状态下的成熟骨经检测出雌激素受体（ＥＲ）ｍＲＮＡ的表达，并经测序证实。实验结果还显示切旋卵巢大鼠的ＥＲ表达水平明显降低，而予以雌激素治疗组的ＥＲ表达接近正常。提示ＥＲ的表达依赖于雌激素的存在，而雌激素通过ＥＲ在骨代谢中起作用。     

NMDA受体1和雌激素受体在白细胞介素-2致痫大鼠脑内的表达变化和共存

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)致痫与NMDA受体(NMDAR)和雌激素受体(ER)的关系.方法 应用免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共焦显微镜技术研究IL-2致痫大鼠及经免疫抑制剂预处理后再致痫大鼠脑内NMDAR-1、ER的表达变化以及NMDAR/ER和NMDAR/IL-2R共存情况.结果 大鼠侧脑室注射IL-2以后,动物出现明显的癫痫发作,其大脑皮质和海马部位NMDAR-1及ER表达较对照组明显增多,免疫反应平均吸光度(A)值与对照组相比有极显著性差异;而用IL-2抑制剂环胞霉素(CsA)或糖皮质激素(G)预处理后再注射IL-2,动物未出现或仅出现轻微的癫痫发作,其NMDAR-1和ER表达较IL-2组明显减少(P＜0.05).研究还观察到大鼠脑内大脑皮质和海马部位NMDAR/ER或NMDAR/IL-2R之间存在着广泛共存.结论 IL-2有致痫作用,NMDAR-1、IL-2R和ER在致痫活动中可能存在协同和互动作用.     

雌激素受体β在成年C57小鼠脑内的表达与性别差异

目的:观察雌激素受体β(ER-β)在成年小鼠脑内的性别差异.方法:成年C57小鼠用硫酸镍铵增强显色的免疫组织化学SP法.结果:ER-β在脑内有广泛的分布,ER-β免疫阳性产物主要表达于细胞核,但在个别脑区也可在胞质甚至突起内检测到.ER-β的表达具有一定的性别差异,在部分脑区ER-β的表达表现为雄性强于雌性,而在另一些脑区则相反,并且该受体的脑核团定位方面表现出某些性别差异.结论:在不同性别的动物同一核团,ER-β发挥的调节作用可能不一样,这可能是造成脑的性别差异的原因之一.     

雌激素受体在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的研究雌性激素受体(ER)在肝癌组织中的表达和其临床价值。方法采用免疫组化法对59例肝癌患者肝肿瘤组织中雌激素受体(ER)表达情况进行研究。结果 59例肝癌患者ER表达阳性率为72.9%。22～36岁的肝癌患者ER表达阳性率为72.22%(13/18),37～52岁的患者表达阳性率为75.01%(15/20),53～67岁的患者的阳性率为71.42%(15/21);直径≤5 cm的肝癌中ER表达阳性率为33.33%(6/18),直径大于5 cm的癌组织阳性率为90.24%(37/41);分化程度为EdmondsonⅠ级的肝癌组织中表达阳性率为96.97%(32/33),Ⅱ级的阳性率为55.56%(10/18),Ⅲ级阳性率为12.5%(1/8)。年龄组间表达差异无统计学意义(P>0.05),而不同大小肿瘤和不同分化程度组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌具有一定的雌激素依赖性,肝癌发生、发展及预后与肝癌组织中ER表达有关。     

支配雌性大鼠近段尿道的交感神经节内神经元雌激素α和β受体的表达

尿失禁在绝经后的妇女是普遍的 ,在治疗上通常给予雌激素。在动物模型中 ,雌激素可增加尿道平滑肌的收缩性 ,但是 ,在人体并没有得到同样的效果。其原因可能是 ,雌激素只影响一些组织 ,而不是影响控制排尿的尿道。为了探讨支配尿道的交感神经是否具有雌激素受体 ,美国堪萨斯洲医学中心大学的ZoubinaEV和SmithPG进行了该项研究。给 1 0只切除卵巢的成年雌性大鼠注射逆行示踪物坚牢蓝(FastBlue) ,以显示支配近段尿道平滑肌的交感神经元。大鼠一次性注射苯甲酸钠雌二醇 1 0mg/kg ,2 4小时后取材 ,用免疫染色确定椎前节和椎旁节内逆行标记的…     

正常及去势大鼠骨组织内雌激素受体mRNA表达水平的研究

通过切除大鼠卵巢复制实验性骨质疏松动物模型，从小块胫骨组织内提取ＲＮＡ，对正常对照、切除卵巢及雌激素治疗组的标本进行逆转录。聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测，直接从生理状态下的成熟骨组织中检测出雌激素受体（ＥＲ）ｍＲＮＡ的表达，并经测序证实。实验结果还显示切除卵巢大鼠的ＥＲ表达水平明显降低，而予以雌激素治疗组的ＥＲ表达接近正常。提示ＥＲ的表达依赖于雌激素的存在，而雌激素通过ＥＲ在骨代谢中起作用。     

雌激素受体β在小鼠及猪卵巢中表达的比较研究

目的 研究雌激素受体β(ERβ)在小鼠和猪卵巢中的表达差异. 方法通过免疫组织化学的方法,研究ERβ在小鼠及猪卵巢中不同类型细胞中的表达量和细胞内的定位情况. 结果在小鼠卵巢中,ERβ在黄体和各级生长卵泡的卵母细胞质中均有大量表达,在各级卵泡的颗粒细胞和膜细胞中表达量很少,生殖上皮和间质细胞中没有检测到表达信号.猪卵巢中ERβ强表达于各级卵泡的膜细胞中,各种直径的腔前卵泡的颗粒细胞中也有表达,但有腔卵泡颗粒细胞有的表达,有的则未见表达,间质细胞和生殖上皮中无明显表达. 结论 ERβ在小鼠和猪卵巢中的表达和定位差异很大.表明ERβ在小鼠和猪卵巢中的作用也可能不同.     

雌激素及雌激素受体对高血压心肌肥厚的影响

雌激素通过雌激素受体（estrogen receptor,ER）的介导对心血管系统发挥保护作用。雌激素被动扩散进入细胞后与雌激素受体结合,通过影响肾素血管紧张素系统（RAS）、NO合成、钙离子通道,改善脂质代谢等方面导致高血压心肌肥厚。雌激素受体调节剂（SERMs）如雷洛昔芬等也可以与ER结合,发挥抗心肌肥厚的作用。     

心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体雌激素受体的变化

目的：探讨雌性大鼠心理应激状态下，海马-下丘脑-垂体雌激素受体（ER）的改变，进而阐明卵巢内分泌功能失调的机制。 方法: 采用声-光-电复合刺激作为心理应激制造大鼠卵巢内分泌功能失调模型；采用免疫组化方法和图像分析仪定量分析海马-下丘脑-垂体ER的表达。 结果： 采用声-光-电复合刺激雌性大鼠后，大鼠海马-下丘脑-垂体ER的表达下降。 结论： 心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体ER下降可能是卵巢内分泌功能失调的机制之一。     

GIRK1、2在慢性颞叶癫痫大鼠海马内的表达变化

目的:探讨G蛋白偶联内向整流钾通道(GIRK)在海人酸诱导慢性颞叶癫痫大鼠海马内的表达变化及其在癫痫中的作用。方法:采用海人酸颞叶癫痫模型,运用原位杂交、免疫细胞化学检测海马齿状回、CA1、CA3区GIRK1、2mRNA和蛋白表达;Westernblotting检测海马整体GIRK1、2蛋白变化。结果:GIRK1、2mRNA和蛋白在大鼠海马内分布广泛;慢性颞叶癫痫海马DG区GIRK2mRNA和蛋白表达增高有显著差异(P＜0.01);GIRK1mRNA在海马DG区表达有差异(P＜0.05);Westernblotting检测海马GIRK1、2未有明显变化。结论:GIRK1、2在慢性癫痫大鼠海马内的表达增高,特别在齿状回,提示是机体对神经元网络过度兴奋的代偿或适应性反应;其合成增加将降低神经元的兴奋性,阻止海马内过度兴奋的扩散(DG-CA3-CA1)。     

乳腺Paget病细胞角蛋白-8、c-erbB-2、雌激素受体和孕激素受体的表达及意义

目的探讨乳腺Paget病中细胞角蛋白-8(CK-8)、c-erbB-2、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达及意义。方法对12例乳腺paget病组织进行免疫组织化学染色,检测CK-8、c-erbB-2、ER、PR在Paget细胞与同一例深部癌组织中表达的异同。结果Paget细胞CK-8表达阳性率为100%、c-erbB-2表达阳性率为91.67%,而ER、PR表达阳性率为16.67%。CK-8、c-erbB-2、ER及PR中每一标记物在Paget细胞和同一病例深部癌组织中阳性表达一致。结论乳腺Paget病内Paget细胞来源于乳腺深部存在的导管内癌或浸润性导管癌,是深部癌细胞在表皮内的扩散。     

左旋18-甲基炔诺酮对大鼠雌激素水平及下丘脑雌激素受体阳性细胞的影响

目的:观察左旋18-甲基炔诺酮(LNG)对大鼠雌激素(E)水平及下丘脑内雌激素受体(ER)阳性细胞的影响。方法:正常雌性SD大鼠分为给药对照组、给药组、停药对照组、停药组,应用免疫组织化学方法显示下丘脑ER阳性细胞并检测血清E浓度。结果:给药组较给药对照组E浓度下降,弓状核(Arc)、下丘脑腹内侧核(VMH)内ER阳性细胞的数量减少、光密度下降。停药后基本恢复正常。结论:长期LNG作用导致给药大鼠血清E水平下降;长期LNG作用引起大鼠下丘脑ER数量减少、活性减低,推测ER可能参与影响促性腺激素释放激素的分泌;停药后ER的形态学变化恢复正常,所以LNG的作用基本上是可逆的。     

慢性癫痫大鼠海马内GABA_A受体γ_2亚单位的改变──原位杂交组织化学研究

将马桑内酯作腹腔注射诱发大鼠慢性癫痫动物模型。然后，对模型动物和对照动物海马组织进行ＧＡＢＡ_Ａ受体γ_２亚单位的原位杂交组织化学研究。结果表明，慢性癫痫动物海马回和齿状回内的ＧＡＢＡＡ受体γ_２亚单位ｍＲＮＡ较对照组明显减少。提示ＧＡＢＡＡ受体γ_２亚单位可能在癫痫发病机理中起一定作用。     

子宫肌瘤雌激素受体亚型mRNA的表达

目的　探讨雌激素受体亚型的表达与子宫平滑肌瘤发生、发展的关系。方法　将60例子宫肌瘤患者分为AB两组, A组32例<48岁,B组28例>48岁,应用原位杂交技术测定平滑肌瘤组织中雌激素两种受体亚型mRNA的表达,取肿瘤周 围正常的平滑肌作对照。结果　子宫肌瘤组织中ERαmRNA的表达明显高于正常的平滑肌组织,而ERβmRNA的表达降 低;B组ERαmRNA在子宫平滑肌瘤组织中的表达较A组呈下降趋势,而ERβmRNA的表达呈上升趋势。结论　子宫肌瘤的 发生发展与ERαmRNA的高表达有关,亦与ERβmRNA表达减少有关。肌瘤的萎缩可能与ERβmRNA表达的升高趋势及 ERαmRNA表达的下降趋势均相关。