正常细胞与镉转化细胞抑制消减cDNA文库构建

目的 构建正常人支气管上皮细胞(16HBE)与氯化镉诱导转化16HBE细胞间差异表达基因的消减cDNA文库.方法 以16HBE为驱动子,氯化镉诱导转化16HBE细胞为检测子,应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建cDNA文库,经2次消减杂交和2次PCR后,将巢式PCR产物插入载体,随机挑选克隆进行鉴定.结果 得到纯度高及完整性好的总RNA和mRNA,并扩增出良好的双链cDNA,cDNA与接头的连接效率＞25％,最终使差异表达基因得到富集;经蓝白菌落筛选,获得1 200余个白色阳性克隆;随机挑选50个白色克隆进行PCR扩增,显示96％克隆均有100 ～ 600 bp的插入片段,这些片段可能是差异表达基因cDNA片段,提示用SSH法及T/A克隆技术有效构建了两细胞株间差异表达基因的消减cDNA文库.结论 成功创建正常16HBE细胞与镉转化16HBE细胞差异表达基因消减cDNA文库.     

白藜芦醇对K562细胞增殖凋亡及分化的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人K562细胞增殖、凋亡、分化及血红蛋白合成的影响。方法通过细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测Res对K562细胞增殖的影响,流式细胞分析仪检测Res对K562细胞凋亡率的影响,联苯胺染色及血红蛋白测定检测Res对K562细胞红系分化及血红蛋白合成的作用。结果不同浓度Res作用后可时间和剂量依赖性地抑制K562细胞的增殖,可浓度依赖性地促进K562细胞的凋亡;Res单独作用后未能引起K562细胞联苯胺染色阳性率和血红蛋白含量发生变化。而Res预处理后能增加氯化血红素诱导的细胞联苯胺染色阳性率和血红蛋白含量。结论白藜芦醇能够抑制K562细胞增殖、促进其凋亡,白藜芦醇可增强K562细胞红系分化的能力,但并不能直接引起K562细胞的红系分化。     

晕船易感大鼠脑干组织消减cDNA文库的构建

目的 筛选晕船易感大鼠脑千组织的晕船易感性相关基因，为建立晕船易感人群预测方法提供基础数据。方法 以晕船易感大鼠为实验组，以非易感大鼠为驱动组，抽提恼千组织mRNA，利用抑制消减杂交技术(SSH)，通过2次抑制性PCR反应得到二者之间差异表达的cDNA。将PCR产物与pGEM-T载体连接，构建消减cDNA文库，将连接产物用电击法转化大肠杆菌进行文库扩增。对所得克隆进行PCR扩增鉴定。结果 构建具有高消减效率的消减cDNA文库，差异表达的cDNA得到富集，文库中包含470个白色克隆(高表达260个、低表达210个)，其中442个有插入片段，片段大小主要在250～650bp之间。结论 利用抑制消减杂交技术成功构建了晕船易感大鼠脑干组织差异表达基因cDNA文库，为研究晕船易感特异表达基因奠定了基础。     

植物单宁对K562细胞诱导红系分化抑制作用

目的 研究可水解单宁诃子酸和特里马素Ⅰ对氯化高铁血红素和丁酸钠诱导K562细胞红系分化的影响.方法 四甲基偶氮噻唑蓝法分析诃子酸和特里马素Ⅰ对K562细胞生长的影响,联苯胺染色法检测血红蛋白合成情况,应用免疫荧光和流式细胞术检测血型糖蛋白A(GPA)在细胞表面的表达.结果 诃子酸和特里马素Ⅰ在0.04～0.09mmol/L浓度下均可显著抑制K562细胞的生长增殖.2种单宁化合物(0.002～0.01 mmol/L)可显著抑制丁酸钠诱导的K562细胞血红蛋白合成,2种单宁化合物(0.01～0.05 mmol/L)还可显著抑制氯化高铁血红素诱导的血红蛋白合成,特里马素Ⅰ(0.01 mmol/L)还抑制丁酸钠诱导的GPA在细胞表面表达.结论 诃子酸和特里马素Ⅰ对红系分化有抑制作用.     

个旧矿粉诱导的支气管上皮转化细胞cDNA消减文库的构建

目的 构建永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B与其受个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库.方法 以BEAS-2B为对照组,以采自个旧井下作业面的矿粉为染毒物在体外成功诱导的恶性转化细胞为实验组.分别提取总RNA;应用SMART cDNA合成技术,获得充足的ds cDNA;应用抑制性消减杂交(SSH)技术分离BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段;再通过T/A克隆和蓝白筛选实验,克隆BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段,构建二者之间差异表达的cDNA消减文库.结果 通过SSH和T/A克隆等技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库,文库经扩增后得到107个白色克隆和41个蓝色克隆.结论 应用SSH技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库,为进一步研究个旧矿粉致肺癌发生的分子生物学机制奠定了基础.     

抑制消减杂交技术在筛选矽肺大鼠差异表达基因中的应用

目的对正常大鼠肺组织与矽肺大鼠肺组织之间基因表达差异进行比较,筛选与矽肺相关的差异表达基因片段。方法 30只SD大鼠随机分为2个组,对照组6只,实验组24只。实验组大鼠采用非气管暴露法染尘制作矽肺大鼠模型,对照组灌注生理盐水,利用HE切片确定建立模型成功;抑制消减杂交技术构建cDNA双向消减文库;菌液RCR技术初步筛选cDNA消减文库,将获得的阳性克隆进行测序、同源性比对及生物信息学分析。结果扩增消减cDNA文库获得400多个白色阳性克隆,随机挑取252个白色克隆用PCR进行扩增,95%的克隆中均有100~1 500bp的插入片段,经测序,得到具有差异表达的基因175个。经生物信息学分析表明,筛选出的已知差异表达基因与众多生物学过程和分子功能相关,包括物质代谢、物质转运、细胞增殖、细胞凋亡、细胞黏附、信号转导等,其中许多差异表达基因与矽肺的关系尚未被报道。结论利用抑制消减杂交技术可以建立高质量的矽肺正、反向差异消减cDNA文库,筛选与矽肺相关的已知和未知基因,为寻找矽肺诊断和预后的检查指标和筛选治疗靶点提供有用的信息。     

利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞cDNA消减文库

目的利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞的消减文库,为进一步从基因表达水平研究空间特殊环境影响肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定基础。方法采用SuperSMART和SSH技术,以太空诱变的宫颈癌48A9细胞株作为Tester,地面正常对照组宫颈癌细胞株作为Driver,分离太空诱变的宫颈癌48A9细胞中差异表达的基因片段;连接T载体,转化宿主菌,构建太空诱变的宫颈癌48A9细胞cDNA抑制性消减文库。结果经蓝白筛选后随机挑取300个阳性克隆,以接头1和2R内侧序列为引物进行菌液PCR扩增鉴定阳性克隆,结果显示其中288个克隆有插入片段,阳性率为96％,大小分布在0．2—1．0kb间。结论本实验利用抑制性消减杂交技术成功的构建了高质量的太空诱变宫颈癌细胞消减文库,为进一步从基因水平阐明太空特殊环境对肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定了基础。     

铝离子对K562细胞红系分化能力抑制作用

目的 研究铝离子对K562细胞红系分化能力的影响.方法 应用台盼蓝染色排除法分析铝离子对K562细胞的活力的影响;应用联苯胺染色法检测铝离子作用下K562细胞的红系分化率;利用荧光标记抗体结合流式细胞技术分析铝离子处理K562细胞的细胞表面转铁蛋白受体CD71的表达.结果 50、100和150 μmol/L铝离子作用24 ～72 h对K562细胞生长有浓度依赖性抑制作用,各浓度组作用72 h时的相对活力分别为(89.23±4.37)％、(52.78±1.58)％和(44.69±1.95)％;铝离子作用48 h对氯化高铁血红素诱导的K562细胞血红蛋白合成表现出较为明显的浓度依赖性抑制,相对于对照组细胞,各浓度组的血红蛋白合成抑制率分别为3.37％、8.61％和10.55％;经100 μmol/L铝离子处理48 h后的K562细胞表面CD71的表达水平增加27.7％.结论 一定浓度的铝离子对K562细胞的红系分化能力有抑制作用.     

反式二羟环氧苯并芘诱导人支气管上皮细胞翻译延长因子1αl基因的表达

目的 探讨反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱导转化(16 HBE-T）与成瘤(16HBE-C)人支气管上皮细胞(16HBE)翻译延长因子1αl基因的表达变化。方法 联合应用抑制性消减杂交、生物信息学分析以及半定量RT-PCR等方法，分别以16HBE-T和16HBE-C细胞cDNA为检测子，以正常16HBE细胞(16HBE-N)cDNA为驱动子，构建消减杂交文库，经2次杂交和2次PCR后，插入TA克隆载体克隆，经筛选、测序、序列分析后，设计特异引物，以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照，进行半定量PCR。结果 有9条差异表达片段与Genbank的翻译延长因子1αl的不同片段相同，半定量PCR表明，翻译延长因子1αl在16HBE-T和16HBE-C细胞中的表达水平分别为16HBE-N细胞的1．148倍和1．253倍，表明表达水平上调。结论 翻译延长因子1αl可能与反式-BPDE的转化及成瘤有部分关系。     

版纳微型猪近交系外周血淋巴细胞cDNA文库的构建

[目的]构建版纳微型猪近交系(BMI)外周血淋巴细胞中cDNA文库.[方法]取新鲜BMI外周血,分离淋巴细胞,并进行体外诱导培养,提取总RNA,纯化mRNA.按照SMART cDNA library construction kit提供的方法构建BMI外周血淋巴细胞cDNA初始文库,进行滴度测定及文库扩增.[结果]初始文库和扩增文库的滴度分别为1.1×106 pfu/ml和2.5×109 pfu/ml,重组率分别为98.2%和89.1%,插入片段平均长度大于1200bp.[结论]成功地构建了BMI外周血淋巴细胞cDNA文库.     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

Choice of measures of vaccination and estimates of risk of pediatric pertussis

BackgroundVaccination uptake at the individual level can be assessed in a variety of ways, including traditional measures of being up-to-date (UTD), measures of UTD that consider dose timing, like age-appropriate vaccination, and risk reduction from individual doses. This analysis compared methods of operationalizing vaccination uptake and corresponding risk of pertussis infection.MethodsCity-wide case-control study of children in Philadelphia aged 3 months through 6 years, between 2001 and 2013. Multiple logistic regression was used to isolate the independent effects of each measure of vaccination uptake and the corresponding relative odds of pertussis.ResultsBeing UTD on vaccinations was associated with a 52% reduction in risk of pertussis (OR 0.48, 95% CI: 0.34, 0.69). Evaluation of delayed receipt of vaccine versus on-time UTD yielded similar results. There was a decrease in risk of pertussis for each additional dose received with the greatest reduction in pertussis infection observed from the first (OR 0.48, 95% CI: 0.28, 0.83) and second dose (OR 0.17, 95% CI: 0.08, 0.34). Additional doses conferred minimal additional protection in this age group.ConclusionExamining vaccination status by individual doses may offer improved predictive capacity for identifying children at risk for pertussis infection compared to the traditional UTD measure.     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。     

Correlates of stages of change of smoking among inhabitants of deprived neighbourhoods

BACKGROUND: This study examines the prevalence and correlates of stages of change of smoking, in terms of psychosocial, structural and sociodemographic factors, among inhabitants of deprived neighbourhoods. METHODS: Cross-sectional data were obtained from a survey on health related behaviour. Subjects were 2009 current and former smokers, aged 20-46, living in deprived neighbourhoods in Rotterdam, the second largest city in the Netherlands. Three groups of smokers were formed according to the stages of change-definitions of the Transtheoretical Model: smokers not planning to quit (precontemplators), smokers planning to quit (contemplators/preparators) and former smokers (actors/maintainers). Smokers planning to quit and smokers not planning to quit were compared regarding psychosocial factors (attitude, social norm, self-efficacy), structural factors (neighbourhood problems, material deprivation, financial problems, employment status) and sociodemographic factors (age, gender, marital status, cultural background, educational level). Former smokers were compared with smokers planning to quit regarding structural and sociodemographic factors. Logistic regression was used to assess correlates of stages of change. RESULTS: Smokers planning to quit (prevalence = 19%) reported a more positive attitude, stronger social norms and higher self-efficacy expectations in quitting smoking than smokers not planning to quit (prevalence = 57%). Smokers planning to quit less often were Dutch-born, more often had attended higher vocational schooling or university and more often reported experiencing two or more neighbourhood problems compared to smokers not planning to quit. Former smokers (prevalence = 24%) were older, more often Dutch-born, married, employed and higher educated, compared to smokers planning to quit. Furthermore, former smokers less often reported material deprivation and financial problems than smokers planning to quit. CONCLUSION: Among people living in deprived neighbourhoods, different factors correlate with different stages of change of smoking. Implications for health promotion are discussed.     

两种不同肌瘤剔除术治疗子宫肌瘤的临床疗效比较

目的:比较腹腔镜子宫肌瘤剔除术与腹式子宫肌瘤剔除术的临床疗效。方法:回顾分析63例腹腔镜子宫肌瘤剔除术与61例腹式子宫肌瘤剔除术的临床资料,比较2种手术方式的手术时间、术中出血量、肛门排气时间、使用抗生素时间、术后感染率、体温恢复正常时间、住院时间等情况。结果:两组患者接受子宫肌瘤剔除术顺利完成,腹腔镜组手术时间长于开腹组(P0.05),腹腔镜组术中出血量及剔除肌瘤个数均少于开腹组(P0.05),术后腹腔镜组体温恢复正常时间、肛门排气时间、抗生素使用及住院时间均短于开腹组,两组患者最多随访6个月,腹腔镜组平均康复时间较开腹组短(P0.05),两组随访B超均未发现明显肌瘤结节。结论:腹腔镜子宫肌瘤剔除术损伤小,恢复快,住院时间短,是值得推广的微创手术。     

医学院学生14例癔症分析

目的为了解高校大学生癔症发病情况,以利于做好癔症发作的预防。方法对徐州医学院14例癔症病人发作诱因、临床表现及诊治情况进行回顾性分析。结果具备＂癔症性格特征＂的女大学生易受精神刺激出现心理障碍而发病,且临床症状与体征不符,有复发倾向,暗示治疗有效。结论癔症的起病与精神因素和暗示密切相关,在治疗中暗示疗法同样起着重要作用。应加强女大学生心理健康教育,积极预防癔症发作。     

10例肺吸虫病临床分析

目的了解肺吸虫病的临床表现,诊断和鉴别诊断,为临床防治肺吸虫病提供科学依据。方法采用回顾性分析法,对临床收治的10例肺吸虫病人进行统计分析。结果10例肺吸虫病人,男性多于女性,儿童多发。人体感染肺吸虫后,可表现为胸肺型、胸腹混合型、皮肤型、脑型,但因虫体寄生部位不同,临床表现不一。肺吸虫病人白细胞和嗜酸细胞计数升高。肺吸虫病最易误诊的疾病为结核病。结论肺吸虫病的临床表现和体征并不一致,主要与疾病临床分型有关。临床医生应熟悉肺吸虫病防治知识,提高对肺吸虫病的诊断和鉴别诊断能力,防止误诊、误治。     

尘肺病患者145例死因调查

目的分析汉中市尘肺病的发生、发展和死亡原因，以提高尘肺病患者的生存质量。方法对145例尘肺病患者的死因进行回顾性分析，计算其平均发病年龄、死亡年龄及患尘肺病后的存活年限。结果矽肺的平均发病年龄和死亡年龄均早于煤工尘肺和石棉肺，尘肺病的主要死因为患肺部疾患，患尘肺病后的平均存活年限为12a。结论加强职业健康体检工作，对尘肺病人做到早发现早治疗和预防并发症的发生。     

性发育异常发病机制的研究进展

正常的性腺分化可分为3个过程：原始性腺形成、性别决定和卵巢/睾丸发育。在任一环节中,基因表达或调控发生异常均有可能导致性发育异常疾病的发生。性发育异常是指染色体、性腺和解剖性别不典型。随着分子生物学技术的发展,不断地发现新的基因或信号通路参与性腺分化和发育,如SRY、SF1、WT1、Sox9等基因与睾丸发育密切相关,Wnt/Rspo1/B连环蛋白通路、Dax1、Foxl2等基因在卵巢分化中发挥着重要作用,一些非编码RNA和转化生长因子也有重要的调节功能,且睾丸和卵巢发育均为主动过程,即使在出生后因某些基因的改变两者间也可出现横向分化。这些为揭示性分化异常的发病机制提供了可能。     

通过设计发夹RNA抑制HIV病毒NEF基因表达的实验研究

目的 实验研究shRNA能否抑制宿主细胞Hele细胞中NEF基因的表达.方法 给HIV病毒宿主细胞Hele细胞加入预先设计好的4对shRNA,同时设置对照组,提取细胞总RNA和细胞总蛋白,设计NEF和GAPDH的引物,利用SYBR Green实时荧光定量PCR检测NEF的基因水平,利用western blotting检测NEF的蛋白水平.结果 定量PCR和Western-blot方法检测显示,NEF-miRNA-1、NEF-miRNA-2、NEF-miRNA-3、NEF-miRNA-4干扰质粒对靶基因mRNA表达都有抑制作用,其中NEF-miRNA-3干扰质粒抑制作用最显,抑制率达87％.结论 可以通过设计shRNA去抑制HIV病毒的复制.