龟板含药血清对骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察益肾龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）体外增殖过程的增殖细胞核抗原（Proliferation cell nuclear antigen,PCNA）表达的影响。方法：使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC增殖过程。用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测MSC的PCNA及其mRNA表达;免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测PCNA蛋白表达的变化。结果：龟板血清以浓度依赖方式促进MSC的PC-NA及其mRNA表达阳性细胞数和PCNA蛋白表达,与对照组比较有显著性（P〈0.05）。结论：龟板血清促MSC增殖作用可能与上调PCNA表达有关。     

龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响,筛选龟板组份中进MSC增殖的药效成分方法:从龟板提取物分离出10个组份,以不同浓度(2μl,5μl,10μl,20μl)组份及配伍加入体外培养的MSC中,培养3 d后,MTT法测定细胞活性。结果:与对照组比较,A、B、H、I 20μl浓度组和C、F(10μl～20μl)浓度组和J(5μl～0μl)浓度组细胞活性显著提高,与J组份配伍细胞活性提高(P<0．05);E(2μl-20μl)浓度组细胞活性显著降低,与E组份配伍组细胞活性显著降低;D和G组细胞活性没有影响。结论:7个组分均促进MSC增殖,以J组份最强,与J组份配伍作用提高;E组份抑制MSC增殖,与E组份配伍作用降低;D和G组份无效。     

菟丝子含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制

目的:探讨菟丝子含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机制研究。方法:分离、培养大鼠MSCs,菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中MSCs不同细胞因子mRNA的表达;Real-time PCR检测骨形态蛋白-2(BMP-2)mRNA表达;Western-blot检测BMP-2蛋白表达。结果:10%菟丝子含药血清具有显著促进MSCs增殖的作用(P<0.05),并显著促进BMP-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论:10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进BMP-2 mRNA表达有关。     

地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,用流式细胞术鉴定P3代BMSCs。将地龙配制成终浓度为500、50、5、0.5 mg/m L的提取物溶液作为药物干预组,以0 mg/m L组为空白对照组,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。通过比较OD值判断地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,比较增殖率。结果:全骨髓贴壁法培养的P3代BMSCs表现为集落生长,经流式细胞术检测,CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达;CCK-8法检测结果为,剂量为0.5-50 mg/m L的药物干预组OD值较对照组显著升高;地龙浓度为5 mg/m L组OD值出现最大值,继续提高浓度OD值逐渐减小,当提取物浓度达到500 mg/m L时表现为细胞生长受到抑制。结论:培养的骨髓基质细胞在形态和表型上具备BMSCs的特性。地龙提取物在一定浓度范围内能促进BMSCs增殖。浓度为5mg/m L时促进BMSCs增殖作用最为明显,浓度为500 mg/m L时会抑制BMSCs的增殖。     

补肾壮骨颗粒含药血清对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：探讨补肾壮骨颗粒含药血清对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞（ MSCs）体外增殖的影响。方法：选用10只6月龄SD大鼠去卵巢制作骨质疏松模型,对骨质疏松骨髓间充质干细胞进行分离和体外培养,传代后的 MSCs分为OP组、OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组和OP＋空白血清组,倒置显微镜观察各组MSCs的生长情况,进行形态学观察,并用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定生长曲线。结果：OP＋含药血清组,MSCs呈典型的集落生长,细胞呈长梭形,突起细长且多,细胞增殖较旺盛,细胞数量不断增加,随着传代次数的增多,细胞增殖速度减慢。OP组及OP＋空白血清组MSCs接种后胞体立体感下降,体积较大,细胞偏圆形,突起收缩,增殖速度较慢,细胞数量减少;随着传代次数的增多,细胞增殖速度显著减慢。OP＋补肾壮骨颗粒含药血清组骨髓间充质干细胞增殖能力明显提高,生长曲线有显著性差异。结论：补肾壮骨颗粒含药血清能促进去卵巢骨质疏松大鼠MSCs的增殖。     

龟板对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响

目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外向成骨分化的影响.方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化.应用形态学、碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa 染色、骨钙素测定等方法观察细胞成骨活性.结果形态学表明,MSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞外观.龟板组碱性磷酸酶、钙化结节、骨钙素明显升高,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05).结论 MSCs受龟板诱导高效地向成骨细胞分化,可以为体内骨组织工程提供种子细胞.     

肾气丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度肾气丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖的影响。方法：应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化法检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度肾气丸水提液干预组,采用MTT比色法观察其增殖情况。结果：采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44、CD29阳性,CD34阴性。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,肾气丸水提液干预24h后,4、2、1、0.5mg/ml浓度肾气丸干预组吸光度值均增高（P〈0.05）,其中2mg/mL肾气丸干预组增高明显;0.25mg/mL浓度肾气丸水提液干预组吸光度与空白组相比无差异（P〉0.05）。结论：本实验采用全骨髓贴壁法培养的骨髓基质细胞符合BMSCs的生物特性,可以用于BMSCs相关研究。在一定浓度范围内,肾气丸水提液可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法取SD大鼠,无菌条件下收集股骨、胫骨骨髓内的细胞进行体外培养,选第3代细胞用于实验。川芎嗪培养液选用9个不同的浓度进行干预实验。骨髓间充质干细胞分别在不同浓度的川芎嗪培养液中培养24h后,倒置显微镜下观察细胞形态,采用MTT比色法检测骨髓间充质干细胞增殖的情况。结果在低浓度范围内,川芎嗪对细胞的增殖作用具有浓度依赖性,浓度越高越明显,但到达一定浓度后,随着川芎嗪浓度进一步增加,对细胞的增殖反而有抑制作用。0.08mmol/L的川芎嗪对骨髓间充质干细胞的增殖作用最强。结论川芎嗪对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖作用与剂量有关。     

左归丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度左归丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度左归丸干预组,采用MTT比色法观察不同浓度左归丸水提液干预后BMSCs增殖的情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态以长梭形为主,呈集落样生长。体外培养的BMSCs免疫组织化学鉴定显示CD44,CD29呈阳性表达,CD34呈阴性表达。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药质量浓度2.5～4 g·L-1的左归丸水提液干预24 h后,干预组吸光度均明显增高(P<0.01),而与其他浓度相比1 g·L-1时左归丸水提液促进BMSCs增殖的作用最强。结论:所培养的大鼠骨髓基质细胞在细胞表型表达和细胞形态上具备BMSC特征。左归丸水提液在一定浓度范围内可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

中药对骨髓间充质干细胞增殖分化影响的研究进展

骨髓间充质干细胞（marrow stromal stem cells，MSCs）具有的多向分化潜能和自我更新能力使其成为未来再生医学的重要种子细胞，并成为研究人类早期胚层特化和器官形成、药物筛选以及基因治疗的最佳工具。随着现代研究在中医药领域的不断渗透和深入，中药在诱导MSCs增殖分化水方面有不少突破。目前，这些研究主要集中在单味中药、中药复方其相应提取物对MSCs的直接及间接干预上。本文针对中药对骨髓间充质干细胞的增殖分化的研究进展进行综述。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定及复方扶芳藤合剂含药血清对细胞增殖的影响

目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分化,采用流式细胞仪检测其表面标志物,分析其细胞周期,进行BMSCs鉴定;采用不同浓度(20%、10%和5%)的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对大鼠BMSCs进行干预,以CCK-8法检测其吸光度值,对比各组细胞生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。BMSCs成脂、成骨诱导后,油红O染色和茜素红染色均呈阳性。第3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD44表达分别为99.645%、99.677%、0.016%、0.133%;不同浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续干预7 d后,CCK-8法检测显示:20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清组,其1～7 d的吸光度均值均高于20%浓度的空白血清组(P<0.05);10%的含药血清组的吸光度均值在3～7 d,高于10%的空白血清组(P<...     

强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）体外增殖的影响。方法使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs，5-溴脱氧嘧啶（Brdu）和CD44、CD54双重免疫组化鉴定，传3代后的MSCs分为强肌健力口服液含药血清组和空白血清对照组，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2组MSCs的生长情况。结果强肌健力口服液含药血清组以浓度依赖方式促进MSCs的增殖活力，与相应浓度的空白血清对照组比较差异有显著性意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论补脾法（强肌健力口服液含药血清）能促进干细胞的生长。     

补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠1周,制备3种补阳还五汤含药血清和空白血清。将BMSCs分为补阳还五汤6.5 g·kg~(-1)组(用含10%6.5 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤13 g·kg~(-1)组(用含10%13 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤26 g·kg~(-1)组(用含10%26 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),空白组(用含10%空白血清培养)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组BMSCs的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)和磷酸化丝(苏)氨酸蛋白酶(p-Akt)(Ser473)蛋白的表达。结果:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用BMSCs 48,72 h后,细胞增殖活性较空白组明显升高(P0.05);3种补阳还五汤含药血清作用48 h后,BMSCs在S期的细胞比率随着药物浓度的升高而升高,与空白组比较有统计学意义(P0.05);13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用48 h后,PI3K和p-Akt(Ser473)蛋白表达较空白组显著增强(P0.01)。结论:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清可能通过活化PI3K/Akt信号通路促使细胞进入S期,增强BMSCs增殖活性。     

金雀异黄酮对体外培养缺氧大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

 目的 观察金雀异黄酮对缺氧体外培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖与成骨分化的影响。方法 采用贴壁筛选法体外培养BMSCs并用三气培养箱建立缺氧模型。设常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组细分为1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol·L-1组金雀异黄酮组,缺氧处理36 h后分析各组的细胞增殖和成骨性指标包括碱性磷酸酶（ALP）活性、Ⅰ型胶原表达、钙盐沉积量和钙化结节面积等,并用Real Time RT-PCR法检测Runx2和骨形成蛋白（BMP）-2的基因表达情况。结果 与缺氧对照组比较,金雀异黄酮抑制BMSCs增殖,显著提高ALP活性、Ⅰ型胶原表达量、钙盐沉积量和钙化结节面积,并提高基因Runx2和BMP-2的表达水平,且呈现出剂量依赖性特点。结论 金雀异黄酮具有抑制缺氧BMSCs增殖并促进其成骨分化的作用。     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

不同浓度麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在体内迁移的影响

目的 研究不同浓度麝香酮对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone rnarrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)在体内迁移的影响,以期筛选出最佳的治疗剂量。方法 SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,采用牙科钻营造颅骨缺损的大鼠模型;利用贴壁筛选法提取大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代,并加入含有终浓度为10 μmol/L BrdU 进行标记,待细胞融合至于80%时,利用胰酶消化,配置成细胞密度为1×109cells/L细胞混悬液,然后通过尾静脉注入颅骨缺损的大鼠体内,回植后分别采用高(16.8 μL /100 g)、中(8.4 μL /100 g)、低(4.2 μL/100 g)剂量的麝香酮灌服实验大鼠,空白组以灌服等体积生理盐水作为对照。14 d后取出颅骨,固定,脱钙,做免疫组化后,荧光显微镜下,计数BrdU阳性细胞。结果 利用免疫组化处理后,进行灰度分析,麝香酮低、中剂量组与空白组比较,差异有统计学意义（P<0.01),麝香酮高剂量组与空白组比较,差异无统计学意义（P>0.05)。结论 麝香酮具有促进外源性干细胞在体内的迁移作用,以中、低浓度麝香酮效果较好。