金黄色葡萄球菌蛋白A的纯化

葡萄球菌蛋白 A(简称 SpA)是大多数金黄色葡萄球菌所具有的细胞壁成份,它能与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fo 片段发生非特异性结合。为进一步研究 SpA 的结构和生物学特性,必须获得纯化的 SpA。纯化方法有用酸沉淀和电泳或用柱层析、凝胶过滤等,但都较繁复,产率不高。Hjelm 等(1972)用溶葡萄球菌素(Lysostaphin)消化细菌后再经 IgG 柱的亲和层析以纯化 SpA,产率高,但溶葡萄球菌素来源困难,价格昂贵。我们利用现有实验条件对这一方法作些改良,获得产率较高的纯化 SpA。     

金黄色葡萄球菌的蛋白A基因多态性分型

目的 建立金黄色葡萄球菌的蛋白A基因（spa）多态性分型方法,并初步测定了结核患者鼻腔定植的金黄色葡萄球菌的spa基因型。方法 采用PCR方法扩增10株金黄色葡萄球菌spa基因的X区,测序后通过数据库（http：//www．ridom．de／spaserver／）进行分型,并与脉冲场凝胶电泳（PFGE）结果相比较。结果 5例患者抗结核治疗前后前鼻腔定植的金黄色葡萄球菌spa分型相同,结果与PFGE一致。5例患者定植的金黄色葡萄球菌spa型分别为：t795、t179、t189、t758和t796,其中t795、t758和t796为新发现的型。结论 Spa分型是一个较好的金黄色葡萄球菌快速基因分型方法。     

A蛋白测定作为鉴别金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌的方法之一

从表皮葡萄球菌中快速而准确的鉴别金黄色葡萄球菌对于诊断葡萄球菌感染有着极其重要的意义。作者对A蛋白试验作为从表皮葡萄球菌中快速鉴定金黄色葡萄球茵菌株的方法进行了研究。金黄色葡萄球菌具有A蛋白是种的特征,这种细菌有     

金黄色葡萄球菌药敏试验初步分析

对1993年至1996年本院血培养的金黄色葡萄球菌药物敏感试验进行了统计分析，发现先锋霉素类，氨基糖甙类，喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌的敏感性较高，青霉素类和其它合成类药物则敏感性较低。     

金黄色葡萄球菌DNA提取方法的研究

目的:建立一种简易的金黄色葡萄球菌DNA提取方法。方法:用4种不同的细菌DNA提取方法提取金黄色葡萄球菌DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR检测提取物并比较结果。结果和结论:溶菌酶能有效的降解金黄色葡萄球菌细胞壁,且用溶菌酶破壁后提取的DNA适于PCR实验,本研究成功的得到一种简易的、改良的金黄色葡萄球菌DNA的提取方法。     

葡萄球菌A蛋白

一、葡萄球菌A蛋白的发现葡萄球菌A蛋白(staphlococcal protein A: SPA)是存在于大多数金黄色葡萄球菌(staphy aureus: SA)细胞壁上的一种蛋白质抗原。1940年Wer-     

含A蛋白金黄色葡萄球菌在皮质醇放射免疫分析中的应用

在放射免疫分析中,抗原—抗体复合物与游离抗原的分离是极为重要的一环,它直接关系到分析结果的准确性。分离剂的品种很多,各有利弊。近年来报道,含A蛋白的Cowan Ⅰ型葡萄球菌是良好的抗体吸附剂,具有容易制备、性能稳定、保存方便和价格低廉等优点。我们在皮质醇放射免疫分析中,用含A蛋白的金黄色葡萄球菌(以下简称SPA菌体)     

含A蛋白金黄色葡萄球菌在抗原抗体反应中的一些试验方法

金黄色葡萄球菌A蛋白能够与人及其他一些哺乳动物血清中IgG的Fc段结合。利用这一特性,近些年来在国外将它作为一种免疫学试剂,已应用于免疫学和血清学的研究中,并取得了广泛的进展。在国内过去由于缺少Cowan Ⅰ标准株,故未见到有关实验报道。本文根据所见到的国外资料并结合我们自己的实践,对含A蛋白金黄色葡萄球菌在抗原抗体反应中的一些基本方法作了概括介绍。     

金黄色葡萄球菌蛋白A的原核表达及生物亲和特性研究

目的构建金黄色葡萄球菌蛋白A (SPA)基因片段的表达载体,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,探讨该重组蛋白与不同来源IgG结合的生物学特性。方法利用PCR法扩增SPA基因片段,将该段基因克隆到pET30a(+)表达载体,转化感受态BL21大肠杆菌细胞,IPTG诱导表达,利用SDS PAGE及Westen blot鉴定目的蛋白。His亲和层析纯化后分别与人、小鼠、兔、猪及山羊血清反应,分析其与不同来源IgG的亲和关系。结果构建的pET30a(+) SPA表达载体在大肠杆菌BL21中可表达SPA蛋白,且发现其与人及小鼠源IgG具有较高亲和性,与兔及猪源IgG亲和性较低。结论该重组蛋白SPA与人及小鼠源免疫球蛋白IgG具有较高亲和性,为下一步应用于SPA ELISA打下基础。     

影响金黄色葡萄球菌败血症疗效因素的探讨(附101例分析)

<正> 金黄色葡萄球菌(以下称金葡菌)败血症为一严重全身性感染,虽新的抗生素不断应用于临床,但其病死率仍未降低(12.5—40%)。本文收集我院1965年11月至1984年1月,19年内金葡菌败血症101例,就其主要影响本病疗效的因素加以分析探讨。临床资料全部病例均符合下列诊断标准:(1) 具有败血症的临床表现;(2) 有或无原发感染灶及/或迁徙病灶;(3) 血或/骨髓培养出金     

产肠毒素D金黄色葡萄球菌的筛选及其基因克隆和蛋白表达

目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素D基因(entD),表达和纯化其重组蛋白(rSED),以进一步制备抗rSED抗体,研制SED金标免疫快速检测试纸条.方法 利用PCR技术,从野生型金黄色葡萄球菌中筛选产肠毒素D金黄色葡萄球菌标准株,扩增entD基因,克隆至pGEM-T Easy载体,亚克隆至原核表达载体pET28a,重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,免疫印迹检测抗原活性.结果 分离获得1株产肠毒素D金黄色葡葡球菌标准株,成功克隆entD序列,测序表明该基因共684 bp,与其他entD序列(GenBank登陆号:M28521)具有99%的同源性.rSED蛋白在大肠杆菌中得到高效的可溶性表达.免疫印迹结果 表明,rSED蛋白能被抗天然SED抗体识别.结论 通过基因重组技术制备的重组SED蛋白具有良好的免疫反应性.     

三种方法提取金黄色葡萄球菌DNA的比较

目的对三种金黄色葡萄球菌DNA提取方法的效果进行比较,以期获得一种简便、经济的提取方法。方法采用改良SDS法、NP40法和细菌DNA试剂盒法分别提取同一浓度的金黄色葡萄球菌ATCC25923细菌DNA,利用Nano Drop 2000核酸检测仪测定核酸浓度和纯度,纯度用核酸在波长260 nm处的吸光值与在波长280 nm处的吸光值的比值A260/A280表示,用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量;提取不同浓度梯度的金黄色葡萄球菌ATCC25923细菌DNA,PCR扩增16S r DNA片段检测并比较三种方法的灵敏度。结果三种方法提取金黄色葡萄球菌所得核酸浓度差异有统计学意义(χ~2=6.25,P0.05),NP40法提取浓度较高,改良SDS法较低。试剂盒法提取的DNA纯度较高,A_(260)/A_(280)值在1.8~2.0之间;NP40法提取纯度较差;DNA电泳结果表明SDS法和TIANGEN试剂盒法提取的DNA条带清晰,无拖带现象,NP40法未出现DNA主带,且有拖带现象。所有方法所得DNA经PCR扩增均出现阳性条带。NP40法提取DNA的PCR检测敏感度最高,为1.5×10~6 cfu/ml,改良SDS法敏感度最低,为1.5×10~8 cfu/ml。结论 NP40法提取DNA成本低,耗时少,灵敏度高,适用于金黄色葡萄球菌的快速初筛。     

金黄色葡萄球菌感染的误诊原因探讨

金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌感染),近来发病率逐年增加,而且临床表现多样化,因此有时容易误诊为其他疾病。我科于1984年收治的金葡菌感染,其误诊病种及例数如下:水痘3、猩红热4、乙脑1、麻疹1、白喉1,共10例。典型病例例一:章某、女、9/12岁。患儿以头面部,上胸部出疹七天,发热,咳嗽4天为主诉入院。某院拟诊水痘转本院。体检:T:38～39°c,R:36次/分,P:140次/分,神清,头面部,上胸部可见     

葡萄球菌A蛋白抗癌机理的研究 Ⅱ、葡萄球菌A蛋白对小鼠自然杀伤细胞活性的影响

采用~(125)Ⅰ—udD标记肿瘤靶细胞RNA释放试验,对体内注射SpA纯品或SpA菌体后小鼠脾细胞自然杀伤(NK)活性进行了观测,结果表朋,SpA或SpA菌体经皮下或腹腔注射均可增强小鼠细胞NK活性,SpA菌体所诱导的NK活性似乎高于SpA纯品所诱导的NK效应。     

金黄色葡萄球菌α毒素对肺水通道蛋白表达的影响

目的:观察金黄色葡萄球菌α毒素(α-toxin)对Balb/c小鼠肺微血管内皮细胞(LMEC)水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法:将实验组小鼠15只腹腔注入α-toxin后根据6h、10h、24h取材时间,随机将它们分为α-toxin6h组、α-toxin10h组和α-toxin24h组。取左肺行病理HE染色和免疫组化染色,检测肺组织病理变化情况和AQP1表达的变化。结果:α-toxin各组肺泡间隔增宽、水肿,炎性细胞浸润,肺泡结构破坏,以α-toxin10h组最为明显。免疫组化α-toxin各组AQP1表达下降(P<0.05)。其中以α-toxin10h组最为明显。α-toxin6h组和α-toxin10h组及α-toxin10h组和α-toxin24h组均有显著性差异(P<0.05)。结论:AQP1表达于LMEC。金葡菌α毒素可致小鼠肺LMEC的AQP1表达下降,随着炎症的减轻,AQP1也随之表达增加,进而恢复正常。     

Ph-SA对金黄色葡萄球菌δ溶血素分泌影响的初步研究

目的　通过检测Ph- SA作用后,金黄色葡萄球菌δ溶血素分泌的变化,初步探究Ph- SA的作用机理。方法　实验分未处理、Ph- SA处理、青霉素处理三组,当菌的光吸收值A595达到0 .2时,加入相应的药物,分时段采集样品,用高效液相色谱法检测样品中δ溶血素的分泌量。结果　同一时间点比较,Ph- SA处理组δ溶血素分泌量明显低于其他两组(P均<0 .0 5 )。结论　Ph- SA除了形成孔道杀菌外,还可能具有抑制agr系统而降低细菌外毒素分泌的作用。     

金黄色葡萄球菌对U937细胞HSP90蛋白表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡以及热休克蛋白90（HSP90）在这一过程中的作用。方法当U937：金葡菌分别为0,1∶5,1∶10,1∶20,1∶50和1∶100时,培养30min;当U937：金葡菌为1∶20时,分别培养0,15,30,60和90min。采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡率;采用Western blot方法检测HSP90蛋白的表达。结果U937细胞凋亡率随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐增高;HSP90的表达随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐升高。结论金葡菌诱导的U937的凋亡可能与HSP90蛋白表达的改变有关,并且具有感染时间及细菌浓度依赖性。     

金黄色葡萄球菌IsdB表位蛋白与HBc蛋白融合表达

目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB_50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB_50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB_50-285,并转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相对分子质量;BCA法测蛋白浓度;采用免疫接种法检测重组蛋白的免疫活性。40只小鼠随机分为rIsdB+adjuvant组、HBc-IsdB_50-285+adjuvant组、HBc-IsdB_50-285组和PBS组,每组10只,间接ELISA法检测小鼠特异性IgG效价值,采用金黄色葡萄球菌Newman株对免疫后小鼠攻毒,检测各组小鼠重组蛋白免疫保护效果。结果:表达质粒pET-28-HBc-IsdB_50-285经测序及酶切鉴定证明构建正确;SDS-PAGE分析,重组蛋白以部分可溶形式存在于培养上清中,相对分子质量约为44 000,亲和纯化后蛋白质水平为1.0 g·L^-1。ELISA检测,使用rIsdB蛋白包被酶标板,HBc-IsdB_50-285+adjuvan组小鼠血清特异性抗体滴度的效价值低于rIsdB+adjuvant组(P<0.01);使用HBc-IsdB_50-285蛋白包被酶标板,HBc-IsdB_50-285+adjuvant组的小鼠血清特异性抗体滴度的效价值高于rIsdB+adjuvant和HBc-IsdB_50-285组。攻毒实验,HBc-IsdB_50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球菌免疫保护率低于rIsdB+adjuvant组,但差异无统计学意义(P>0.05);且其与HBc-IsdB_50-285未添加佐剂组比较差异也无统计学意义(P>0.05);与PBS组比较,HBc-IsdB_50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球免疫保护率升高(P<0.01),HBc-IsdB_50-285组小鼠对金黄色葡萄球菌攻毒保护率亦升高(P<0.05)。结论:HBc-IsdB_50-285原核表达载体构建成功;在大肠杆菌中成功表达具有较好生物活性的HBc-IsdB_50-285融合蛋白。