天然抗氧化剂减少神经根撕脱诱导的一氧化氮合酶表达和运动神经元死亡

为了研究抗老年性痴呆 990 1号和 TA990 1+银杏叶标准提取物合剂对臂丛神经根撕脱后前角运动神经元的神经元型一氧化氮合酶 ( n NOS)表达和存活的影响 ,用成年 SD雌性大鼠进行右侧臂丛 C5～ T1 神经根撕脱术后 ,随机分为撕脱组、撕脱 +TA990 1组以及撕脱 +TA990 1和 EGb761合剂组。对此三组每天分别进行腹腔注射 1ml生理盐水、0 .5 % TA990 1、0 .5 %TA990 1和 EGb761合剂。治疗 5 d、1、2、4和 6周后处死动物并进行 NADPH-d染色及中性红复染。定量比较各组 n NOS阳性和存活的运动神经元数量。结果证明 ,神经根撕脱后 5 d受损运动神经元开始表达 n NOS,2周时达高峰 ,随后下降至 6周。受损运动神经元的死亡从 2周开始 ,4～ 6周最明显。抗氧化剂治疗组 n NOS表达规律与对照组相似 ,但是阳性程度和阳性细胞数量均少于对照组 ,存活的运动神经元数量则明显多于对照组。撕脱后 4～ 6周 ,TA990 1治疗组抑制 n NOS表达和提高运动神经元存活的效果均明显优于 TA990 1和 EGb761合剂组。结论 :天然抗氧化剂可有效地减少臂丛神经根撕脱后 n NOS表达 ,提高受损运动神经元的存活。 TA990 1抑制 n NOS表达的作用强于 EGb761。     

银杏叶提取物影响臂丛撕脱后运动神经元NOS表达及其存活

目的:观察EGb761对脊神经根撕脱后前角运动神经元的保护作用和对NOS表达的影响。方法:成年Sprague-Dawley雌性大鼠80只, 行脊髓C5-T1神经根撕脱术后, 治疗组每天腹腔注射1mLEGb761, 25mg·kg^-1·d^-1;对照组注射等量生理盐水。治疗后1周、2周、4周和6周分别处死动物, 取脊髓C7节段行NADPH-d组化和中性红染色, 计数各组动物损伤侧前角NOS阳性和中性红阳性的运动神经元数目, 比较组间差异显著性。结果:脊神经根撕脱后受损运动神经元NOS表达从1周开始, 2周达高峰, 4周-6周逐渐下降。运动神经元死亡以4周-6周最明显。EGb761能减少以上各时点NOS阳性运动神经元的数目, 提高各时点运动神经元的存活。结论:EGb761能下调运动神经元NOS基因表达, 提高受损运动神经元的存活。     

EGb761增强c-jun表达减少轴突撕脱后运动神经元的死亡

目的:观察EGb761对脊神经根撕脱后前角运动神经元c-jun表达和存活的影响。方法:成年Sprague-Dawley雌性大鼠180只,行脊髓C5-T1节段神经根撕脱术后,每日给予腹腔注射1mLEGb761(25mg·kg^-1),对照组注射同容积的生理盐水。治疗后4h、12h、1d、3d、5d、1周、2周、4周和6周9个时点分别处死动物,取C7脊髓节段行c-jun免疫细胞化学和中性红染色。定量比较两组c-jun阳性和存活的运动神经元数目。结果:对照组损伤侧运动神经元4h开始表达c-jun,1d达高峰,以后逐渐下降至术后2周。术后2周运动神经元开始死亡,4周-6周达高峰。EGb761组各时点c-jun阳性和存活的运动神经元数目都多于对照组。结论:EGb761能有效地减少神经根撕脱后运动神经元的死亡,机制可能与c-jun基因的上调有关。     

热休克蛋白27对臂丛神经根撕脱后脊髓运动神经元NOS的影响

目的:观察热休克蛋白27(Hsp27)对大鼠臂丛神经根撕脱后脊髓运动神经元一氧化氮合酶(NOS)表达的影响.方法:Wistar大鼠60只,随机分为实验组和对照组.实验组动物分别以45℃预处理热处理15 min,再置于42℃维持20min,置室温恢复24 h后,手术显微镜下进行脊髓C5～C8节段神经根撕脱术;对照组仅施行臂丛神经根撕脱术,两组分别于术后12 h、1 d、3 d、5 d、7 d处死动物.各组取C5～C8节段脊髓,行Hsp27免疫组化、NADPH-d组化染色,结合自动图象分析系统对结果进行半定量分析.结果:①实验组在12 h即有NOS大量表达,之后迅速同落;对照组伤后第5天开始大量出现NOS阳性.②两组Hsp27表达高峰均在热休克后1 d,且实验组强于对照组.结论:臂丛神经根撕脱伤后Hsp27可能通过抑制NOS神经元来发挥其细胞保护作用.     

神经根撕脱后脊髓运动神经元的病理表现

目的:观察神经根撕脱后脊髓前角运动神经元的病理表现,探讨在该条件下运动神经元死亡的神经生物学机制。方法:选择成年SD雌性大鼠20只,体重200-300g,撕脱右侧臂丛C₅-T₈神经根,术后动物存活3d、5d、1周后取C₅-C₈节段脊髓,对冰冻切片行NADPH-d组化、c-jun免疫组化、中性红和HE染色。观察神经元的形态,计数脊髓前角NOS阳性运动神经元及存活运动神经元数目,以非损伤侧的前角运动神经元数目为100%,计算百分比。结果:神经根撕脱3d、5d、1周后,损伤侧脊髓前角NOS运动神经元平均阳性率分别为:0.74%±0.59%、24.83%±6.73%、51.16%±8.67%。神经元平均存活率分别为93.00%±4.32%、93.67%±5.27%、89.83%±2.65%;c-Jun从撕脱术后3d就有表达,5d后表达开始减少。运动神经元形态变化不明显。1周时偶见前角运动神经元的胞核偏位,但核膜清晰,核仁尚存,染色体固缩。结论:脊神经根撕脱1周内,脊髓前角运动神经元NOS表达递增,c-Jun表达递减,运动神经元开始死亡。NO/NOS可能通过抑制神经元损伤后的再生反应,促进脊髓前角运动神经元的死亡。     

银杏叶提取物减轻臂丛根性撕脱后脊髓运动神经元超微结构的损伤

目的：研究银杏叶提取物(EGb761)对臂丛撕脱后运动神经元超微结构的保护作用。方法：显微镜下撕脱大鼠臂丛 C_5～T_(?)神经根,术后实验大鼠腹腔注射100 mg·kg~(-1)·d~(-1)EGb761,透射电镜观察损伤 C_7节段运动神经元的超微结构。结果：神经根撕脱6～8周,运动神经元胞体体积缩小、胞核染色质裂解、浓缩异染色质增多;粗面内质网和游离核糖体减少、线粒体减少、嵴肿胀;神经髓鞘不完整、呈空泡状变性。EGb761治疗后,胞体体积基本正常,偶见浓缩异染色质;粗面内质网减少不显著;游离核糖体数量明显增多;线粒体形态正常;髓鞘完整呈同心圆包绕在轴索周围。结论：EGb761能减轻运动神经元超微结构的损伤,减少臂丛根性撕脱诱导的运动神经元凋亡。     

圆二色谱分析抗氧化剂EGb761配伍TA9901对老化Aβ_(1-42)二级结构改变的影响

目的　研究抗氧化剂EGb76 1、TA990 1及EGb76 1配伍TA990 1抑制Aβ1-42 聚集作用的分子机制。方法　运用圆二色谱 (CD)分析Aβ1-42 老化后以及其与EGb76 1、TA990 1和二者配伍物共同孵育后二级结构变化。结果　Aβ1-42 孵育 30min和 2 4h及用EGb76 1、TA990 1和其配伍物干预后 ,Aβ1-42 的CD图形发生了明显改变 ,30min以不规则卷曲和α 螺旋为主 ,其含量分别为 4 0 5 %和 2 5 4 % ;孵育 2 4h后以 β 折叠为主 ,占 4 0 3% ;TA990 1、EGb76 1和配伍物分别与Aβ1-42 共同作用后 ,则α 螺旋结构增多 ,分别为 37 6 %、4 5 3%和 10 0 % ,β 折叠消失。 结论　EGb76 1配伍TA990 1及其成分均能促使老化的Aβ1-42 由 β 折叠向α 螺旋转化 ,以配伍物的作用最强     

条件性损伤的时间与频次对神经根撕脱伤后脊髓前角运动神经元死亡及NOS表达的影响

目的　探索条件性损伤 (CL)的时间和频次对神经根撕脱 (TL)后脊髓前角运动神经元一氧化氮合酶 (NOS)表达及细胞死亡的影响。方法　成年SD雌性大鼠 116只 ,体重 2 0 0～ 30 0g ,以钳夹神经干为CL ,分为两个系列。时间系列 :在CL后 1d、3d、1w、2w后进行TL ,频次系列分别在 1w和 2w内行 1次、2次、6次钳夹 ,术后不同时间点处死动物 ,以单纯撕脱臂丛为对照 ,取C5～C8节段脊髓 ,行NADPH d组化染色 ,中性红复染。定量观察前角运动神经元NOS表达及神经元数目。结果　单纯撕脱组术后第 5d脊髓前角运动神经元开始表达NOS ,术后 3wNOS阳性神经元数达到高峰 ,随后逐渐下降并伴有神经元丢失。时间系列 :撕脱后 3d和 2w ,CL与TL间隔 1d组的NOS表达和神经元数目与对照组无显著性差异 ,但 3d、1w、2w组的NOS细胞数及神经元的丢失均较对照组明显 (P <0 0 5P <0 0 1) ,但在撕脱后 4w各CL时间的NOS表达和神经元存活均较对照组减少 (P <0 0 5 )。频次系列 :在 1w和 2w内增加CL次数可使NOS的表达水平和神经细胞的死亡数目有显著增加 ,在撕脱后 2w和 4w等较后的时间点更为明显 ;但在一定时间内 2次与 6次钳夹之间则无显著性差异。结论　条件性损伤与二次损伤之间的间隔影响撕脱后神经元NOS表达和神经元的死亡 ,以间隔时间     

臂丛损伤脊髓运动神经元与神经根GAP-43 mRNA表达

目的：探讨臂丛根性撕脱伤后脊髓腹角运动神经元胞体及其神经根GAP-43 mRNA的表达变化及其影响因素,为臂丛损伤的修复治疗提供理论依据.方法：本实验创立三种臂丛根性撕脱伤模型：C7前根撕脱（Ⅰ组）;C7前根撕脱＋切断同侧C5～T1后根（Ⅱ组）;C7前根撕脱＋C5和C6之间作同侧脊髓半横断（Ⅲ组）.术后2周按CBS评分标准检查动物神经缺失症状,用SYBR Green荧光定量RT-PCR方法检测脊髓腹角运动神经元胞体及其神经根GAP-43 mRNA的表达改变.结果：根据CBS评分标准,对照组计为0分,Ⅰ组计分较低、Ⅲ组计分最高.对照组C7神经元胞体和C7神经根中GAP-43 mRNA表达量相近,但三种损伤组术后2周神经元胞体内GAP-43 mRNA表达均上调,而神经根内表达却下调.结论：（1）臂丛根性撕脱伤后脊髓腹角运动神经元胞体GAP-43 mRNA表达受突触前机制的调控;（2）臂丛损伤2周时神经元胞体内GAP-43 mRNA表达呈现高峰期,此时进行神经移位术将显著提高神经修复的效果.     

外源性一氧化氮对臂丛根性撕脱伤后脊髓的影响

目的探究在根性撕脱伤早、中期应用外源性一氧化氧(NO)供体硝普钠补充NO能否改变撕脱伤诱导运动神经元的凋亡进程及其相关机制。方法成年SD大鼠,右侧全臂丛神经根撕脱后于4 d和13 d分别在蛛网膜下腔受损脊髓节段局部给予NS或5 mmol/L SNP各4μL,存活2d后处死。取C7节段脊髓应用免疫组织化学以及酶组织化学、中性红染色、Western blot等方法,定量存活运动神经元数以及nNOS蛋白在运动神经元的表达情况;同时检测i NOS、GFAP、0X-42在胶质细胞的表达情况。结果 SNP 40 mmol/L以上剂量局部应用会导致动物立刻死亡,我们选择了5 mmol/L做为最终SNP浓度;SNP会降低撕脱伤脊髓运动神经元的存活率(%)6 d时间点SNP组与NS组无显著差异;15 d时间点,SNP组(57.41±3.96)显著低NS组(81.48±2.53);撕脱伤引起的小胶质细胞和星形胶质细胞反应与NS组相比加剧。结论在早期补充NO使前角运动神经元nNOS表达时间提前;加剧损伤脊髓的胶质反应;使运动神经元死亡时间提前,死亡程度增加。     

Rescue of rat spinal motoneurons from avulsion-induced cell death by intrathecal administration of IGF-I and Cerebrolysin.

Ventral root avulsion results in the loss of motoneurons in the corresponding spinal cord segment. In the present experiments we have tested effects of insulin-like growth factor-I (IGF-I) and Cerebrolysin on survival of avulsed motoneurons after their chronic intrathecal administration in the adult rats. We have found that avulsion of the C5 ventral roots results in significant loss of motoneurons in the same spinal cord segment due mainly to apoptosis. In comparison to the untreated control rats, the amount of motoneuron survival in avulsed ventral horn was significantly higher after 4 weeks intrathecal administration of IGF-I or Cerebrolysin. No significant differences were observed between effects of IGF-I and Cerebrolysin in our experimental model. The results suggest that both IGF-I and Cerebrolysin can reduce avulsion-induced loss of adult rat motoneurons.     

TA9902对SAM-P/8小鼠脑胆碱乙酰转移酶神经元的影响

目的　探讨抗氧化剂TA990 2 (TA990 1配伍EGb76 1)对加速老化鼠P/ 8(SAM P/ 8)脑胆碱乙酰转移酶 (ChAT)神经元的影响 ,为治疗阿尔采默病 (AD)提供理论依据。方法　选用 3月龄雄性SAM P/ 8小鼠 83只 ,随机分为TA90 0 1组、TA990 2低剂量组、TA990 2高剂量组、EGb76 1组、HAT组和老年组 ;另选 3月龄 15只为年轻组。对隔区切片用胆碱乙酰转移酶 (ChAT)免疫组化染色 ,并对ChAT阳性神经元进行计数和图像分析。结果　老年SAM P/ 8小鼠内侧隔核 斜角带 (MS DB)区ChAT神经元明显受损。TA990 2对MS DB区ChAT受损害神经元有显著改善作用 ,主要表现在ChAT神经元数量的增加和平均灰度值的下降 ,尤以高剂量组明显 ,这种改善作用虽有优于对照药HAT的趋势 ,但与HAT无显著性差异。相关分析结果表明ChAT阳性神经元数量与小鼠避暗试验测得的STL和STS分别呈显著正相关和负相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论　TA990 2有促进SAM P/ 8鼠脑受损胆碱能系统恢复的作用 ,这可能是其改善SAM P/ 8小鼠学习记忆能力的神经保护作用机制之一     

Glial reactions in a rodent cauda equina injury and repair model

In the adult rat, an avulsion injury of lumbosacral ventral roots results in a progressive and pronounced loss of the axotomized motoneurons. A subsequent acute implantation of an avulsed ventral root into the spinal cord has neuroprotective effects. However, it has not been known whether a surgical implantation of an avulsed ventral root into the spinal cord for neural repair purposes affects intramedullary glial and microglial reactions. Here, adult female Sprague-Dawley rats underwent a unilateral L5-S2 ventral root avulsion injury with or without acute implantation of the L6 ventral root into the spinal cord. At 4 weeks postoperatively, immunohistochemistry using primary antibodies to GFAP (astrocytes), Ox-42 (microglia), and ED-1 (macrophages) was performed at the L6 spinal cord segment, and quantified using densitometry. Our results show that a lumbosacral ventral root avulsion injury induces an activation of astrocytes, microglia, and macrophages in the ventral horn. Interestingly, an acute implantation of an avulsed root into the white matter does not significantly affect the activation of glial cells or macrophages in the ventral horn. We speculate that neuroprotective and axonal growth promoting benefits of the combined glial and microglial/ macrophage responses may outweigh their potential negative effects, as previous studies have shown that implantation of avulsed roots is a successful strategy in promoting reinnervation of peripheral targets.     

银杏叶提取物对拟血管性痴呆大鼠海马CA1区的保护作用

为了观察银杏叶提取物(EGb761)对拟血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区神经细胞的保护作用,本研究通过反复夹闭再通大鼠双侧颈总动脉,同时腹膜腔内注射硝普钠制作拟血管性痴呆大鼠模型,选出造模成功者随机分为模型组及用药组,各为30只。另以条件匹配的30只大鼠为假手术组。采用Morris水迷宫和尼氏染色方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马CA1区细胞形态学改变和细胞数目。结果显示:模型组大鼠在1、2和4月不同时间点测得的Morris水迷宫逃避潜伏期(EL)均较假手术组明显延长(P<0.01),药物组EL均显著短于模型组,但仍长于假手术组(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组海马CA1区锥体细胞及其树突丢失,但药物组锥体细胞数多于模型组。上述结果说明EGb761对海马CA1区的保护作用可能是其改善VD大鼠学习记忆障碍的重要机制。