视网膜干细胞移植任重而道远

进行性视网膜感光细胞的死亡是许多视网膜变性疾病的共同特征。现有的治疗方法不能恢复已经丧失的视功能。视网膜干细胞移植研究的不断深入在为视网膜变性患者带来希望的同时也面临一些严峻挑战：如何获得理想的视网膜干细胞？如何诱导视网膜干细胞分化成视杆及视锥细胞？如何诱导移植的细胞与受体细胞形成功能性突触连接？感光细胞丧失的早期,内部的视网膜神经通路是完整的,新的感光细胞只需与双极细胞形成突触连接就能恢复完整的视网膜神经通路。而感光细胞替换通常比其它神经元更直接更容易。因为感光细胞是感觉神经元,只在一个方向上与双极细胞一水平细胞形成连接。另外,视网膜特殊的层状结构决定了视网膜外层的感光细胞层是视网膜干细胞移植最理想的位置。视网膜干细胞研究的进展、视网膜变性疾病的特征及视网膜的特殊结构让我们有理由相信,干细胞移植的成功将首先来自视网膜感光细胞移植。     

视网膜感光细胞移植的研究

视网膜移植是视觉恢复研究中的重大课题之一，包括视网膜色素上皮移植和视网膜感光细胞移植，因感光细胞在视觉形成中具有更重要的作用，感光细胞移植成为近年来的研究热点并取得了初步结果，本文就目前视网膜感光细胞移植研究的进展进行综述。     

视网膜感光细胞移植的研究

视网膜移植是视觉恢复研究中的重大课题之一，包括视网膜色素上皮移植和视网膜感光细胞移植，因感光细胞在视觉形成中具有更重要的作用，感光细胞移植成为近年来的研究热点并取得了初步结果，本文就目前视网膜感光细胞移植研究的进展进行综述。     

兔胚胎全层视网膜移植至大鼠视网膜下的观察

视网膜色素变性(RP)是一组能导致进行性感光细胞变性和视觉障碍的遗传病症候群，目前尚无有效治疗方法。近年来研究表明视网膜移植是最接近临床应用治疗RP的方法。当RP进展到晚期，感光细胞和视网膜色素上皮(RPE)细胞都出现变性死亡，单独移植这两种成分都没有作用，此时病变视网膜的修复需要全层视网膜的移植。我们将青紫蓝兔胚胎全层视网膜移植到正常Wistar大鼠和视网膜变性RCS大鼠的视网膜下腔，观察移植物在宿主视网膜下腔的发育状况，从而探讨异种胚胎全层视网膜移植方法的可行性。     

视网膜类器官治疗视网膜退行性疾病的研究进展

视网膜退行性疾病是导致视力受损与失明的重要原因。目前,对于感光细胞大量丧失的疾病晚期阶段尚无有效的治疗方案。近年来,大量研究提供了感光细胞的移植替代治疗的新思路,而视网膜3D培养技术产生的视网膜类器官能够在体外产生移植所需的感光细胞及组织,为视网膜退行性疾病的移植替代治疗奠定了基础。本文通过综述视网膜3D培养技术以及感光细胞移植的发展,着重阐述视网膜类器官在视网膜退行性疾病移植替代治疗中的现有运用策略以及局限性,以期为视网膜3D培养技术在感光细胞替代治疗中的优化提供理论参考。     

干细胞移植治疗视网膜变性疾病的研究进展

视网膜变性疾病是一类与遗传相关的变性疾病,导致患者渐进性视觉丢失,是主要的致盲性眼病之一,其共同病理基础是视网膜光感受器细胞的变性、坏死和凋亡,然而目前尚无有效的治疗方法。细胞移植治疗是目前实验研究治疗视网膜变性疾病的主要方法之一。近年研究表明将感光前体细胞或视网膜色素上皮细胞移植到视网膜下腔或玻璃体内,可以延缓宿主感光细胞的凋亡、替代凋亡的感光细胞、挽救残存的视觉功能和修复视网膜结构。细胞移植治疗的一个很重要的问题是移植细胞的来源问题,目前主要的移植细胞来源是视网膜祖／干细胞、胚胎干细胞和诱导多潜能干细胞等。本文就干细胞移植治疗视网膜变性疾病的研究进展进行综述。     

视网膜感光细胞纯化方法的研究

目的　探讨改进获取视网膜纯感光细胞的方法。方法　应用改良的准分子激光切削法和酶分层消化法来分离纯化视网膜感光细胞层。结果　由两种方法获取的视网膜组织片经苏木素 -伊红染色均证实为单一的纯感光细胞层并保持生物活性。结论　改良的准分子激光切削法和酶分层消化法均能获取视网膜纯感光细胞 ,且对细胞损伤小 ,内外节段保持完好 ,可为视网膜的移植创造条件。     

明胶载体用于感光细胞片层制备存在的问题

目的：介绍明胶载体用于视网膜切削和制备感光细胞片层时存在的一些问题,方法：以新生小牛视网膜为研究对象,明胶作载体,常规视网膜铺片法铺片,准分子激光PTK切削方式,H－E染色和冰冻切片分析,结果;研究发现,在制备过程中可以出现感光细胞节段脱落,感光细胞核脱落和丢失,视网膜层间和层内分离以及冰冻切片时感光细胞破坏严重等现象,结论：改良明胶载体的供体形式和物理特性是未来视网膜移植 研究中的一个重要课题。     

视网膜感光细胞的药物干预研究

视网膜变性疾病累及感光细胞 ,以感光细胞的渐进性凋亡以及死亡为结局。对感光细胞进行药物干预是治疗这类疾病的一种方法和途径。多种神经营养因子有保护感光细胞 ,延缓其凋亡的作用 ;牛磺酸是一种条件必需氨基酸 ,在视网膜感光细胞的发育和分化过程中起重要作用 ;DHA是唯一能减少感光细胞凋亡数目的多不饱和脂肪酸 ;多种维生素以及一些蛋白质也对感光细胞有保护作用。本文就这些物质单独和 /或联合干预感光细胞作用研究现状及进展作一介绍。     

光感受器移植在视网膜退行性疾病中的应用研究进展

视网膜退行性疾病是影响人类视力的主要疾病，使人感光细胞受损，损害人的视力。而且哺乳动物的视网膜没有再生能力，一旦患病会严重影响人们的正常生活。目前尚未有明确的预防和减缓该类疾病的方法，但移植光感受器以补充视网膜中受损的感光细胞可以治疗视网膜疾病。本文将讨论光感受器移植方法在视网膜退行性疾病中恢复视力的现状和移植技术。     

极小胚胎样干细胞研究现状

视网膜退行性疾病包括视网膜色素变性、增殖性糖尿病性视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变和年龄相关性黄斑变性等,是一类由于视网膜感光细胞变性丢失而引起的不可逆性致盲性疾病.干细胞移植技术为此类疾病带来了一线希望,干细胞整合入视网膜,分化成为特定的感光细胞,可以重建视网膜功能.最近,科学家在骨髓和一些成人组织中发现了一种表达CXCR4受体的干细胞,称为极小胚胎样干细胞（VSELSCs）,这种细胞表达多种胚胎细胞及原生殖细胞的标志物,有实验证实其具有分化为三个胚层细胞的潜能.VSELSCs这种可以定向分化的特性预示了它在治疗退行性疾病中的广阔前景.本研究主要着眼于VSELSCs的研究现状,探讨其在视网膜退行性疾病中的应用前景.     

视网膜感光细胞的药物干预研究

视网膜变性疾病累及感光细胞，以感光细胞的渐进性凋亡以及死亡为结局。对感光细胞进行药物干预是治疗这类疾病的一种方法和途径。多种神经营养因子有保护感光细胞，延缓其凋亡的作用；牛磺酸是一种条件必需氨基酸，在视网膜感光细胞的发育和分化过程中起重要作用；DHA是唯一能减少感光细胞凋亡数目的多不饱和脂肪酸；多种维生素以及一些蛋白质也对感光细胞有保护作用。本就这些物质单独和／或联合干预感光细胞作用研究现状及进展作一介绍。     

可溶性因子在视网膜移植中的作用

视网膜移植是治疗视网膜疾病的一种新方法,通过细胞与局部微环境中的可溶性因子的相互作用,视网膜前体细胞可以发育成特定的细胞类型。本文主要对可溶性因子在视网膜前体细胞诱导分化为感光细胞中的作用作一综述。     

新生期小牛感光细胞联系和缝隙连接特征超微形态学分析

目的：了解新生期小牛视网膜感光细胞联系和细胞连接特征。方法：以新生期小牛视网膜感光细胞为研究对象，扫描电镜和透射电镜为研究手段，实验共用眼球6个，取视网膜24片。结果：新生期小牛视网膜感光细胞胞体平均直径3-5μm。近外核层外侧端，感光细胞间有束状纤维联系；近外核层内侧端，多个感光细胞通过网状纤维形成多种联系，纤维平均直径：0.3—0.6μm。部分感光细胞通过束状纤维呈“会聚式”联系，束状纤维主干平均直径：0.65～0．75μm，分支平均直径：0．25-0．5μm。感光细胞与中间传导细胞建立缝隙连接，部分具备典型结构，缝隙间隙宽度：3-5nm，但大部分感光细胞与中间传导细胞的细胞连接结构尚不成熟。结论：新生期视网膜感光细胞已具有分化和参与功能构建能力，适宜作为视网膜移植供体选材。     

可溶性因子在视网膜移植中的作用

视网膜移植是治疗视网膜疾病的一种新方法，通过细胞与局部微环境中的可溶性因子的相互作用，视网膜前体细胞可以发育成特定的细胞类型。本文主要对可溶性因子在视网膜前体细胞诱导分化为感光细胞中的作用作一综述。     

细胞移植在眼科临床的应用

细胞移植是组织修复的一种重要手段。目前己在眼科临床应用的有视网膜色素上皮细胞移植、虹膜色素上皮细胞移植、角膜缘干细胞移植、结膜上皮细胞移植和视网膜感光细胞移植等。本文复习了各种眼科细胞移植的现况及展望。对一些细胞移植的适应证、远期效果及潜在副作用均有待进一步研究。细胞移植与干细胞工程、基因工程及组织工程结合具有一定的发展前景。     

胚胎干细胞源性视网膜前体细胞在rd鼠视网膜下腔移植后的分化

目的 研究绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞(green fluorescent protein-embryonic stem cells,GFP-ESC)源性视网膜前体细胞在rd小鼠视网膜下腔移植后的存活分化情况.方法 将GFP-ESC 源性视网膜前体细胞移植到伴有视网膜感光细胞变性和继发性视网膜神经节细胞变性的rd 小鼠视网膜下腔,移植后1周、4周、8周取材行免疫荧光细胞化学检测,观察移植细胞存活、分化情况.对移植细胞进行核型分析,并接种裸鼠眼内观察是否成瘤,评价其安全性.结果 GFP-ESC 源性视网膜前体细胞移植眼内可存活、整合到宿主变性视网膜层间.1周时 GFP 阳性细胞移行于外层视网膜并呈视杆细胞标志抗原rhodop-sin阳性:4周时整合于内层视网膜,共表达成熟神经元标志抗原神经丝蛋白-200、微管相关蛋白-2,突触标志抗原synaptophysin检测阳性;8周时移至邻近玻璃体腔形成节细胞样结构,表达节细胞标志抗原Thy1.1;移植细胞维持正常二倍体核型,术后8周未见排斥反应及瘤性增殖.结论 GFP-ESC源性视网膜前体细胞在变性视网膜中可存活、整合,并有优先向变性的感光细胞及.神经节细胞类型分化的倾向,有望为青光眼等视神经视网膜病变的细胞移植治疗提供安全有效的种子细胞.     

视网膜移植抗原性的初步研究

目的：探讨视网膜的免疫原性，为视网膜移植的免疫排斥提供理论依据。方法：采用C57BL/6小鼠，提供视网膜全层、感光细胞层，受体为BALB/C小鼠，并设立阳性及阴性对照组，测定脚掌皮肤迟发性超敏反应及细胞毒性淋巴细胞功能。
结果：①异种全视网膜移植引起了迟发性超敏反应(P<0.05)，而异种感光细胞移植未引起迟发性超敏反应(P>0.05)。②异种全视网膜移植后产生了一定的细胞毒性淋巴细胞功能，在1：90浓度下的杀死率为33.4%，明显高于阴性对照组(同种脾细胞为5.3%，同种全视网膜为4.8%，P<0.05)，而经过抗CD₈单克隆抗体处理后其毒性淋巴细胞功能消失。 结论：异种全层视网膜有一定的移植免疫原性，而异种感光细胞移植可能没有明显的移植免疫原性。 （中华眼底病杂志，1997，13：234-236）     

准分子激光切削视网膜制备感光细胞片层时存在的一些问题

目的：分析准分子激光切削视网膜制备感光细胞片层时存在的一些问题。方法：以新生小牛视网膜为研究对象,白明胶作载体,行视网膜预定位,液态视网膜膜片法辅片,准分子激光PTK切削方式。结果：发现准分子激光切削时,可以产生感光细胞片层的“锁边”现象;外颗粒层细胞间的离散现象;感光细胞层内细胞核的丢失;同一切削深度下不同植片切削深度不一和同一植片内切削浓度不均等现象。结论：准分子激光切削视网膜时存在的各种问题将会直接影响视网膜移植的手术效果,必须心早解决。     

视网膜变性疾病基因治疗的研究进展

分子生物学的进展为基因治疗视网膜变性疾病开拓了良好的应用前景，但目的基因的有效转染和长期表达等问题亟待解决，对有丝分裂后的视网膜感光细胞，解决这一问题就显得更为迫切。本文在阐述这些问题的研究现状的基础上对感光细胞的转基因营救及基因修饰的神经前体细胞回体移植的应用前景作一综述。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 268-270)