流式细胞术检测吸烟对精子质膜完整性的影响

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测不育患者精子质膜完整性,分析吸烟对精子质膜完整性的影响并探讨其临床意义。方法:收集202例男性精液标本,其中132例为本院就诊男性不育患者,分为大烟量组(n=68)与小烟量组(n=64),正常生育男性为正常对照组(n=70)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双染后上流式细胞仪分析,用SYBR-14+/PI-(绿)表示质膜完整精子(PMI);SYBR-14-/PI+(红)表示质膜破损而坏死的精子;SYBR-14+/PI+(绿,红)表示正处于由活到死过度状态的精子。检测精子质膜完整性,并对精子质膜完整性与部分精液参数做相关性分析。结果:大烟量组与小烟量组质膜破损的坏死精子(SYBR-14-/PI+%)、过渡态的精子(SYBR-14+/PI-%)与正常对照组存在显著差异(P<0.01或0.05)。大烟量组SYBR-14+/PI-%明显低于小烟量组,SYBR-14-/PI+%明显高于小烟量组。所有202例标本SYBR14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.938,P=0.000)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法能快速、准确地检测精子质膜完整性。吸烟会导致精子质膜完整性下降,引起精子活力下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。     

JC-1单标法流式细胞术检测精子线粒体膜电位的研究

目的:探讨应用荧光染料JC-1单色标记法进行流式细胞术检测精子线粒体膜电位(MMP)的可行性及其临床意义。方法:收集63例男性精液标本,分为生育组(n=31)和不育组(n=32)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后用JC-1染色后上流式细胞仪分析,用发橙红色荧光精子百分率(JC-1+%)表示MMP正常精子的比例。结果:生育组精子JC-1+%为(75.89±15.69)%,显著高于不育组[(54.04±22.21)%,P=0.000]。63例标本中,JC-1+%与精子活动率呈显著正相关(r=0.610,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.614,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.504,P=0.000)。JC-1+%与已建立的罗丹明/碘化吡啶双染法检测结果(Rh123+/PI-%)呈显著正相关(r=0.938,P=0.000)。结论:应用流式细胞术JC-1单标法检测精子MMP具有可行性,精子JC-1+%可作为男性不育的辅助诊断指标。     

少弱畸精子综合征治疗前后精子染色质流式细胞术分析

目的:观察少弱畸精子综合征(OAT)患者采用中西医结合治疗前后精子染色质的变化。方法:对60例OAT患者给予中西医结合治疗3个月,留取治疗前后精液标本,进行吖啶橙(AO)标记,流式细胞术分析以及激光共聚焦显微镜观察绿、黄和红色荧光精子百分率,同时进行常规分析。结果:治疗前后流式细胞术提示主群精子变化存在显著差异(P<0.01)、αt和COMPαt变化存在显著差异(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察时,绿色与红色两种荧光有显著差异(P<0.05),而黄色荧光无明显差异(P>0.05)。计算机辅助精子分析结果:精子密度、活动力、活动率和畸形率等均有变化。除直线运动精子密度无显著差异外(P>0.05),密度、活动率、活动力均有显著差异(P<0.05)。结论:中西医结合治疗OAT综合征可以改善精子染色质。综合流式细胞术、CASA、精子AO染色激光共聚焦显微镜观察等3种检测手段更有助于疗效判断。     

流式细胞术检测精索静脉曲张患者精子质膜完整性的研究

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测精索静脉曲张患者精子质膜的完整性并探讨其临床意义。方法:随机收集120例男性精液标本,其中90例左侧精索静脉曲张患者分为3组:VC1组(精索静脉曲张Ⅰ度,n=30)、VC2组(精索静脉曲张Ⅱ度,n=30)和VC3组(精索静脉曲张Ⅲ度,n=30),正常生育男性为正常对照组(n=30)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双染后上流式细胞仪分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例,检测精子质膜完整性,并预见精子的受精能力。结果:精索静脉曲张各组患者与正常对照组之间SYBR-14+/PI-%、SYBR-14-/PI+%均存在统计学差异(P<0.01)。精索静脉曲张患者(VC1、VC2、VC3)代表精子质膜完整性指标(SYBR-14+/PI-%)的百分率分别是:[(54.85±3.78)%]、[(45.37±4.12)%]、[(35.14±4.91)%],均显著低于正常对照组[(70.79±6.71)%],其活力顺序为VC30.05)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法能快速、准确地检测精子质膜完整性,精索静脉曲张引起精子质膜完整性下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。     

SYBR-14/PI双染法流式细胞术检测精子质膜完整性的研究

目的:探讨应用荧光染料SYBR-14/碘化丙啶(SYBR-14/PI)双色标记法进行流式细胞术检测精子质膜完整性的可行性及其临床意义。方法:收集208例男性精液标本,按WHO精液分析标准分为正常组(n=31)与异常组(n=177)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后经SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪(FCM)分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例。结果:正常组与异常组SYBR-14+/PI-与SYBR-14-/PI+精子百分率均存在统计学差异(P均<0.05)。正常组精子SYBR-14+/PI-%为(55.66±20.64)%,显著高于异常组[(39.71±19.21)%,P=0.000]。208例标本中,SYBR-14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.408,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.398,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.413,P=0.000);SYBR-14-/PI+%与精子活动率呈显著负相关(r=-0.380,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著负相关(r=-0.397,P=0.000),与d级精子百分率呈显著正相关(r=0.385,P=0.000);SYBR-14+/PI+%与精子活动率呈正相关(r=0.172,P=0.013),与(a+b)级精子百分率呈正相关(r=0.177,P=0.011),与d级精子百分率呈负相关(r=-0.164,P=0.018)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法检测精子质膜完整性具有可行性,可用于评估男性生育力。     

精子质膜功能检测的研究进展

精子质膜上含有丰富的多聚不饱和脂肪酸及多种蛋白成分,精子质膜与精子获能、顶体反应及精卵融合密切相关。检测精子质膜功能,可预见精子的受精能力。评估精子质膜功能的方法主要有:精子尾部低渗肿胀试验、伊红Y水试验、精子膜脂过氧化反应的测定、精浆超氧化物歧化酶的测定、流式细胞术等。精子质膜功能检测可应用于检测精液质量、筛选精液离心法、评估性别分选精子质量和生育力、改进低温保存方法、优化卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)技术。本篇综述将简要介绍精子质膜功能检测的原理、方法、步骤,并对其研究现状及应用作一概述。     

JC-1单标法检测精索静脉曲张患者精子线粒体膜电位的研究

目的:检测精索静脉曲张患者精子线粒体膜电位并探讨其临床意义。方法:将67例精索静脉曲张患者分为VC1组(精索静脉曲张1度,n=26)、VC2组(精索静脉曲张2度,n=21)和VC3组(精索静脉曲张3度,n=20),以正常生育男性为正常对照组(n=29)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后用荧光染料JC-1染色后上流式细胞仪分析,检测精子线粒体膜电位(JC-1+%)。结果:VC1、VC2、VC3组精子线粒体膜电位[(56.29±16.32)%,P<0.05;(45.04±13.21)%,P<0.01;(31.63±12.91)%,P<0.01]均显著低于正常对照组[(76.21±13.96)%]。96例标本中,JC-1+%与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.693,P=0.000)。结论:精索静脉曲张可引起精子线粒体膜电位降低,可能是导致男性不育的重要原因之一。     

流式细胞术及其在男科学研究中的应用

作为一项先进的检测技术,流式细胞术(FCM)在单细胞快速定量分析方面具有其独特的优势,目前在临床检测中应用得越来越多。FCM也为精液分析提供了一种新的检测平台,将FCM用于精液分析与精子功能测定是男科学研究的一个新思路。本文简要介绍了FCM的基本原理,综述了FCM在精液细胞分离与鉴定、精子细胞结构与功能分析,以及在精浆及精子表面生物活性物质检测中的研究现状和临床应用前景。     

精子染色质结构分析的临床意义

目的探讨女方不明原因流产和不明原因不孕与其配偶精子染色质性状之间的关系;方法通过精子染色质结构分析(SCSA)对22例不明原因流产和36例不明原因不孕妇女配偶精子,以及20例正常对照者精子进行DNA完整性检测,并比较它们之间的差异;结果对照组与不明原因流产组以及不孕组之间精子DNA完整性存在差异,且差异具有统计学意义(P<0．05),而不明原因流产组与不孕组之间精子DNA完整性比较无明显差异(P>0．05);结论精子染色质结构分析有可能作为不明原因流产和不孕的辅助诊断方法在临床应用。     

Microencapsulation of human spermatozoa increases membrane stability and DNA longevity

The microencapsulation of spermatozoa offers potential benefits for maintaining sperm survival in vitro. The technique has also resulted in the production of offspring in several domestic animal species, but as yet, it has not been successfully applied in human reproductive medicine. This study examined the effect of alginic acid microencapsulation on human sperm membrane integrity (viability) and sperm DNA fragmentation (SDF) following storage for 24 hr at 37°C. The cumulative sperm viability (Log-rank, Mantel–Cox; Chi-square = 114.95, p = .000) and cumulative sperm DNA fragmentation (Log-rank, Mantel–Cox; Chi-square = 187.86, p = .000) of encapsulated spermatozoa were substantially improved when compared to control spermatozoa. Significant differences in the dynamic behaviour of different individuals were only apparent for sperm viability in microencapsulated samples (p = .021) while no significant differences were observed in control spermatozoa (p = .245); the equivalent comparison for SDF showed no differences (control p = .320; microencapsulated p = .432). We present potential scenarios for the use of microencapsulated human spermatozoa in reproductive medicine.     

精子染色质完整性对IVF/ICSI临床结局的预测价值

目的:通过分析精子染色质完整性与体外受精胚胎移植(IVF-ET)、卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)结局之间的关系,探讨精子染色质完整性检测在辅助生殖技术(ART)中的预测价值。方法:采用精子染色质结构分析试验(SCSA)方法检测187个ART周期中精子的染色质完整性,以精子DNA损伤指数(DFI)为参数,分为高DFI组(DFI≥30%)和低DFI组(DFI<30%),两组中根据采用不同的体外受精方式分为IVF亚组和ICSI亚组。分别比较高DFI组、低DFI组中IVF亚组和ICSI亚组间受精率、卵裂率、D2天胚胎质量、D3天胚胎质量、临床妊娠率差异性。结果:在高DFI组中,行ICSI治疗的夫妇临床妊娠率显著高于行IVF治疗的夫妇,具有统计学意义;在行IVF治疗的夫妇中,比较高DFI组与低DFI组的各临床结局,未见统计学差异;在行ICSI夫妇中,比较高DFI组与低DFI组的各临床结局,未见统计学差异。结论:精子染色质完整性影响辅助生育技术的结局,在选择辅助生殖技术方案时,可作为常规精液检查的一个补充。