转基因猪骨髓间充质干细胞的分离及与猪胰岛的共培养研究

目的 探讨α-1, 3-半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除（GTKO）、GTKO/人补体调节蛋白hCD46插入、单磷酸胞嘧啶-N-乙酰神经氨酸羟化酶（CMAH）/GGTA1双基因敲除（Neu5GC/Gal）猪骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离培养,以及与猪胰岛共培养对胰岛的保护作用。 方法  从不同转基因修饰GTKO、GTKO/hCD46及Neu5GC/Gal猪中提取骨髓,采用全骨髓法分离猪BMSC后进行培养。对BMSC进行形态学观察,并使用流式细胞术鉴定BMSC表面标志物。同时,观察BMSC诱导的多向分化,通过绿色荧光蛋白（GFP）转染标记猪BMSC来实现对BMSC的标记和示踪。将GFP转染标记的猪BMSC与猪胰岛细胞共培养,观察猪胰岛形态变化,与单纯猪胰岛细胞培养组进行比较。 结果  猪来源的BMSC在体外培养时呈梭形,表达标志物CD29、CD44、CD73、CD90、CD105及CD166,不表达CD34、CD45,具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的能力;通过GFP转染标记的猪BMSC能够实现BMSC的标记和示踪,且在细胞分裂后的子代细胞中也能够稳定表达。猪BMSC对胰岛细胞有一定保护能力。 结论  成功建立了GFP标记的GTKO、GTKO/hCD46及Neu5GC/Gal猪来源的BMSC,其对胰岛细胞具有一定的保护能力。     

大鼠脂肪干细胞诱导分化为类许旺细胞的表型和功能特征

目的 研究大鼠脂肪干细胞(ADSCs)在体外分化为类许旺细胞的表型和功能特征,为外周神经组织工程应用提供实验基础.方法 采用β-巯基乙醇、全反式视黄酸、forskolin、血小板源生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和heregulin依次联合诱导,双重免疫荧光细胞化学法和Western blot鉴定神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白等许旺细胞标志蛋白的表达,与原代背根神经节(DRG)感觉神经元共培养研究诱导后细胞的功能.结果 诱导后ADSCs形态类似许旺细胞.双重免疫荧光细胞化学法显示S-100和GFAP的最高表达率分别为(78.08±6.08)%和(72.38±6.43)%,双重表达率为(60.76±6.43)%.Western blot显示诱导后细胞同时表达这两种蛋白.诱导后细胞能明显增加DRG神经元的突起向外生长.结论 诱导后ADSCs的表型和功能特征证实大鼠ADSCs在体外可分化为类许旺细胞.     

共培养条件下嗅鞘细胞对骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的影响

目的:观察体外骨髓间充质干细胞(BMSC)和嗅鞘细胞(OEC)非接触共培养时,OEC对BMSC向神经样细胞诱导分化的影响.方法:采用5～6周龄、体重100g左右的SPF级雄性Sprague Dawley (SD)品系大鼠20只,分离培养大鼠BMSC和OEC,BMSC取自双侧股骨,OEC取自嗅上皮.使用6孔0.4μm的Transwell共培养系统进行培养.将2×104/cm2的第3代OEC置于共培养系统上层,3×104/cm2的第3代BMSC置于下层.对共培养7d和14d后的BMSC行免疫组化染色,检测神经细胞特异性蛋白巢蛋白(Nestin)、神经元类型Ⅲβ-微管蛋白(Tuj-1)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况.流式细胞仪检测Nestin、Tuj-1和GFAP阳性细胞的分布和所占的比例.结果:免疫组化检测显示,共培养7d和14d后BMSC均表达Nestin、Tuj-1和GFAP.流式细胞仪分析,共培养7d后Nestin、Tuj-1和GFAP阳性细胞比例分别为46.3％、76.5％和23.2％,共培养14d后分别为27.7％、89.1％和50％.结论:非接触共培养条件下,OEC能诱导BMSC向神经样细胞分化.     

促红细胞生成素预处理增强大鼠骨髓间充质干细胞定向归巢能力的初步研究

目的  探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖及迁移能力的影响。方法  将第5代BMSC分为5组,分别为对照组（不加EPO）及10、100、500、1 000 IU/mL EPO组,培养24 h和48 h后检测各组BMSC的增殖率、迁移能力以及趋化因子受体（CXCR）4的表达情况。将第5代BMSC分为BMSC组和EPO-BMSC组,培养48 h后观察EPO对两组BMSC的表面标志物、定向分化和细胞骨架形态的影响。结果  EPO与BMSC共培养48 h后,与对照组比较,100、500 IU/mL EPO组BMSC增殖率和迁移能力增强,CXCR4蛋白表达量增高（均为P < 0.05）。EPO-BMSC组BMSC表面标志物的表达和定向分化能力未受EPO影响。在EPO-BMSC组中,大多数细胞的纤维骨架沿细胞的长轴排列,呈平行状。结论  EPO可提高BMSC的增殖率、迁移能力和组织修复治疗能力,可能通过增加CXCR4的表达,促进其向损伤器官组织的定向归巢。     

肾移植术前高压氧治疗对术后低氧血症发生的影响

目的  探讨术前实施高压氧治疗对肾移植患者术后低氧血症发生的影响。 方法  实验组55例肾移植受者术前实施高压氧治疗,对照组66例患者常规实施肾移植术。比较两组患者术后低氧血症发生率、肺部感染率、卧床吸氧时间、住院时间等方面的差异。 结果  实验组55例患者术后发生低氧血症12例,发生率为22%,对照组66例患者术后发生低氧血症20例,发生率为30%。实验组发生肺部感染4例,发生率为7%,对照组发生肺部感染14例,发生率为21%。实验组肾移植术后低氧血症及肺部感染的发生率低于对照组（均为P < 0.05）。实验组和对照组患者术后卧床吸氧时间分别为（5.9±2.0）d、（6.8±2.6）d,住院时间分别为（17.7±3.7）d、（20.5±4.2）d。实验组患者卧床吸氧时间及住院时间均短于对照组（均为P < 0.05）。 结论  术前实施高压氧治疗可以明显降低肾移植术后低氧血症及肺部感染的发生率,可以作为肾移植术后低氧血症的常规预防措施。     

低氧对脂肪间充质干细胞向雪旺细胞分化的影响

目的探讨低氧对脂肪间充质干细胞（ADMSCs）向雪旺细胞（SCs）分化能力的影响。方法分离培养SD大鼠ADMSCs并用流式细胞仪、茜素红染色、油红O染色鉴定。将成功分离的ADMSCs随机分为3组：常氧诱导组,在常氧条件下（5％CO2,21％O2,37℃）诱导;低氧处理＋常氧诱导组,低氧处理（5％CO2,0．5％O2,37℃）后在常氧条件下诱导;低氧诱导组,低氧条件下（5％CO2,0．5％O2,37℃）诱导。观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色和Westernblot检测SCs标志物GFAP和S-100的表达。结果细胞分离后,经流式细胞仪分析可见细胞表面CD44阳性、CD45阳性、CD90阳性,茜素红及油红O染色均为阳性。MTT法检测结果：低氧处理＋常氧诱导组A值为0．861±0．039,高于常氧诱导组0．837±0．017,差异具有统计学意义（P〈0．05）;低氧诱导组A值为0．931±0．041,均高于常氧诱导组和低氧处理＋常氧诱导组（P均〈0．05）。免疫荧光染色发现常氧诱导组和低氧处理＋常氧诱导组大量细胞GFAP和S-100表达阳性,低氧诱导组仅少量细胞S-100和GFAP表达阳性。Westernblot检测发现常氧诱导组S-100蛋白表达最高,低氧处理＋常氧诱导组GFAP蛋白表达最高,低氧诱导组S-100蛋白、GFAP蛋白表达均最低。结论低氧抑制ADMSCs向SCs的分化,低氧处理后的ADMSCs在常氧条件下仍可向SCs分化。     

改良法体外诱导骨髓基质干细胞分化为类许旺细胞

目的　探讨一种较为有效的诱导方法将骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为类许旺细胞。　方法　用Dezawa所述方法 (称为传统诱导法 )加以改良成将所有诱导剂一起联合半量间隔诱导两次的方法 (称为改良诱导法 ) ,诱导后的细胞从形态学、抗S 10 0和抗GFAP细胞免疫化学染色的阳性率、MTT细胞活性测定及流式细胞仪检测细胞DNA含量来比较此两种方法对细胞的综合作用。　结果　改良法诱导的细胞在形态上更具有许旺细胞的长梭形外观 ,抗S 10 0及抗 GFAP阳性率分别由5 8 1%和 60 3 %提高到 79 4%、81 2 % (P <0 0 5 ) ;MTT法细胞活性测定表明改良法对细胞活性影响小(P <0 0 1) ;流式细胞仪DNA含量测定显示S期DNA含量较高 (P <0 0 5 )。　结论　改良法体外诱导骨髓基质干细胞为类许旺细胞具有诱导效果更好 ,对细胞损害小的优越性。     

同种异体共培养大鼠骨髓间充质干细胞的神经分化诱导鉴定

目的：探讨同种异体大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）在体外的共培养方法，并行神经分化诱导。方法：分别通过全骨髓直接培养法及密度梯度法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，各传至第3代后。取等量细胞混合后共培养，共培养的细胞再次传代后进行神经方向诱导，并行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：共培养的大鼠骨髓间充质干细胞经诱导分化后出现神经元和胶质细胞形态，经Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色证实为神经细胞。结论：同种异体共培养的骨髓间充质干细胞可在体外定向诱导为神经元和胶质细胞等神经细胞。     

氯化锂体外诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究

目的 探讨氯化锂体外诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的可行性.方法 无菌条件下收集正常足月儿的脐带血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,贴壁法纯化,用含15%FBS的低糖DMEM培养基进行扩增培养,流式细胞仪检测表面抗原.取3代的脐血MSCs进行诱导,A组:用含15%FBS和20 ng/ml bFGF的DMEM完全培养基预诱导24 h,3 mol/L LiCI的DMEM培养基继续诱导6 d:B组:含3 mol/L LiCI的DMEM培养基诱导7 d;C组:含15%FBS的DMEM培养基正常培养7 d.光镜下观察细胞形态,用免疫组化技术检测细胞NSE、MAP2及GFAP的表达.结果 A组与B组诱导3 d后细胞即出现形态学上的改变,细胞变成不规则形,立体感增强,从胞体伸出突起.免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能表达神经元特异性标志NSE和MAP2,阳性表达率A组[分别为(73.6±7.8)%,(75.5±8.5)%]明显高于B组[分别为(31.0±4.3)%、(33.5±5.O)%],而星形胶质细胞特异性标志GFAP阳性细胞较少,A、B、C三组阳性表达率分别为(4.7 ±3.3)%、(5.1±4.6)%、(8.5±3.2)%.结论 LiCI联合生长因子bFGF体外可诱导人脐血MSCs分化为神经元样细胞.     

许旺细胞诱导下脂肪来源干细胞向神经细胞方向分化的研究

目的 探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)和SD大鼠许旺细胞(Schwann cells)利用Transwell非接触式共培养时生长增殖特性和向神经元样细胞分化的规律.方法 取1月龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,按酶原消化法获取脂肪来源干细胞,同时取大鼠坐骨神经按改良植块法获取许旺细胞.取P3代脂肪来源干细胞分三组:A组使用ADSCs和许旺细胞构建Transwell非接触式共培养体系,B组利用β-巯基乙醇(BME)、丁酸酯羟基茴香醚(BHA)作为脂肪来源干细胞诱导因子使其向神经方向诱导,C组脂肪干细胞为对照组.比较各组细胞形态,观察脂肪来源干细胞代谢、轴突生长、免疫荧光染色情况,并做统计学分析.结果 A组脂肪来源干细胞部分分化为具有细长突起的细胞,B组诱导培养后,大多数存活的细胞也同样转变为类似于神经元的形态,A组突起长度(11.64±1.64)μm,B组突起长度 (13.03±1.35)μm,差异有统计学意义(P>0.05),细胞生长代谢旺盛.A组B组诱导分化后的细胞NF表达阳性率分别为(54.16±9.35)%和(62.25±8.95)%,两者差异无统计学意义,而GFAP染色阴性.在细胞数量上,A组为(4.08±0.68)×107/L,C组(4.20±0.79)×107/L,差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于B组(3.23±0.37)×107/L(P<0.05).结论 许旺细胞能促进脂肪来源干细胞向神经方向分化,效果与使用β-BME加BHA试剂诱导的结果相近,并能有效防止脂肪来源干细胞损伤.     

大鼠骨髓基质干细胞体外诱导分化为类许旺细胞

目的 研究大鼠骨髓基质干细胞在体外分化为类许旺细胞的方法。方法 采用β—巯基乙醇、全反式视黄酸、Forskolin、碱性成纤维细胞生长因子等依次按顺序诱导。神经胶质纤维酸性蛋白、S—100免疫细胞化学染色鉴定、计数诱导前后不同时间的细胞阳性表达率。结果 诱导后骨髓基质干细胞形态改变，胞体呈椭圆形，有2—3个纤细的细胞突起，成纵形栅栏状排列，免疫细胞化学染色神经胶质纤维酸性蛋白表达率为42．5％-68.7％、S—100表达率为39．6％-60.2％。结论 采用β—巯基乙醇、全反式视黄酸、Forskolin、碱性成纤维细胞生长因子、血小板源生长因子、HRG可以诱导大鼠骨髓基质干细胞在体外分化为类许旺细胞。     

无血清诱导脂肪间充质干细胞向雪旺细胞分化的实验研究

目的探索无血清诱导脂肪间充质干细胞分化为雪旺细胞的方法。方法取大鼠双侧睾丸周围脂肪组织,分离培养原代脂肪间充质干细胞,CD90、CD44和CD45流式鉴定。将脂肪间充质干细胞分成两组,实验组无血清诱导培养,对照组有血清诱导培养。采用雪旺细胞化学诱导因子逐步诱导2周,比较形态学变化以及细胞免疫荧光S-100和GFAP阳性率。结果分离的脂肪间充质干细胞相关的CD90和CD44表达阳性,CD45表达阴性。诱导后两组形态学相似,实验组S-100、GFAP阳性率与对照组比较无明显差异(P0.05)。结论无血清诱导培养可作为诱导脂肪间充质干细胞向雪旺细胞分化的方法。     

周围神经创伤中S-100蛋白与雪旺细胞活化关系

目的探讨周围神经创伤变性中雪旺细胞S-100蛋白的生理作用.方法将74只SD大鼠随机分为12组.1个正常空白组(8只),11个实验组(66只).每只实验组大鼠双后肢再随机分为试验肢(构成试验组)和对照肢(构成对照组).分别于术后1小时、6小时、12小时、24小时、2天、3天、4天、8天、14天、21天、30天共11个时相点,切取坐骨神经中下段标本.检测各组神经纤维形态学改变,雪旺细胞S-100表达水平变化.结果试验组显示华勒氏变性,雪旺细胞数在24小时后下降,3～4天后罕见,8天开始增加,14天形成Bungner带.各组S-100普遍低水平表达.与正常空白组相比,对照组变化无统计学显著性意义(P＞0.05),试验组术后1小时、21天变化有统计学显著性意义(P＜0.05).结论在周围神经创伤变性中,S-100与雪旺细胞的应急反应、增殖重建有关,反映雪旺细胞的功能活化状态.     

黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

目的:探讨黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向神经细胞分化的作用。方法:体外对hUMSCs进行培养,以不同浓度黄连素(分4组：对照组即0 mg/L组、50 mg/L组、100 mg/L组和200 mg/L组)诱导其向神经样细胞分化,显微镜下观察细胞形态改变并记录,并通过细胞免疫化学及免疫荧光技术检测细胞表...     

骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化的体内外实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞在体内、外条件下向周围神经雪旺细胞分化的可行性。方法利用SD大鼠间充质干细胞(取自股骨和胫骨)贴壁生长的特性，培养纯化，传代扩增。用复合诱导因子(Beta-mercaptoethanol，retinoic acid，forskolin，basic—FGF，PDGF，heregulin-β)在体外诱导间充质干细胞分化。用免疫细胞化学(P75，S-100，GFAP)鉴定体外的诱导结果。将PKH67标记的间充质干细胞移植人损伤的周围神经动物模型内，术后2周行组织切片免疫荧光染色，激光共聚焦定位移植细胞的去向。结果诱导后的间充质干细胞形态类似雪旺细胞，免疫荧光鉴定骨髓间充质干细胞具有雪旺细胞性质，表达雪旺细胞的表面标志(GFAP，S-100和P75)。周围神经组织切片免疫荧光染色后共聚焦定位的间充质干细胞表达雪旺细胞的表面标志(GFAP，S-100和P75)。结论骨髓间充质干细胞在体内、外都可以分化为具有雪旺细胞性质的细胞，表达GFAP，S-100和P75。骨髓间充质干细胞有可能替代雪旺细胞促进周围神经的再生。     

低氧状态下联合培养骨髓基质干细胞及其诱导来源的内皮细胞的实验研究

目的在低氧条件下联合培养兔骨髓基质干细胞(Bone Marrow Stromal Cell,BMSC)及由其诱导而来的内皮细胞(Endothelial Cell,EC),观察并探讨低氧状态及EC对BMSC增殖的影响。方法从兔骨髓中分离获得BMSC,体外培养扩增后取部分向EC诱导。实验分4组:①BMSC常氧培养组;②BMSC低氧培养组;③BMSC+EC常氧联合培养组;④BMSC+EC低氧联合培养组。通过观察细胞的形态、增殖能力等了解低氧条件及EC对BMSC生长的影响。结果 BMSC可诱导为EC,EC与BMSC混合生长良好。MTT法检测显示,低氧培养组的细胞增殖能力明显高于常氧培养组(P<0.01),但相同条件下的BMSC单独培养组和BMSC+EC联合培养组间的细胞增殖能力没有显著性差异(P>0.05)。结论在一定时间内,低氧培养可以促进BMSC的增殖;BMSC来源的EC不能促进BMSC的增殖。     

Schwann cell apoptosis in Wallerian-degenerated sciatic nerve of the rat

Objective: To investigate systematically Schwann cell apoptosis in Wallerian-degenerated sciatic nerve of the rat, and evaluate its time-related feature. Methods: Ninety-five SD rats were divided randomly into one normal group (8 rats) and 11 experimental groups (66 rats, 6 in each). Both hind legs of each rat in experimental groups were randomly divided into test leg (sciatic nerve transected ) and control one (nerve uninjured). All test legs constituted a test group and all control legs constituted a control one. After operation, all rats were respectivdy sacrificed at 1 h, 6 h, 12 h, 24 h, 2 d, 3 d, 4 d, 8 d, 14 d, 21 d, and 30 d. We analyzed the specimens of mid-distal sciatic nerve, especially the morphological changes of the nerve, the different expression levels of S-100 protein and apoptosis-related proteins such as Bel-2, Bax, and Fas in Schwann cells. The TUNEL method was used to detect the apoptotic rate of Schwann cells. Results： (1) The test group showed Wallerian degeneration. The number of Schwann cells began to decrease at 24 h, obviously decreased on day 3 and 4, then began to increase from day 8 and formed Bungner belt after 14 days. (2) Schwann cells generally expressed S-100 at a low level in all groups. The control group was not significantly different from the normal group. The test group had statistical significance at 1 h and day 21. (3) As an inhibitory gene protein of Schwann cell apoptosis, Bcl-2 positive rates in the control and test groups apparently elevated and were statistically different from the normal group. (4) As a promotive gene protein of Schwann cell apoptosis, the control and test groups expressed Bax at a high level and were statistically different from the normal group. (5) As a promotive gene protein of Schwann cell apoptosis, Fas positive rate in control group was slightly elevated, but had no statistical significance compared with the normal group. Fas positive rate in test group continuously elevated in a fluctuant way, with highly statistical significance compared with the normal group. (6) TUNEL detection further proved that Schwann cell apoptosis rarely existed in the normal group, and the left sciatic nerve had no statistical significance compared with the right sciatic nerve. While the test group showed lots of apoptotic nuclei at 6 h, 2 d, 4 d, and 21 d. It had highly statistical significance compared with the normal group. Conclusions: Schwann cell apoptosis does exist in Wallerian-degenerated sciatic nerve of the rat after transection. Schwann cell apoptosis and its apoptotic genes expression have a time-related feature.     

软骨细胞与骨髓基质细胞共培养体外构建软骨组织的实验研究

目的 探讨利用软骨细胞提供的软骨微环境诱导骨髓基质细胞(BMSC)在体外构建软骨组织的可行性.方法 将分离出的猪骨髓基质细胞和软骨细胞进行体外培养,收集软骨细胞培养上清液,作为骨髓基质细胞诱导液从第2代开始进行诱导分化.7 d后取出标本,免疫组织化学检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达.体外分离培养的骨髓基质细胞与软骨细胞,扩增后两者以8∶2比例混匀,以5.0×107/ml的终浓度接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)支架,以相同浓度的单纯软骨细胞和单纯BMSC以及20%上述浓度(1.0×107/ml)的单纯软骨细胞作为对照组.标本于8周后取材,行大体观察、湿重、蛋白多糖(GAGs)含量测定、组织学及免疫组化等相关检测.结果 经诱导后的骨髓基质细胞的Ⅱ型胶原免疫组化检测阳性,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA呈阳性表达.混合细胞组及阳性对照组体外培养8周后形成了单一成熟的软骨组织,并保持了支架材料的大小和形状,两组新生软骨在外观及组织学特征上也基本相同,免疫组化结果 表明两组均大量表达软骨特异性细胞外基质Ⅱ型胶原,共培养组的平均湿重和蛋白多糖(GAGs)含量均达到阳性对照组的70%以上.而单纯骨髓基质细胞组仅在局部形成了极少量幼稚的软骨样组织,且材料支架明显皱缩变形.低软骨细胞浓度组虽新生软骨湿重量能达阳性对照组的30%,但材料支架明显皱缩变形,仅在局部形成了不连续的软骨组织,新生软骨量明显少于共培养各组及阳性对照组.结论 软骨细胞能在一定程度上提供软骨形成的微环境,有效地诱导BMSC向软骨细胞分化,并在体外形成组织工程化的软骨组织.

Abstract：

Objective To investigate the feasibility of chondrogenesis in vitro with bone marrow stromal cells (BMSCs) induced by the co-cultured chondrocytes. Methods The BMSCs and chondrocytes were separated from pig and cultured. The supernatant of chondrocytes was used as the inducing solution for BMSCs from the 2nd generation. 7 days later, samples were taken and underwent immunohistochemistry and RT-PCR for detection of the expression of specific type Ⅱ cartilage collagen,type Ⅱ collagen and aggrecan mRNA. The cultured BMSCs and chondrocytes were mixed at a ratio of 8:2(BMSC: cartilage cell) and were inoculated into a polyglycolic acid/polylactic acid (PGA/PLA) scaffold at the final concentration of 5.0 × 107/ml. The cartilage cells and BMSCs were also inoculated seperately at the same concentration as the positive and negative control. Pure cartilage cells at 20% of the abovementioned concentration (1.0 × 107/ml) were used as the low concentration cartilage cell control group. Samples were collected 8 weeks later. General observations, wet weight, glycosaminoglycans (GAGs) determination and histological and immunohistochemistry examinations were performed. Results The expression of type Ⅱ collagen, type Ⅱ collagen and aggrecan mRNA were positive in induced BMSCs.In the co-cultured group and the positive control group, pure mature cartilage was formed after 8 weeks of culture in vitro, and the size and shape of the scaffold were maintained. The newly formed cartilage in the two groups were almost the same in appearance and histological properties. The immunohistochemistry results indicated that the cartilage cells of the two groups all expressed ample cartilage-specific type Ⅱ collagen. The average wet weight and GAG content in the co-cultured group reached more than 70% of those in positive control group. Only an extremely small amount of immature cartilage tissues was formed in local regions in pure BMSC group, and the scaffold was obviously shrunk and deformed. Although the wet weight of newly generated cartilage tissue in the low concentration cartilage cell group reached 30% of that in positive control group, the scaffold was obviously shrunken and deformed. Only regional and discontinuous cartilage tissues were formed, and the amount of newly formed cartilage was obviously less than that in the co-culture group and the positive control group. Conclusions Chondrocytes can provide a micro-environment for the formation of cartilage, and also effectively induce BMSC to differentiate into chondrocytes and form tissue-engineered cartilage in vitro.