术前调节性T细胞水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系

目的:探讨术前调节性T细胞(Treg)水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系.方法:搜集2006年1月至2007年2月在我院实施的32例肝癌肝移植病人术前外周血及肿瘤组织,采用流式细胞技术检测外周血CD4 D25 调节性T细胞的比例,采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中FoxP<,3> 细胞浸润的比例,以正常人的外周血、正常肝组织及肝硬化组织作对照.对32例病人随访18个月,观察肿瘤复发时间.分析术前Treg水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发时间的相关性,单因素回归判断术前Treg水平对肿瘤复发时间的影响.结果:肝癌病人外周血及肝脏中Treg的水平较正常人为高:术前外周血Treg水平与肝移植术后肿瘤复发时间呈负相关(r=-0.87);术前Treg水平是影响术后肿瘤复发时间的独立危险因素(P<0.01);高Treg组病人肝移植术后一年肿瘤复发率高于低Treg组者,差异有统计学意义(P<0.05).结论:术前调节性T细胞水平可作为肝癌肝移植术后肿瘤复发的预测指标之一.     

乳腺癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及意义

目的:探讨乳腺癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(简称Foxp3+Treg)的变化及意义。方法:选择40例乳腺癌患者和32例乳腺良性肿瘤患者,采用流式细胞术检测外周血Foxp3+Treg、CD8+CD28+T细胞、NK细胞水平;用Western blot和RT-PCR病变乳腺组织Foxp3蛋白与m RNA表达。结果:乳腺癌患者外周血中Foxp3+Treg比例较乳腺良性肿瘤患者明显升高,而CD8+CD28+T细胞、NK细胞比例明显降低(均P0.05),且乳腺癌患者外周血Foxp3+Treg水平与CD8+CD28+T细胞和NK细胞水平呈负相关(r=-0.631,r=-0.578,均P0.05);乳腺癌患者术后外周血Foxp3+Treg水平较术前明显降低(P0.05)。乳腺癌组织中Foxp3蛋白与m RNA的表达均较乳腺良性肿瘤组织明显升高(均P0.05)。结论:Foxp3+Treg和其标记分子Foxp3在乳腺癌患者中的表达增加,且可能通过抑制CD8+CD28+T细胞和NK细胞而产生肿瘤免疫抑制。     

CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌肝移植肿瘤复发中的作用

目的 探讨肝癌肝移植病人移植前后外周血和肿瘤组织中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例变化及其临床意义.方法 用流式细胞仪检测肝癌肝移植病人和其他肝移植病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞的比例,并采用正常人作对照.用免疫组化法检测肝癌病人和非肝癌病人肿瘤组织中FoxP3的表达及CD8+T细胞浸润的比例.观察肝癌肝移植病人术后及肿瘤复发后调节性T细胞的变化及其对肿瘤复发的影响.结果 流式细胞检测显示肝癌肝移植、非肝癌肝移植的病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例较正常人明显升高,分别为(10.15±1.00)%、(5.30±1.64)%和(3.20±1.18)%,P<0.05.肝癌肝移植肿瘤复发病人较未复发病人外周血CD4+CD25+FOXP3+T比例明显升高,分别为(15.15±1.50)%和(6.80±1.50)%,P<0.01.免疫组化检测显示肿瘤组织中FOXP3+T细胞增多,CD8+T细胞浸润明显减少.结论 肝癌肝移植肿瘤复发的病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例升高.调节性T细胞可能通过减少CD8+T细胞浸润,加速肿瘤复发.     

不同分期前列腺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的相关性

目的 :观察不同分期前列腺癌患者外周血单个核细胞CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的关系。方法:采用流式细胞术检测62例前列腺癌患者(患者组,临床TNM分期Ⅰ期5例、Ⅱ期16例、Ⅲ期21例、Ⅳ期20例)外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目,计算CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率;并检测其空腹胰岛素及空腹血糖水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用ELISA法测定外周血胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与胰岛素抵抗的相关性,并与42例健康体检者进行对照。结果:与健康对照组相比,前列腺癌患者HOMAIR明显升高(6.68±1.66 vs 3.68±1.42),IGF-1水平明显下降[(96.39±21.21)ng/ml vs(164.56±30.58)ng/ml],PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率[(13.88±0.96)%vs(5.33±0.65)%]及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对值[(3.55±0.29)×107vs(1.99±0.78)×107]明显升高(P0.05,P0.01)。患者PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数﹑HOMA-IR均随TNM分期逐渐加重而增加,IGF-1逐渐下降;相关性分析表明:CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数均与HOMA-IR呈明显正相关(r分别为0.689、0.722,P0.01),与IGF-1呈明显负相关(r分别为-0.896、-0.747,P0.01)。结论:前列腺癌患者存在不同程度的胰岛素抵抗,且随着疾病程度的加重,外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目和比例及胰岛素抵抗逐渐加重;CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能通过调节胰岛素抵抗参与其形成和发展。     

不同免疫抑制剂对肝移植受者外周血中调节性T淋巴细胞比例的影响

目的 探讨西罗莫司(SRL)和钙调磷酸酶抑制剂(CNI)对肝移植受者外周血中CD4+CD25high T淋巴细胞水平的影响.方法 排除肝移植远期移植肝功能异常的受者,将移植肝功能长期(超过2年)稳定的受者47例纳入研究,其中免疫抑制方案使用SRL者15例(SRL组),使用CNI(均为他克莫司)者32例(CNI组).以同期38名健康成人志愿者作为正常对照.使用流式细胞仪检测各组受试者外周血中单个核细胞CD4、CD25及Foxp3的表达水平,比较各组间外周血中CD4+CD25high调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的差异.结果 与正常对照组相比,CNI组外周血淋巴细胞中CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著减少(P<0.05),SRL组CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).SRL组、正常对照组和CNI组受试者外周血中CD4+ CD25high Foxp3+ Treg 细胞占CD4+ T淋巴细胞的比例依次降低,分别为1.88%(1.56%～2.60%)、1.15%(0.57%～1.48%)和0.84%(0.46%～1.45%),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).CD4+ CD25 high T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率超过95%,CD4+ CD25 low T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率低于20%,CD4+ CD25-T淋巴细胞不表达Foxp3.结论 SRL可促进肝移植受者外周血中Treg细胞水平的升高,而CNI可降低Treg细胞的水平.     

射频消融治疗对原发性肝癌患者T细胞免疫功能的影响

目的探讨射频消融(radio frequency ablation,RFA)前后原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)患者T细胞亚群的变化。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测2011年1月~2013年6月40例PHC患者RFA术前24 h与术后1周、4周时外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、CD4~+CD25~+Treg细胞的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)含量。选择40例健康志愿者作为对照组。结果术前肝癌患者外周血T细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+明显低于健康对照组,CD8~+、Treg细胞明显高于健康对照组(P0.01);肝癌患者IL-2、IFN-γ、TNF-α明显低于健康对照组(P0.01)。术后1周,肝癌患者CD3~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+与术前相比均无统计学意义(P0.05),术后4周CD3~+、CD4~+明显升高,CD8~+明显降低(P0.05);Treg细胞术后1周、4周与术前比较均明显降低(P0.01)。RFA治疗1周、4周IL-2、IFN-γ、TNF-α较治疗前均明显升高(P0.01)。结论射频消融可以改善肝癌患者短期内的T淋巴细胞功能,促进Th1型细胞因子分泌,从而对原发性肝癌患者的免疫状况产生有益的影响。     

大肠癌患者中调节性T细胞的表达及其临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及其特异性标志物叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)蛋白在大肠癌患者外周血及淋巴组织中的变化情况,以了解Tregs在肿瘤免疫中的作用.方法 流式细胞仪检测30例大肠癌患者术前7 d、术后14 d外周血Tregs及CD4+、CD8+T细胞比例.应用免疫组织化学染色定性分析大肠癌患者手术切除标本中淋巴结组织Foxp3蛋白的表达水平.结果 大肠癌患者术前外周血中Tregs比例显著高于对照组(t=2.843,P<0.01).术前外周血CD8+T细胞比例与Tregs比例呈负相关(rs=-0.849,P<0.01).术后Tregs比例明显降低(t=6.16,P<0.01).淋巴结转移患者术前Tregs比例及Foxp3蛋白淋巴结检出率明显高于未转移者(Z=-2.56,P<0.01;χ2=4.474,P<0.05).TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者外周血Tregs比例明显高于Ⅱ期患者(Z=1.818,P<0.01).结论 大肠癌患者外周血Tregs比例显著增高,提示与肿瘤患者细胞免疫功能抑制有关.并且可能与肿瘤的转移有关.大肠癌患者淋巴结中特异性Foxp3蛋白表达,提示其在体内与抗肿瘤免疫有关.     

肝癌肝移植术后肿瘤复发与外周血调节性T细胞及细胞因子表达水平的关系

目的  分析肝细胞癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发与调节性T细胞(Treg)及细胞因子表达水平的关系。方法  以解放军第309医院2010年至2014年56例肝移植患者为研究对象。根据术后病理资料分为肝癌肝移植组(28例)和肝硬化肝移植组(肝硬化组,28例),肝癌肝移植组再根据术后患者有否肿瘤复发分为未复发组(8例)和复发组(20例)。比较各组患者外周血中Treg及调节性细胞因子[血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-2、IL-10、IL-12、转化生长因子(TGF)-β、干扰素(IFN)-γ]的表达水平。结果  与肝硬化组比较,未复发组的IFN-γ、IL-12水平显著升高(均为P＜0.05);复发组的Treg%、VEGF、IFN-γ、IL-10、TGF-β水平均显著升高,IL-2和IL-12水平明显降低(均为P＜0.05)。与未复发组比较,复发组的Treg%、VEGF、IL-10、TGF-β水平均显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-12水平明显降低(均为P＜0.05)。结论  Treg及细胞因子水平可作为肝癌肝移植术后肿瘤复发的预测指标。     

早期肝癌术后患者调节性T细胞数量及功能变化

目的通过分析早期肝癌患者肝癌切除手术前、后外周血中CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)数量及功能的变化,从免疫抑制角度探讨手术对肝癌患者免疫功能的影响。方法采集肝癌患者(病例组,15例)手术治疗前、后及正常人群(对照组,5例)外周血,提取淋巴细胞,行细胞外(CD4、CD25)及细胞内(FOXP3)染色,应用流式细胞仪分析Treg的数量及功能。结果 病例组CD4+CD25+T细胞和CD25+FOXP3+T细胞在术前外周血中所占比例均明显高于正常对照组〔(12.43±2.57)%比(5.56±1.02)%,(5.14±1.4)%比(2.18±0.83)%,P<0.05〕,病例组以上两种细胞在术后1周﹝(10.56±2.13)%,(4.28±1.08)%﹞较术前均有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05),而术后2周〔(7.30±0.89)%,(3.43±0.83)%〕较术前下降明显(P<0.05)。病例组CD8+T细胞和CD4+CD25-T细胞在术前外周血中所占比例明显低于正常对照组〔(23.42±1.80)%比(29.22±2.26)%,(36.14±1.12)%比(43.69±2.78)%,P<0.05〕,病例组以上两种细胞在术后2周〔(27.15±1.71)%,(40.30±2.00)%〕较术前均明显升高(P<0.05)。对Treg与AFP进行相关性分析发现二者具有低度相关关系(r=0.48,P<0.05)。结论肝癌切除术能够在一定程度上改善肝癌患者的免疫功能,且Treg在肝癌的诊治及预后的判断中,可能具有一定辅助意义。     

骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞与aGVHD的关系

目的 研究患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(以下简称CD4+CD25+Foxp3+T细胞)的比率、Foxp3 mRNA和Foxp3蛋白的表达与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.方法 选择37例行HIA相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT))的患者作为研究对象.采用流式细胞术检测患者allo-HSCT前7天(-7 d)、移植当天(0 d)、移植后30天(+30d)、+60 d和+90 d时骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞所占的比率;定量聚合酶链反应(PCR)检测Foxp3 mRNA相对表达量;蛋白印迹(Western blot)法检测Foxp3的蛋白表达水平.结果 37例患者存移植后100 d内发生aGVHD 13例(aGVHD组),未发生aGVHD 24例(无aGVHD组).CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率在0 d时最低,与-7、+30、+60、+90d时比较.差异均有统计学意义(P<0.01);与aGVHD组比较,无aGVHD组患者的CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).aGVHD组患者移植后Foxp3的表达水平逐渐升高,但明显低于无aGVHD组,尤其在+60和+90 d时的差异有统计学意义(P<0.01).Western blot法检测结果 表明,aGVHD组受者的Foxp3蛋白表达也明显低于无aGVHD组.结论 CD4+CD25+Foxp3+T细胞对防止发生aGVHD具有重要作用,监测患者骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率可以预测aGVHD的发生.