PARG基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞肝转移影响

 摘要：目的 探讨多聚（腺苷二磷酸核糖）水解酶（PARG）基因沉默对小鼠结肠癌CT26细胞肝脏转移的影响。方法 小鼠随机分成3组,脾脏包膜下注射PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞悬液,以未转染组和空载体转染组为对照。比较各组脾脏肝脏瘤结节数量、大小;Western blot检测PARG、PARP、NF-κB、integrin-β1、MMP-2和MMP-9的表达。结果 PARG基因沉默组小鼠脾脏移植瘤大小及肝脏转移瘤结节分级均明显低于对照组（P<0.05）;PARG基因沉默后,脾脏移植瘤组织中PARG（0.0105±0.0028）、PARP（0.1786±0.024）、NF-κB（0.1678±0.0359）、integrin-β1、MMP-2和MMP-9的蛋白表达量明显低于对照组（P<0.05）。结论 PARG基因沉默后能抑制小鼠脾脏移植瘤的生长及肝脏转移瘤结节的形成,其作用可能是通过下调PARP、 NF-κB及其下游依赖性基因的表达而实现的。     

PARG基因沉默抑制小鼠结肠癌CT26细胞系体外淋巴管形成

目的初步探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶(PARG)基因沉默对肿瘤淋巴管形成的影响。方法 CT26细胞分为未转染组,空载组和PARG-shRNA慢病毒载体转染组,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染细胞克隆。用Westernblot法检测PARG、PARP-1、NF-κB和VEGF-C蛋白表达。给BALB/c小鼠腹腔注射不完全弗氏佐剂,诱导良性淋巴管瘤形成,分离并培养小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)。免疫荧光细胞化学检测VEGFR-3和Podoplanin的表达,共培养实验检测LEC体外淋巴管样结构的形成。结果与对照组相比,PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞系后PARP-1、NF-κB及VEGF-C蛋白表达显著减弱,相对灰度值分别为1.0±0.05,0.9±0.02和0.2±0.02(P<0.05)。LEC表达VEGF-C和Podoplanin;PARG沉默组的LEC体外形成淋巴管样结构明显较未转染组和空载组少(P<0.05)。结论 PARG抑制肿瘤淋巴管形成可能与降低VEGF-C的表达有关。     

基因免疫研究进展

基因免疫的研究已成为免疫治疗研究的热点之一。其产生的机制目前认为主要是注射的DNA直接转染专职递呈细胞,它可激活CD4 T细胞、B细胞和CD8 T细胞。但也有证据表明DNA转染的肌细胞或角质细胞产生抗原后,转送给浸润在附近递呈细胞,激活相应的细胞。DNA免疫刺激序列的发现,使我们在基因免疫时应用或设计特殊DNA的结构成为可能。细胞因子和共刺激分子是基因免疫中最有前途的生物佐剂。     

体内电转染增强基因免疫诱导的HBV特异性体液免疫应答

为观察体内电转染对HBV基因免疫诱导的特异性体液免疫应答的调节作用,将HBV-preS2/S编码基因插入pVAON33载体构建重组质粒pVAON33-preS2/S,运用肌肉注射法对BALB/c小鼠进行基因免疫(100ug质粒DNA.100ul.只)。以pVAON33-preS2/S、pVAON33-preS2/S(体内电转染)为实验组,并以pVAON33空质粒为对照。按期采集免疫小鼠血清。采用ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗HBs-IgG抗体。结果显示,pVAON33-preS2/S免疫小鼠后可诱导产生特异性抗HBs-IgG抗体,到第7周时其OD值为0.73±0.18(P/N为2.13),而pVAON33-preS2/S(体内电转染)组诱导了更高水平的特异性抗HBs-IgG抗体,第7周时OD值为1.30±0.45(P/N为3.79),两组比较有显著性差异(P<0.05)。本研究表明体内电转染可明显增强HBV基因免疫诱导的体液免疫应答。     

急性轮状病毒性腹泻患儿免疫应答的观察

目的 研究小儿在轮状病毒急性感染期的免疫应答特点。方法 采用EIJSA方法检测血浆和粪便轮状病毒特异性抗体，流式细胞术进行淋巴细胞亚群分析，采用荧光定量RT-PCR方法检测外周血单个核细胞转录因子、细胞因子mRNA的表达。结果 腹泻患儿血浆中轮状病毒特异性聊价gG抗体和大便中轮状病毒特异性IgA抗体及CD19细胞亚群比例，均较对照组有明显的升高。腹泻患儿外周血单个核细胞中IL-12p40 mRNA的表达升高。粪便和血浆中IgA抗体的滴度与患儿腹泻的严重程度有一定关系。结论 急性轮状病毒感染小儿早期出现的免疫应答反应，以特异性抗体显著增加为主要特点，并且抗体产生的水平与疾病的严重程度相关。     

严重感染与免疫应答

人体免疫系统在抗感染方面起着非常重要的作用,但它具有双重性。恰当的免疫应答能抵卸病原体入侵,促进组织修复。不恰当的免疫应答可引发广泛的自身组织破坏、多重感染、多器官功能衰竭,导致死亡。促炎症细胞因子与抗炎症细胞因子之间相互平衡才能有助于维持内环境稳定。早年的研究过多地以动物实验结果为依据,加以引伸,认识上陷于片面性。上世纪90年代中期,对严重感染进行抗炎症细胞因子治疗的多项、跨国、多中心的大规模临床试验,以失败告终。近年的研究提示,严重感染时,促炎症细胞因子应答与抗炎症细胞因子应答可以交替改变。若一成不变地套用某种既定的用药方案,以干预人体免疫性,很可能引起不恰当的免疫应答。当今治疗性干预倾向于下调过度炎症反应,遏制组织自身破坏,但随之而引发的更为持久的免疫抑制或者无变应性状态,同样可以导致惨重后果。这方面的教训深刻,经验需总结。     

非特异免疫对特异性免疫应答的指导作用：抗原选择与应答类型

本文介绍了一个新的概念：非特异免疫的细胞和体液成份可为特异性免疫提供指导，决定特异性免疫对抗原的选择性并左右其应答类型。     

非特异免疫对特异性免疫应答的指导作用——抗原选择与应答类型

本文介绍一个新的概念：非特异免疫系统的细胞和体液成份可为特异性免疫提供指导,决定特异性免疫对抗原的选择性并左右其应答类型。     

IP10对机体抗肿瘤免疫应答的增强作用及其机制

目的：研究IP10对机体整体及肿瘤局部细胞免疫应答的影响，从而探讨其抗肿瘤的作用及机制。方法：基因转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株（IP10-4T1）。观察IP10-4T1细胞生长情况，观察荷瘤小鼠的生存情况。^3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答水平。Ficoll密度梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞，流式细胞技术检测CXCR3的表达。结果：pcDNA3-IP10转染不影响4T1细胞体外生长。IP10-4T1形成的肿瘤生长明显减慢，瘤重显著减轻，该荷瘤小鼠生存率显著增加（P〈0.05）。与对照组比较，IP10-4T1细胞免疫的小鼠脾细胞特异性增殖反应明显（P〈0．05）。IP10-4T1细胞形成的肿瘤内CXCR3^＋细胞浸润增加，肿瘤内分离的淋巴细胞抗原刺激后显著增殖（P〈0．05）。结论：IP10可能通过诱导机体细胞免疫应答、促进肿瘤内淋巴细胞浸润并增强肿瘤内淋巴细胞增殖活性介导抗肿瘤作用。     

白细胞介素-17参与固有免疫应答的研究进展

白细胞介素(IL)-17是一类重要的细胞因子,通常认为IL-17主要由Th17细胞分泌,参与机体的适应性免疫应答.近年来大量研究表明,在肺、胃肠黏膜及皮肤等屏障组织中存在多种固有免疫细胞可以分泌IL-17,作为的机体免疫系统第一道防线的重要成员,一方面通过模式识别受体迅速感知外来抗原的刺激,趋化募集到损伤部位,不经克隆扩增即可发挥清除病原,参与炎症、应激或者超敏反应的作用.另一方面,分泌IL-17的固有免疫细胞能够与慢性炎症的记忆细胞相互作用,启动适应性免疫应答,发挥调节机体免疫稳态的功能.     

SARS病人的免疫应答

机体抵御SARS-CoV的免疫应答包括非特异性和特异性两类。非特异性免疫应答主要包括细胞因子和NK细胞对病毒的抑制和杀伤作用等。特异性免疫反应包括体液免疫和细胞免疫。体液免疫反应是指当SARS-CoV感染机体后，引起B淋巴细胞的活化，其中一些细胞迅速分化为浆细胞，分泌IgM；而另一些细胞在T细胞和细胞因子的辅助下，发生类型转换，     

C3d-P28增强乙肝病毒基因免疫诱导的特异性细胞免疫应答

目的 :研究补体C3d中P2 8分子对HBV基因免疫诱导的细胞免疫应答的调节作用 ,为增强基因疫苗细胞免疫的效果寻求新方法。方法 :分别分离获取C3d P2 8和HBV preS2 /S编码基因 ,并克隆入真核表达载体 pVAON33中 ,构建相应重组质粒pVAON33 S2 /S (仅含HBV preS2 /S编码基因 )和pVAON33 S2 /S P2 8.4 (含HBV preS2 /S和 4拷贝C3d P2 8的编码基因 ) ,并以PCR、酶切和DNA序列测定进行鉴定。以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施 3次基因免疫 ( 10 0 μg/10 0 μL·只 ) ,间隔 3wk ,并以空质粒免疫小鼠作为对照。免疫小鼠脾细胞体外经HBsAg刺激后 ,用3 H TdR掺入法和同位素释放法 ,分别检测特异性淋巴细胞增殖和CTL杀伤活性。结果 :pVAON33 S2 /S和 pVAON33 S2 /S P2 8.4免疫小鼠的脾细胞 ,均显示较强的特异性增殖活性和CTL杀伤活性 ,但后者显著强于前者 (P <0 .0 5 )。结论 :C3d P2 8可增强HBV preS2 /S基因免疫诱导的特异性细胞免疫应答     

GM-CSF对抗原化抗体基因免疫TH细胞应答的调节作用

目的研究GM-CSF(粒-单核巨噬细胞集落刺激因子)与抗原化抗体联合基因免疫时,GM-CSF对TH细胞应答的调节作用。方法在编码免疫球蛋白重链的质粒中分别克隆黏蛋白1(MUC1)中特异性PDTRP抗原表位和GM-CSF编码基因,构建含PDTRP和GM-CSF编码基因的抗原化抗体表达重组体。经脾免疫和肌肉加强的方式免疫BALB／c小鼠。采用ELISA方法检测小鼠血清中特异性抗体的水平及其亚类并动态观察;RT-PCR方法检测TH细胞分化中细胞因子和转录因子的表达水平。结果抗原化抗体基因免疫能诱导机体产生免疫应答。GM-CSF增强抗原化抗体基因免疫诱生的抗PDTRP特异性IgG抗体水平并且伴随IgG1／IgG2a显著性升高,同时可增强淋巴细胞TH2型细胞因子及转录因子(IL-4、GATA-3)mRNA的表达水平。结论GM-CSF在增强抗原化抗体基因免疫诱导的免疫应答的同时使得免疫应答向TH2方向偏移。     

痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导不同部位淋巴组织的免疫应答

目的 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后，小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响。方法将Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为３组，每组１５只。舰疾菌苗株 ＴＩＭ－２１１７或 ＦＳ－５４１６，按 ５×10～6、１×１０～７、４×１０～７和４×１０～７ＣＦＵ／只滴鼻跟 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠４次涧隔两 ｗｂ。分离鼻相关淋巴组织（ＮＡＬＴ）、鼻通道（ＮＰ）及脾、小肠的ＰＰ结淋巴细胞。一部分细胞采用流式细胞术检测淋巴细胞表型的变化；另一部分细胞与全菌破碎抗原共培养，于不同时间点取出，提取ＲＮＡ做ＲＴ－ＰＣＲ。结果两株菌苗经鼻内免疫后，ＮＡＬ、ＮＰ和ＰＰ结的淋巴细胞中ＣＤ３Ｔ细胞显著增加，其中以ＣＤ４＋Ｔ细胞增加为主。ＴＳＭ－２１１７株免疫组的脾细胞中，Ｂ２２０＋细胞显著增加；而ＦＳ－５４１６株免疫组的脾细胞中，ＣＤ３＋Ｔ细胞显著增加。免疫小鼠的ＮＡＬＴ、ＮＰ和ＰＰ结淋巴细胞，在体外经抗原刺激后，均在不同时间出现ＩＦＮ－γ和ＩＬ-４ｍＲＮＡ的表达，ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ的表达在免疫前后无明显变化。结论痢疾菌苗经鼻粘膜免疫，可诱导不同粘膜部位及全身免疫应答的产生。     

瘦素与免疫应答

痩素作为一种激素样细胞因子,在造血及免疫细胞的发育中发挥重要作用。它主要作用在造血干、祖细胞阶段,从而引起三系造血细胞增殖,特别是对淋巴细胞的生成具有重要的促进作用,并在维持胸腺CD4 CD8 T细胞成熟的过程中发挥作用。痩素通过与表达在单核巨噬细胞、中性粒细胞、NK细胞、淋巴细胞表面的长型受体结合,促进上述免疫细胞的活化增殖,释放细胞因子,特别是促进Th1型促炎症免疫应答。     

非特异免疫对特异性免疫应答的指导作用──疾病防治新思路

非特异免疫对特异性免疫应答的指导作用主要体现在两个方面：决定其抗原选择性和应答类型。对这种作用分子机制的深入了解为传染病、肿瘤、变态反应、自身免疫病及移植排斥等的防治提供了新的思路。     

CVB3-VP1基因免疫诱导特异性抗病毒免疫应答及保护作用

目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其表达情况 ;以 5 0 μgpcDNA3 VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答。间隔 4wk以 5×LD50 的CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后小鼠的存活情况。结果 :构建了重组质粒 pcDNA3 VP1,并在体外获得有效表达。以该质粒肌肉免疫BALB/c小鼠 ,可诱生高水平的IgM和IgG ,VP1多肽特异性淋巴细胞增殖反应及CTL活性均显著高于 pcDNA3免疫的对照组。病毒攻击试验表明 ,pcDNA3 VP1免疫组33.3%小鼠可长期存活 ,其心肌组织未见明显的病理学改变 ;而对照小鼠平均仅存活 6 .7d ,心肌显示大量的局灶性坏死和炎性细胞浸润。结论 :pcDNA3 VP1免疫可诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答 ,保护免疫小鼠抵抗CVB3的致死性攻击     

非特异免疫对特异性免疫应答的指导作用——疾病防治新思路

非特异免疫对特异性免疫应答的指导作用主要体现在两个方面：决定其抗原选择性和应答类型。对这种作用分子机制的深入了解为传染病，肿瘤，变态反应，自身免疫病及移植排斥等的防治提供了新的思路。