Cbfαl对小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子转录调控作用的研究

目的研究Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子转录活性的影响。方法确定Cbfa1瞬时转染的最高表达时间点后,将含牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的真核表达载体与PCMV5-Cbfαl共转染MDPC-23细胞,分析Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子的转录调控作用。结果MDPC-23细胞转染PCMV5-Cbfαl后,Cbfαl在48h时表达量最高。Cbfa1表达对各段启动子都有激活作用。结论Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子有转录激活的调控作用。     

MDPC-23细胞内核心结合因子A1增强Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因的表达

目的 :研究转录因子核心结合因子A1(CBFA1)在Smad分子调控牙本质涎磷蛋白 (DSPP)基因表达中的作用。方法 :细胞培养 ,基因转染和报告基因检测。结果 :转化生长因子 β1(TGF β1)抑制DSPP基因启动子活性的表达。Smad3过表达显著增强了TGF β1对DSPP基因表达的转录抑制。单独过表达CBFA1对DSPP基因启动子活性无明显影响。但是 ,CBFA1与Smad3共转染显著增强Smad3对DSPP基因启动子的抑制作用 ,在TGF β1存在时 ,其作用进一步增强。结论 :在成牙本质细胞系MDPC 2 3内 ,CBFA1可能作为一种转录因子协同调控Smad3对DSPP基因转录的调控。     

Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白启动子片段的调控

目的：在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析DSPP启动子活性,了解TGF-1的信号分子Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）基因启动子片段的调控作用。方法：瞬时转染和报告基因检测。结果：TGF-β1可以下调pGL3LUC-Pdspp-410～-176bp和pGL3LUC-Pdspp-410～＋54bp的活性,Smad3可以加强这种下调作用;它们对pGL3LUC-Pdspp-195～＋54bp的调控作用不明显。结论：TGF-β1可以通过Smad3信号通路对DSPP启动子进行调控;在DSPP启动子-410～-176bp之间,存在着其它的启动元件,促使其启动活性。在DSPP启动子-195～＋54bp区域内,存在DSPP抑制子元件,发挥负调节作用,导致启动活性下降或丧失。     

核心结合因子α1对牙本质涎磷蛋白基因转录调控的影响

目的观察核心结合因子α1(corebindingfactorα1,cbfα1)对牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因启动活性的影响。方法选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,DSPP基因上游2.6kb片段(-2475bp～ 53bp)为启动子。通过采用瞬时转染、报告基因等方法,用SPSS10.0统计软件包对结果进行统计学分析,观察在MDPC-23中,cbfα1对DSPP基因启动子启动活性的影响。结果在MDPC-23细胞中,pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3-cbfα1共转染组荧光素酶的表达量显著小于pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3共转染组(P<0.01)。结论cbfα1对DSPP基因上游-2475bp～ 53bp区域的启动活性有抑制作用。     

Smad在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用

目的：研究Smad蛋白在牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的作用。方法：细胞培养,瞬时转染和报告基因检测。结果：转化生长因子β1(transforning growth factor-β1,TGF-β1)抑制DSPP基因启动子活性。过表达野生型Smad3蛋白显著增强了TGF-β1对DSPP基因表达的转录抑制,而过表达Smad3突变型蛋白则显著抑制了TGF-β1对DSPP基因启动子活性的影响。过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1抑制DSPP基因启动子活性无明显影响。结论：Smad3在介导TGF-b1对DSPP基因的转录调控中发挥重要的作用.     

TGF-β1/Smad3信号途径对牙本质涎磷蛋白基因表达的调控

目的：研究小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中TGF-β1及其信号分子Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白（dentinsialophosphoprotein，DSPP）基因表达中的调控作用。方法：PCR法制备DSPP引物、构建带有DSPP启动子片段的萤火虫荧光素酶基因报告载体，通过瞬时转染入MDPC-23细胞后，检测报告基因活性。结果：在TGF-β1的作用下，Smad3可以发生转位表达，由细胞浆转入细胞核内。同时，过表达野生型Smad3可以显著增强TGF-β1对DSPP启动子活性的下调作用。结论：TGF-β1可以通过Smad3信号通路对DSPP启动子进行调控；在DSPP启动子-2525-＋54bp之间，存在TGF-β1／Smad3信号途径的结合位点，从而发挥对DSPP基因的调控作用。     

转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用

目的 研究成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白（DSPP）基因转录调控中的作用, 探索成牙本质细胞内DSPP基因表达的调控机制。方法 细胞免疫组化观察MDPC-23细胞内c-Jun和c-Fos蛋白分子的表达。瞬时转染和报告基因检测c-Jun和c-Fos在DSPP基因转录中的作用。结果 MDPC-23细胞表达c-Jun和c-Fos蛋白,c-Jun和c-Fos主要分布在MDPC-23细胞胞核。c-Jun或c-Fos过表达均显著抑制DSPP基因启动子活性。结论 证实成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos参与下调DSPP基因表达。     

牙本质涎磷蛋白的研究进展

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白.关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入.本文就近年来关于牙本质涎磷蛋白的研究现状作一综述.     

小鼠牙本质涎磷蛋白启动子报告基因载体的构建和启动子活性分析

目的：克隆小鼠牙本质涎磷蛋自（dentin sialophosphopmtein,DSPP)基因启动子，构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性。方法：细胞基因组提取，PCR，瞬时转染和报告基因检测。结果：从MDPC-23细胞基因组中克隆出长为1.5kbp的DSPP启动子，将启动子酶切成不同的片断，克隆到虫工业基础光素酶报告基因载体pC1.3-Enhancer,构建出4种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论：成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体，为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。     

小鼠牙本质涎磷蛋白5′端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析

目的：克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein，DSPP)基因启动子，构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性：方法：PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果：PCR获得DSPP启动子的3个不同片段，将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pG13-Enhancer，构建出3种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论：成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体，为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。     

DSPP基因启动子不同片段启动活性的对比分析

目的：对比分析牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）基因启动子不同片段的启动活性。方法：选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,利用含DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体,采用报告基因方法观察DSPP基因启动子不同片段的启动活性。结果：在MDPC-23细胞中,DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体均不同程度地表现了启动活性,其启动活性有差异（P〈0.01）。结论：DSPP基因启动子不同片段的启动活性有差异,其活性变化反映位于-95bp～54bp、-410bp～-195bp、-1243bp～-791bp、-1447bp～-1243bp、-3519bp～-2475bp区存在潜在的增强子;-195bp～-95bp、-670bp～-410bp、-2475bp～-1447bp区存在潜在的抑制子。进一步明确了DSPP基因启动子的结构,为今后研究DSPP基因的特异性表达奠定基础。     

小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)特异性启动子的克隆和序列分析

目的 :获得小鼠牙本质涎磷蛋白 (DSPP)编码序列上游约 1.6kb的特异性启动子。方法 :按Mac Dougall报道设计一对引物 ,提取小鼠胚胎干细胞基因组DNA作为模板 ,PCR获得大小约为 1.6kb的DNA片段 ,将该片段克隆并进行序列分析。结果 :所得到的片段是DSPP的特异性启动子 ,其序列与文献报道有一定差异 ,但转录因子的结合位点均未发生突变。结论 :成功获得小鼠DSPP的特异性启动子 ,为进一步的研究打下基础。     

人牙髓干细胞诱导后人牙本质基质蛋白1基因转录活性的变化和意义

目的:观察人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)经矿化液诱导后牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达、细胞生物学变化以及对人DMP1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC体外矿化诱导模型,运用RT-PCR、组织染色等方法检测矿化诱导后细胞DMP1 mRNA表达、细胞形态和矿化能力的变化以及对两个DMP1基因启动子重组报告基因载体pGL3-P-193~ 86和pGL3-P-505~ 86活性的影响。结果:HDPSC经矿化液诱导后,能够向成牙本质细胞方向分化,出现成牙本质细胞样细胞表型。与对照组相比较,随着诱导时间的延长,细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性增强,较早的出现了矿化结节,说明在诱导液作用后细胞矿化能力升高。诱导后的细胞出现了DMP1 mRNA表达水平增高,pGL3-P-193~ 86和pGL3-P-505~ 86活性均出现增强的趋势,尤其以pGL3-P-505~ 86活性增强更明显。结论:矿化液可诱导HDPSC向成牙本质细胞方向分化,诱导后的细胞矿化能力增强,DMP1表达和转录活性也随之增强,提示DMP1可能参与成牙本质细胞的分化过程。     

人牙本质基质蛋白1基因启动子的克隆、测序和活性分析

目的:克隆并测定牙本质基质蛋白1(dentinmatrixprotein1,Dmp1)基因上游启动子的序列,观察其不同片段在人牙髓干细胞(humandentalpulpstemcells,HDPSCs)中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因的转录调控特点和分析特异性转录位点奠定基础。方法:以人全基因组DNA为模板,通过PCR方法获得目的片段,将其连接到PKey-TA载体进行测序,并对所获得的序列进行生物学信息分析。将不同启动子片段构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染至牙髓干细胞,荧光素酶检测启动子活性并进行分析。结果:从人全基因组中获得2.2kb大小的目的片段,测序结果与基因组相应序列吻合。酶切鉴定表明不同长度启动子报告基因载体构建成功。荧光素酶分析结果显示:不同片段的Dmp1启动子在牙髓干细胞中活性不同,-505～-193区为Dmp1启动子的核心启动子区。结论:成功克隆到Dmp1上游启动子的序列,该启动子区在牙髓干细胞中具有活性,为研究Dmp1基因在成牙本质细胞分化和牙本质矿化中转录调控机制奠定了基础。     

釉原蛋白基因启动子的克隆及在不同细胞中转录调控的分析

目的：克隆釉原蛋白基因启动子及可能影响转录调控的序列,分析其在不同细胞中的转录模式。方法：检索并分析釉原蛋白基因的上游调控序列．利用PCR及酶切方法,从小鼠C57BL／6J基因组上扩增不同长度（包括基本启动子区域）的转录调控序列,与PGL3-Basic载体的虫荧光素酶基因连接。瞬时转染CHO、Hela、UMR-106细胞,检测荧光素酶的活性．分析不同长度的启动子片段在各种细胞中的转录活性。结果：共构建了6个不同长度的报告载体,瞬转后发现在Hela细胞中有较强的荧光素酶活性,在CHO、UMR-106细胞中活性很弱。在不同的细胞内,启动子活性随片段长度变化,其变化趋势有明显的相似性。表现为在转录起始点上游975bp与532bp的区域具有较强的转录活性．而转录起始点上游285bp区域的转录活性有所降低。结论：釉原蛋白的启动子可在Hela细胞中激活,Hela细胞可作为研究釉原蛋白启动子转录调控的细胞模型：初步判断釉原蛋白启动子上的-1693与-975之间的序列为转录抑制区域,-532与-285之间为转录增强区域。     

牙本质基质蛋白-1的研究进展

牙本质基质蛋白-1是牙发育过程中一种非常重要的非胶原性基质蛋白,对牙本质的形成和矿化起着重要的作用,但其具体的作用机制有待于进一步的研究.下面就牙本质基质蛋白-1的表达定位、基因结构、生物学功能以及表达调控因素作一综述.