LncRNA XIST靶向miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST通过miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用及机制。方法 RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、T98G、U87-MG、A172、SW1783中XIST表达水平及si-XIST转染U251细胞后XIST与miR-543表达;在胶质瘤细胞U251中敲低XIST后,MTT法、流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和凋亡情况;用双荧光素酶报告基因验证LncRNA XIST与miR-543的靶向关系。结果 XIST在U251细胞中表达水平(0.79±0.08)最高,故以U251细胞进行后续实验;与XIST组[(2.35±0.17)、(0.37±0.05)]相比,si-XIST组U251细胞XIST表达水平(0.25±0.19)较低,miR-543表达水平(3.15±0.36)较高(P<0.05);与XIST组[(0.57±0.09)、(0.81±0.01)、(1.15±0.04)]相比,si-XIST组胶质瘤U251细胞A570在24、48、72 h[(0.22±0.02)、(0.31±0.03)、(0.55±0.04)]明显降低(P<0....     

反义miR-155对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察敲低微小RNA-155(miR-155)的表达对人胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响.方法 脂质体介导转染miR-155反义抑制序列(AS-miR-155)下调入胶质瘤U251细胞中miR-155的表达,同时设未转染组和无义序列转染组.实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测转染后细胞miR-155的表达,四甲基偶氨唑盐(MTT)实验检测转染后细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)检测转染后细胞周期变化和凋亡情况.结果 与未转染组和无义序列转染组相比,miR-155 反义抑制序列转染组细胞miR-155表达下降;MTT实验结果显示细胞生长受抑;流式细胞术结果可见细胞出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率增高.结论 反义miR-155可抑制U251胶质瘤细胞生长增殖,促进其凋亡.miR-155可能成为治疗胶质瘤的候选靶标.     

三氧化二砷体外抑制人星形细胞瘤细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷(As_2O_3)对人脑胶质瘤细胞系LN444的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 用梯度浓度的As_2O_3处理LN444胶质瘤细胞,CCK-8比色法检测细胞的增殖活性,计算细胞增殖抑制率.Hoechst染色观察As_2O_3引起的核形态改变.流式细胞仪PI染色检测As_2O_3作用后的细胞凋亡率.结果 As_2O_3对LN444胶质瘤细胞增殖有明显的抑制作用,各剂量组与空白对照组抑制率的差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量依赖性和时间依赖性.Hoechst染色显示用药后细胞出现细胞凋亡的典型变化.PI染色显示As_2O_3处理后细胞凋亡显著增加,各剂量组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 As_2O_3对人胶质瘤细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用.     

EGFR反义RNA抑制人脑恶性胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)反义RNA对抑制胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法:将互补于EGFR 3′端部分序列的反义cDNA转染胶质瘤细胞,检测其生长率、增殖活性、EGFR mRNA及其蛋白表达和细胞凋亡。结果:胶质瘤细胞转染EGFR反义RNA后生长率及增殖活性下降,EGFRmRNA及蛋白表达减低,出现大量细胞凋亡。结论:EGFR有可能成为胶质瘤基因治疗的候选基因。     

姜黄素对阿尔茨海默病细胞模型miRNA106a的影响

目的探讨阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中姜黄素与miR-106a的关系。方法将PC12细胞随机分为5组:正常对照组(PC12细胞组),模型组(PC12细胞与浓度为4μg/mL的Aβ1-42共培养24h),anti-miR-106a组(造模成功后转染anti-miR-106a),姜黄素组(造模成功后加姜黄素,终浓度为20μmol/L)、共同作用组(anti-miR-106a加入姜黄素)。RT-PCR检测miR-106a的含量;Western blotting检测APP的含量。结果 RT-PCR结果显示,与正常对照组相比,模型组和anti-miR-106a组miR-106a含量均明显降低(P<0.05),而姜黄素组明显升高(P<0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组相比,模型组(P<0.05)和anti-miR-106a组(P<0.01)APP明显增加,姜黄素组APP比模型组明显降低(P<0.05)。结论姜黄素可通过正性调节miR-106a而参与AD的治疗。     

miR-936通过靶向CKS1诱导细胞周期停滞并抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的探讨微小RNA-936(miR-936)通过靶向细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(CKS1)诱导细胞周期停滞并抑制神经胶质瘤细胞增殖行为及其作用机制。方法流式细胞术检测miR-936对胶质瘤细胞细胞周期的影响;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测miR-936对胶质瘤细胞的增殖行为的影响,miR-936对细胞周期蛋白和通路蛋白的影响情况,双荧光素酶实验检测miR-936和CKS1在神经胶质瘤细胞中的相互作用,miR-936对裸鼠体中的肿瘤生长及肿瘤中的Ki67蛋白水平的影响。结果 miR-936的表达下调可以调控胶质瘤细胞细胞周期抑制胶质瘤细胞增殖行为,抑制miR-936的表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖行为,miR-936的异位表达显着抑制U87细胞中的细胞分裂周期蛋白2(CDC2),细胞分裂蛋白激酶2(CDk2),细胞分裂蛋白激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)的表达,miR-936能与CKS1的3'UTR特异性结合,调控CKS1的表达活性;miR-936的表达下调可以抑制裸鼠体内胶质瘤细胞的生长,并降低Ki67的表达水平。结论 miR-936在胶质瘤的发生发展过程中起重要作用,通过靶向调节CKS1的表达影响胶质瘤细胞的增殖和迁移。     

miR-23c靶向调控MTDH抑制胶质瘤U87细胞增殖迁移与侵袭

目的探讨miR-23c对胶质瘤细胞U87增殖、迁移和侵袭的影响及初步机制。方法将miR-23c mimics转染于U87细胞中,用miR-无关序列转染于U87细胞做为Control组,采用MTT法、细胞划痕、Transwell侵袭实验观察miR-23 c对U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响;采用生物信息学软件分析miR-23c潜在的靶基因;采用Western blot、RT-PCR和萤光素酶报告基因检测miR-23c对靶基因的调控作用;在转染miR-23c mimics的基础上同时转染MTDH质粒,通过MTT法、细胞划痕、transwell侵袭实验观察转染MTDH对miR-23c抑制U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 MTT实验显示,miR-23 c组U87细胞的OD值为(0. 668±0. 032),明显低于Control组的(1. 031±0. 060)(P 0. 01);细胞划痕实验显示,miR-23c组细胞划痕愈合率(0. 35±0. 02)明显低于对照组的(0. 59±0. 03)(P 0. 01); Transwell侵袭实验显示,miR-23 c组U87细胞穿过基质胶的细胞数(153. 2±8. 30)明显低于与对照组的(348. 4±12. 12)(P 0. 01); Western blot、RT-PCR和萤光素酶报告基因检测表明MTDH是miR-23 c直接调控的靶基因; MTT实验显示,miR-23 c+MTDH组U87细胞的OD值为(1. 025±0. 059),明显高于miR-23 c组的(0. 672±0. 024)(P 0. 01);细胞划痕实验显示,miR-23 c+MTDH组细胞划痕愈合率为(0. 45±0. 04),明显高于miR-23 c组的(0. 31±0. 03)(P 0. 05); Transwell侵袭实验显示,miR-23c+MTDH组U87细胞穿过基质胶的细胞数(260. 9±10. 23),明显高于miR-23c组的(148. 4±9. 4)(P 0. 01)。结论上调miR-23 c能明显抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与其下调MTDH表达有关。     

miR-34a在胶质瘤化疗耐药中的研究进展

胶质瘤是一种严重威胁人类健康的脑恶性肿瘤,因发现miR-34a在大脑中表达丰富,其在脑肿瘤领域的地位逐渐提高。miR-34a能调控胶质瘤相关基因的表达,参与胶质瘤形成,阐明miR-34a在胶质瘤中的作用机制,寻找到新的药物治疗靶点,对胶质瘤治疗极为重要。本文通过介绍miR-34a的生理特性、信号通路、替莫唑胺化疗耐药、化疗给药载体等方面的综述,总结了miR-34a在胶质瘤化疗耐药机制中的研究新进展并展望未来研究方向。     

miR-93在脑胶质瘤的表达及其对胶质瘤细胞系U87、U251细胞增殖的影响

目的 探讨miR-93在脑胶质瘤的表达及其对胶质瘤细胞系U87、U251细胞增殖的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测61例脑胶质瘤组织及正常脑组织的miR-93表达水平。构建慢病毒载体,转染抑制胶质瘤细胞系U87、U251中miR-93的表达。检测转染后24、48、72、96 h的胶质瘤细胞系U87、U251细胞增殖和克隆形成数。结果 61例胶质瘤组织标本中,44例(72. 1%) miR-93表达水平明显高于正常脑组织。其中WHOⅠ级胶质瘤的阳性表达率为20%(1/5)、Ⅱ级为71. 4%(15/21)、Ⅲ级为73. 3%(11/15)、Ⅳ级为85%(17/20)。miR-93在WHOⅠⅣ级胶质瘤组织的表达值分别为1. 25、5. 91、6. 71、31. 20。转染抑制U251、U87细胞的miR-93表达后,细胞的增殖活性明显被抑制(均P 0. 05),并且U251、U87细胞的克隆形成能力明显降低(均P 0. 01)。结论 miR-93在脑胶质瘤中的表达水平较正常脑组织明显增高,且与胶质瘤的分级相关; miR-93能促进胶质瘤细胞的增殖。     

miR-23c靶向调控MTDH抑制胶质瘤U87细胞增殖迁移与侵袭

目的 探讨miR-23c对胶质瘤细胞U87增殖、迁移和侵袭的影响及初步机制。方法 将miR-23c mimics转染于U87细胞中,用miR-无关序列转染于U87细胞做为Control组,采用MTT法、细胞划痕、Transwell侵袭实验观察miR-23c对U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响;采用生物信息学软件分析miR-23c潜在的靶基因;采用Western blot、RT-PCR和萤光素酶报告基因检测miR-23c对靶基因的调控作用;在转染miR-23c mimics的基础上同时转染MTDH质粒,通过MTT法、细胞划痕、transwell侵袭实验观察转染MTDH对miR-23c抑制U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 MTT实验显示,miR-23c组U87细胞的OD值为（0.668±0.032）,明显低于Control组的（1.031±0.060）（P<0.01）;细胞划痕实验显示,miR-23c组细胞划痕愈合率（0.35±0.02）明显低于对照组的（0.59±0.03）（P<0.01）;Transwell侵袭实验显示,miR-23c组U87细胞穿过基质胶的细胞数（153.2±8.30）明显低于与对照组的（348.4±12.12）（P<0.01）;Western blot、RT-PCR和萤光素酶报告基因检测表明MTDH是miR-23c直接调控的靶基因;MTT实验显示,miR-23c+MTDH组U87细胞的OD值为（1.025±0.059）,明显高于miR-23c组的（0.672±0.024）（P<0.01）;细胞划痕实验显示,miR-23c+MTDH组细胞划痕愈合率为（0.45±0.04）,明显高于miR-23c组的（0.31±0.03）（P<0.05）;Transwell侵袭实验显示,miR-23c+MTDH组U87细胞穿过基质胶的细胞数（260.9±10.23）,明显高于miR-23c组的（148.4±9.4）（P<0.01）。结论 上调miR-23c能明显抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与其下调MTDH表达有关。     

MiR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的作用

目的观察miR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,进一步探讨miR-181c的生物学功能。方法化学合成miR-181c,脂质体转染U251细胞。应用cck-8法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡。结果miR-181c上调后对U251细胞具有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,而对照组无明显抑制作用。结论化学合成的miR-181c在人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

microRNA-490-3p抑制胶质瘤增殖及凋亡的作用研究

目的探讨微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,观察miR-490-3p对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测16例胶质瘤样本、胶质瘤旁组织及4种胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达;利用人工合成miR-490-3p mimic瞬时转染脑胶质瘤细胞株,qRT-PCR检测细胞中miR-490-3p的表达水平;采用MTT比色法检测胶质瘤细胞增殖情况;流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系显著降低,miR-490-3p mimic能够显著上调胶质瘤细胞株中miR-490-3p的表达水平,并显著抑制胶质瘤细胞株U251、U87细胞的增殖能力显著增加细胞凋亡数量;结论 miR-490-3p在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中呈现低表达,过表达miR-490-3p有效抑制了胶质瘤细胞株的增殖,增加凋亡,提示miR-490-3p可能成为胶质瘤治疗的新靶点。     

靶向PTTG1基因的微小RNA转染后诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 构建表达靶向抑制垂体瘤转化基因1 (PTTG1)基因表达的RNA干扰载体microRNA,导入人脑胶质瘤细胞株U251中,研究靶向抑制PTTG1基因对U251细胞的凋亡诱导作用.方法 以PTG1为靶基因,根据pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体要求,设计针对PTIG1的microRNA序列,脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,采用荧光定量多聚酶链反应(PCR)以及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;膜联蛋白Ⅴ与碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双色标记的流式细胞仪法检测microRNA诱导的细胞凋亡,碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期阻滞.结果 实时荧光定量PCR以及Western blot检测显示,PTTG1基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;转染后,流式细胞仪检测分析显示,PTTG1基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 靶向PTTG1基因的重组microRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1介导的RNAi显著靶向抑制了PTTG1基因在人脑胶质瘤细胞中的表达,并明显地诱导了脑胶质瘤细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞.     

miR-181a和miR-181b抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭

目的 探讨miR-181a和miR-181b对胶质瘤细胞增殖和侵袭等影响.方法 通过实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株中的表达情况.我们合成miR-181a和miR-181b寡聚核苷酸及构建pre-miR-181a和pre-miR-181b表达载体,转染胶质瘤细胞,通过MTT、Transwell实验、流式检测和软琼脂实验,观察上调miR-181a和miR-181b表达后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、转化能力和细胞凋亡的影响.结果 miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株较正常脑组织均呈过低表达;miR-181a表达水平与胶质瘤等级呈负相关.上调miR-181a和miR-181b表达能有效抑制胶质瘤细胞生长,降低其转化和侵袭能力,诱导凋亡.结论 胶质瘤中异常低表达的miR-181a和miR-181b可能发挥着肿瘤抑制因子作用.     

siRNA靶向下调nNav1.5影响胶质瘤细胞增殖与凋亡研究

目的研究下调电压-门控钠离子通道(VGSCs)幼稚型钠离子通道1.5(n Nav1.5)的表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法用免疫荧光技术检测n Nav1.5在U251细胞的表达;设计合成n Nav1.5的靶向小干扰核糖核酸(siRNA),脂质体瞬时转染至U251细胞,用实时定量逆转录酶-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测n Nav1.5的mRNA和蛋白水平变化,并判断siRNA干扰效果;用四唑盐比色法(MTT)和流式细胞仪检测siRNA对细胞增殖和凋亡的影响。结果 n Nav1.5主要在U251细胞核中表达;siRNA可显著下调n Nav1.5的mRNA和蛋白表达水平,并抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。结论 n Nav1.5在胶质瘤的发生发展过程中起着促进作用,可能成为胶质瘤诊断和治疗的一个新靶点。     

二氢杨梅素促进胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

目的 探讨二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)对人胶质瘤U251细胞凋亡的促进作用及其机制。方法 将体外培养的胶质瘤U251细胞分为对照组和DHM组(根据DHM水平的不同分为3个亚组),MTT法观察细胞活性,Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态,Western blot检测Bax和bcl-2蛋白表达水平。结果 Hoechst 33258核染色和流式细胞仪检测显示,随着DHM水平的增高,U251细胞凋亡率呈剂量依赖性增高; 电镜观察显示,对照组胶质瘤U251细胞形态正常,DHM组胶质瘤U251细胞肿胀,细胞器呈碎片样分散,随着DHM水平升高,线粒体、内质网等细胞器结构破坏明显。此外, DHM处理后Bax蛋白表达水平增高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论 DHM可能通过改变Bax及Bcl-2蛋白表达水平来抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进其凋亡。     

LRIG2基因全长及胞外段对胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因全长及胞外段对脑胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响。方法将LRIG2全长,LRIG2胞外段（LRIG2_ecto）及空白质粒（对照）经慢病毒法分别转染胶质瘤细胞系U251细胞,筛选稳定细胞株,实时PCR及免疫印迹法检测mRNA及蛋白表达,细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期及细胞凋亡。结果两转染组Flag标签蛋白表达成功;两转染组LRIG2全长及LRIG2_ectomRNA表达较对照组明显升高（氏0．01）;两转染组细胞增殖率均明显高于对照组（P〈0．01）;两转染组s期与G2/M期细胞数之和（即细胞增殖指数）均明显高于对照组（P〈0．01）,而细胞凋亡率均明显低于对照组（P〈0．05）。结论LRIG2基因全长及LRIG2_ecto促进胶质瘤细胞增殖,并将细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞凋亡。     

白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞及干细胞凋亡诱导作用

目的比较研究白黎芦醇(Res)对人脑胶质瘤U87细胞及其胶质瘤干细胞(GSC)的作用。方法膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)和碘化丙啶(PI)染色法测定细胞凋亡;CD133标记、CD133与AnnexinⅤ/PI共标记检测GSC相对含量及GSC的凋亡;实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mdr1基因mRNA表达,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)的表达;集落形成法(CFU)检测细胞的自我更新和增殖能力。结果不同浓度的Res显著诱导U87细胞凋亡,抑制U87细胞集落的形成。40～160μmol/L Res作用后U87细胞群体中CD133+GSC相对含量显著增高、GSC凋亡细胞数量增加,但GSC对Res的敏感性低于U87群体细胞。Res诱导后U87细胞群体中高表达mdr1/P-gp的细胞显著增高,并与GSC含量的增高基本相一致。结论白黎芦醇可诱导脑恶性胶质瘤U87群体细胞及其干细胞凋亡。