供肝冷保存再灌注期间核因子NF-κB和抑制蛋白IκBs的变化及其意义

目的:研究肝移植期间供肝组织中核因子NF-κB的激活特征及其活性调控机制.方法:改良Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型,按供肝在4℃乳酸林格液中的冷保存时间,实验分冷保存2 h组和6 h组,凝胶迁移率改变分析法(EMSA)和Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白IκB-α、IκB-β的表达水平.结果:两组供肝组织在冷缺血保存期间其NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异(P>0.05),再灌注后30 min至6 h两组的NF-κB活性均出现显著的诱导激活(P<0.01),其中冷保存2 h组供肝组织的NF-κB活性高峰出现在再灌注1 h;而冷保存6 h组在再灌注30 min即达到活性高峰,并维持在较高的激活水平;供肝组织中抑制蛋白IκB-α的含量显著高于IκB-β,两组的IκB-α蛋白在再灌注30 min至1 h均有明显降解(P<0.05),而IκB-β蛋白仅在冷保存6 h组有较明显的降解(再灌注30 min).结论:核因子NF-κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关,抑制蛋白IκB-α在供肝的NF-κB活性调控中可能起了主要作用.     

核因子kB活性抑制对再灌注早期供肝损伤的保护作用

目的 :研究 NF-κB活性抑制对再灌注早期供肝损伤的保护作用。方法 :改良 Kam ada法建立同种大鼠原位肝脏移植模型 ,实验分对照组和二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)组 ,对照组供肝于 4℃乳酸林格液中保存 6 h,PDTC组供肝于乳酸林格冷保存液中加入 0 .1mol/L PDTC,于再灌注早期分析测定供肝组织中 NF-κB的结合活性 (EMSA法 )、TNF-α和 ICAM- 1的 m R-NA转录水平 (RT- PCR)以及 AL T和 L DH的活性变化。结果 :供肝组织的 NF-κB在移植后再灌注早期明显激活 ;再灌注 1h,PDTC组的 NF-κB活性较对照组显著降低 ,但 6 h后两组 NF-κB活性未见明显差异。再灌注早期 TNF-α和 ICAM- 1m RNA转录水平上调以及 AL T和 L DH活性升高 ,但 PDTC组明显低于对照组 (P<0 .0 5 )。结论 :供肝组织中 NF- κB的活性抑制可显著降低再灌注早期供肝组织中炎症介质的转录表达 ,并有效改善供肝的再灌注损伤。针对 NF- κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径。     

高迁移率族蛋白B1预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响

目的：评价高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord is－chemia reperfusion injury,SCII）的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠于缺血前18 h经侧脑室给予不同浓度的重组HMGB1预处理。采用Zivin改进法建立大鼠SCII模型,阻断腹主动脉45 min后行再灌注。于再灌注6、12、24 h取血清检测循环中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6 （interleukin-6,IL-6）水平,取脊髓组织检测核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）活性及其抑制蛋白（inhibitors κB-α,IκB-α）含量。评价大鼠后肢运动神经功能,观察脊髓组织病理学改变。结果：再灌注各时间点,与行单纯缺血再灌注损伤的大鼠相比,给予HMGB1预处理后大鼠后肢运动神经功能评分明显提高,脊髓前角正常运动神经元的计数增多,血清中TNF-α、IL-6水平下降,脊髓组织中IκB-α含量增高,NF-κB活性降低。结论：HMGB1预处理对大鼠SCII具有保护作用,其机制与预处理减少IκB-α降解,抑制NF-κB活性,从而减轻炎性反应有关。     

核因子κB活性抑制对再灌注早期供肝损伤的保护作用

目的：研究NF－κB活性抑制对再灌注早期供肝损伤的保护作用。方法：改良Kamada法建立同种大鼠原位肝脏移植模型，实验分对照组和二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC组），对照组供肝于4℃乳酸林格液中保存6h,PDTC组供肝于乳酸林格冷保存液中加入0.1mol/L PDTC，于再灌注早期分析测定供肝组织中NF－κB的结合活性（EMSA法）、TNF-α和ICAM－1的mRNA转录水平（RT－PCR）以及ALT和LDH的活性变化。结果：供肝组织的NF－κB在移植后再灌注早期明显激活；再灌注1h,PDTC组的NF－κB活性较对照组显著降低，但6h后两组NF－κB活性未见明显差异。再灌注早期TNF－α和ICAM－1mRNA转录水平上调以及ALT和LDH活性升高，但PDTC组明显低于对照组（P＜0.05)。结论：供肝组织中NF－κB的活性抑制可显著降低再灌注早期供肝组织中炎症介质的转录表达，并有效改善供肝的再灌注损伤。针对NF－κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径。     

多黏菌素B抗炎作用机制的研究

目的观察多黏菌素B(PMB)和内毒素(LPS)共同处理大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)后对核因子-κB(NF-κB)信号通路的变化。方法分离、培养大鼠PAM,分为正常对照组、LPS刺激组及PMB干预组。采用原位杂交(ISN)技术、凝胶电泳迁移率改变(EMSA)及ELISA法,检测刺激后0、15、30、60、120和240min各时相点PAM中IKK-βmRNA及IκB-α的表达、NF-κB的活性和TNF-α的含量。结果LPS刺激组IKK-βmRNA的水平在刺激后15min出现升高,30min达高峰,60min后逐渐下降;IκB-α的水平的变化趋势在各时相点与IKK-βmRNA刚好相反;NF-κB活性的峰值相出现在60min,15min出现升高,120min后逐渐下降;TNF-α的含量峰值相出现在60min,30min出现升高,120~240min后恢复至刺激前水平。PMB干预组NF-κB的活性与TNF-α的含量虽较刺激前和正常对照组升高,但均显著低于LPS刺激组(P<0.01)。IκB-α水平的最低值显著高于LPS刺激组(P<0.01);而IKK-βmRNA的峰值则显著低于LPS刺激组(P<0.01)。结论LPS能诱导PAM中的IKK-β激活、IκB-α降解和NF-κB活化,并促进TNF-α释放。而PMB则能抑制LPS诱导的IKK-β激活、IκB-α降解、NF-κB活化和TNF-α释放。     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-кB活性的研究

目的　探讨丙型肝炎病毒核心蛋白 (HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子 κB(NF- κB)的调控作用。方法　利用稳定表达 HCV C蛋白的 QBC939细胞株 (QBC939HCV C+) ,通过 NF- κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析 (EMSA)检测 HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞 NF- κB的 DNA结合活性和反式激活活性。 RT-PCR、Western blot检测 HCV C蛋白对核转录因子 κB抑制蛋白 α(IκBα) m RNA及 P5 0、P6 5、IκBα蛋白表达及 IκBα蛋白磷酸化的影响。结果　 1EMSA结果显示 QBC939HCV C+细胞系中 NF- κB相对信号密度明显比 QBC939细胞高。 2将 p NF- κB- lun表达质粒转染稳定表达 HCV C蛋白胆管癌细胞系中 ,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性 ,结果显示 QBC939HCV C+细胞中活化 NF- κB为 12 .8倍 ,而 QBC939细胞中 NF- κB为 2 .6倍。 3RT- PCR显示IκB m RNA在 QBC939HCV C+细胞和 QBC939细胞中的表达无明显差异 ;Western blot结果显示稳定表达 HCV C蛋白的 QBC939HCV C+细胞株的胞核中的 P5 0、P6 5蛋白高水平表达 ,而未转染 HCV C蛋白的 QBC939细胞仅检测出极低水平的 P5 0、P6 5蛋白。在 QBC939HCV C+细胞胞浆中 IκBα蛋白低水平表达 ,QBC939细胞高水平表达 ,但 IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论　 HCV     

NF-κB在缺血再灌注肝脏枯否细胞活化中的作用

目的 探讨缺血再灌注肝脏枯否细胞（KCs）的活化机制。方法 Wistar大鼠随机分为肝缺血30min再灌注组（HIR－30min组）、肝缺血60min再灌注组（HIR－60min组）及对照组。EMSA、ELISA法检测HIR后KCs NK-κB激活及KCs培养上清液TNF－α含量。结果 肝缺血30min或60min再灌注后0h KCs NF-κB活性均于HIR后3h达到高峰，肝缺血时间越长，KCs NF－κB激活越明显；KCs培养上清TNF－α含量于HIR后0h增高，HIR后6h达到高峰，肝缺血时间越长，KCs培养上清TNF－α含量越高。结论 NF－κB是缺血再灌注肝脏KCs活化的关键因子。     

地氟醚预处理对缺氧/复氧损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响

目的探讨地氟醚预处理对缺氧/复氧(A/R)损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响。方法选用ECV304细胞株.实验分为两部分:(1)将细胞分为空白对照组及TNF-α不同持续时间刺激组共6组,用West-ernblot法分析NF-κB的抑制因子IκB蛋白的降解和磷酸化。(2)将细胞分为5组,即空白对照组(Ⅰ组)、A/R组(Ⅱ组)、A/R TNF-α10ng/mL刺激组(Ⅲ组)、地氟醚1.0MAC预处理 A/R组(Ⅳ组)和地氟醚1.0MAC预处理 A/R TNF-α10ng/mL刺激组(Ⅴ组)。用间接免疫荧光法检测各组细胞NF-κB/p65亚基的定位。结果TNF-α刺激ECV304细胞后,IκB-α蛋白降解的时间高峰为30min,而IκB-α磷酸化的时间高峰为1h。A/R损伤可激活ECV304细胞中NF-κB的活性,而经1.0MAC地氟醚预处理后,由TNF-α激活的上述变化可受到抑制。免疫荧光分析显示,TNF-α刺激可使NF-κB/p65荧光标记由胞浆区转入胞核区,而经地氟醚预处理后,NF-κB/p65入核明显减少。结论抑制NF-κB的激活可能是地氟醚预处理减少ECV304细胞缺氧/复氧损伤的机制之一。     

核因子-кB在急性脑缺血再灌注损伤中的作用及地塞米松的影响

目的 :观察小鼠急性脑缺血再灌注损伤时核因子 -κB(nuclearfactor-kappaB ,NF -κB)活性变化及作用和地塞米松 (dexamethasone,DXM )的影响。方法 :小鼠随机分为 :假手术组 ;脑缺血组 ;缺血再灌注 2h组 ;DXM预处理组 ;制备小鼠急性脑缺血再灌注模型并于缺血 2 0min和再灌注 2h后断头取脑 ;同时记录异常神经症状 ;用免疫组织化学法检测脑组织中NF -κB亚单位P6 5活性。结果 :脑缺血再灌注 2hP6 5活性增加 (P<0 .0 5 ) ,DXM预处理能降低P6 5活性水平 (P <0 .0 5 ) ;且能明显改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的异常神经症状 (P <0 .0 5 )。结论 :NF -κB参与了小鼠急性脑缺血再灌注早期损伤的过程 ;地塞米松可能通过抑制NF-κB活性减轻缺血再灌注早期损伤。     

NF-κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的影响

目的探讨NF-κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的影响。方法 C57BL/6肺纤维化模型小鼠造模前6 h,尾静脉注射NF-κB反义寡核苷酸,取肺组织,模型组及对照组分别行原代培养。肺组织及培养细胞进行NF-κB、IκB-α蛋白的免疫组织化学染色及细胞化学染色,并行图像分析,以平均光密度(MOD值)表示各指标的表达量。结果在肺组织及培养细胞中,模型组NF-κB、IκB-α蛋白表达量均较对照组增加(P<0.05),干预组各项指标的表达量均较模型组减少(P<0.05)。NF-κB蛋白与IκB-α蛋白表达呈正相关。结论 NF-κB反义寡核苷酸可以抑制博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的表达,从而起到治疗肺纤维化的作用。     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)的调控作用。方法 利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCVC蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性。RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及P50、P65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响。结果 ①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高。②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCVC蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12．8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2．6倍。③RT-PCR显示IκB mRNA在QBC939HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCVC蛋白的QBC939HCV C 细胞株的胞核中的P50、P65蛋白高水平表达,而未转染HCVC蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的P50、P65蛋白。在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达。QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论 HCVC蛋白通过增加IκB降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用。     

促红细胞生成素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的抗炎作用?

目的：观察促红细胞生成素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的抗炎作用。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及促红素组。假手术组仅解剖分离肝十二指肠韧带;模型组采用无创血管夹夹闭肝左叶及中叶血流(约70%肝缺血),缺血时间为45 min;促红素组于缺血前30 min门静脉注射促红细胞生成素(3000 IU/kg)。采集各组再灌注1、6、12 h血液及肝组织标本。全自动生化分析仪测定血清ALT、AST;ELISA测定血浆TNF-α、IL-1蛋白含量;Western blot免疫印迹检测肝组织NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,促红素组ALT、AST水平显著下调(P<0．05)。血浆TNF-α和IL-1含量自再灌注6 h明显升高,至12 h达最高;与模型组相比,促红素组各时间点血浆TNF-α和IL-1含量均明显降低(P<0．05)。再灌注后早期肝内组织NF-κB表达量开始增加,于6 h表达最高峰,其后开始下降;与模型组相比,促红素组各时间点肝组织NF-κB表达量均明显降低(P<0．05)。结论促红细胞生成素能有效减轻大鼠肝缺血再灌注损伤,其作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达,减少TNF-α、IL-1的释放,从而减轻肝脏缺血再灌注过程中的炎症反应。     

严重烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞NF—кB、IкB—α、TNF—α的变化及调控

目的 观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-кB抑制剂PDTC后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-кB活性,IкB-α的表达及TNF-α的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制。方法 以15%体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型。收集腹腔巨噬细胞,采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-кB的活性,改变的ELISA及QWestern Blotting法测IкB-α的表达,反转录-PCR测TNF-αmRNA的表达。结果 烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12h达到高峰,NF-кB伤后明显活化,于2h达到了高峰,早于TNF-α的增多,IкB-α的表达先降低,后升高,予PDTC后NF-к的活性及TNF-αmRNA表达量均下降,结论 烫伤后NF-кB活性及TNF-α表达明显增强,IкB-α对NF-кB在高水平上维持着一种制约关系,烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-кB途径参与TNF-α表达的调控。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞NF-κB的激活及其机制的探讨

目的探讨同型半胱氨酸（HCY）对血管内皮细胞核因子-κB（NF-κB）的激活及其机制，以明确HCY在动脉粥样硬化发病过程中的作用。方法从人脐静脉分离血管内皮细胞；用电泳迁移率和免疫荧光方法检测NF-κB的活性；用免疫印迹实验检测κB抑制蛋白（IκB-α）的磷酸化。结果电泳迁移率变动实验（EMSA）证明HCY可以时间依赖性和浓度依赖性地激活血管内皮细胞NF-κB；免疫荧光共聚焦显微镜可见在HCY刺激后的血管内皮细胞，大量的NF-κB-P65蛋白从细胞质转移入细胞核内，故NF-κB-P65蛋白染色在细胞核内呈强阳性，而细胞质内染色较弱；Western blot证明HCY能明显地诱导血管内皮细胞IκB-α的磷酸化。结论HCY可能通过增强IκB-α的磷酸化，抑制血管内皮细胞IκB-α的活性，从而激活NF-κB，在转录水平对下游的趋化因子和黏附因子产生调节作用，促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

核因子κB在大鼠双侧后肢缺血再灌注致肺损伤中的表达及意义

目的: 探讨核因子κB(NF-κB)在大鼠双侧后肢缺血再灌注(I/R)致肺损伤中的表达及意义. 方法:建立大鼠双侧后肢I/R模型:48只大鼠随机分为假手术组(Ⅰ组,n=8)、缺血组(Ⅱ组,n=8)、缺血再灌注组(Ⅲ组,n=32).Ⅱ组在缺血4 h末,Ⅲ组分别于再灌注4,12,24,48 h切取双肺,应用半定量RT-PCR和Western blot方法检测肺组织NF-κB p65/ IκBβ的mRNA和蛋白产物表达. 结果:Ⅲ组各时点NF-κB p65mRNA表达较Ⅰ、Ⅱ组增加,再灌注后12 h达高峰.p65蛋白产物表达亦逐渐增加,12 h达高峰,持续到术后48 h;IκBβ的mRNA和蛋白表达在I/R后同样开始增加,24 h的表达量最多.结论:NF-κB/IκBβ系统的激活可能在骨骼肌I/R所致肺损伤中发挥重要作用.     

羟乙基淀粉130/0.4改善大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:观察羟乙基淀粉(HES)130/0.4(万汶)对缺血再灌注(I/R)损伤心肌的干预作用,探讨其可能的作用机制。方法:24只SD大鼠随机均分为4组(n=6)：假手术(S)组、缺血再灌注(IR)组、白蛋白-缺血再灌注(A-IR)组、HES-缺血再灌注(H-IR)组。后3组建立在体大鼠心肌I/R模型,分别在缺血25 min时股静脉持续泵入生理盐水、5%白蛋白或HES 130/0.4,假手术组行开胸手术但不结扎左冠状动脉前降支。再灌注180 min处死大鼠,取心肌组织观察病理学改变;处死前颈动脉采血ELISA法测定TNF-α、IL-1β浓度;测定心肌组织NF-κB活性。结果:H-IR组心肌组织损伤病理学改变较IR组、A-IR组减轻。IR组、A-IR组、H-IR组血清TNF-α、IL-1β水平和心肌NF-κB活性明显高于S组(P<0.05),但其中H-IR组血清TNF-α、IL-1β水平及心肌NF-κB活性上升程度不及IR组、A-IR组(P<0.05)。结论:羟乙基淀粉130/0.4能减轻缺血再灌注所致心肌病理损伤,可能与其抑制NF-κB的活性、减少促炎细胞因子的释放有关。     

牛磺酸预处理抑制IRAK-4信号通路对大鼠移植肝脏再灌注损伤的保护机制

目的 观察牛磺酸预处理后SD大鼠移植肝脏的白细胞介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor aasociated kinase-4,IRAK-4)表达水平的变化,探讨牛磺酸预处理抑制肝脏缺血再灌注损害的相关机制.方法 雄性SD大鼠128只,完全随机化分为生理盐水对照组(NS组)和牛磺酸预处理组(TA组),每组64只,用Kamada's袖套法经行肝移植.NS组切取供肝前10 min经腰静脉注射生理盐水1.5 ml,TA组切取供肝前10 min经腰静脉注射牛磺酸(300 mmol/L)1.5 ml.于再灌注后0、60 min及180 min,蛋白免疫印记法及实时荧光定量PCR测定肝组织中IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;凝胶电泳迁移率分析法(EMSA)检测肝组织NF-κB活性及血清TNF-α含量;全自动血清自动生物化学仪检测血清转氨酶;光镜切片检测肝脏组织学.结果 牛磺酸预处理能明显提高大鼠1周生存率(P＜0.01),改善肝功能,减轻肝组织病理学改变.再灌注后0 min,血清转氨酶、IRAK-4 mRNA与蛋白表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);NS组各项指标水平于再灌注60 min出现峰值,但TA组各项指标水平明显低于NS组(P＜0.01);再灌注后180 min,2组IRAK-4 mRNA与蛋白表达水平、NF-κB活性以及TNF-α含量均较60 min时有所下降,且TA组下降水平较NS组更为明显(P＜0.01).结论 牛磺酸对大鼠移植肝脏的缺血再灌注损伤有明显抑制作用,抑制IRAK-4及其下游的NF-κB、TNF-α表达是牛磺酸预处理减轻肝脏缺血再灌注损害的重要机制之一.     

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响.方法 建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50 mg/kg)和生理盐水对照组,给药14 d.免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平.结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著.结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性.     

PDTC对缺血再灌注复合内毒素血症所致急性肝损伤的保护作用

目的:探讨PDTC对肝脏缺血再灌注复合内毒素血症(HIRE)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制. 方法:Wister大鼠40只随机分为:HIRE组, PDTC保护(HIRE PDTC)组. HIRE组阻断肝左叶及肝中叶的入肝血流60 min后再灌注,再灌注时自阴茎背iv大肠杆菌内毒素(LPS) 2.5 mg/kg,PDTC组先经阴茎背iv PDTC 120 mg/kg后立即按HIRE组致伤. 分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后 1, 3, 6, 12 h NF-κB活性及TNF-α表达,并用赖氏法检测血浆中ALT含量. 结果:损伤后NF-κB结合活性明显升高,并于再灌注后3 h达到高峰,TNF-α表达增加,同时血浆中ALT含量亦明显升高,PDTC保护组NF-κB活性减弱,TNF-α表达减弱,ALT水平降低. 结论:PDTC能通过抑制NF-κB的激活,减少致炎因子的基因表达与合成释放,减轻炎细胞浸润,从而对HIRE所致ALI起到保护作用.     

牛蒡子苷对ARDS细胞模型的抗炎作用及PI3K-AKT-NF-кB信号通路的影响

[目的] 研究牛蒡子苷(Arctiin,Arc)对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)细胞模型的抗炎作用及其相关机制。[方法] 将RAW 264.7细胞分为4组:对照组,模型组和Arc高、低剂量组。Arc高、低剂量组在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激24 h前用Arc预处理24 h。采用噻唑蓝法(methy thiazolyl tetrazolium,MTT)测定Arc对RAW 264.7细胞的毒性,采用共聚焦显微镜观察细胞形态变化,以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis-α,TNF-α)水平,免疫印迹法检测细胞中磷酸酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、核因子-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IкBα)磷酸化水平。[结果] Arc对RAW 264.7细胞增殖活性无明显抑制作用(P＞0.05),Arc高、低剂量组细胞形态与对照组相似。与对照组比较,模型组IL-6、IL-1β、TNF-α水平显著升高(P＜0.001);与模型组比较,Arc高、低剂量组IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低(P＜0.05)。与对照组比较,模型组PI3K、AKT、NF-κB、IкBα磷酸化水平显著升高(P＜0.001);与模型组比较,Arc高、低剂量组PI3K、AKT、NF-κB、IкBα磷酸化水平显著降低(P＜0.05)。[结论] Arc对LPS诱导的ARDS细胞模型具有抗炎作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT-NF-кB信号通路的活化有关。