荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、抗酸染色和改良罗氏培养三种方法同时检测156例结核患者标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为50%、25.64%、33.33%,以荧光定量PCR检测的阳性率最高。结论荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌具有灵敏度高、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法,在临床上有重要应用价值。     

荧光定量PCR和抗酸染色在联合诊断结核病及其疗效考核中的应用

目的探讨荧光定量PCR法和抗酸染色检测技术在结核病联合诊断中的价值。方法对89例临床确诊的结核病患者和22例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本同时应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测结核杆菌,并检测外周血血清结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果治疗前后荧光定量PCR阳性率为60.67%、25.84%,涂片抗酸染色法阳性率为23.60%、6.74%,结核抗体阳性率为71.91%和86.51%。痰标本的荧光定量PCR法阳性率均要高于抗酸染色法阳性率,比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论荧光定量PCR技术对肺结核诊断方面灵敏度和特异性较高,同时反映抗结核治疗过程中痰标本中结核杆菌数量的变化,不仅提高了结核菌检出的阳性率,同时对抗结核药物有一定的疗效考核效果。     

免疫胶体金法检测MPB64抗原在结核病实验室诊断中的价值

目的通过与传统的结核病实验室诊断方法（直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养、PCR）的比较,评价免疫胶体金法检测结核杆菌MPB64抗原在结核病快速诊断中的应用价值。方法收集158例确诊为结核病患者的临床标本,分别用直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养基培养、PCR、免疫胶体金法检测米氏7H9培养产物中的MPB64抗原检测结核分支杆菌,并对结果进行比较分析。结果涂片阳性率为10.76%,改良罗氏培养阳性率为20.89%,PCR检测阳性率为56.33%,免疫胶体金法检测阳性率为41.14%。结论免疫胶体金法检测米氏7H9液体培养产物中的MPB64抗原可以作为一种较为敏感、快速简便的检测结核分支杆菌感染的方法,有助于结核病临床快速诊断。     

金标免疫法与抗酸染色联合应用对结核病的诊断

目前广泛应用检测结核杆菌的方法有抗酸染色法、细菌培养法、金标免疫法、PCR法等。我们对l14例疑为结核病人的不同性质的体液分别用抗酸染色法找抗酸杆菌和金标免疫斑点法测定结核抗体两种方法联合应用以探讨对结核病的诊断价值。     

结核杆菌的细菌学、分子生物学和免疫学检测方法评价

目的比较涂片法、荧光定量PCR方法和结核抗体检测法对结核病的诊断价值。方法选取2006年7月~2010年8月期间临床确诊或怀疑结核的检样326例,进行涂片抗酸染色、荧光定量PCR检测和采集血样进行结核抗体检查。结果 326例检样中,检出TB-DNA阳性107例,阳性率32.82%。其中脓液、支气管灌洗液和痰液最高,分别为48.84%（86例）、31.71%（82例）、30.39%（102例）。抗酸染色标本痰液阳性率为9.80%,脓液25.58%,支气管灌洗液15.85%。结核抗体阳性率52.45%。抗酸染色法与荧光PCR法的符合率81.60%,而结核抗体检测法与抗酸染色法的符合率61.97%,与荧光PCR检测法的符合率为80.37%。结论三种方法中,以结核抗体法阳性率最高,荧光PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。三种方法联合运用,可弥补单独采用1种方法阳性率低的缺点,几种方法之间可相互佐证,从而使准确性得以提高。     

改良结核分枝杆菌L型检测方法在结核病早期诊断中的价值

目的探讨改良结核分枝杆菌L型检测方法在结核病早期诊断中的应用价值。方法选择2012年8月至2014年8月在武汉市第十一医院门诊确诊的120例活动性肺结核患者,分别采用荧光定量聚合酶链反应法(PCR)、MTB-L抗酸染色法、萋-尼抗酸染色法(Ziehl-Nelsen,Z-N)、改良IK抗酸染色法检测MTB-L的阳性感染率,以荧光定量PCR法作为金标准,评价各种检测方法对MTB-L结核病的诊断价值。结果荧光定量PCR法MTB-L阳性检出率为30.0%(36/120),Z-N法阳性检出率为14.2%(17/120),改良IK抗酸染色法阳性检出率为25.8%(27/120),MTB-L抗酸染色法阳性检出率为28.3%(34/120)。以荧光定量PCR法作为金标准,MTB-L抗酸染色法检测特异度为96.4%,灵敏度为86.1%,准确度为93.3%;与荧光定量PCR法结果比较,Z-N法检测Kappa值为0.509,改良IK抗酸染色法Kappa值为0.731,MTB-L抗酸染色法Kappa值为0.839,MTB-L抗酸染色法与荧光定量PCR法一致性最好。结论 MTB-L抗酸染色法检测MTB-L的特异度、准确度较高,与荧光定量PCR法一致性最好,且操作简单,对MTB-L早期诊断具有重要的参考价值。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的初步探讨

目的:探讨荧光定量PCR技术在结核病诊断中的价值。方法:应用荧光定量PCR技术对我院102例门诊及住院病人的痰、胸腔积液、尿等标本进行结核杆菌DNA检测,同时涂片镜检与培养,并对3种方法检测的阳性率进行比较。结果:荧光定量PCR阳性率为48%、涂片抗酸染色法阳性率为15%、结核培养法阳性率为14%。结论:荧光定量PCR技术较传统方法具有较高的敏感性与特异性,尤其对涂片染色与结核培养阴性的结核病具有更大的诊断价值。     

抗酸染色与金胺O荧光染色对结核菌检出的对比观察

目的探讨抗酸染色与金胺O荧光染色在结核病中的诊断价值。方法选取698例结核病门诊就诊病人的痰液,收集其痰液制作标本,采用痰涂片抗酸染色法和金胺O荧光染色法检测所有标本中结核杆菌的阳性检出情况,统计分析两种诊断方法对结核病的诊断价值。结果金胺O荧光染色检测结核杆菌的阳性检出率为29.4%,痰涂片抗酸染色法检测结核杆菌的阳性检出率20.1%,前者明显优于后者,差异具有统计学意义(P0.05)。结论金胺O荧光染色法对结核分枝杆菌的阳性检出率高于抗酸染色法,荧光染色过程简单,镜检过程所涉及的视野少,更易于临床操作。     

金标免疫法与抗酸染色联合应用对结核病的诊断

目前广泛应用检测结核杆菌的方法有抗酸染色法、细菌培养法、金标免疫法、PCR法等。我们对114例疑为结核病人的不同性质的体液分别用抗酸染色法找抗酸杆菌和金标免疫斑点法测定结核抗体两种方法联合应用以探讨对结核病的诊断价值。1　材料与方法1.1　病例选择　疑为结核病人114例,男6 4例,女5 0例,年龄5～76岁。平均年龄4 7.2岁。1.2　方法　金标免疫斑点法测定结核抗体,试剂盒由福建三明生物制剂所提供。抗酸染色法找抗酸杆菌按《全国临床检验操作规程》[第二版]操作,抗酸杆菌阴性的片子以30 0个视野以上未找到抗酸杆菌为标准。2　结果金…     

荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的价值

目的分析使用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测结核分支杆菌的应用价值。方法收集首都医科大学附属北京同仁医院临床各科室各类结核病或疑似结核病患者检测标本178例,使用FQ-PCR法进行结核分枝杆菌脱氧核糖核酸检测,标本同时进行抗酸染色显微镜下观察。结果 FQ-PCR法和抗酸染色涂片法对不同来源标本检测结核分枝杆菌的结果存在较好的一致性(Kappa=0.615,P<0.01)。使用FQ-PCR法检测结核分枝杆菌的阳性检出率为12.9%,抗酸染色涂片法的阳性检出率为6.2%,二者比较差别有统计学意义(χ2=4.682,P<0.05)。结论 FQ-PCR法检测标本中的结核分枝杆菌的灵敏度高于传统的抗酸染色涂片法,可作为结核病病原学诊断的优先方法。     

聚合酶链反应技术早期诊断关节结核

目的：早期诊断关节结核。方法：应用聚合酶链反应技术对３３例共３８个关节的关节液行结核杆菌检测;同时将所取关节液抗酸染色涂片镜检,以病理诊断为金标准并比较基华 病理确诊的关节结核有１７个,其中ＰＣＲ法与涂片法出的阳怀数分别为１２个和３个,ＰＣＲ法的灵敏度为７０．６％,而涂片法仅为１７．６％,经统计学处理差异有显著性意义。３８个关节中,ＰＣＲ法与涂法检出的阳性数分别为１４个和５个,ＰＣＲ法和涂片法的     

涂片、培养和实时荧光定量PCR检测在妇科的临床应用

目的：比较涂片革兰染色、培养和实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测妇科性病淋球菌感染的临床应用价值,寻找一种快速而敏感的淋球菌检测方法。方法：同时用涂片革兰染色、培养和FQ-PCR检测临床疑诊淋病123例女性阴道标本中的淋球菌,以培养法为“金标准”,将另外两种方法与之比较,分别计算其敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值。结果：涂片检出率为76．4％、培养法检出率为66．7％、FQ-PCR检出率为69．9％;经配对计数资料Х^2检验,FQ-PCR与培养法的检出率比较差异无显著性（P〉0．05）。涂片法和FQ-PCR法的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为94．2％、66．7％、87．2％、82.8％和97．6％、89．7％、95．3％、94．6％。结论：FQ-PCR检测淋球菌,可弥补涂片法较粗糙、培养法耗时长的缺点。FQ-PCR具有准确快速,敏感性和特异性较高的特点,是一种具有临床应用价值的淋球菌快速定量检测方法。     

萋-尼氏抗酸染色法和金胺O荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的对比

目的:比较萋-尼氏抗酸染色法（简称Z-N）和金胺O荧光染色法（简称荧光染色）在痰涂片镜检中对结核分枝杆菌的检测效果差异。方法:纳入580份痰标本,挑取相同部位制成两份涂片,分别使用Z-N和荧光染色进行染色镜检,比较两种方法的阳性检出率、阳性分级标准及读片时间上的差异。将涂片后余下的痰标本采用全自动分枝杆菌检测/药敏系统做液体培养。结果:Z-N法阳性检出率为10.8%,荧光染色法为15.3%,两种方法比较差异有统计学意义（P＜0.05）。对两种方法每一级别的结果进行?字2检验,结果表明两种染色方法在各个分级没有统计学差异（P＞0.05）。荧光染色法的读片时间要明显短于Z-N。结论:荧光染色阳性检出率略高于Z-N,证明荧光染色法是一种快速、灵敏的检测方法,对肺结核的临床诊断具有重要意义。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用分析

目的采用统计学方法评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在临床淋球菌检测中的应用。方法以淋球菌培养法为标准对照,采用实时荧光核酸恒温扩增技术同时对150例疑似患者的生殖道拭子标本和尿液标本进行检测,对结果进行统计学分析比较,并用PCR法进行验证。结果使用SAT检测的生殖道拭子和尿液阳性检出均为110例,培养法阳性检出为108例,其中培养法检出阴性的2例通过PCR验证为阳性。两种取样方式的SAT检测法和培养法三者阳性率差异均无统计学意义(P0.05);以培养法为金标准,SAT检测拭子的敏感度为100.0%,特异度为95.2%;SAT检测尿液标本的敏感度为100.0%,特异度为95.2%。结论采用实时荧光核酸恒温扩增技术对生殖道拭子和尿道标本的检测效果与培养法相比,阳性率高,敏感度较高,且尿道标本收集方法比较简便,患者依从性好,可代替拭子道取样方法,此方法可在临床推广应用。     

体外细胞培养支原体的检测与清除

目的检测及清除细胞培养中支原体的污染.方法应用DNA荧光法及两步PCR法检测支原体,采用BM-Cycline与裸鼠皮下过继联合法去除支原体;结果DNA荧光法、两步PCR法支原体检测率分别为25.0%,40.0%;BM-cyclie与裸鼠过继法对支原体的清除率为100.0%;结论上述方法能有效检测和清除细胞培养中支原体的污染.     

聚合酶链反应在诊断肺结核中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对７８例患者的痰、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和胸水标本进行结核菌检测；并同时进行涂片抗酸染色、皮肤结核菌素试验及血结核菌抗体检测。结果：ＰＣＲ阳性率为４６．１５％，与涂片镜检、结核菌素试验强阳性、血结核菌抗体阳性率（分别为３．８５％、１７．９５％、１１．５４％）相比均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。由此可见ＰＣＲ方法比传统方法具有更高的结核杆菌检出率。     

荧光染色技术在艾滋病患者活检标本病原学诊断中的应用

目的探讨快速真菌与抗酸分枝杆菌荧光技术在艾滋病患者活检标本病原体诊断中的应用价值及意义。方法选取艾滋病患者500例活检标本,采用快速真菌荧光染色及六胺银、PAS染色对300例可疑真菌感染的活检标本进行检测,采用抗酸分枝杆菌荧光染色及萋尼抗酸染色对200例可疑结核的活检标本进行检测,并对检测结果进行对比。结果（1）快速真菌荧光镜检法检出阳性205例（阳性率68.3%）,六胺银染色法检出阳性209例（阳性率69.7%）,PAS染色法检出阳性97例（阳性率39.5%）,快速真菌荧光染色与六胺银染色检出阳性率差异无统计学意义（P>0.05),但高于PAS染色法;（2）抗酸分枝杆菌荧光染色检出阳性179例（阳性率89.5%）,萋尼抗酸染色法检出阳性117例（阳性率58.5%）,抗酸分枝杆菌荧光染色阳性率高于萋尼抗酸染色法,两者差异有统计学意义（P<0.01）;（3）荧光染色比常规特殊染色操作更快速、简便、显示更清晰。结论艾滋病患者并发机会性感染病原体种类多样,普通的特殊染色阳性率不高并且费时费力,而快速真菌及抗酸荧光染色特别是抗酸荧光染色的阳性率明显增高,为活检组织诊断真菌及结核分枝杆菌感染提供一种快速、准确、经济、对比更清晰的染色方法,能够为真菌感染及结核病患者诊断提供可靠的指导依据,值得在病原体诊断工作中广泛使用。     

肺结核病人两种痰涂片染色法结果比较

目的比较痰涂片两种染色方法对肺结核病人发现的作用。方法采集初诊活动期肺结核病例痰标本进行抗酸染色、荧光染色,并用酸性改良罗氏培养基法进行分离培养结核分枝杆菌,比较痰涂片阳性率。结果1344份痰标本中抗酸染色阳性率11．6％、荧光染色阳性率13．8％,差异有统计学意义（χ2=21．43,P〈0．01）;246份痰培养阳性标本中抗酸染色和荧光染色镜检结果1＋时阳性率分别为20．3％、29．3％,差异有统计学意义（χ2=13．78,P〈0．01）。结论两种痰涂片染色方法对初诊结核病人发现差异有统计学意义,特别是对痰标本中低密度结核分枝杆菌发现荧光染色效果更好,应加强基层技术培训,提高结核病人发现率。     

聚合酶链反应检测铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡的实验研究及临床应用

目的：探索聚合酶链反应（PCR）技术对铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡快速诊断的可行性。优越性及其在临床应用中的价值。方法：建立PCR检测标准铜绿假单胞菌方法，对兔铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡模型研究并应用于临床，并与细菌培养做比较。结果：铜绿假单胞菌扩增出一条长504bp的阳性条带，其他常见细菌，人和兔正常角膜组织均为阴性，动物模型PCR敏感性为93.8%。特异性为100.0%；细菌培养敏感性为68.7%。特异性为93.7%。临床标本PCR阳性率为66.7%；细菌培养阳性率为38.1%。结论：PCR技术对快速检测实验室和临床标本中的铜绿假单胞菌具有重要的应用价值。     

不同检测方法在骨结核诊断中的应用效果比较

目的:比较利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF,简称"Xpert")、荧光PCR熔解曲线法及液体培养方法在骨结核诊断中的应用效果。方法:收集2017年1月至2018年12月期间166例疑似骨结核患者的脓液标本,分别进行分枝杆菌液体培养(MGIT960培养)、Xpert与荧光PCR熔解曲线法检测。以临床综合诊断为标准,对3种检测方法的敏感度和特异度进行比较分析;以液体药敏为金标准,评价Xpert和荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平耐药的敏感度和特异度。结果:Xpert检测的敏感度分别高于荧光PCR熔解曲线法和MGIT960培养法,荧光PCR熔解曲线法的敏感度高于MGIT960培养法,差异有统计学意义(P<0.05);以MGIT960培养为标准,Xpert的敏感度高于荧光PCR熔解曲线法,差异有统计学意义(P<0.05);Xpert与荧光PCR熔解曲线法的特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05);以液体药敏为金标准,Xpert和荧光PCR熔解曲线法检测利福平的敏感度和特异度均为80.0%和100%,两种方法与金标准进行一致性检验Kappa值均为0.872。结论:Xpert和荧光PCR熔解曲线法在骨结核诊断中的敏感性和特异度均优于液体培养方法,两种方法各有千秋,可根据实际情况选择。