人巨细胞病毒感染新生乳鼠心肌细胞的实验研究

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)AD169株在体外感染SD大鼠新生乳鼠心肌细胞。方法以人巨细胞病毒感染SD大鼠新生乳鼠的心肌细胞,通过相差显微镜、间接免疫荧光观察感染后细胞病变、搏动情况,检测培养液中心肌酶的改变,及鉴定HCMV在心肌细胞内感染的状况。结果培养的SD大鼠新生乳鼠搏动心肌细胞感染HCMV后,细胞逐步出现病变,细胞停止搏动,HCMVpp65蛋白免疫荧光等检测亦为阳性。结论HCMV AD169株可能具有感染SD大鼠乳鼠心肌细胞的能力。     

HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究

目的 观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMV AD169株能跨种属感染MEF提供依据.方法 将100 TCID50 HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d 的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达.结果 观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMV AD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势.结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖.     

人NSCs分化的Astrocyte系中HCMV感染的建立

目的研究HCMV能否感染体外培养的由人海马神经干细胞（NSCs）分化成的星形胶质细胞（astrocyte）。方法体外分离、培养人NSCs,诱导其定向分化为星形胶质细胞,观察细胞的形态学特点并分别进行免疫荧光鉴定。然后用HCMVAD169株感染分化细胞,观察细胞形态变化,检测胞内病毒蛋白表达,并收集感染细胞的培养液,添加到正常人胚肺细胞中,观察有无典型细胞病变出现。结果体外原代培养的人NSCs绝大多数都表达巢蛋白（nestin）,诱导其分化为星形胶质细胞后,细胞高表达神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。HCMVAD169感染细胞7d后,细胞出现肿胀、变大变圆等典型病变,胞核内检测到HCMV即刻早期基因表达产物-IE蛋白,添加感染细胞的培养液到人胚肺细胞中,细胞也出现典型病变。结论上述结果说明：在体外培养的由人NSCs分化成的星形胶质细胞中,HCMVAD169能够建立增殖性感染,这可能与先天性感染导致脑发育异常有关。     

用单克隆抗体快速检测细胞培养中人巨细胞病毒的研究

用抗人巨细胞病毒(HCMV)早期抗原的单克隆抗体,通过间接免疫荧光技术和间接免疫酶染色,对细胞培养中的CMV早期抗原(EA)进行检测。检测结果,132份临床标本中有43份常规细胞培养(CCC)出现HCMV特征性细胞病变(CPE),其中40份在接种后24h早期抗原检测(DEA)阳性,敏感性达93%;其余89份CCC阴性,有5份DEA阳性,特异性为94.4%.同时用HCMVAD169进行的试验结果表明,HCMV感染细胞24h即可在接种10~(-5)病毒稀释度的细胞培养瓶中检测到CMV-EA,而同一稀释度CCC则于21d才能观察到CPE出现。提示DEA不仅敏感特异,而且与CCC相比,其最大的优点是快速,可在接种标本后24h甚至更短的时间内完成,CCC则平均需要16d。     

两种不同属源巨细胞病毒对树鼩肝细胞易感性的研究

目的研究不同属源巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）株对树鼩原代肝细胞的易感性。方法分离培养树鼩原代肝细胞,利用感染剂量MOI为1的小鼠CMV（MCMV）Smith和人源性CMV（HCMV）AD169病毒株感染肝细胞,同时设立非病毒感染组（即空白对照组）,间接免疫荧光法检测肝细胞内及周边PP65蛋白表达。RT-PCR法检测培养肝细胞内MCMVSmithM152和HCMVAD169UL49mRNA。结果间接免疫荧光法可以观察到HCMVAD169组肝细胞内外均有PP65蛋白表达,提示病毒复制旺盛,而MCMVSmith组和非病毒感染组则显示PP65抗原不表达,RT-PCR结果确证树鼩肝细胞内有HCMVAD169UL49mRNA表达,未显示MCMVSmithM152mRNA表达,而非病毒感染组UL49和M152mRNA均不表达。结论HCMVAD169能感染体外培养的树鼩原代肝细胞,而MCMVSmith则不能。     

柯萨奇B3m病毒感染新生乳鼠致急性病毒性心肌炎模型的研究

目的 探讨制备柯萨奇B3m病毒感染Balb/C新生乳鼠急性病毒性心肌炎模型的实验途径。方法 地柯萨奇B3m亲心肌株病毒进行增毒，滴定TCID50后感染Balb/C新生乳鼠。CVB3m病毒感染组3窝共21只，对照组3窝共20只。感染组每只乳鼠腹腔内接种1000TCID50CVB3m病毒液0.04ml，对照组每只乳鼠腹腔内接种1640维持液0.04ml。观察感染乳鼠的发病及心肌病理变化。结果 感染组乳鼠在感染CVB3m后48～72h发病，心肌病理变化以多形核细胞、单核细胞和巨噬细胞浸润为主要特征，心肌小血管壁内皮细胞受损，心肌细胞变性、肿胀；对照组乳鼠未见发病。结论 柯萨奇B3m病毒是急性心肌炎的重要病原体，其毒力及接种量与发病密切相关，本模型为研究急性病毒性心肌炎的发病机制及抗病毒药物的筛选奠定了基础。     

人巨细胞病毒原发感染BALB/c小鼠大脑皮质模型的建立

目的建立人巨细胞病毒(HCMV)原发感染BALB/c小鼠大脑皮质的模型,为进一步研究其发病机制奠定实验基础。方法分别用2×106、2×105、2×104、2×103、2×102PFU/ml的HCMV AD169株腹腔注射6~8周SPF级BALB/c小鼠雌雄各6只作为实验组,同时设立灭活病毒对照组和细胞对照组。1个月后取各组小鼠大脑皮质组织进行病毒分离与鉴定、PCR和RT-PCR分别检测各标本中HCMVUL83基因及UL54的转录、HE染色。结果2×106、2×105PFU/ml实验组的雌性小鼠病毒分离、PCR及RT-PCR均为阳性;HE染色可见海马区出现了明显的病理变化。雄性小鼠、低剂量(2×104、2×103、2×102PFU/ml)实验组、灭活病毒组和HF对照组均为阴性。结论HCMV AD169株腹腔注射6~8周龄SPF级雌性小鼠1个月可测出大脑皮质发生急性炎症反应,为HCMV所致的原发感染状态,且小鼠性别及病毒的接种量可能与感染发生存在密切关系。     

巨细胞病毒先天性感染对ICR鼠胚胎生长及脑组织发育的影响

目的探索人巨细胞病毒（HCMV ）先天性感染对胎鼠胚胎生长及脑组织发育的影响。方法 10周龄的ICR ♀♂鼠按1∶1配对,实验组于交配前及妊娠3天（E3）、7天（E7）、15天（E15）腹腔内接种HCMV悬液,对照组接种HF细胞上清液。于E0、E3、E6、E9、E12、E15、E19称取孕鼠体重。临产时剖腹取胚胎的大脑皮质,用常规组织切片及HE染色,检测组织的病理变化,同时取部分组织进行病毒分离。结果各实验组（除E15组）孕鼠自E15后体重较对照组明显降低。组织病理学检查发现,各实验组ICR胎鼠大脑皮质血管扩张、充血、出血,脑实质有单核细胞浸润,部分神经细胞变性坏死或凋亡及噬神经细胞现象,软化灶形成;受染的神经细胞核内出现HCMV特征性包涵体。E0、E3、E7、E15实验组大脑皮质病毒分离阳性率分别为60%、62%、67%、25%,组间差异显著（χ2=13.475,P＜0.05）,E15组低于其他3组。结论不同孕期ICR胎鼠大脑皮质均可先天性实验感染HCMV且大脑皮质损伤明显,胚胎发育迟缓。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 ,这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据     

巨细胞病毒嗜肝细胞性和肝细胞感染模型的建立

目的确定巨细胞病毒（CMV）体外能否直接攻击肝细胞,并建立肝细胞感染模型。方法①人肝细胞系感染：用人CMV（HCMV）AD169毒株感染正常人肝细胞系（L-02）和人胚肺成纤维细胞（HELF）与L-02共培养细胞,HC-MV感染的HELF细胞为阳性对照;②原代鼠肝细胞（PML）感染：用重组鼠CMV（MCMV）感染PML细胞。光镜观察细胞病变（CPE）,电镜观察病毒颗粒,间接免疫荧光（IFA）法检测HCMV抗原;原位杂交法检测MCMVIE基因。PML性质经观察其特征性超微结构和检测培养上清白蛋白水平予以鉴定。结果在PML细胞纯度〉95%（培养第8天）时感染病毒,3d后〉80%细胞出现典型CPE;电镜下胞核和胞质内见大量病毒颗粒;病毒IE基因检测呈阳性。HELF细胞可被HCMV感染;而L-02细胞无论是单独,还是与HELF共培养,其病毒标志物均呈阴性,细胞结构保持正常。结论原代鼠肝细胞体外可受到MCMV直接感染,为CMV肝炎的体外研究提供成功的肝细胞感染模型;而正常人肝细胞系不能感染HCMV,推测其表面HCMV受体发生改变或丢失。     

甲型H1N1流感病毒在季流病毒、禽流感病毒共感染时变异可能性的验证

目的 甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009分别与A/Brisbane/10/07和A/ShenZhen/406H/06共感染小型香猪,预测甲流病毒在与季流H3N2病毒/甲流病毒与禽流感病毒共感染时是否会发生变异.方法 分别将A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)对5～6月龄小型猪共感染,小型猪经复方氯胺酮0.1 mL/kg麻醉后进行滴鼻感染,感染后第5天安乐死动物,取动物肺组织作病毒测序分析.结果 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2)共感染后,A/California/7/2009病毒PB1基因993位G→A突变,PA基因1659位G→A突变,没有氨基酸的变异.A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后A/California/7/2009病毒PB2基因1711位T→C突变.碱基的突变未引起氨基酸的变异.结论 A/California/7/2009(CA7)与A/Brisbane/10/07(H3N2),A/California/7/2009与A/Shenzhen/406H/06(H5N1)共感染后在猪的体内没有发生病毒重组、变异.     

胰腺细胞缩胆囊素和胆碱能受体对细胞内Ca~2 的调节

本文使用Fura-2做为细胞内钙离子荧光指示剂,在大白鼠胰腺分离细胞观察缩胆囊素和乙酰胆碱对细胞内钙离子的影响及其相互作用.结果表明1nmol/L缩胆囊素和lmmol/L乙酰胆碱分别使细胞内钙离子浓度从基础水平的122±8nmol/L增高至360±32nmol/L和380±20nmol/L,半最大有效浓度分别为0.45nmol/L及54μmol/L。不同剂量的缩胆囊素和乙酰胆碱彼此不同程度抑制对方的作用,后加入的试剂提高细胞内钙离子浓度的幅度与先加入的试剂所引起的增加幅度成反比,加入各自相应的受体拮抗剂可使细胞恢复对另一激素(蛙皮素)刺激的反应。说明了缩胆囊素受体和胆碱能受体的相互调节影响细胞内钙离子的活动.加入受体拮抗剂后,细胞恢复反应过程中的时间动力学改变可能与受体阻滞后钙离子通道关闭的程度和时间有关.     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.     

A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒感染力比较

目的甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒序列比较同源性在99%以上,本实验旨在比较两株病毒感染BALB/c小鼠研究感染力强弱。方法分别将A/California/7/2009(CA7)与A/California/4/2009(CA4)两株病毒分别连续10倍稀释后,对4~6周龄雌性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定CA7 MLD50为101.24/0.05 mL,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14 d。结果相同TCID50的CA7和CA4病毒感染小鼠,CA4感染小鼠后14 d内死亡率为20%,而CA7感染小鼠后8 d内死亡率为100%。CA7 106TCID50感染的小鼠病理表现为重度弥漫性间质性肺炎,CA4 106TCID50感染的小鼠病理表现为中度-重度间质性肺炎。结论在相同条件下,CA7感染力明显强于CA4。     

可手术胃癌血清HER-2/neu ECD水平与临床特征及疗效的研究

目的：探讨可手术胃癌患者血清HER-2/neu胞外域部分(ECD)水平与临床特征及疗效的关系。方法：收集江苏省连云港市第二人民医院2010年01月至2010年12月,可手术胃癌患者46例进入研究,术前、术后收集血清,同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照组。另外收集7例血清HER-2/neu ECD阳性患...     

镉对大鼠胚胎损害作用的实验研究

目的 :探讨镉对大鼠胚胎的毒性效应及可能机制。方法 :雌雄性 SD大鼠按 2∶ 1同笼交配获取 38只孕鼠 ,随机分为 4组 (对照组 ,低镉组 ,中镉组 ,高镉组 )。分别在妊第7、1 0、1 3天经腹腔注射生理盐水和不同剂量的氯化镉 ( Cd Cl2 ) ,妊 2 1 d,剖宫取胎鼠 ,活杀取出胎鼠的肝、脑组织称重后测定 Cd、Zn、Ach、AKP、DNA含量。结果 :1高镉组未见存活胎鼠 ;2染镉组胎鼠肝中镉增加 ( P<0 .0 5 ) ,脑中锌有下降趋势 ;3染镉组胎鼠肝组织中的AKP活性 ,脑组织中的 Ach、DNA含量较对照组减低。结论 :1高剂量的镉可使孕鼠胚胎发育异常 ;2母鼠染镉可致胎鼠肝中 AKP酶活性降低及脑组织中 Ach、DNA含量减少 ,抗脂质过氧化能力减弱。     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

服镁后血镁钙及24小时尿钙和钙/肌酐比值变化

研究服镁后，血镁钙及24h尿钙和钙／肌酐比值变化及与妊高征发生的关系。方法：采用前瞻性随机双盲的方法，对治疗组52例（治疗1组24例和治疗2组28例）孕妇自孕28周起，连续服用葡萄糖酸镁，每日3g。结果：治疗组血钙明显高于对照组；治疗2组的尿钙和钙／肌酐明显高于对照2组，且妊高征发生率3．57％，明显低于对照2组（30．77％）；治疗组和对照组尿钙与钙／肌酐比值分别呈正相关关系。结论：服镁后，调节体内钙平衡，使妊高征发生率降低。     

动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素与血脂检测结果分析

目的:探讨血清胆红素浓度与四种动脉粥样硬化( AS)性疾病的关系。方法:观察组分为四组,单纯性高血压组、冠心病组、糖尿病组、脑梗死组,对照组为同年龄段健康查体者,检测空腹血清总胆红素、直接胆红素、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇,计算间接胆红素,并对检测结果进行统计学分析。结果:与对照组比较,观察组中直接胆红素均有所下降,但差异无显著统计学意义( P>0 .0 5 ) ,总胆红素与间接胆红素除脑梗死组外,其他各组均明显降低( P<0 .0 5 ) ;除脑梗死组HDL - C与对照组无显著差异外,其他观察组血脂各指标与对照组比较均有显著统计学差异( P<0 .0 5 ) ,且糖尿病组三酰甘油及冠心病组低密度脂蛋白胆固醇与对照组比较有极显著统计学差异( P<0 .0 1 )。结论:高血压、冠心病、脑梗死、糖尿病等动脉粥样硬化相关性疾病血清胆红素浓度有不同程度降低,其中,间接胆红素降低更明显,提示可将胆红素水平作为AS患者体内氧化活性增加的一个临床监测指标     

青蒿琥酯静脉注射7天疗程治疗恶性疟疗效观察

青蒿琥酯注射剂治疗恶性疟以及凶险型疟疾的推荐剂量为3天疗程,总量240mg。该剂量具有速效、低毒的优点,但原虫复燃率高达50%左右.试用7天疗程,总量480mg方案治疗恶性疟40例,原虫复燃率降至5.6%,亦未见毒副反应。本文结果提示,适当延长青蒿琥酯注射剂的疗程和增加总剂量,可明显地降低疟原虫的复燃率;延长疗程、增加总剂量而不增加每天量,未见毒副作用出现。