吉非替尼对鼻咽癌细胞株CNE2放疗增敏作用

目的应用吉非替尼作用于鼻咽癌细胞株CNE2,观察其放疗增敏作用。方法体外培养鼻咽癌细胞株CNE2,以MTT实验检测细胞增殖抑制情况及吉非替尼对细胞放射敏感性的影响;用克隆形成法绘制细胞存活曲线,获得不同处理条件下的放射增敏比。以流式细胞术(FCM)分析细胞周期变化和凋亡情况。结果 MTT显示与单纯照射组比较,联合吉非替尼照射组细胞生存率显著降低(0.582±0.012vs0.398±0.016,P=0.0020);FCM显示吉非替尼联合放射组S期细胞显著下降(P=0.000),而G2/M期细胞比值显著增加(P=0.000),吉非替尼和放射线可协同作用,使CNE2细胞的周期再分布显著变化。结论吉非替尼可增强鼻咽癌细胞株CNE2放射敏感性,其机制可能与改变细胞周期的分布相关。     

缺氧诱导鼻咽癌细胞株CNE2化疗耐药及其机制

目的：探讨缺氧环境下人鼻咽癌多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达和意义,从而部分阐明鼻咽癌发生多药耐药的机制,为逆转鼻咽癌耐药提供新的分子靶点.方法：将人鼻咽癌细胞系CNE2分别行不同时间低氧培养,MTT法检测CNE2对紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶的耐药倍数;流式细胞仪检测缺氧与常氧下细胞的凋亡情况.应用RT-PCR和Western Blot分别检测每组CNE2细胞中多药耐药相关基因（mdr1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）和HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达.结果：缺氧培养48 h,CNE2对紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶的耐药倍数较常氧分别提高2.14,1.86,1.43倍,且药物引起的凋亡减少.在缺氧组,随着缺氧时间的延长,CNE2细胞中多药耐药相关基因mdr1,MRP1的表达均逐渐增高,而且这些多药耐药相关基因的表达与HIF-1α的表达呈同步化改变.结论：缺氧可上调鼻咽癌细胞内的核转录因子HIF-1α以及多药耐药相关基因的表达,从而诱导鼻咽癌产生多药耐药性.核转录因子HIF-1α和这些多药耐药相关基因可能成为逆转鼻咽癌耐药的新的分子靶点.     

吉西他滨对鼻咽癌HNE2细胞株的放射增敏作用及其机制研究

目的研究低浓度吉西他滨对人鼻咽癌HNE2细胞系的放射增敏作用及其机制,并探讨用药后最佳放射时间。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定吉西他滨24h IC10值。以该浓度吉西他滨处理HNE2细胞4、8、12、24h,弃药后立即给予6MV X线单次照射0、2、4、6、8Gy,用克隆形成实验计算各组的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较各组的细胞凋亡率及细胞周期变化。Western blot法测定各组细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果吉西他滨的24h IC10值为0.21μg/mL,吉西他滨处理4、8、12、24h后的放射增敏比分别为1.09、1.18、1.23和1.37。流式细胞仪检测显示吉西他滨联合射线主要诱导S期阻滞,且S期细胞比例及细胞凋亡率随吉西他滨作用时间延长而增加。4组中bcl-2的表达随作用时间延长逐步下降,而bax的表达则逐步上升。结论低浓度吉西他滨对HNE2细胞有放射增敏作用,其增敏比随作用时间的延长而延长,以作用24h后增敏作用最强。增敏机制可能与诱导S期阻滞及促进凋亡有关。     

AKT抑制剂对鼻咽癌细胞株CNE1的放疗增敏作用

【目的】 探讨Akt抑制剂124005对人鼻咽癌细胞CNE1放射增敏效应及其潜在机制。【方法】 CCK8法检测不同浓度124005对人鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,计算IC50值,选择低于IC50的药物浓度作为增敏浓度,集落形成实验检测放射线加或不加124005以及124005+放射线组联合或不联合自噬抑制剂3-MA对CNE1细胞生存曲线的影响,间接免疫荧光法检测γ-H2AX观察DNA损伤修复和GFP-LC3转染CNE1中自噬标志物LC3的聚集,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡、免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3、PARP、Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,并检测AKT及下游信号通路的表达,探索Akt抑制剂124005放射增敏效应及其潜在机制。【结果】 124005对CNE1 IC50值为30.5 μmol/L。集落形成实验显示,DEF值放疗+8 μmol/L 124005持续用药组为1.92,放疗+12.5 μmol/L 124005用药72 h组为1.12,共聚焦显微镜观察显示124005联合放疗显著增加了CNE1细胞照射后细胞核内γ-H2AX焦点的聚集和转染GFP-LC3质粒的CNE1细胞内LC3的点状聚集、流式检测124005可以明显提高放射线诱导的CNE1细胞凋亡,凋亡率最高达52.9%。Western blot显示124005可以显著抑制放射后p-AKT及下游p-GSK-3?茁和p-PRAS40的表达,增加放射引起的cleaved caspase-3和cleaved PARP以及Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,应用3-MA可降低124005处理后LC3-Ⅱ的表达水平?放射+124005再联用3 mmol/L 3-MA组的DEF值为1.69,明显低于单纯放射+124005组(DEF=1.97)。 【结论】 124005通过对AKT以及下游通路的抑制,抑制DNA损伤修复,同时增加凋亡和自噬来起到对CNE1细胞株放射增敏的效应。     

安替可对放射治疗鼻咽癌的增敏作用

放射增敏剂配合放射治疗恶性肿瘤的研究愈来愈受到重视。为提高鼻咽癌疗效 ,应用安替可放射增敏剂配合放射治疗中、晚期鼻咽癌 ,结果报告如下。1　资料与方法1.1　一般资料　 1997年 9月～ 1999年 9月 ,我院收治并经病理证实的鼻咽癌患者 6 0例 ,随机分为常规放疗加安替可观察组和单纯放疗对照组。其年龄、性别、分期均基本相同 ,具有可比性。安替可胶囊为一种纯中药产品 ,主要成分为蟾皮、当归等 [1 ] ,本组用药由深圳海王生物有限公司研制。1.2　方法　放疗采用 6 MVX线 ,鼻咽癌常规照射方法。鼻咽癌剂量 70～ 76 Gy/ 7～ 8周 ,颈部 6 4…     

放射增敏散在鼻咽癌放疗中的放射增敏作用

目的　探讨中药放射增敏散在鼻咽癌放射治疗中的放射增敏作用。方法　 90例鼻咽癌初治患者 ,随机分为单放组、放化组和观察组。所有患者均接受常规外照射放疗 ,鼻咽原发灶肿瘤量为 68～ 77Gy/ 6 5～ 8周 ,颈部淋巴转移灶肿瘤量为 64～ 70Gy/ 6 5～ 7周。单放组行单纯常规放疗。放化组在放疗第 2周和第 6周行DF方案化疗 :顺铂(DDP) 2 0mg/m2 静脉滴注 ,第 1～ 5天 ;5 -氟脲嘧啶 ( 5 -FU) 5 0 0mg/m2 静脉滴注 ,第 1～ 5天。观察组用中药放射增敏散配合放射治疗。结果　鼻咽肿瘤残留率 ,3组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。颈部淋巴结残留率 ,放化组和观察组与单放组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。鼻咽肿瘤和颈部淋巴结局部控制率 ,放化组和观察组高于单放组 (P <0 0 5 )。 3组的生存率和远处转移率差异无显著性 (P >0 0 5 )。放化组在治疗后IgG水平明显下降 (P <0 0 1)。结论　中药放射增敏散能增强放射敏感性 ,提高鼻咽癌的疗效和减轻毒副作用 ,不会产生免疫抑制。     

马蔺子素在鼻咽癌放疗中增敏作用的临床研究

目的：评价马蔺子素（商品名：安卡）对算咽癌放射治疗的增敏作用及毒副反应,方法：145例经病理确诊为息咽低分化鳞癌患者,被随机分为试验组与对照组,两组遗嘱者均采用相同的放疗计划,试验组在放疗同时给预安卡110mg,每天2次,直到放疗结事,对照组单纯放疗,采用增每比（ER）和肿瘤的局部控制情况,邓部分缓解（PR）,完全缓解（CR）作为增敏的评介指标,结果：无论原发灶还是转移灶,达到PR和CR的平均放疗剂量试验组均明显低于对照组,治疗结束时的CR率试验组明显高于对照组,原发灶PR和CR分别为1．17,1．07,转移灶RP和CR的ER分别为1．20,1．05,毒副反应方面,试验组消化道的毒副反应如恶心,呕吐及腹泻较对照组多,但反应轻,患者能够耐受,结果：安卡鼻咽癌原发灶和转移灶均具有放射增敏作用,毒副反应较轻。     

肿节风浸膏溶液对鼻咽癌细胞系CNE-2的放射增敏作用

目的：探讨肿节风浸膏对鼻咽癌细胞系CNE-2的细胞毒性作用以及对放射敏感性的影响。方法：应用克隆形成方法,观察不同浓度的肿节风浸膏对CNE-2的细胞杀灭效应,求得IC50,选择合适浓度的肿节风浸膏配合照射和单纯照射对细胞的杀伤作用,计算细胞存活率,用多靶单击数学模型进行曲线拟合作图。结果：与照射配合的肿节风浸膏的合适浓度为10mg／L。单纯照射组D0值为3．096Gy,照射加肿节风浸膏组D0值为2．441Gy,放射增敏比（SER）为1．268（3．096／2．441）。结论：肿节风浸膏具有一定的放射增敏作用。     

诱导性一氧化氮抑制剂对鼻咽癌CNE-2细胞株作用的探讨

目的 观察诱导性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)是否对鼻咽癌细胞株CNE-2有抑制细胞增殖的能力和促进凋亡的能力,探讨SMT对顺铂(DDP)的抗CNE-2细胞作用是否存在增敏效应及其分子机制.方法 选用鼻咽癌细胞株CNE-2作为研究对象,以A549作为对照,R.T-PCR测试CNE-2是否表达iNOS.用不同浓度的SMT、DDP和二者联合干预CNE-2细胞后,MTT试验及集落形成实验观察其对细胞活力的影响.Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学变化.流式细胞仪检测细胞凋亡的水平.硝酸还原酶法测NO的含量.结果 以iNOS高表达的肺癌细胞株AS49为阳性对照,CNE-2细胞证实为iNOS阳性表达.SMT能以浓度依赖性的方式有效地抑制CNE-2细胞的增殖.0.5μmol/mL的SMT与6μg/mL的DDP共同干预CNE-2细胞,较之单用SMT或DDP抑制CNE-2细胞的凋亡形态学改变明显,凋亡小体以及核固缩现象增多,早期凋亡率增多(P＜0.05).0.5μ moi/mL的SMT与6μg/mL的DDP共同干预CNE-2细胞,与正常组相比,两组NO含量的差异有显著性(P＜0.05).结论 SMT能够有效地和浓度依赖性地抑制CNE-2细胞的增殖.SMT对DDP的抗CNE-2细胞作用具有化疗增敏效应,其机制可能与NO含量有关,但具体增敏机制还有待进一步研究.     

白藜芦醇对鼻咽癌细胞株 CNE-2Z 增殖和凋亡的影响

目的　探讨白藜芦醇 (resveratrol,Res)对鼻咽癌细胞株 CNE- 2 Z增殖和凋亡的影响。方法　采用 MTT法检测 IC50 值 ,流式细胞术、Hoechst 332 5 8/PI荧光染色和 DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡。结果　不同浓度Res分别处理细胞 2 4 ,4 8和 72 h,其 IC50 值分别为 (10 9.2± 7.5 ) ,(83.6± 6 .0 ) ,(5 4 .3± 2 .8) μmol/L,各 IC50 值间比较差异显著 (P<0 .0 1)。2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μm ol/L Res分别处理细胞 2 4 h后 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组经流式细胞术和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,荧光染色可见典型的凋亡形态学改变 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组可见明显的 DNA梯带。结论　 Res可通过诱导 CNE- 2 Z细胞株凋亡而抑制其增殖。     

康莱特增加肺癌细胞化疗敏感性的实验研究

目的寻找康莱特联合化疗药物（多西他赛,DDP）序贯治疗或同步治疗的最佳时机。方法MTT比色法。结果康莱特单药对人肺腺癌95D的生长有抑制和化疗增敏作用;康莱特先于化疗药物（多西他赛,DDP）加入对95D的抑制最强。结论康莱特体外对肺癌细胞有抗肿瘤和化疗增敏作用;康莱特先于化疗药加入优于二者同时加入。     

化香树果序乙醇提取物诱导CNE1、CNE2细胞发生methuosis死亡的机制

目的 探讨化香树果序乙醇提取物(PSZ)诱导鼻咽癌细胞CNE1、CNE2发生methuosis死亡的机制.方法 用1.0 mg/mL PSZ处理CNE1、CNE2细胞,观察细胞形态学变化,RT-qPCR、Western blotting检测PSZ干预后Rac1基因和蛋白表达水平.EHT 1864抑制两组细胞Rac1表达,观察化香树果序醇提物对CNE1、CNE2细胞的作用.结果 CNE1、CNE2细胞经PSZ处理后,细胞质出现大量空泡,空泡相互融合,不断增大,最后细胞膜破裂,细胞核没有发生明显的变化,这种形态学改变符合methuosis细胞死亡方式,Rac1在基因和蛋白水平表达均增加.EHT 1864抑制细胞Rac1表达后,PSZ引起的methuosis死亡现象消失.结论 Rac1是PSZ诱导人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2发生methuosis死亡的关键靶点.     

不同分化程度鼻咽癌细胞化疗药物作用后放射敏感性的变化

目的 检测鼻咽高分化鳞癌细胞系CNE1和低分化鳞癌细胞系CNE2细胞化疗药物作用后放射敏感性的变化。方法 对CNE1和CNE2细胞以及经阿霉素作用后的细胞射线照射，应用集落形成实验方法绘制细胞存活曲线，得出放射生物学参数，比较化疗药物作用后细胞放射敏感性的变化。结果 CNE1细胞化疗药物作用后放射敏感性增高；而CNE2细胞化疗药物作用后放射敏感性降低。结论临床上对中晚期鼻咽癌的治疗应根据其不同病理类型考虑个体化治疗方案。     

柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE 2骨架的作用

目的：探讨柞蚕抗菌肽对癌细胞骨架的破坏作用。方法：用柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE2处理12和18h，抗微管蛋白单克隆抗体检测细胞骨架结构的变化。结果：免疫组织化学染色见抗菌肽处理后细胞骨架分布不均匀，形态不规则，散乱，卷缩。结论：柞蚕抗菌肽具有较明显的破坏人鼻咽癌细胞株CNE2细胞骨架的作用。     

鼻咽癌CNE2与放疗抗拒株CNE2R细胞的放化疗敏感性及其CUEDC2表达量比较

目的 比较鼻咽癌CNE2细胞与其放疗抗拒株CNE2R细胞的放化疗敏感性及两者CUE结构域2(CUEDC2)蛋白表达量的差异.方法 裸鼠成瘤法比较CNE2与CNE2R细胞的体内生长情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CNE2及CNE2R细胞对顺铂、多西紫杉醇的敏感性;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CUEDC2的相对mRNA水平、蛋白质免疫印迹法检测CUEDC2蛋白的表达量.结果 CNE2生长速度快于CNE2R,对多西紫杉醇更敏感(P<0.05).0 Gy、4 Gy、8 Gy照射剂量下,CNE2R的G2/M期阻滞较CNE2明显,但12 Gy照射剂量下,CNE2R的G2/M期阻滞不如CNE2明显(均P<0.05).在8 Gy、12 Gy照射剂量下,CNE2的凋亡率高于CNE2R(P<0.05).CNE2R细胞CUEDC2蛋白相对mRNA扩增水平和蛋白表达量均高于CNE2(P<0.05).结论 放疗抗拒株细胞CNE2R的放化疗敏感性较其亲代细胞CNE2低,CUEDC2蛋白的表达量较CNE2的多.     

化疗药物不同配伍诱导人胰腺癌细胞株细胞凋亡

目的通过对临床常用化疗药物５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）、丝裂霉毒（ＭＭＣ）、卡铂（ＣＢＰ）、阿霉素（ＡＤＭ）和表阿霉素（Ｅ－ＡＤＭ）相互配伍诱导人胰腺癌细胞株细胞凋亡的观察,探讨化疗药物抑制胰腺癌细胞生长的作用机制,为临床制定合理的化疗方案提供理论依据。方法不同配伍的化疗药物作用于胰腺癌细胞后,以倒置显微镜和荧光显微镜观察其形态变化;以流式细胞仪检测细胞ＤＮＡ含量的变化,计算出凋亡细胞的比例;提取细胞ＤＮＡ,进行凝胶电泳确定细胞凋亡的发生。结果联合化疗可以诱导胰腺癌细胞凋亡,与引起细胞坏死相比,诱导肿瘤细胞凋亡的化疗药物剂量小、作用时间短;随作用时间的延长和药物剂量的增加,凋亡细胞的比例也增加;不同配伍的化疗药物诱导不同胰腺癌细胞株细胞发生凋亡的情况是不完全相同的。结论诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抑制胰腺癌细胞生长的主要机制,能否诱导胰腺癌细胞发生凋亡可作为判断不同配伍的化疗药物抑制胰腺癌细胞生长能力的重要指标之一。     

白藜芦醇阻断信号通路对鼻咽癌细胞生长的影响

目的 通过体内和体外研究探讨白藜芦醇在人核孔复合物细胞（NPC）中的抗癌活性。方法 用MTT 实验检测白藜芦醇对CNE-1 细胞和CNE-2Z 细胞（两种具有不同分化程度的NPC 细胞株）生长增殖的影响。用流式细胞仪检测白藜芦醇诱导NPC 细胞凋亡情况和NPC 细胞周期分布变化。Western blot 检测涉及细胞凋亡调控的数个重要基因和与细胞周期调控有关的数种Cyclins 的蛋白表达水平。在裸鼠体内进行CNE-2Z 细胞移植瘤实验。结果 用白藜芦醇处理NPC 细胞后,白藜芦醇不仅以时间和剂量依赖的方式降低NPC 细胞的增殖能力,还可以剂量依赖的方式诱导NPC 细胞的凋亡。流式细胞仪分析结果表明,白藜芦醇处理可将NPC 细胞生长阻滞于S- 期和G2/M- 期。白藜芦醇处理可下调Bcl-2 和低氧诱导因子1（HIF-1）蛋白的表达,上调Caspase-3 蛋白表达。此外,白藜芦醇处理不仅可以降低蛋白激酶B（Akt）、p70 核糖体S6 蛋白激酶（p70S6K）和真核翻译起始因子4E- 结合蛋白1（4E-BP-1）的磷酸化水平,也可降低参与细胞周期调控的数个细胞周期蛋白（Cyclins）的表达水平。白藜芦醇可抑制裸鼠体内NPC 移植瘤的生长,进一步确认白藜芦醇对NPC 生长的治疗效果。结论 在人NPC 细胞株中,白藜芦醇可能是通过干扰Akt/p70S6K 信号通路而发挥有效的抗增殖和促凋亡作用。     

白藜芦醇在缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤中的保护作用及与TLR4/NF-kB通路的关系

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)在缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤中的保护作用及其相关分子机制.方法 建立BRL-3A细胞(大鼠肝细胞株)H/R模型.建模前分别用RES和TLR4抑制剂(HTA125)预处理细胞.建模完成后,检测细胞存活率及细胞凋亡,观察细胞形态变化,检测细胞培养液中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)及炎症因子含量,检测细胞TLR4、NF-kB p65基因mRNA及蛋白水平表达及NF-kB p65入核情况.结果 H/R条件使细胞存活率明显降低,细胞凋亡率增加(P＜0.01),受损细胞明显增多,ALT、IL-1β含量增多(P＜0.01),TLR4和NF-κB p65表达水平显著提高(P＜0.01),p65入核细胞比例提高(P＜0.01).经RES及HTA125预处理后,细胞存活率显著提高,细胞凋亡比例显著缩小(P＜0.01),受损细胞减少,ALT、IL-1β含量降低(P＜0.01),TLR4和NF-kB p65表达水平明显降低(P＜0.01),p65入核细胞比例下降(P＜0.01).结论 RES可以减轻H/R诱导的BRL-3A肝细胞损伤,该作用可能与抑制TLR4/NF-kB信号通路有关.     

鼻咽癌细胞株CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度测定

目的 测定CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度参数.半修复时间(repair half-time,T1/2).方法 设0s、15S、30s、1h、2h、4h及6h共7个间隔时间,将8Gy照射剂量分为平分为两个4Gy间断照射4株细胞.采用集落形成法得到4株细胞在不同间隔时间两个4Gy照射后的存活分数.拟合细胞存活分数随间隔时间延长的变化曲线,并测算出T1/2.结果 CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的T1/2分别为18、22、29和27s.结论 鼻咽癌细胞的亚致死性损伤修复速度较快.提示调强放疗中被延长的分次照射时间(15～45s)可能导致鼻咽癌细胞的辐射死灭效应降低.